疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响

目的观察疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响。方法将60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、疏肝健脾方(1.5、3.0、6.0 g/kg)组和阳性药秋水仙碱(0.1×10-3g/kg)组,每组10只。除正常组外,其余各组采用50%四氯化碳(CCl4)每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,灌胃给予不同剂量的疏肝健脾方和秋水仙碱,正常组和模型组给予等量溶媒,每天1次,连续6周。HE和Masson染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化法检测肝组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏病理组织学损伤程度明显加重,肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,疏肝健脾方(3.0、6.0 g/kg)组和秋水仙碱组肝组织损伤减轻,胶原纤维沉积减少(P0.05,P0.01),CollagenⅠ、α-SMA、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01)。结论疏肝健脾方具有抗肝纤维化作用,其机制与减少细胞自噬,降低能量的生成,从而抑制肝星状细胞活化有关。     

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学以及α-SMA蛋白表达的影响

目的观察补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理学的影响。方法 SD大鼠随机分为空白对照组8只、模型组15只、秋水仙碱组15只、补肾柔肝方组15只。均以标准鼠食饲养,自由饮水,除空白对照组外,其余各组大鼠采用CCl4造模8周制备肝纤维化模型。从第9周开始,秋水仙碱组、补肾柔肝方组灌胃相应药物,空白对照组、模型组灌胃等体积生理盐水,均连续灌胃8周。末次给药后2 h,取肝组织进行HE、天狼猩红染色,评价肝细胞变性与胶原纤维增生程度。分别采用RT-PCR法和蛋白印迹法检测肝组织α-SMA表达情况。结果补肾柔肝方组大鼠肝脏的纤维化程度明显低于模型组;与空白对照组相比,模型组大鼠的α-SMA蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组相比,秋水仙碱组及补肾柔肝方组α-SMA蛋白表达水平有所降低(P均0.05)。结论补肾柔肝方能够降低大鼠肝脏内α-SMA蛋白的表达水平,具有明确的抗肝纤维化作用。     

复方半枝莲颗粒对肝纤维化中PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察复方半枝莲颗粒对40%CCl_4复合因素致肝纤维化模型大鼠PI3K/Akt信号通路中蛋白表达的影响,探讨复方半枝莲颗粒对肝纤维化治疗的作用机制。方法:将SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱对照组、大黄?虫丸对照组和复方半枝莲颗粒高、中、低剂量组。采用赫伍德法制备肝纤维化大鼠模型,造模成功后分别予以相应药物灌胃治疗4 w。治疗结束后采集样本,进行免疫组化,Western blot检测样本中PI3K、Akt蛋白表达情况。结果:(1)免疫组织化学法结果:模型对照组大鼠肝脏组织PI3K、Akt镜下阳性表达率显著高于正常对照组(P<0.05);各药物治疗组大鼠肝脏组织PI3K、Akt镜下阳性表达率显著低于模型对照组(P<0.05)。(2)Western blot结果:模型对照组大鼠肝脏组织PI3K、Akt表达量均显著高于正常对照组(P<0.05);与模型对照组比较,各治疗组大鼠肝组织PI3K的蛋白表达量显著下降(P<0.05),除复方半枝莲颗粒低剂量组外,余各治疗组大鼠肝脏组织Akt的蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论:复方半枝莲颗粒可能通过调控肝纤维化过程中PI3K/Akt信号通路的传导,在一定程度上促进与其关系密切的肝星状细胞的凋亡,从而改善肝纤维化大鼠模型的纤维化程度,逆转肝纤维化的进展。     

扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg·kg^-1)、扶脾柔肝方组(8.54 g·kg^-1)、扶脾方组(4.58 g·kg^-1)、柔肝方组(3.96 g·kg^-1)。采用四氯化碳腹腔注射和乙醇灌胃复制HF大鼠模型,灌胃给药4周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);HE、Masson染色观察病理变化情况;电镜观察大鼠肝组织超微结构;Western Blot和qRT-PCR方法检测大鼠肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的HF程度明显,胶原容积分数明显增加(P<0.01),电镜发现自噬小体增多,线粒体结构损害,大鼠血清ALT、AST明显升高(P<0.01),肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-ⅡmRNA及蛋白表达上调(P<...     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-Ⅱ表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27 g·kg~(-1)),秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1))。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5 mL·kg~(-1))联合灌胃30%乙醇(10 mL·kg~(-1))制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10 mL·kg~(-1)),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及Western Blot法检测大鼠肝组织Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(P 0.05,P 0.01),ALB含量显著降低(P 0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1和LC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(P 0.01)。与模型组比较,FRF中、高剂量组的γ-GGT显著下降(P 0.05,P 0.01),FRF各剂量组的大鼠血清ALT、AST、TBIL明显降低(P 0.05,P 0.01),ALB升高(P 0.05,P 0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1、LC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(P 0.01)。结论FRF能干预纤维组织增生,改善肝功能,其抗肝纤维化机制可能与下调Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。     

槐果碱通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路缓解完全弗氏佐剂致大鼠炎性痛作用机制

目的:探讨槐果碱缓解完全弗氏佐剂致大鼠炎性痛的PI3K/Akt/NF-κB信号通路机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组、炎性痛模型组、阳性药对照组(地塞米松0.3mg/kg)及槐果碱组(30、15、7.5 mg/kg)。于造模前1 d、造模后2 d(给药前1d)及给药后1、4、7 d,采用热辐射和Von Frey法分别测定大鼠热刺激缩足反射潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)与机械刺激缩足反射阈值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT);末次给药后24 h,取大鼠炎症部位组织,采用RT-PCR法检测PI3K、Akt及NF-κB mRNA表达水平,采用Western blot法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及NF-κB蛋白表达水平。结果:与模型组比较,给予槐果碱30 mg/kg后第4、7 d,使致炎性痛大鼠热刺激缩足反射潜伏期显著延长,机械刺激缩足反射阈值显著升高,可下调大鼠炎症部位组织PI3K、Akt及NF-κB mRNA和蛋白表达水平,降低p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平。结论:槐果碱对CFA所致炎性痛具有一定的缓解作用,其机制与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。     

基于网络药理学探讨化瘀软肝胶囊对肝纤维化大鼠的肝脏保护作用

目的 基于网络药理学与实验动物模型验证探讨化瘀软肝胶囊对肝纤维化大鼠的肝脏保护作用。方法 通过网络药理学预测化瘀软肝胶囊治疗肝纤维化的作用靶点与信号途径。采用复合因素诱导8周建立肝纤维化大鼠模型，模型复制成功后随机分为模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg)及化瘀软肝胶囊低、中、高剂量组(0.031 5、0.063 0、0.094 5 g/mL),另设空白组，药物干预6周后处死，HE染色与天狼猩红染色观察肝组织形态学变化及胶原纤维沉积状况，Western blot法检测肝组织PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子及LC3-B、Beclin-1蛋白表达，免疫荧光染色法检测肝组织α-SMA蛋白表达。结果 共筛选出化瘀软肝胶囊活性成分128种；预测药物与疾病共有靶点367个；蛋白相互作用PPI网络筛选出23个核心节点；富集分析结果表明，化瘀软肝胶囊主要通过调控PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等途径发挥抗肝纤维化作用。动物实验验证结果表明，与空白组比较，模型组大鼠肝组织纤维桥接形成，且伴有明显的纤维化现象，LC3-B、Beclin-1、α-SMA蛋白表达升高(P<0.01)...     

