促红细胞生成素对人牙髓细胞迁移能力的作用

目的研究促红细胞生成素（EPO）对人牙髓细胞（hDPC）迁移能力的影响,并初步探讨相关分子机制。 方法实时荧光定量聚合链反应（PCR）检测EPO对hDPC表达趋化因子mRNA的影响;Transwell实验观察不同浓度的EPO对hDPC迁移能力的影响;Western blot检测不同时间点hDPC中p38、ERK1/2、JNK磷酸化水平的变化;细胞划痕实验观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路抑制剂对EPO诱导hDPC迁移的影响。 结果EPO上调趋化因子CXCR4、SDF-1 mRNA的表达（t_CXCR4= 5.727,P_CXCR4= 0.005;t_SDF-1= 3.412,P_SDF-1= 0.027）;与对照组相比,EPO显著促进hDPC的迁移能力（F= 207.775,P_{10 U/ml}= 0.000,P_{20 U/ml}= 0.000,P_{40 U/ml}= 0.000）;EPO可升高MAPK信号通路中关键蛋白ERK1/2（t_{15 min}= 6.554,P_{15 min}= 0.000;t_{30 min}= 17.305,P_{30 min}= 0.000;t_{60 min}= 8.913,P_{60 min}= 0.000;t_{120 min}=-5.896,P_{120 min}= 0.934）和p38的磷酸化程度（t_{15 min}= 4.396,P_{15 min}= 0.004;t_{30 min}= 6.447,P_{30 min}= 0.000;t_{60 min}= 34.676,P_{60 min}= 0.000;t_{120 min}= 4.689,P_{120 min}= 0.003）;MAPK信号通路抑制剂U0126、SB203580可抑制EPO诱导的hDPC迁移（t_EPO-U0126= 2.422,P_{EPO- U0126}= 0.025;t_EPO-SB203580= 3.837,P_EPO-SB203580= 0.001）。 结论EPO上调趋化因子CXCR4和SDF-1 mRNA的表达,通过激活MAPK信号通路,促进hDPC迁移。     

Toll样受体2激动剂Pam3CSK4对人牙髓细胞表达细胞因子的影响

目的研究Toll样受体2（TLR2）激动剂Pam3CSK4对体外培养人牙髓细胞（hDPC）表达细胞因子的影响。方法特异性配体Pam3CSK4体外活化hDPC表面TLR2,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测不同时间处理后hDPC内白细胞介素6（IL-6）、IL-8、IL-1β及半胱氨酸-X-半胱氨酸趋化因子配体10（CXCLl0）mRNA的表达水平;双抗体夹心ELISA法检测上述细胞上清液中IL-6、IL-8蛋白的表达水平;激光共聚焦观察TLR2-核因子κB（NF-κB）信号通路关键蛋白p65的胞内分布情况。结果1μg／mlPam3CSK4处理hDPC0、4、8、12h,荧光定量PCR结果显示,除IL-6mRNA表达水平最先于4h达峰值外（P=0．006）,IL-8、IL-1β及CXCLl0mRNA表达水平均于4h开始升高．8h达峰值（P〈0．001）：双抗体夹心ELISA法显示,hDPC上清液中IL-6及IL-8的蛋白表达于4h开始升高．8～12h趋于平稳。激光共聚焦显微镜发现,表达绿色荧光的NF-κBp65蛋白主要位于对照组细胞质．经1μg／mlPam3CSK4刺激75min后转移至胞核。结论特异性配体Pam3CSK4通过结合hDPC表面TLR2启动细胞内NF-κB信号通路进而激活其转录作用．诱导hDPC表达多种细胞因子．从而参与牙髓炎的早期免疫调控。     

