B7-H1分子免疫病理在多发性肌炎中的临床研究

目的 通过免疫组化染色了解协同刺激分子B7-H1蛋白在多发性肌炎(PM)和肢带型肌营养不良2B型(LGMD 28)患者肌组织中的表达情况,探讨其在PM诊断和鉴别诊断中的意义.方法 选择苏州大学附属第一医院神经内科自2006年1月至2009年12月收治的43例PM患者(PM组),26例LGMD 2B型患者(LGMD 2B组)及21例肌活检正常者(对照组).对所有成员行肌肉活检,冰冻切片后进行常规HE染色、免疫组织化学染色,检测肌组织中B7-H1蛋白的表达.结果 (1)PM组与LGMD 2B型组肌肉活检普通病理染色结果相似,表现为不同程度的坏死、吞噬、再生现象,伴有不同程度的炎细胞浸润.(2)PM组B7-H1蛋白阳性表达主要定位于细胞膜,呈棕黄色至棕褐色,主要集中在有炎细胞浸润的变性、坏死肌纤维上;其肌组织中B7-H1蛋白表达水平比较LGMD2B型组和对照组成员肌组织中水平明显增高(分别为69.77%、26.92%、4.76%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 协同刺激分子B7-H1在PM患者肌组织中高表达,参与了PM的免疫学发病机制,可成为PM与继发性炎细胞浸润性肌病相鉴别的免疫病理标志.

Abstract：

Objective To analyze the protein expression of costimulatory molecule B7-H1 in muscular tissues of patients with polymyositis (PM) and limb-girdle muscular dystrophy-2B type (LGMD-2B), and investigate its relevance to the pathogenesis of PM and its role in the diagnosis and identification of PM. Methods Forty-three patients with PM, 26 patients with LGMD -2B and 21 with normal muscle biopsy were recruited. Muscle biopsy was performed before frozen sections, and then, HE staining and immunohistochemistry were employed to detect the protein expression of B7-H1 in muscle tissues of each group. Results The results of HE staining of muscle tissues in the PM group and LGMD 2B group were very similar; varying degrees of necrosis, phagocytosis and regeneration phenomenon were noted with varying degrees of inflammatory cell infiltration. In PM group,muscle-related expression of B7-H1 was observed on the surface of muscle fibers (the cytomembrane). It was localized in areas where inflammatory cells lay in close apposition to damaged or non-necrotic muscle fibers. The B7-H1 protein in the PM muscular tissue was significantly increased as compared with that in the LGMD -2B tissue and normal tissue (69.77%, 26.92%, 4.76%, P<0.05). Conclusion Costimulatory molecule B7-H1 is highly expressed in the muscular tissue of patients with PM and it may be involved in the immunological pathogenesis of PM. It can be used to make a distinction between PM and other myopathies that have secondary inflammatory changes.     

B7-H1分子免疫病理在多发性肌炎中的临床研究

目的 通过免疫组化染色了解协同刺激分子B7-H1蛋白在多发性肌炎(PM)和肢带型肌营养不良2B型(LGMD 28)患者肌组织中的表达情况,探讨其在PM诊断和鉴别诊断中的意义.方法 选择苏州大学附属第一医院神经内科自2006年1月至2009年12月收治的43例PM患者(PM组),26例LGMD 2B型患者(LGMD 2B组)及21例肌活检正常者(对照组).对所有成员行肌肉活检,冰冻切片后进行常规HE染色、免疫组织化学染色,检测肌组织中B7-H1蛋白的表达.结果 (1)PM组与LGMD 2B型组肌肉活检普通病理染色结果相似,表现为不同程度的坏死、吞噬、再生现象,伴有不同程度的炎细胞浸润.(2)PM组B7-H1蛋白阳性表达主要定位于细胞膜,呈棕黄色至棕褐色,主要集中在有炎细胞浸润的变性、坏死肌纤维上;其肌组织中B7-H1蛋白表达水平比较LGMD2B型组和对照组成员肌组织中水平明显增高(分别为69.77%、26.92%、4.76%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 协同刺激分子B7-H1在PM患者肌组织中高表达,参与了PM的免疫学发病机制,可成为PM与继发性炎细胞浸润性肌病相鉴别的免疫病理标志.     