清热解毒扶正颗粒对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的探讨清热解毒扶正颗粒对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)的部分作用机制。方法采用烟熏及气管内注入脂多糖建立COPD大鼠模型,经清热解毒扶正颗粒治疗后,用ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor,TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(metallopeptidase inhibitor-1,TIMP-1)水平;用Western Blot检测肺组织磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-hydroxy kinase,PI3K)、蛋白激酶B (protein kinase B,Akt)、核因子-κB-1 (nuclear factor-κB-1,NF-κB-1)蛋白表达。结果造模后大鼠血清的TNF-α、TIMP-1、MMP-9均不同程度的升高,与空白对照组比较,TNF-α、MMP-9升高,有显著性差异(P0.05),TIMP-1升高无显著性差异(P0.05)。经清热解毒扶正颗粒灌胃治疗后,大鼠血清的TNF-α、TIMP-1、MMP-9均不同程度的降低。与模型组比较,清热解毒扶正颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α水平(P0.01);清热解毒扶正颗粒中剂量组显著降低TIMP-1水平(P0.01),清热解毒扶正颗粒高剂量组显著降低TIMP-1水平(P0.05),清热解毒扶正颗粒低剂量组降低TIMP-1水平,但差异不显著(P0.05);清热解毒扶正颗粒低、中、高剂量组降低MMP-9水平不显著(P0.05)。造模后磷酸化Akt、NF-κB-1、PI3K蛋白表达不同程度地增高,与空白组比较,模型组增高有显著性差异(P0.05)。经清热解毒扶正颗粒灌胃治疗后,与模型组比较,清热解毒扶正颗粒高剂量组显著降低磷酸化Akt、NF-κB-1、PI3K蛋白表达水平(P0.05);清热解毒扶正颗粒中剂量组显著降低磷酸化Akt蛋白表达水平(P0.05);清热解毒扶正颗粒中剂量组、低剂量组对磷酸化NF-κB-1、PI3K蛋白表达作用不显著(P0.05),清热解毒扶正颗粒低剂量组对磷酸化Akt作用不显著(P0.05)。结论清热解毒扶正颗粒可降低炎性因子水平,抑制Akt、NF-κB-1、PI3K蛋白表达,进而抑制炎症反应,对PI3K/Akt/NF-κB信号通路有一定的调节作用。     

益气化瘀化痰法制剂对CCL_4所致肝纤维化大鼠肝组织KLF15、NF-κB及下游炎症因子的影响

目的观察益气化瘀化痰法制剂对四氯化碳(CCL_4)所致肝纤维化大鼠模型的治疗作用及其可能机理。方法 105只雄性SD大鼠,随机选取10只为空白对照组,其余大鼠采用腹腔注射40%CCL4玉米油溶液联合高脂低蛋白饮食建立肝纤维化大鼠模型,成模后随机分为模型组(10只)、秋水仙碱组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰合剂组(各9只),分别给予相应药物制剂灌胃治疗,模型组及空白对照组以等量生理盐水灌胃,连续用药12周后处死大鼠。苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)、天狼猩红(Sirius Red)染色观察肝组织形态学变化,RT-q PCR法检测肝组织KLF15、核因子κB(NF-κB)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN m RNA)表达水平,Western Blot检测肝组织NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织大量胶原纤维沉积,纤维化明显;NF-κB、IL-1β、TNF-α、Col-Ⅰ、FN m RNA表达显著上调(P0.01),KLF15 m RNA表达显著下调(P0.01);NF-κB、IL-1β蛋白表达显著上调(P0.05)。与模型组相比,各药物干预组肝纤维化程度减轻,NF-κB、IL-1β、TNF-α、Col-Ⅰ、FN m RNA表达下调(P0.05),KLF15 m RNA表达上调(P0.05),NF-κB、IL-1β蛋白表达显著下调(P0.05),其中益气化瘀化痰合剂组各项指标改善最明显(P0.05)。结论益气、化瘀、化痰法和秋水仙碱均可以降低肝组织内纤维化程度,改善部分纤维化指标,其作用机制可能与上调肝组织KLF15表达,抑制NF-κB等炎症相关因子的表达有关。其中益气化瘀化痰法合剂优于单法治疗和秋水仙碱治疗。     