转化生长因子β1增强糖酵解促进舌鳞状细胞癌细胞上皮间充质转化及迁移与侵袭

目的研究转化生长因子β1（TGF-β1）对舌鳞状细胞癌（TSCC）糖酵解活性和上皮间充质转化（EMT）及迁移与侵袭的影响。 方法利用10 ng/mL TGF-β1处理TSCC SCC9细胞1、2、3 d,收集细胞上清液检测葡萄糖和乳酸表达变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TGF-β1处理1、2、3 d后糖酵解关键酶表达变化;应用10 ng/mL TGF-β1处理TSCC SCC9细胞2、4、6 d,在倒置显微镜下定时观察细胞形态;Western blot检测TGF-β1诱导2、4、6 d后EMT上皮标记蛋白E-cadherin、间质标记蛋白Vimentin、Snail和Slug的表达变化;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;同等培养条件下未经TGF-β1处理的为对照组。SPSS 13.0统计软件进行数据分析。 结果在TGF-β1诱导条件下,TSCC SCC9细胞葡萄糖摄取量在2和3 d时[（34.1 ± 1.2）、（47.1 ± 2.3）mmol]较对照组显著升高（t_{2 d}= 17.941,P_{2 d}= 0.003;t_{3 d}= 24.430,P_{3 d}= 0.002）,同时SCC9细胞乳酸生成量在2和3 d时[（46.4 ± 1.0）、（60.2 ± 2.0）mmol]较对照组明显增加（t_{2 d}= 50.230,P_{2 d}= 0.005;t_{3 d}= 26.883,P_{3 d}= 0.004）;TGF-β1处理后,糖酵解关键酶HK2表达在2和3 d时（1.21 ± 0.04、1.30 ± 0.06）均高于对照组,差异有统计学意义（t_2d= 6.111,P_{2 d}= 0.026;t_{3 d}= 6.423,P_{3 d}= 0.023）;糖酵解关键酶PKM2表达在2和3 d时（1.048 ± 0.002、1.071 ± 0.010）与对照组相比,差异无统计学意义（t_{2 d}= 20.693,P_{2 d}= 0.072;t_{3 d}= 9.875,P_{3 d}= 0.081）;糖酵解关键酶PFKP在2和3 d时（0.820 ± 0.010、0.839 ± 0.036）表达较对照组明显升高（t_{2 d}= 21.829,P_{2 d}= 0.020;t_{3 d}= 9.853,P_{3 d}= 0.022）;糖酵解关键酶GLUT1表达在2和3 d时（0.503 ± 0.007、0.589 ± 0.019）均高于对照,差异具有统计学意义（t_{2 d}= 30.693,P_{2 d}= 0.015;t_{3 d}= 21.173,P_{3 d}= 0.012）。在TGF-β1诱导下,与对照组相比,TSCC SCC9细胞从鹅卵石状变为长梭形,同时EMT上皮标记蛋白E-cadherin表达在2、4和6 d时（0.69 ± 0.03、0.67 ± 0.04、0.65 ± 0.04）较对照组降低,差异有统计学意义（t_{2 d}= 7.187,P_{2 d}= 0.019;t_{4 d}= 6.631,P_{4 d}= 0.022;t_{6 d}= 6.690,P_{6 d}= 0.022）,间质标记蛋白Vimentin（1.089 ± 0.134、0.706 ± 0.025、0.620 ± 0.010）表达在2、4、6 d处与对照组相比表达升高（t_{2 d}= 6.948,P_{2 d}= 0.020;t_{4 d}= 16.710,P_{4 d}= 0.004;t_{6 d}= 6.157,P_{6 d}= 0.025）,EMT转录因子snail在2 d时（1.14 ± 0.17）表达与对照组（0.77 ± 0.10）相比表达升高（t= 3.794,P= 0.015）,EMT转录因子slug在2 d时（1.85 ± 0.11）表达与对照组（0.93 ± 0.02）相比表达升高（t= 15.385,P= 0.014）;与对照组（20.0 ± 2.0）相比,TGF-β1处理后细胞迁移能力（45.7 ± 11.6）显著增加（t= 4.529,P= 0.017）,细胞侵袭能力（58.7 ± 5.0）较对照组（22.3 ± 1.5）明显升高（t= 15.571,P= 0.015）。 结论TGF-β1增强糖酵解,并促进TSCC细胞EMT及迁移和侵袭。     

TNF-α及LPS刺激下牙周膜干细胞IκB磷酸化及其下游基因的表达

目的:研究TNF-α及LPS刺激下牙周膜干细胞IκB磷酸化及其下游基因的表达.方法:体外分离、培养人牙周膜干细胞,分别在10 ng/mL TNF-α和500 ng/mL Ecoli.LPS刺激下进行培养,并于刺激培养即时(0 h)、5、30 min和1、2h,采用Western Blot法检测IκBα总蛋白和磷酸化IκBα蛋白的表达变化;Real-time PCR检测IL-6、IL-8 mRNA的表达水平.结果:牙周膜干细胞在10 ng/mL TNFα或500 ng/mL Ecoli.LPS刺激下培养0～2h不同时间后,IκBα总蛋白随刺激时间逐渐降低,1h时最低;磷酸化IκBα随刺激时间逐渐升高,2h时最高;NFκB的下游基因IL-6及IL-8mRNA表达水平均随刺激时间逐渐升高,2h时升高最明显(P＜0.05).结论:炎症细胞因子TNF-α或LPS均可促进牙周膜干细胞中IκBα蛋白的磷酸化,并上调IL-6、IL-8 mRNA的表达;提示NFκB信号通路的活化可能是导致炎症状态下牙周膜干细胞功能损害的重要因素.     

