骨关节炎软骨细胞凋亡的信号传导

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种严重危害老年人健康的慢性退行性骨关节疾病。在最常见的三大老年病（脑血管疾病，骨质疏松症，老年性骨关节病）中，OA患病率在世界范围内居于首位。60—70岁的老年人OA患病率约为60％，70岁以上老年人的OA患病率约为70％。联合国业已宣布2000—2010年是骨与关节的十年，以提醒人们注意骨关节疾病对世界健康的影响。而软骨细胞凋亡是骨关节炎发生的重要病理学特征，本文主要通过对骨关节炎中软骨细胞凋亡可能通过的线粒体途径、死亡受体途径、内质网应激反应性凋亡途径等信号传导通路作一综述，为今后中西医治疗骨关节炎提供一个新的思路。     

白藜芦醇对实验性兔骨关节炎软骨细胞凋亡及bcl-2 bax表达的影响

目的 研究白藜芦醇对兔实验性骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2、bax表达的影响,探讨其治疗OA的机制.方法 30只新西兰大白兔随机平分为5组,A组(健康对照组)、B组(模型对照组)、C组(白藜芦醇高剂量干预组)、D组(白藜芦醇中剂量干预组)、E组(白藜芦醇低剂量干预组).除A组外,其他各组均以Hulth法复制膝OA模型.术后第4周开始,A组、B组每天以5 ml含0.1%二甲基亚砜的蒸馏水灌胃;白藜芦醇干预各组每天以相应剂量白藜芦醇溶液(浓度为60 mg/ml)灌胃,C、D、E组日剂量分别为120、60、30mg·kg-1·d-1,连续6周.第10周处死大白兔,取右膝关节股骨内髁内侧软骨,软骨组织切片用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察软骨细胞凋亡,免疫组织化学法观察软骨细胞bcl-2和bax的表达.结果 ①模型对照组关节软骨细胞凋亡率明显高于健康对照组;白藜芦醇干预各组可不同程度地降低OA软骨细胞凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05),且呈剂量依赖性.②与健康对照组相比,模型对照组关节软骨细胞bcl-2和bax阳性率均升高(P＜0.01),bcl-2/bax的比值降低;白藜芦醇干预后,bcl-2阳性率升高更为明显(P＜0.01);而bax阳性率有不同程度降低(P＜0.01);bcl-2/bax的比值均不同程度提高(P＜0.01).结论 白藜芦醇通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,提高bcl-2/bax的比值,以抑制兔实验性OA中软骨细胞的过度凋亡,达到保护软骨,防治OA的目的 .     

血清抗I,Ⅳ,Ⅴ型胶原自身抗体的测定及其意义

目的 为了解衰老过程中细胞外基质胶原的变化，建立了血清抗Ｉ，Ⅳ，Ⅴ型胶原抗体水平的测定方法并探讨共意义，方法 采用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）测定方法，观察１０８名老年人和３９名中年人血清中抗Ｉ，Ⅳ，Ⅴ型胶原自身抗体水平，对照Ｂｕｙｚｅｒｅ方法计算样品抗体水平，以混合的健康人血清作标准对照，用每份待测样品的吸光度值与标准对照的吸光度 百分比表示抗休的相对水平。结果 老年组抗Ｉ，Ⅳ，Ⅴ型胶原自抗体     

骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱的芯片研究

目的 利用基因芯片技术,研究骨关节炎关节软骨细胞基因表达谱差异性基因、差异性基因功能及通路,初步探讨骨关节炎预警基因.方法 入选行关节置换术的骨关节炎、类风湿关节炎(RA)和无关节炎的创伤患者各3例,分成骨关节炎组、RA组和创伤组.分别取关节软骨标本,体外培养关节软骨细胞.采用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片技术,通过微阵列差异性基因分析软件两因素不配对检验分析比较骨关节炎组分别与创伤组、RA组关节软骨细胞基因表达谱的差异在生物分子功能注释系统中分析差异性基因功能、通路.结果 骨关节炎组与创伤组比较差异基因为145个(其中70个上调,75个下调),骨关节炎组与RA组比较差异基因为281个(其中94个上调,187个下调);骨关节炎组分别与创伤组、RA组比较得到的差异性表达基因功能分属于细胞过程、生理过程、细胞成分、生物调节、信号转导等;有统计学意义的差异性基因通路主要有:凋亡通路、细胞周期通路、P53蛋白信号通路、Fas 信号通路、一氧化氮通路、凋亡级联通路、局部黏附通路、细胞外基质受体相互作用通路、紧密连接通路、黏着接合通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、骨重塑通路、硫酸软骨素生物合成通路、Jak-STAT信号通路、Wnt信号通路、Toll样受体信号通路、细胞间黏附信号通路、T细胞受体信号通路等(P＜0.05);骨关节炎.创伤组和骨关节炎-RA组之间差异性基因功能及通路存在差异,同时也存在交叉.结论 从差异性基因表达种数、生物学功能、通路分析三方面获得骨关节炎生物学信息,使得从基因表达人手寻找骨关节炎的早期预警指标成为可能.     