基于PI3K/Akt/NF-κB通路探讨前列舒通胶囊对慢性非细菌性前列腺炎大鼠的影响

目的 探讨前列舒通胶囊抗慢性非细菌性前列腺炎(CNP)的作用。方法 采用角叉菜胶诱导建立CNP大鼠模型,随机分为模型组、普乐安片(阳性药)组和前列舒通胶囊低、中、高剂量组,另设假手术组,每组10只。给药4周后取材,HE染色观察大鼠前列腺组织形态变化,ELISA法检测血清和前列腺组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平,Western blot法检测前列腺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠前列腺组织内有大量炎性细胞浸润和腺体增生,血清和前列腺组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.01),前列腺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,普乐安片组及前列舒通胶囊各剂量组大鼠前列腺炎症及破坏程度减轻,血清和前列腺组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05,P<0.01),前列腺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达降低(P<0.01)...     

乌丹丸对寒凝血瘀子宫内膜异位大鼠PI3K/Akt/m TOR自噬信号轴及相关分子表达的影响

目的 探讨乌丹丸对寒凝血瘀型子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠自噬信号轴磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB又称Akt）/雷帕霉素靶分子（mammalian target of rapamycin,mTOR）及相关分子表达的影响。方法 随机将49只雌性SD大鼠分为假手术组、模型组、乌丹丸高、中、低剂量组、散结镇痛胶囊组、地诺孕素组,每组7只,采用冰水浴联合自体子宫内膜移植法建立寒凝血瘀EMs大鼠模型。假手术组及模型组每天给予10 m L/kg生理盐水灌胃,乌丹丸高、中、低剂量组分别给予2.4 g/kg、1.2 g/kg、0.6 g/kg灌胃,散结镇痛胶囊组每天给予0.48 g/kg灌胃,地诺孕素组每天给予0.2 mg/kg灌胃,各组持续用药28日。应用蛋白免疫印迹法和免疫组化法检测异位内膜组织自噬信号轴PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白以及相关自噬分子LC3、Beclin-1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠异位内膜组织PI3K/Akt/m T...     

肝豆扶木汤对CuCl2诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用和机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨肝豆扶木汤（GDFMD）对氯化铜（CuCl₂）诱导的人肝癌细胞（HepG2）氧化损伤的保护作用。方法 HepG2细胞分为空白组，模型组，GDFMD组，PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235（10 nmol·L^-1）组，GDFMD+NVP-BEZ235（10 nmol·L^-1）组。采用200 μmol·L^-1 CuCl₂构建模型组铜负荷HepG2细胞，酶联免疫吸附测定法（ELISA）观察细胞超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量；免疫荧光观察细胞微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞磷酸化PI3K（p-PI3K）/PI3K，磷酸化Akt（p-Akt）/Akt，磷酸化mTOR（p-mTOR）/mTOR，Beclin-1，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ，p62表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞PI3K，Akt，mTOR，Beclin-1，LC3Ⅰ，LC3Ⅱ，p62 mRNA表达。结果 与空白组比较，模型组细胞SOD，GSH-Px活性下降，MDA含量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，10% GDFMD含药血清组SOD，GSH-Px活性升高，MDA含量下降（P<0.05，P<0.01）；NVP-BEZ235组GSH-Px活性下降，MDA含量升高（P<0.05）。与空白组比较，模型组p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR，p62表达水平显著降低，Beclin-1，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，10% GDFMD组p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR，p62表达水平升高，Beclin-1，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平下降（P<0.05，P<0.01）；NVP-BEZ235组p-PI3K/PI3K，p-mTOR/mTOR表达水平下调，Beclin-1，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平升高（P<0.05，P<0.01）。与10% GDFMD组比较，10% GDFMD+NVP-BEZ235组p-Akt/Akt，p-mTOR/mTOR表达水平下降，Beclin-1，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平升高（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，模型组LC3Ⅱ蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，10% GDFMD组LC3Ⅱ蛋白表达降低，与10% GDFMD组比较，10% GDFMD+NVP-BEZ235组LC3Ⅱ蛋白表达升高。各组PI3K，Akt，mTOR mRNA相对表达量差异无统计学意义，与空白组比较，模型组p62 mRNA相对表达量显著降低，Beclin-1，LC3Ⅰ，LC3Ⅱ mRNA相对表达量显著升高（P<0.01）；与模型组比较，10% GDFMD组p62 mRNA相对表达量升高，Beclin-1，LC3Ⅰ，LC3Ⅱ mRNA表达水平下调（P<0.01）；NVP-BEZ235组Beclin-1 mRNA相对表达量升高（P<0.05）。与10% GDFMD组比较，10%GDFMD+NVP-BEZ235组Beclin-1，LC3Ⅱ mRNA相对表达量升高（P<0.01）。结论 GDFMD能抑制CuCl₂诱导的HepG2细胞过度自噬，减轻细胞氧化损伤，其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。     