B7-H1分子免疫病理在多发性肌炎中的临床研究

目的 通过免疫组化染色了解协同刺激分子B7-H1蛋白在多发性肌炎(PM)和肢带型肌营养不良2B型(LGMD 28)患者肌组织中的表达情况,探讨其在PM诊断和鉴别诊断中的意义.方法 选择苏州大学附属第一医院神经内科自2006年1月至2009年12月收治的43例PM患者(PM组),26例LGMD 2B型患者(LGMD 2B组)及21例肌活检正常者(对照组).对所有成员行肌肉活检,冰冻切片后进行常规HE染色、免疫组织化学染色,检测肌组织中B7-H1蛋白的表达.结果 (1)PM组与LGMD 2B型组肌肉活检普通病理染色结果相似,表现为不同程度的坏死、吞噬、再生现象,伴有不同程度的炎细胞浸润.(2)PM组B7-H1蛋白阳性表达主要定位于细胞膜,呈棕黄色至棕褐色,主要集中在有炎细胞浸润的变性、坏死肌纤维上;其肌组织中B7-H1蛋白表达水平比较LGMD2B型组和对照组成员肌组织中水平明显增高(分别为69.77%、26.92%、4.76%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 协同刺激分子B7-H1在PM患者肌组织中高表达,参与了PM的免疫学发病机制,可成为PM与继发性炎细胞浸润性肌病相鉴别的免疫病理标志.     

外周血淋巴细胞CD40／CD40L表达与多发性肌炎／皮肌炎发病关系

目的:初步探讨协同刺激分子CD40/CD40L在多发性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)发病机制中的作用。方法:采用流式细胞学检测PM/DM患者外周血淋巴细胞CD40、CD40L的表达,并与正常健康人对照。结果:CD40、CD40L在正常健康人外周血淋巴细胞几乎无表达,但在PM/DM患者表达增高,PM患者CD40平均荧光强度为10.24±4.15,CD40L平均荧光强度为1.35±0.77;DM患者CD40平均荧光强度为13.67±5.83,CD40L平均荧光强度为1.73±0.98。PM/DM患者比较差异无显著性(P>0.05)。结论:CD40/CD40L的表达可能参与了PM/DM的发病。     

特发性多发性肌炎复发规律的观察

目的 探讨特发性多发性肌炎(idiopathic polymyositis,IPM)复发的特点及可能相关的因素.方法 回顾性分析作者医院45例IPM患者的临床资料.结果 45例IPM患者中复发19例,复发率为42.2%,复发总次数为28次,9例(47.4%)多次复发,年复发次数0.59次/人.复发于皮质类固酵激素减量后期者占57.9%,稳定维持治疗阶段者占31.6%,减量初期者占10.5%.复发诱囚包括疲劳、精神刺激和感染.复发与无复发者在年龄、性别、病情严重程度、吞咽网难、肺部并发症、最初血清CK水平、红细胞沉降率等方面差异无统计学意义(P＜0.05).复发者激素与免疫抑制剂的联合应用比率低于无复发者(P＜0.05).IPM复发率于4个季节均衡分布(P＜0.05).结论 IPM多复发于皮质类固醇激素减量后期,与性别、年龄、临床特点及血清CK等无关;单独使用激素治疗者易复发;复发与季节无关.     

少年特发性炎性肌病的研究进展

少年特发性炎性肌病(JIIMS)主要包括少年皮肌炎(JDM)、少年多发性肌炎(JPM)和少年包涵体肌炎.作为炎性肌病的一类,因少见而对其知之较少,本文将对JIIMS的流行病学、诊断标准、临床特点、治疗、疾病活动的评估和监测以及发病机制等方面最新研究进展进行综述.     

