急性白血病患儿多药耐药基因表达的临床意义

目的探讨急性白血病(AL)患儿多药耐药(MDR)相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTπ)、肺耐药相关蛋白(LRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TOPⅡα)、TOPⅡβ的表达及临床意义。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测139例AL患儿上述6种MDR相关基因的mRNA表达水平。结果1)难治组前5种基因表达水平与敏感组相比有非常显著差异(P<0.01)。2)复发14例患儿初治时LRP、TOPⅡα表达水平与复发后存在非常显著差异。3)6种基因表达水平与年龄及白细胞计数无相关性。4)经多元相关分析发现所有病例mdr1与MRP,mdr1与GST,πmdr1与LRP,GSTπ与LRP,GSTπ与MRP,LRP与MRP间呈正相关(P<0.01),TOPⅡα与mdr1,MRP,GSTπ呈负相关(P<0.05)。结论mdr1、MRP、GSTπ、LRP、TOPⅡα是独立于年龄及白细胞之外的反应儿童AL复发难治的预后因素,LRP、TOPⅡα与继发耐药有关,不同耐药基因间存在相关性。     

儿童急性髓细胞白血病WT1基因表达及其临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(AML)患儿WT1基因表达情况及其与临床预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测45例非M3儿童AML的WT1表达水平,并回顾性分析其与AML预后的关系。结果骨髓幼稚细胞比例60%的AML患儿WT1表达水平高于幼稚细胞≤60%的患儿(P0.05)。M2病例组初诊时WT1表达量低于非M2病例组(P0.05)。完全缓解组患儿的WT1表达量显著低于初诊组和复发组(P0.01)。诱导化疗结束时WT1高表达组的2年无病生存率(DFS)低于WT1低表达组(P0.05)。诱导化疗结束时WT1下降程度≥1个数量级病例组的2年总生存率(OS)和DFS高于WT1下降程度1个数量级病例组(P0.05)。AML患儿骨髓复发2~3个月前WT1表达呈上升趋势。结论 WT1表达水平与儿童AML预后密切相关,动态监测WT1表达在指导儿童AML个体化治疗、预后评估和复发预测方面具有重要临床应用价值。     

儿童急性白血病多药耐药基因检测的临床价值

随着联合化疗的应用,儿童急性白血病的疗效已有极大提高,但仍有部分患儿达不到完全缓解或缓解后易复发。多年的研究发现,白血病细胞多药耐药性(ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)是白血病难以获得良好疗效的障碍。多药耐药基因(ｍｄｒ1)的扩增和过度表达所引起的ＭＤＲ是其中的一个重要机制[1]。我们以半定量逆转录聚合酶链反应(ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ)技术检测了33例儿童急性白血病细胞中ｍｄｒ1ｍＲＮＡ基因的表达,初步探讨了其与临床耐药的关系。对象…     

急性白血病多药耐药的产生机制及其临床意义

急性白血病(AL)细胞对抗癌药物的耐药是AL化疗失败、肿瘤复发的主要原因之一,其中主要的耐药形式为多药耐药。最具代表的经典耐药机制为细胞膜上P糖蛋白(P-gp)的产生。耐药检测为临床提供评判化疗和预后的实验室依据。     

儿童急性髓细胞性白血病复发原因

目的：探讨小儿急性髓细胞性白血病（AML）复发原因。方法：分析小儿AML39例，均为初治，采用DA或DAE或HA或维甲酸治疗，缓解后经巩固，再给予强化方案治疗3个疗程以上。结果：39例中有14例复发，其中M1 1例，M2 7例，M3 2例，M41例，M5 3例，复发平均时间为15个月，复发原因与患儿年龄（＜18个月，＞10岁）有关，年龄越大，对化疗耐受性差，预后不佳，其次，AML的预后与缓解速度快慢有关，缓解速度越快，预后较好，本组复发病例多为第一疗程后不缓解，复发14例在强化过程中有早期细胞上升现象，结论：小儿AML复发与年龄，疾病缓解速度有关，是否与治疗过程中有无早期细胞反跳现象有关，尚待进一步观察。     