化痰通脉饮对多囊卵巢综合征大鼠IRS-1-PI3K/Akt及NF-κB信号串流的影响

目的:观察化痰通脉饮对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型胰岛素受体底-1-磷脂酰肌醇-3激酶(IRS-1-PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)及核转录因子-κB(NF-κB)信号串流的影响,为中药复方多靶点多通路作用起效模式的论证提供科学的依据,为治疗PCOS开辟新的思路。方法:将大鼠分为正常组、模型组、二甲双胍组(二甲双胍0. 16 g·kg~(-1)·d~(-1))和化痰通脉饮低、中、高剂量组(8,16,24 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只,利用"胰岛素(INS)联合绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导大鼠PCOS模型"方案对非正常组大鼠进行造模,完成后采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠肝脏中IRS-1,PI3K,Akt,NF-κB p65,NF-κB抑制蛋白(IκB)等蛋白表达和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL~(-1)β)的变化。结果:与正常组比较,模型组肝脏中IRS-1,Akt,PI3K,IκB蛋白表达明显降低(P 0. 05),NF-κB p65蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与模型组比较,化痰通脉饮高剂量组大鼠的肝脏中IRS-1,Akt,PI3K,IκB蛋白表达明显升高(P 0. 05),NF-κB p65蛋白表达明显降低(P 0. 05)。模型组大鼠血清中TNF-α,IL~(-1)β水平较正常组明显升高(P 0. 05);化痰通脉饮低、中、高剂量组大鼠血清中TNF-α,IL~(-1)β水平较模型组明显降低(P 0. 05)。结论:PCOS发病过程中IRS-1-PI3K/Akt与NF-κB通路有交叉作用,化痰通脉饮对涉及的IRS-1-PI3K/Akt与NF-κB通路异常均有较好的回调作用。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

扶脾柔肝方含药血清对大鼠原代肝星状细胞上皮间质转化及自噬的影响

目的观察扶脾柔肝方(FRR)含药血清对大鼠原代肝星状细胞(PHSC)上皮间质转化及自噬的影响。方法体外培养大鼠原代肝星状细胞,设立空白对照组,模型组,FRR低、中、高剂量组(20、40、80 g·kg~(-1),10%含药血清),氯喹组(CQ,50μmol·L~(-1)),采用转化生长因子-β1(TGF-β1,10 ng·mL~(-1))刺激PHSC发生上皮间质转化,给予相应药物干预24 h。RFP-GFP-LC3斑点法观察HSC自噬;脂滴染色观察脂质变化情况;实时荧光定量PCR法和Western Blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果与空白对照比较,模型组HSC自噬增强(P0.01),脂质减少(P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.01),E-cadherin降低(P0.01);与模型组比较,FRR中、高剂量组HSC自噬减弱(P0.01),脂质增加(P0.05,P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01);与氯喹组比较,FRR大剂量组Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01)。结论 FRR药物血清可降低大鼠HSC自噬水平,增加细胞脂质,降低Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达,升高E-cadherin表达,具有逆转HSC上皮间质转化与抑制细胞自噬的功效。     