共刺激分子与神经系统自身免疫性疾病

T细胞活化需要双信号，共刺激分子在T细胞活化、分化及免疫效应的维持中起着重要作用。本文就共刺激分子的生物学特性及在几种神经系统自身免疫性疾病中的作用作一综述，以期进一步探索神经系统自身免疫性疾病发病机制和针对共刺激途径的靶向性治疗。     

特发性炎性肌病的蛋白组学研究进展

特发性炎性肌病主要包括皮肌炎、多发性肌炎和散发性包涵体肌炎,该类肌病发病机制未明确,用于临床诊断的特异性抗体缺乏。使用蛋白组学研究数据虽然较少,但有所发现。皮肌炎主要与氧化应激相关蛋白有关,多发性肌炎多与炎症、线粒体功能障碍和氧化磷酸化通路异常相关,而散发性包涵体肌炎不仅与氧化应激、线粒体功能障碍、炎症相关,还与变性相关。本文就蛋白质组学在特发性炎性肌病目前的研究做一综述。     

CD28/B7-1在多发性肌炎中的作用及雷公藤多甙的影响

多发性肌炎 (ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ,ＰＭ)是一组常见的自身免疫性炎性肌病。已有研究表明 ,ＰＭ的发病机制与Ｔ细胞异常活化有关。Ｔ细胞的活化需要两个刺激信号 :Ｔ细胞受体 /白细胞分化抗原 3(ＴＣＲ/ＣＤ3)复合物与抗原提呈细胞 (ＡＰＣ)上的组织相容性抗原 Ⅱ (ＭＨＣ Ⅱ )类抗原结合 ,提供第一信号 ;Ｔ细胞上的协同刺激分子如ＣＤ2 8与ＡＰＣ表面的配体 (Ｂ7 1 /Ｂ7 2 )结合提供第二信号 ,在第二信号的协同作用下 ,Ｔ细胞活化 ,增殖分化为效应细胞。阻断或抑制Ｔ细胞的活化过程 ,使其处于无反应状态 ,则有可能达到治疗ＰＭ的目的。…     

多发性硬化合并多发性肌炎一例

1 临床资料 患者女，44岁，因劳累后出现全身肌肉疼痛、乏力1个月，加重伴四肢浮肿2周，于2006-02-22入院。2000年曾因肢体麻木在作者医院诊断为“急性脊髓炎（C2-3）”，经治疗后好转；2003年出现双下肢乏力、麻木伴右侧胸背部痛诊断为“多发性硬化”（MS）。入院查体：四肢凹陷性浮肿，全身肌肉压痛，双上肢肌力Ⅴ级，双下肢肌力Ⅳ^＋级，双下肢腱反射未引出。     

Expression of costimulatory molecules on peripheral blood mononuclear cells in multiple sclerosis

OBJECTIVE: To determine whether there was aberrant expression of costimulatory molecules and their receptors on peripheral blood mononuclear cells of MS patients and healthy individuals and whether expression correlated with disease status. METHODS: Forty-six patients with MS and 29 healthy individuals were analyzed by direct 2-color immunofluorescence flow cytometry for expression of CD80, CD86, CD28 and CTLA-4 on T and B cells and monocytes. RESULTS: Expression of CD80 on CD4+ T cells was upregulated in progressing MS patients compared to stable MS patients and controls. Marked increase in the expression of CD80 and CD86 was seen on both CD4+ and CD8+ T cells from an MS patient with rapidly progressing disease. No difference in the expression of the costimulatory molecules or their ligands was seen between IFN-beta treated and non-treated MS patients. CONCLUSIONS: Aberrant expression of costimulatory molecules occurs on T lymphocytes in MS patients with progressing disease.     