EVI1基因阳性的儿童急性髓细胞性白血病生物学及临床特征分析

目的 研究EVI1 基因在急性髓细胞性白血病（AML）患儿中的表达及EVI1 基因阳性AML 患儿的临床特征。方法 收集分析EVI1 阳性患儿的临床资料;采用RT-PCR 法和实时荧光定量聚合酶链反应法（RQ-PCR）定性和定量测定EVI1 的表达;流式细胞术检测骨髓细胞免疫表型;多参数流式细胞术（MFC）监测微小残留白血病（MRD）;同时对染色体进行检查。结果 241 例AML 患儿中,有33 例EVI1 基因表达呈阳性（13.7%）;与EVI1 基因表达阴性的AML 患儿相比,EVI1 阳性AML 患儿的初诊年龄、外周血白细胞计数、血红蛋白含量和血小板计数差异均无统计学意义（均P>0.05）,但女性患儿比例增加（P<0.05）;EVI1 表达改变与临床缓解和MRD 改变不同步,部分患儿EVI1 转阴滞后于临床缓解和MRD 转阴,而部分患儿临床未缓解或MRD 仍呈阳性,但EVI1 已转阴;EVI1 常与其他融合基因共表达;免疫表型分析提示EVI1 阳性AML 患儿高表达CD33（100%）、CD38（88%）和HLADR（76%）;15 例患儿发现染色体结构或数目异常;EVI1 表达阳性AML 患儿第1 疗程完全缓解（CR）率明显低于EVI1 表达阴性患儿（P<0.05）。结论 EVI1 基因表达阳性的AML 患儿近期预后差;EVI1 基因在AML 的病程中活化不是孤立的,而是与其他基因相互作用或染色体异常的结果,其活化机制及功能还需进一步研究。     

101例儿童急性髓细胞性白血病免疫表型与预后相关分析

目的探讨免疫表型对儿童急性髓细胞性白血病的预后价值。方法采用流式细胞术检测101例儿童急性髓细胞性白血病(AML)患儿相关免疫表型,分析免疫表型对完全缓解(CR)及无疾病生存期(DFS)的影响。结果CD34阴性组及CD34、HLA-DR同时阴性组一疗程CR率均明显高于非阴性组,差异有统计学意义(P=0.008,0.000);DFS的CD34阴性组,HLA-DR阴性组以及CD34和HLA-DR同时阴性组均明显高于非阴性组,差异有统计学意义(P=0.004,0.006,0.040),而CD14,CD15,CD7,CD19差异对CR和DFS均无统计学意义。结论免疫表型对评估AML患儿的预后有一定意义。     

儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究

目的：初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能的作用及意义。方法：运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平。以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞：①采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达。结果：ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组（P<0.01）。阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应（P<0.05）;阿霉素作用24 h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);细胞WAVE1 mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：WAVE1在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标。     

多重RT-PCR检测儿童急性髓细胞性白血病融合基因的临床与实验研究

目的研究儿童急性髓细胞性白血病(AML)染色体畸变所形成融合基因的临床和实验关系。方法采用多重巢式RT_PCR方法对38例儿童AML的融合基因联合染色体核型分析、免疫表型、临床资料进行研究。结果38例儿童AML中有23例(60.53%)具有4种融合基因:MLLex7/AF9、TLS/ERG、AML1/ETO、PML1RARα。8例患儿有HOX11原癌基因活化,7例为单纯表达HOX11原癌基因活化,1例同时伴有其他融合基因表达。伴AML1-ETO、PML-RARα的20例患儿中接受化疗的11例全部达CR,且无复发。结论基因分型是儿童AL最精确的分型方法,为临床化疗提供方向:AML表达HOX11者预后不良;伴MLL基因重排者预后极差。采用多重RT-PCR方法可快速同时检测儿童急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,完善白血病的MICM分型、指导临床个体化治疗。     

ras基因与儿童急性髓细胞性白血病关系研究

目的探讨ras基因在儿童急性髓细胞性白血病（AML）中的表达及其与治疗和预后的相关性。方法用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量方法检测ras基因家族（K—ras,N—ras,H—ras）的表达水平,结合细胞形态学、流式细胞仪免疫分型检测、染色体R带显带核型分析,对36例初诊AML及部分病例进行跟踪。同期采集30例特发性急性血小板减少性紫癜（ITP）患儿骨髓标本作为对照。结果实验组与对照组相比。N-ras、K—ras的平均表达水平明显升高,差异有统计学意义,其中N—ras更具显著意义。AML患儿中ras基因突变多见于M2、M4及M5型。对2例M2患儿进行跟踪检测（1例为不同时期包括初诊和缓解期及复发前的测定,另1例为长期无病生存）,ras基因水平异常活化可见于复发前,也可见于长期缓解患儿。结论初诊儿童AMLras基因表达水平异常增高。ras检测可作为判断儿童AML疗效、预后及随访指标之一。     