NFκB信号通路在炎症根尖牙乳头干细胞中的作用

目的研究NFκB信号通路在炎症条件下对根尖牙乳头干细胞的作用。方法利用TNFα和Ecoli.LPS刺激人根尖牙乳头干细胞。Western Blot检测IκBα的磷酸化及蛋白降解,采用Real-time PCR在mRNA水平检测IL6及IL8的表达。结果 10 ng/ml TNFα或500ng/ml Ecoli.LPS能诱导IκBα磷酸化及蛋白降解,并且促进NFκB的下游基因IL6及IL8的表达。结论在炎症根尖牙乳头干细胞,TNFα或LPS可以通过IκK复合体激活NFκB信号通路。NFκB信号通路的活化可能是导致炎症状态下根尖牙乳头干细胞功能损害的重要因素。     

miR-146a在人牙髓细胞中的表达及其作用研究

目的 检测miR-146a在正常及脂多糖（LPS）刺激的人牙髓细胞（hDPC）中的表达,探讨miR-146a对hDPC分泌炎性因子的影响及其机制.方法 （1）实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法测定正常及LPS刺激的hDPC miR-146a的表达水平.（2） Lipofectamine 2000脂质体分别转染化学合成的miR-146a类似物（miR-146a mimics）、miR-146a抑制剂（miR-146a inhibitor）及其相应无关序列小RNA对照,转染24 h后1μg/ml LPS刺激hDPC,4h后实时荧光定量PCR检测白细胞介素6（IL-6）、IL-8 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清IL-6、IL-8的分泌;Western blot 法检测miR-146a下游靶标白细胞介素1受体相关激酶1（IRAK1）及肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的蛋白表达水平.两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用方差分析.结果 （1）经LPS刺激的hDPC miR-146a表达水平高于正常hDPC（12 h：t=8.488,P=0.014;24 h：t=39.661,P＜0.001）.（2）转染miR-146a mimics的hDPC在1μg/mlLPS刺激下产生炎性因子IL-6、IL-8的水平低于阴性对照,差异有统计学意义（IL-6 PCR：P＜0.001,IL-6 ELISA：P＜0.001;IL-8 PCR：P＜0.001,IL-8ELISA：P=0.011）;过表达miR-146a后IRAK1及TRAF6蛋白水平明显下调（IRAK1：P=0.002; TRAF6：P＜ 0.001）.结论 miR-146a在LPS刺激的hDPC中表达上调,转染miR-146a可下调其靶基因IRAK1及TRAF6表达并降低IL-6、IL-8分泌,推测miR-146a参与牙hDPC的炎症反应调控.     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症损伤的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)是否对脂多糖(LPS)刺激的血管内皮细胞具有保护作用,为NAC用于治疗种植体周围炎、牙周炎等提供理论基础。方法:通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度的LPS或NAC对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,以获得刺激HUVECs的最适药物浓度。添加最佳药物浓度的LPS和(或)NAC处理HUVECs 24 h,实时半定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测炎症因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞粘附分子-1(ICAM-1)的mRNA表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α和IL-8的蛋白表达;Western blot法检测ICAM-1和NF-κB信号通路的表达情况。结果:LPS刺激HUVECs过量表达炎症因子TNF-α、IL-8和ICAM-1。此外,LPS增加NF-κB通路的磷酸化P65(pP65)表达。然而,NAC预处理HUVECs后,显著抑制了LPS引起的TNF-α、IL-8和ICAM-1表达的增加及降低了pP65的分泌水平。结论:本结果表明NAC保护血管内皮细胞免受LPS介导的炎症损伤,从而减轻炎症反应,其潜在的机制可能与NF-κB信号通路有关。     

PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响

目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞（hDPC）体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002（LY）处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT（p-AKT）水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导＋LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖（24 h：Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h：t=11.674,P＜ 0.05;72 h：t=10.832,P＜ 0.05）;Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用最明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组最多、C组最少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.     