Differential expression of costimulatory molecules B7-1 and B7-2 on microglial cells induced by Th1 and Th2 cells in organotypic brain tissue.

Autoreactive T-cells are involved in demyelination, neurodegeneration, and the recruitment of peripheral macrophages and nonspecific activated T-cells in autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS). The ligation of costimulatory B7 molecules on microglia with CD28/CTLA-4 on T-cells is thought to be crucial to the onset and course of MS and its rodent model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). It is currently unclear as to how far the nature of infiltrating T-cells has an impact on the expression of the B7 molecules on microglia, the resident antigen-presenting cells (APCs) of the brain. We studied the expression of B7-1 and B7-2 on microglia after encounter with preactivated Th1 and Th2 cells from transgenic mice whose T-cells express a receptor (TCR) either specific to myelin basic protein (MBP) or ovalbumin (OVA) using murine organotypic entorhinal-hippocampal slice cultures (OEHSC). Our main finding was that Th1 cells downregulate the constitutive expression of B7-2 and induce B7-1 expression while Th2 cells do not induce this B7-1 upregulation. The main difference between MBP- and OVA-specific cells was seen in experiments were Th1 cells had direct contact to APCs but not to brain tissue. In contrast to MBP-specific Th1 cells, OVA-specific Th1 cells required the addition of antigen to upregulate B7-1 and downregulate B7-2. When the cells were allowed to have contact to brain tissue, no difference was seen in the pattern of B7 regulation between OVA- and MBP-specific T-cells. Our data suggest that T-cells are able to modulate B7 expression on microglial cells in the brain independent of antigen presentation through TCR/MHC-II ligation but presumably by soluble mediators.     

单纯多发性肌炎的临床、病理和CD28/CTLA-4:B7表达的研究

目的　研究单纯多发性肌炎 (SPM)的临床、病理特征和CD2 8/CTLA 4 :B7表达及其发病机制。方法　回顾性总结 14 1例SPM患者的临床资料 ,收集 6例治疗前症状高峰期PM病人的外周血 ,单色流式细胞术 (FCM)检测外周血淋巴细胞协同刺激分子CD2 8、CTLA 4、B7 1、BB 1和B7 2的表达 ,并与正常健康者对照。结果　本组主要表现肌无力、肌痛或肌捏痛 ,肌酸激酶 (CK)等血清肌酶谱增高 ,肌电图呈肌源性损害。肌肉病理主要表现为肌纤维变性坏死和再生 ,散在萎缩 ,肌内膜炎症细胞浸润。SPM组外周血淋巴细胞CD2 8、CTLA 4、B7 1、B7 2的表达增加 ,FCM显示CTLA 4及B7 1的平均荧光强度各自与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ,CD2 8及B7 2也有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,BB 1在SPM组与对照组表达量均极少。结论　肌肉病理检查是诊断SPM的重要依据 ,协同刺激分子CD2 8/CTLA 4 :B7可能是SPM发病的重要环节。     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内CD4 、CD8、CD28和CD152表达的影响

目的 探讨左旋咪唑（Levamisole,LMS）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152表达的影响及其意义。方法 采用临床症状评分、病理学检查和流式细胞术，观察LMS处理和非处理条件下豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE临床表现、病理改变及脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152分子表达水平。结果 LMS同时给药促发组和预处理组EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28表达水平明显高于非LMS处理的EAE模型组（P〈0．01），病理变化更加明显。而CD8、CD152表达水平差异无统计学意义。结论 LMS可促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28的表达，提示LMS上调CD4、CD28的表达可能与LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病有关。     