多药耐药细胞系K562/HHT和K562/VCR的建立及耐药性逆转的研究

目的研究人白血病细胞多药耐药（ＭＤＲ）的发生机理及逆转方法。方法建立了Ｋ５６２／ＨＨＴ和Ｋ５６２／ＶＣＲ两株ＭＤＲ细胞系，经免疫组化染色观察了Ｐ－糖蛋白（Ｐｇｐ）和ＭＤＲ相关蛋白（ＭＲＰ）的表达；采用四氮甲基唑蓝（ＭＴＴ）药敏试验及测定细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）含量的方法研究了异搏定和红霉素对ＭＤＲ的逆转作用。结果两株ＭＤＲ细胞系均有Ｐｇｐ高度表达，但无ＭＲＰ表达。５μｇ／ｍｌ异搏定和５０μｇ／ｍｌ红霉素都能部分逆转两株ＭＤＲ细胞系的耐药性。２．５～１０μｇ／ｍｌ异搏定不仅能增加ＭＤＲ细胞对ＤＮＲ的摄取量，也能减少ＤＮＲ的外排，且上述作用随异搏定浓度的增加而增强；５０～２００μｇ／ｍｌ红霉素则对ＭＤＲ细胞摄取和外排ＤＮＲ无明显影响。结论Ｐｇｐ可能与白血病细胞产生ＭＤＲ有关；异搏定和红霉素对白血病细胞ＭＤＲ有逆转作用。     

急性淋巴细胞性白血病患儿巯嘌呤耐受性研究

目的 调查急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastie leukemia,ALL)患儿,维持化疗期间巯嘌呤(6-mercaptopurine,6-MP)的耐受性,为进一步研究6-MP耐受性差异的原因提供依据.方法 选择规范应用北京儿童医院急性淋巴细胞性白血病2003年化疗方案(BCH-ALL-2003),随访至2008年9月30日的患儿.全部患儿处于骨髓缓解期,且维持化疗≥13个月.详细记录患儿6-MP服用情况,包括服用剂量以及恶心、呕吐、皮疹等用药反应,以调查6-MP的耐受性.所有患儿每周复查血常规,间隔4周复查肝功能,并根据检查结果进行6-MP毒性分级.记录6-MP停止时间和剂量减少程度.结果共133例,男81例,女52例,中位年龄67个月(18～188个月),中位缓解时间26个月(6～47个月).6-MP维持化疗(13.5±7.4)个月(3～25个月),其中6-MP标准剂量、全疗程者72例(54%),剂量46 ms/(m~2·d),白细胞(WBC)(3～4)×10~9/L,中性粒细胞(ANC)(1.5～2.0)×10~9/L,肝脏毒性小于Ⅱ级,4例(3%)患儿ANC持续在3×10~9/L以上,6-MP剂量增加为标准剂量125%.余61例患儿均为严重不耐受6-MP者,其中骨髓抑制48例(同时伴肝毒性9例),单纯肝脏功能异常12例,反复皮疹1例.平均毒性反应出现时间为2.5周.19例患儿平均停用6-MP 7 d,42例患儿平均6-MP实际剂量25～30 ms/(m~2·d).结论 ALL患儿个体间6-MP的耐受性差异很大,46%ALL患儿对6-MP的标准治疗剂量表现为明显的骨髓抑制和肝功能异常等不耐受反应,临床需要根据血常规不断调整6-MP的剂量,以避免较大的毒性反应的发生,而3%患儿给予标准剂量6-MP,表现为无轻度骨髓抑制等化疗反应,临床需要增加6-MP剂量以减少复发危险性.但如何更准确地进行6-MP剂量调整是临床研究的难题之一.选择6-MP严重不耐受患儿进行6-MP代谢酶活性和基因多态性研究,以明确ALL儿童6-MP耐受性差异的原因,为进一步进行个体化药物剂量的调整提供理论依据.     