苦参素对肝纤维化大鼠肝组织NF-κB和CTGF表达的影响

目的:探讨苦参素对实验性肝纤维化大鼠的肝组织核转录因子-κB(NF-κB)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:利用四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型。SD雄性大鼠45只,随机分为苦参素组(60 mg.kg-1 ip,1次/d,连续10周)、模型组和正常对照组(ip溶液橄榄油)于造模同时开始给予。10周后剖取肝脏采用HE染色观察各组大鼠肝组织病理改变;免疫组织化学法检测NF-κB,CTGF在肝组织内的表达。结果:与模型组大鼠比较,苦参素组大鼠肝纤维化水平明显减轻(P<0.01),肝组织NF-κB,CTGF表达明显降低(P<0.01)。结论:苦参素可抑制模型大鼠肝纤维化的形成和发展,其机制可能与下调肝内NF-κB,CTGF表达有关。     

针刺结合颈通康通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路减轻大鼠颈动脉狭窄机制研究

目的：探究针刺结合颈通康对重度颈动脉狭窄模型大鼠的影响及所涉及的信号通路机制。方法：将SD雄性大鼠45只随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤组(简称原方组)、颈通康组与针刺结合颈通康组(简称针药组),每组9只。模型组、原方组、颈通康组与针药组均采用颈动脉钳夹联合维生素D₃注射、高脂饮食构建颈动脉粥样硬化性狭窄大鼠模型,假手术组颈部虽切开但不进行颈总动脉钳夹术。待造模成功后,原方组予补阳还五汤灌胃给药;颈通康组予颈通康灌胃;针药组予颈通康灌胃,同时进行针刺;假手术组与模型组则使用等量生理盐水灌胃;2次/d,各组均连续给药4周。干预结束后,应用Western Blot检测分析模型大鼠颈动脉组织中PI3K、AKT与NF-κB蛋白表达情况;应用PCR分析模型大鼠颈动脉组织中PI3K、AKT、NF-κB mRNA表达情况;应用全自动生化分析仪测定模型大鼠颈动脉组织中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。结果：与假手术组比较,模型组TC、TG、LDL-C、PI3K mRNA、Akt mRNA、NF-κB m...     

和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路的影响

目的 观察和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肝纤维化的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组,造模组大鼠每周2次颈背部皮下注射60%CCl4溶液（CCl4∶橄榄油=3∶2）,剂量3 mL/kg,连续12周,复制肝纤维化大鼠模型。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及和血柔肝方低、中、高剂量组,每组10只。各给药组分别予相应药液灌胃,对照组和模型组予等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。给药结束后分别检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）,HE染色观察大鼠肝组织病理变化,RT-PCR检测大鼠肝组织鞘氨醇激酶1(SphK1)、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)及转化生长因子-β（TGF-β）m RNA表达,Western blot检测大鼠肝组织SphK1、S1PR3、ERK1、PTEN和TGF-β蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量...     

银杏叶提取物对大鼠纤维化肝脏NF-κB活性的抑制作用

目的探讨银杏叶提取物对大鼠纤维化肝脏核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法采用四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型。设立银杏叶提取物治疗组,秋水仙碱治疗对照组,模型组及空白组,分别灌胃给药。实验末期采用自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST),放射同位素检测血清透明质酸酶(HA)。免疫组化SP法检测NF-κBp65蛋白表达的改变,光镜下观察肝组织病理学变化。结果银杏叶提取物可以显著降低CCl4诱导的肝纤维化大鼠血清ALT、AST水平;银杏叶提取物组HA含量大幅度下降;模型组的肝脏损伤及其纤维化分级均明显高于正常组,银杏叶提取物的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组;银杏叶提取物显著抑制纤维化肝脏组织NF-κBp65蛋白的活性。结论银杏叶提取物可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,抑制NF-κB的表达可能是其抗肝纤维化作用的靶点之一。