急性脑血管病患者协同刺激分子表达的研究

目的：探讨急性脑血管病患者血液中协同刺激分子白细胞分化抗原簇80（chuster of differention80,CED80,B7-1)、白细胞分化抗原簇86（cluster of differention86,CD86,B7-2)、白细胞分化抗原簇28（cluster of differention28,CD28）,细胞毒性T淋巴细胞抗原－4（cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)蛋白的表达和B7－1、B7－2信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达其与急性脑血管病病损的关系。方法：应用分子生物学技术,检测急性期脑梗死（26例）,脑出血患者（26例）和年龄匹配的26名健康对照者外周血淋巴细胞B7－1,B7－2,CD28和CTLA－4蛋白的表达和外周血淋巴细胞B7－1、B7－2mRAN的表达,各病列均经头部CT或MRI并计算病灶体积,采用改良爱丁堡＋斯堪的那维亚评分标准（SSS）对临床神经功能 缺损程度进行评分,分析其相互关系。结果：外周血淋巴细胞B7－1、CD28和CTLA－4蛋白的表达,脑梗死组高于脑出血组,两组均高于健康对照组;外周血淋巴细胞B7－2蛋白的表达,三组间无显著性差异,健康对照组外周血淋巴细胞未检测到CTLA－4蛋白的表达;外周血淋巴细胞B7－1mRNA的表达,脑梗死组高于脑出血组,两组均高于健康对照,外周血淋巴细胞B7－2mRNA的表达,三组间无显著性差异,脑梗死组B7－1及CD28与SSS呈正相关,脑出血组协同刺激分子的表达以及病灶的大小与SSS无相关性,脑梗死组病灶的大小与SSS呈正相关,结论：协同刺激分子B7－1、CD28和CTLA－4在急性脑血管病的病理机制中起着重要作用。     

TGF-β1基因修饰的树突状细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠外周血单个核细胞CD28/CTLA-4:B7表达的影响

目的 探讨TGF-β1基因修饰的树突状细胞(DC)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)CD28/CTLA-4:B7表达的影响.方法 近交系8～10周龄健康雌性Lewis大鼠30只,分为正常组、EAMG组、DC对照组、pcDNA3-TGF-β1-DC组、pcDNA3-DC对照组、生理盐水对照组.除正常组外,其余各组均采用丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体(AChR)蛋白二次免疫的方法复制EAMG大鼠模型.初次免疫后第5天分别皮下注射2×106的DC、pcDNA3-TGF-β1-DC、pcDNA3-DC及等体积的生理盐水,正常组和EAMG组不接受任何治疗.初次免疫后7周分离各组PBMC,应用RT-PCR和流式细胞术方法分别进行CD28、CTLA-4 mRNA及B7-1、B7-2蛋白表达水平的检测.结果 (1)正常组大鼠PBMC CD28、CTLA-4 mRNA的表达水平较低,尤其CTLA-4 mRNA极少量表达;EAMG组大鼠CD28、CTLA-4 mRNA的表达水平均明显增加;pcDNA3-TGF-β1-DC组CD28 mRNA的表达较EAMG组明显降低(P<0.01),而CTLA-4 mRNA的表达水平较EAMG组明显增加(P<0.05);EAMG组、DC治疗组、pcDNA3-DC对照组和生理盐水对照组之间CD28、CTLA-4 mRNA的表达水平无显著性差异(P＞0.05).(2)正常大鼠B7-1、B7-2在PBMC上少量表达;EAMG组B7-1、B7-2两者表达明显增加(P<0.001);pcDNA3-TGF-β1-DC治疗组B7-1、B7-2的表达较EAMG组均明显降低(P<0.01);DC对照组、pcDNA3-DC对照组、生理盐水对照组与EAMG组比较均无明显差异(P＞0.05).结论 EAMG大鼠存在PBMC CD28/CTLA-4:B7协同刺激分子的表达异常,主动调节机体的共刺激通路可能是TGF-β1基因修饰的DC治疗EAMG的机制之一.     