长链非编码RNA linc00467在儿童急性髓系白血病中的表达及耐药中的作用研究

目的 研究长链非编码RNA linc00467在儿童急性髓系白血病（AML）中的表达及功能。方法 采集2016年5月至2018年6月确诊的5例儿童AML病例的骨髓标本,以进行骨髓检查提示为正常的3例儿童骨髓标本作为对照。通过实时荧光定量PCR检测并比较linc00467在两组样本中的表达量。通过慢病毒系统在AML细胞（HL-60）中过表达linc00467（linc00467过表达组）,以表达绿色荧光蛋白（GFP）的空载体转入AML细胞作为对照（GFP对照组）;通过慢病毒系统将干扰序列插入AML细胞中（sh-linc00467干扰组）,以插入随机序列作为对照（sh-NC对照组）。检测各组细胞增殖情况及对阿霉素耐药性的影响。结果 与对照组儿童相比,linc00467在儿童AML中表达上调。过表达与干扰linc00467表达对细胞增殖无明显影响（P > 0.05）。相比于GFP对照组,过表达linc00467在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL阿霉素浓度作用下均可增强HL-60细胞活性（P < 0.05）。相比于sh-NC对照组,干扰linc00467的表达在0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 μg/mL阿霉素浓度作用下均可降低HL-60细胞活性（P < 0.05）。与未处理组相比,阿霉素处理HL-60细胞后linc00467表达量升高（P < 0.05）。结论 linc00467有促进AML细胞对阿霉素耐药的生物学功能,为AML新的治疗药物开发提供了依据。     

儿童急性淋巴细胞白血病化疗后血流感染的病原体分布与耐药变迁分析北大核心CSCD

目的研究儿童急性淋巴细胞白血病化疗后血流感染病原体分布变化及耐药变迁趋势。方法收集2015年1月至2020年12月郑州大学第一附属医院收治的急性淋巴细胞白血病化疗后血流感染患儿的临床资料,并按送检时间分为前3年组和后3年组,分析病原体分布及耐药性的差异。结果共检出病原体235株,其中革兰阴性菌159株(67.7%),以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主;革兰阳性菌61株(26.0%),以表皮葡萄球菌为主;真菌15株(6.4%),以白色念珠菌为主。前3年组和后3年组革兰阴性菌(68.8%vs 66.9%)、革兰阳性菌(29.2%vs 23.7%)比例差异无统计学意义(P>0.05),后3年组缓症链球菌(5.8%vs 0.0%)和真菌(9.4%vs 2.1%)比例较前3年组增高(P<0.05),两组间革兰阴性菌和革兰阳性菌的耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性淋巴细胞白血病患儿化疗后血流感染病原体以肠杆菌科细菌为主,而缓症链球菌和真菌检出呈增多趋势,临床需重视。     

Mutations of retinoblastoma gene (Rb-1) as a prognostic factor in children with acute leukemia and neuroblastoma

Rb-1 is a tumor suppressor gene encoding for a nuclear phosphoprotein acting as a cell cycle regulator, normally expressed in hematopoietic cells and more often inactivated by point mutations with predominance for exons 20-24. The aim of this study is to correlate the retinoblastoma-1 (Rb-1) gene mutations with the prognosis and progression of childhood acute leukemia and neuroblastoma. Bone marrow slides from 26 children with leukemia (18 acute lymphoblastic leukemia [ALL] and 8 acute myeloid leukemia [AML]) and 4 children with neuroblastoma were studied. Exons 20, 21, and 22 were amplified using the polymerase chain reaction technique. Single strand conformational polymorphism (SSCP) and heterodoublex analysis were performed to detect mutations. In ALL cases, two samples in exon 20 (11.11%), one in exon 21 (5.56%), and four in exon 22 (22.22%) had altered conformation. All but one of these cases were classified as high-risk leukemia patients who either relapsed or never achieved remission. Two of the AML cases who did not achieve remission and one of the neuroblastoma cases with concomitant bone marrow infiltration had altered conformation as well. The SSCP and heterodoublex analysis showed that all but one who did not belong to the high-risk group had the same altered conformation. These data suggest that Rb-1 gene could possibly be used as an independent prognostic factor for the acute leukemia of childhood and result in the intensification of chemotherapy. In solid tumors with bone marrow involvement it could play a role as a marker of aggressive disease.     