白藜芦醇对高糖环境下牙龈上皮细胞TLR4表达及炎症因子分泌的影响

目的:研究白藜芦醇对高糖环境下牙龈上皮细胞TLR4表达及炎症因子分泌的影响,探讨白藜芦醇对伴糖尿病牙周炎患者的治疗作用及相关分子机制.方法:体外培养牙龈上皮细胞,按照作用方式不同分为正常对照组、高糖组和高糖+白藜芦醇组.荧光定量PCR检测TLR4表达情况;取第3代牙龈上皮细胞,高糖环境下采用或不采用白藜芦醇处理24 h,随后用100 ng/mL LPS处理2 h,ELISA检测IL-1β 、IL-6、IL-8和TNF-α分泌;Western印迹法检测TLR4信号通路下游分子NF-κB p65、p38MAPK和STAT3磷酸化.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:白藜芦醇可以逆转高糖环境下牙龈上皮细胞TLR4水平的升高,同时抑制高糖环境下LPS诱导的IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α表达.Western印迹结果显示,白藜芦醇也可抑制TLR4信号通路下游分子NF-κB p65、p38MAPK和STAT3磷酸化.结论:白藜芦醇通过负向调控TLR4信号通路减轻高糖环境下牙龈上皮细胞炎症因子的分泌.     

颞下颌关节紊乱病不同症状患者心理因素调查

目的研究颞下颌关节紊乱病（TMD）不同症状患者心理社会因素,尤其是焦虑的差别,为心理治疗对策提供试验依据。 方法206例就诊于天津医科大学口腔医院的TMD患者和201名无症状志愿者,填写症状自评量表（SCL-90）和状态-特质焦虑问卷（STAI）,根据患者主诉分组。采用SPSS 17.0统计软件,采用独立样本t检验和单因素方差分析对所有数据进行统计学分析。 结果（1）TMD患者SCL-90量表中的躯体化、抑郁、焦虑、敌对、精神病性因子得分及总分高于无症状志愿者,差异有统计学意义（t_躯体化 = 3.79,P_躯体化 = 0.000;t_抑郁 = 2.14,P_抑郁 = 0.033;t_焦虑 = 2.91,P_焦虑 = 0.004;t_敌对 = 3.93,P_敌对 = 0.000;t_精神病性 = 2.48,P_精神病性 = 0.013;t_总分 = 2.80,P_总分 = 0.005）;女性TMD患者的状态焦虑及特质焦虑得分均高于女性无症状志愿者（t_状态焦虑 = 3.52,P_状态焦虑 = 0.001;t_特质焦虑 = 4.26,P_特质焦虑 = 0.000）,两组男性之间差异无统计学意义（t_状态焦虑 = 0.36,P_状态焦虑 = 0.718;t_特质焦虑 = 0.76,P_特质焦虑 = 0.453）;（2）不同症状TMD患者在躯体化和状态焦虑方面差异有统计学意义（F_躯体化 = 2.714,P_躯体化 = 0.046;F_特质焦虑 = 3.007,P_特质焦虑 = 0.031）,具有单纯疼痛症状者躯体化得分高于单纯弹响患者（P = 0.005）,单纯弹响及疼痛伴弹响患者的特质焦虑得分高于疼痛伴开口受限者（P = 0.016）。 结论TMD患者心理健康水平比无症状人群低,主要表现在躯体化、抑郁、焦虑、敌对和精神病性方面。女性TMD患者有明显焦虑特征。单纯疼痛TMD患者躯体化比单纯弹响者更为明显。     