糖皮质激素对多发性硬化患者外周血淋巴细胞CD80和CD4+CD25+T细胞表达的影响

目的探讨糖皮质激素(GC)对多发性硬化(MS)患者外周血淋巴细胞CD80和CD4+CD25+T细胞表达的影响。方法利用流式细胞仪检测21例MS急性期患者GC治疗前后外周血淋巴细胞CD80和CD4+CD25+T细胞阳性率,并与正常对照组比较;比较MS患者治疗前后扩展功能障碍状况量表(EDSS)评分的变化。结果MS患者急性期外周血淋巴细胞CD80的阳性率[(5.031±1.782)%]较正常对照组[(6.436±2.035)%]明显下降(P<0.05),经GC治疗后CD80的阳性率[(6.467±1.882)%]明显增高(P<0.01);CD4+CD25+T细胞阳性率治疗前后与正常对照组间差异均无统计学意义;治疗后EDSS评分[(3.64±1.79)分]较治疗前[(4.26±1.68)分]明显下降(P<0.01)。结论GC可上调MS患者淋巴细胞CD80的表达,抑制细胞免疫,促进MS病情缓解。     

急性缺血性脑卒中患者外周血白细胞CD11c/CD18表达的变化

目的探讨外周血白细胞CD11c/CD18表达与急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)发病的关系。方法采用流式细胞术和单克隆抗体标记测定28例AIS患者(AIS组)发病72h内及病程第7d2次外周血中性粒细胞(PMN)和单核细胞(MNL)表面CD11c、CD18的表达量,以平均荧光强度(MFI)表示其相对含量,并与28名健康对照者(对照组)比较。结果AIS组发病72h内外周血PMN表面CD11c、CD18MFI分别为20.82±5.88、218.25±89.00;病程7d时为18.60±5.52、185.52±68.44;均显著高于对照组CD11c、CD18MFI(15.63±3.01、150.76±41.20);发病72h内外周血MNL表面CD11c、CD18MFI分别为34.78±14.56、286.75±95.50,病程7d时为31.97±14.47、247.00±88.06,均显著高于对照组CD11c、CD18MFI(20.20±8.50和186.38±52.97)(P<0.05~0.01);发病7d时CD11c、CD18MFI虽有所下降,但与发病72h内比较差异无显著性(P>0.05)。结论AIS时激活的PMN、MNL表面β2整合素CD11c、CD18表达上调,CD11c、CD18可能参与了炎症反应。     

急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD137的表达特点及其临床意义

目的探讨急性动脉粥样硬化性脑梗死(atherosclerotic cerebral infarction,ACI)患者外周血肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptor super family,TNFRSF)成员CD137的表达特点及其临床意义。方法入选发病72h以内住院患者共46例,其中ACI组27例,无症状性颈动脉狭窄(asymptomatic carotid stenosis,ACS)组19例,另选择同期健康体检者20名为正常对照组(normal control,NC)。采用流式细胞术和流式细胞磁珠微阵列法(CBA)检测各组观察对象外周血CD4~+T细胞及其CD4~+CD28-T细胞亚群表面CD137的表达和血浆可溶性CD137水平。结果 ACI组外周血CD4~+CD28-T细胞比例[(14.13±4.42)%]、CD4~+CD28-T细胞CD137的表达[(2.60±2.14)%]、血浆sCD137[(3.43±2.48)pg/mL]水平显著高于ACS组[(9.03±4.60)%、(0.70±0.66)%、(2.07±0.814)pg/mL]和NC组[(8.08±3.30)%、(0.45±0.31)%、(1.26±0.70)pg/mL](P0.01),且ACI组CD4~+T细胞的CD137表达及血浆sCD137水平与NIHSS评分(P0.05)和梗死体积(P0.01)呈正相关。结论 ACI患者发病早期CD4~+CD28-T细胞、CD4~+T细胞及其CD4~+CD28-T细胞表面CD137、血浆sCD137水平升高,且CD4~+T细胞的CD137表达及血浆sCD137水平与NIHSS评分呈正相关,提示其可能作为评估脑梗死临床严重程度的外周生物学标志。