儿童急性髓系白血病的免疫学特征与预后的关系

目的：急性髓系白血病（AML）免疫表型与AML患者的化疗效果及预后的关系至今未达成共识。该文分析儿童AML免疫表型与FAB形态学分型以及染色体核型异常的关系,评价儿童AML免疫表型与治疗相关因素及预后的临床重要性。方法：自1998年1月1日至2003年5月31日进入AML-XH-99治疗方案的所有在我院新诊治的AML患儿,诊断采用MICM分型诊断,治疗按AML-XH-99危险度分类标准进行分层治疗。用流式细胞仪进行免疫表型分析,将免疫表型结果分为5组,髄系免疫标志CD13,CD33,MPO（自2001年9月采用单抗胞浆内标记）;髓系相关抗原CD14,CD15;系性特异抗原-红系免疫标志GlyA,巨核系细胞标志CD41;淋系相关抗原CD19,CD7;非系列特异性抗原CD34,HLA-DR。分别计算各免疫表型在FAB形态学分型及染色体核型中表达的灵敏度及阳性预测值;各免疫表型的生存分析采用Kaplan-Meier方法;生存之间的比较采用log-rank检验;各免疫表型患儿一疗程缓解率的比较采用χ2检验或Fisher精确概率法（双尾）;COX比例风险模型用于分析单独各免疫表型进入回归方程中是否为独立预后因素。结果：① 74例患儿中有72例（97.3％）患儿至少有CD13、CD33、MPO中的一种或两种抗原阳性表达;45例（60.8％）患儿有两个或两个以上髓系抗原表达,伴有淋系相关抗原表达的为18例,占24.3％。在M2患儿中,常伴有淋系抗原CD19的表达,阳性预测值（PPV）为75％;FAB分型为急性早幼粒细胞白血病的患儿,缺乏HLA-DR及淋系相关抗原（CD19或CD7）的表达,阴性预测值（NPV）为100％;CD41阳性表达与M7相关,PPV为66.7％; ②单因素分析显示各免疫表型与AML患儿的一疗程缓解率及长期无事件生存（EFS）率无关; ③多因素分析显示各免疫表型均无独立的预后价值。结论：儿童AML患儿的免疫表型对预后无明显影响,不能单独用于治疗前危险度的评估,但可帮助识别某些特殊类型的AML患儿。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：241-245］     

BIM基因与儿童急性淋巴细胞白血病对糖皮质激素耐药的相关性

急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童时期最常见的恶性血液系统疾病。糖皮质激素作为ALL化疗方案中的主要用药,可通过多种途径诱导白血病细胞的凋亡,但仍有约10%的儿童ALL对糖皮质激素不敏感。研究发现糖皮质激素通过上调BIM基因表达介导ALL细胞的凋亡,BIM基因与儿童ALL对糖皮质激素耐药有关。本综述概括了近年关于儿童急性淋巴细胞白血病对糖皮质激素耐药相关研究,主要包括BIM基因及其表达产物在该过程中的作用。     

6-巯嘌呤细胞药理学研究对急性淋巴细胞白血病治疗的指导作用

目的建立一种高效、快速、灵敏的方法，探讨6-巯嘌呤（6-MP）细胞药理学。方法应用反相高效液相色谱分析技术，定量测定急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿红细胞内6-MP三种代谢产物浓度6-巯嘌呤核苷酸（6-TGN）,6-次黄巯嘌呤单核苷酸(6-TIMP)和6-甲基巯嘌呤（6-MeMP）。选择31例ALL缓解期随访的患儿，口服6-MP50～75mg/（m     

多药耐药基因反义寡核苷酸体内逆转耐药的初步研究

目的为研究多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＭＤＲ）基因ｍｄｒ１反义寡核苷酸体内逆转肿瘤耐药的作用。方法采用白血病耐药细胞株细胞移植于胸腺缺陷裸小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）皮下，建立肿瘤耐药模型，局部或腹腔注射ｍｄｒ１反义ＤＮＡ，或以脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ为载体，腹腔注射ｍｄｒ１反义ＤＮＡ，经柔红霉素（ＤＮＲ）和鬼臼乙叉甙（ＶＰ－１６）联合化疗。结果实验组肿瘤生长速度明显低于对照组，从用药后的第５～６天开始，实验组肿瘤体积的增长速率也明显低于相应的对照组，以脂质体为载体的实验组，肿瘤生长出现了暂停的趋势。结论ｍｄｒ１反义寡核苷酸在动物体内具有耐药逆转的作用，脂质体能增强这些作用。