转录因子Nanog过表达对人牙髓细胞增殖及多向分化能力的影响

目的探讨过表达多能相关转录因子Nanog对人牙髓细胞增殖及多向分化能力的影响。 方法构建过表达Nanog的慢病毒载体质粒pSIN-EF2-Nanog-IRES-GFP-puro,采用psPAX和pMD2.G慢病毒包装系统转入293T细胞进行病毒液的生产和收取,转染生长良好的第3代人牙髓细胞,构建稳定过表达Nanog的人牙髓细胞株,以空载体转染的细胞为对照组,对细胞进行成脂及成牙本质诱导。采用BrdU法检测细胞的增殖情况,检测多能性转录因子Oct4和Sox2的表达,以及细胞成脂、成牙本质分化能力。采用单因素方差分析数据。 结果成功构建Nanog过表达的人牙髓细胞株;BrdU法检测结果显示,Nanog过表达组比对照组细胞增殖能力强（F = 90.421,P = 0.000）。过表达组Oct4、Sox2 mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组（F_{Oct4 mRNA} = 71.649,P_{Oct4 mRNA}=0.000;F_{Sox2 mRNA} = 106.278,P_{Sox2 mRNA} = 0.000;F_Oct4蛋白 = 41.632,P_Oct4蛋白 = 0.002;F_Sox2蛋白 = 38.962,P_Sox2蛋白 = 0.002）。在矿化诱导条件下,Nanog过表达组DSPP、DMP1和OCN表达量、矿化结节产生量高于对照组（F_DSPP = 15.261,P_DSPP<0.05;F_DMP1 = 16.235,P_DMP1<0.05;F_OCN = 17.019,P_OCN<0.05）;成脂诱导21 d后,Nanog过表达组LPL和PPARγ2表达量及脂质产生高于对照组（F_LPL = 15.542,P_LPL<0.05;F_PPARγ2 = 10.437,P_PPARγ2<0.05）。 结论过表达Nanog能提高人牙髓细胞增殖能力,促进多能性转录因子Oct4、Sox2的表达,增强细胞多向分化能力。     

神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白对牙髓细胞增殖的影响

目的探索神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白(NRAGE)对人牙髓细胞(h DPCs)和小鼠成牙本质细胞(MDPC-23)细胞增殖的影响。方法重组慢病毒转染细胞稳定敲除h DPCs和MDPC-23的NRAGE表达,体外组织块法原代培养h DPCs和MDPC-23,进而检测NRAGE对h DPCs和MDPC-23的增殖影响。采用CCK-8法分析NRAGE对h DPCs和MDPC-2细胞增殖的影响,流式细胞术分析NRAGE对h DPCs和MDPC-23的细胞周期分布和细胞凋亡影响。免疫荧光法检测NRAGE和NF-κB的表达和定位,分析NF-κB蛋白表达水平,并用IKK抑制剂处理细胞后,分析细胞周期和细胞凋亡。结果重组慢病毒转染后NRAGE的mRNA和蛋白水平下降显着。NRAGE敲减后抑制了h DPCs和MDPC-23的增殖活性和凋亡。NRAGE敲减后显示h DPCs的G0G1期滞留显著,而对MDPC-23没有影响。同时,NRAGE敲减后激活NF-κB信号通路。IKK抑制剂可以抑制NRAGE敲除后对h DPCs和MDPC-23的细胞凋亡的抑制作用。结论 NRAGE敲减后抑制牙髓细胞的增殖活性。NRAGE通过NF-κB信号通路调控h DPCs的细胞周期和凋亡。     

FAM20C在体外培养人牙髓细胞中的表达及成牙本质向分化诱导对其表达的影响

目的研究人牙髓细胞（hDPC）体外培养传代过程中FAM20C的表达模式,及对hDPC成牙本质向分化诱导后FAM20C的表达变化。 方法蛋白免疫印迹法（Western blot）检测第1代至第7代（P1 ~ P7）hDPC中FAM20C蛋白的表达量;结果采用独立样本t检验;对P3代hDPC进行成牙本质分化诱导7和14 d后,反转录聚合酶链反应与Western blot检测FAM20C的mRNA和蛋白水平变化。牙本质涎磷蛋白（DSPP）、牙本质基质蛋白1（DMP1）表达变化,FAM20C的mRNA以及蛋白表达变化采用单因素方差分析。免疫荧光法检测FAM20C在hDPC中的分布。 结果体外培养的hDPC中可检测到FAM20C表达,表达量随细胞传代先增加后减少（t_P2=-10.177,P_P2= 0.001;t_P3=-18.242,P_P3<0.001;t_P4=-19.143,P_P4<0.001;t_P5=-7.452,P_P5= 0.002;t_P6= 1.357,P_P6= 0.246;t_P7= 1.099,P_P7= 0.334）;成牙本质向分化诱导7和14 d后,FAM20C的mRNA和蛋白表达量高于未诱导组细胞（F_{FAM20C mRNA}=86.252,P_{FAM20C mRNA,7 d}<0.001,P_{FAM20C mRNA,14 d}<0.001;F_FAM20C蛋白= 85.569,P_{FAM20C蛋白,7 d}= 0.002,P_{FAM20C蛋白,14 d}<0.001）。免疫荧光结果显示,成牙本质诱导前FAM20C蛋白表达于细胞核,诱导后主要表达于细胞质,诱导14 d FAM20C在细胞质中表达量高于诱导7 d。 结论hDPC中表达FAM20C,成牙本质向分化诱导上调其表达水平,诱导后在细胞质中表达较高,提示FAM20C与hDPC的成牙本质分化相关。     

炎症因子通过核因子κB通路促进口腔鳞状细胞癌转移的体外研究

目的 探讨炎症因子与核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号转导通路在口腔鳞状细胞癌转移中的意义.方法 应用口腔鳞状细胞癌低转移细胞系Tca8113和高转移细胞系Tb为研究对象,通过蛋白质印迹法和荧光素酶报告基因法检测口腔鳞状细胞癌细胞系中NF-κB通路活性.用NF-κB抑制因子α(inhibitor of kappa B alpha,IκBa)抑制质粒第32、36位丝氨酸磷酸化位点被丙氨酸替代的质粒(pBabe-SR-IκBa)和NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrolidinedithiecar bamate,PDTC)抑制信号转导通路活性,并用侵袭小室实验(TransweH)检测口腔鳞状细胞癌高转移系Tb细胞侵袭能力的变化.此外,通过酶联免疫吸附法检测pBabe-SR-IκBα和PDTC抑制信号转导通路后,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素(IL)-1a、IL-6、IL-8和粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)等炎症因子的分泌.结果 蛋白质印迹法检测显示:高转移Tb细胞中磷酸化IκBα和磷酸化p65的表达量明显高于低转移细胞系Tea8113,分别为Tea8113细胞的3.19倍和6.81倍.荧光素酶(luciferase)报告基因结果显示,Tb细胞NF-κB的启动子活性为Tca8113的2.12倍(P<0.01),并对TNF-α更为敏感.转染pBabe-SR-IκBα和应用PDTC抑制NF-κB通路后,对Tb细胞的体外侵袭能力抑制率分别为21.9%和69.3%.此外,酶联免疫吸附试验法显示通路抑制后,TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和GM-CSF等炎症因子的分泌也明显降低.结论 TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和GM-CSF等炎症因子可能通过NF-κB通路促进口腔鳞状细胞癌细胞转移.     

白藜芦醇减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤并抑制TLR4/NF-κB活化

目的:探究白藜芦醇(RES)对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的保护作用.方法:体外培养并鉴定hPDLCs,将培养的hPDLCs随机分为5组:对照组、LPS(10 μg/ml)+RES(0、30、60、90tμmol/L)组,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测各组细胞分泌TNF-α/IL-6水平,PCR和Western blot检测各组细胞TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达.结果:分离培养的hPDLCs抗波丝蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性.与对照组比,LPS处理后细胞增殖能力明显降低,细胞分泌TNF-α/IL-6水平和TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达明显增加;30～90 μmol/L白藜芦醇预处理后,细胞增殖能力增加(P＜0.05),细胞分泌TNF-α/IL-6水平、TLR4/NF-κB mRNA以及蛋白表达则下调(P＜0.05),均呈现一定的浓度依赖性.结论:白藜芦醇可抑制TLR4/NF-κB活化并减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤.     

脂多糖和转化生长因子-β1对牙髓细胞Toll样受体4的表达及信号通路的影响

目的研究牙髓炎症过程中,在促炎因子脂多糖（LPS）和抑炎因子转化生长因子-β1（TGF-β1）同时存在的情况下,牙髓细胞表面Toll样受体4（TLR4）的表达水平及相关信号分子的变化情况。方法LPS、TGF-β1作用于体外培养的牙髓细胞,用流式细胞术检测牙髓细胞表面TLR4的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）、Westernblot方法检测相关信号分子的表达水平,包括进化保守的Toll信号中介分子（ECSIT）和核转录因子-κB（NF-κB）;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测前炎症因子白细胞介素-6（IL-6）的分泌水平;然后进一步通过real-time PCR法检测临床炎症牙髓组织中相应指标的变化。结果体外培养的牙髓细胞在LPS、TGF-β1共同作用下,细胞表面TLR4的表达水平没有明显变化,但是IL-6分泌增加,ECSIT表达增加,NF-κB入核增加。临床标本的real-time PCR结果表明：炎症状态下的牙髓组织中TGF-β1 mRNA表达增加,TLR4 mRNA表达没有明显变化,ECSIT及IL-6 mRNA表达增加。结论牙髓炎症发展过程中,虽然牙髓组织中TGF-β1表达增加,抑制细胞表面TLR4的表达,但TLR4的信号通路仍然被活化,主要机制可能是LPS引起信号分子ECSIT的活化,从而抑制TGF-β1信号通路的活化。