九里香含药血清抗软骨细胞凋亡的机制

目的对九里香血清药物化学抗软骨细胞凋亡进行初步研究。方法建立大鼠骨关节炎(OA)模型,含药血清培养软骨细胞,利用流式细胞仪检测其凋亡,建立中药九里香的指纹图谱、血清指纹图谱等方法,利用柱层析从原药材中分离鉴定主要成分。结果分离培养软骨细胞,九里香含药血清可显著抑制OA软骨细胞的凋亡情况。在大鼠血清中存在16个入血成分,其中6个为九里香的原型成分,10个可能为原型成分的代谢产物。分离鉴定两个主要成分九里香酮和phebalosin,分别与血清中色谱峰9和11的相对保留时间基本一致。结论九里香含药血清具有抗OA软骨细胞凋亡作用,入血成分或移行成分可能成为九里香在体内的直接作用物质。     

骨关节炎软骨细胞和滑膜细胞金属蛋白酶活性的影响因素

目的 探讨几种细胞因子、生长因子和药物等刺激物对骨关节炎软骨细胞及滑膜细胞金属蛋白酶活性的影响。方法 骨关节炎患者的单层软骨细胞和膜细胞均以白细胞介素-1β、转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α、双氯芬酸钠、多西环素和地塞松分别处理72h。应用酶谱分析细胞培养上清液中酶活性。结果 单层软骨细胞产生金属蛋白酶-9和-2,而滑膜细胞仅产生金属蛋白酶-2。白细胞介素-1β,肿瘤坏死因子-α和双氯芬酸钠均能显著增强金属蛋白酶-9活性,其中以白细胞介素-1β作用最强,与肿瘤坏死因子-α或双氯芬酸钠有协同作用。多西环素、转化生长因子-β1和地塞米松均能抑制金属蛋白酶-9和-2活性,并与白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α和地塞米松均能抑制金属蛋白酶-9和-2活性,并与白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α和双氯芬酸钠起拮抗作用。多西环素为最强的抑制物。结论 白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α可能为破坏关节软骨的重要细胞因子,转化生长因子-β1则为保护因子,多西环素则可能成为骨关节炎的有效治疗药物。     

肿瘤坏死因子受体p55和p75在骨关节炎软骨细胞的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α受体（TNFR）p55和p75在骨关节炎（OA）患者软骨细胞中的表达情况，及在介导TNF吨诱导软骨细胞产生基质金属蛋白酶-3（MMP-3）中的作用。方法分离于5例OA患者和2名正常人的软骨细胞经体外培养后。采用间接免疫荧光法、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞分析技术检测p55和p75TNFR在软骨细胞的表达；MMP-3的测定采用酶联免疫吸附试验（ELISA）。结果p55和p75TNFRmRNA的表达，以及它们在细胞表面的表达在OA软骨细胞均高于正常软骨细胞：在OA软骨细胞，p75TNFR的表达高于p55TNFR，但用抗p55中和抗体可以明显降低TNF-α诱导的软骨细胞产生MMP-3，而抗p75中和抗体则无此作用。结论TNFR在OA软骨细胞表达增高。表明TNF／TNFR系统在OA的病理过程中发挥作用，而抗p55抗体对TNF-α诱导MMP-3产生的阻断作用。提示TNF-α主要通过p55介导软骨破坏。     

SLE患者血清抗核小体抗体水平测定及意义

采用酶联免疫吸附试验检测42例系统性红斑狼疮患者（SLE组）和30例健康人（对照组）血清抗核小体抗体（AnuA）水平。结果血清AnuA阳性率SLE组和对照组分别为69.04%和0（P〈0.01）;SLE活动期显著高于非活动期（P〈0.01）,有肾脏损害者明显高于无肾脏损害者（P〈0.05）;经泼尼松治疗后SLE组血清AnuA阳性率明显降低（P〈0.05）。认为血清AnuA可能参与了SLE的发病机制;其可作为反映SLE活动程度、肾脏损害及预后的指标。     

骨关节炎和类风湿性关节炎患者的抗骨桥接素自身抗体

骨桥接素 (Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ)是一种重要的非胶原蛋白 ,主要由软骨细胞分泌。骨桥接素的自身抗体可能在类风湿性关节炎 (ＲＡ)和骨关节炎 (ＯＡ)等关节疾病的病理生理机制中发挥调节作用。作者研究了ＲＡ和ＯＡ患者体内是否存在抗骨桥接素自身抗体。方法　血清标本取自 1 0 5例ＯＡ、88例ＲＡ患者及 50名年龄相匹配的健康志愿者。应用酶联免疫法 (ＥＬＩＳＡ)和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测抗重组骨桥接素自身抗体 ;同时用ＥＬＩＳＡ检测同一批标本对纯化的天然骨桥接素的反应性 ,以评估其表位的一致性。结果　重组人骨桥接素纯化后经 8%…     

低频脉冲超声对骨关节炎中软骨细胞的影响

超声被广泛应用于临床的诊断和治疗,但是临床上低频脉冲超声(LIPU)的应用却非常有限。在实验中,LIPU的应用却是很广泛。在许多的动物实验中证实,LIPU对许多结缔组织疾病有一定疗效。骨关节炎(OA)是以关节软骨细胞、细胞外基质、软骨下骨等合成与分解代谢失衡,关节软骨损坏为特征的全关节疾病。     

兔骨关节炎软骨细胞中bcl-2、bax mRNA及蛋白表达的意义

目的探讨bcl-2、bax基因在兔骨关节炎软骨细胞凋亡中的意义。方法新西兰白兔12只,随机分为模型组,按照石膏外固定兔后膝关节造模,以及空白对照组,6周后处死动物取得膝关节软骨。采用免疫组织化学和原位杂交检测bcl-2、bax mRNA及蛋白表达。结果模型组软骨细胞bcl-2、bax mRNA表达明显多于对照组(P＜0．05)。免疫组织化学模型组软骨细胞bcl-2、bax阳性表达灰度值明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)；阳性细胞比例明显提高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。模型组bcl-2/bax阳性细胞率比值比对照组低,差异有统计学意义(P＜0．05)。结论bcl-2和bax共同参与了兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡的调节,结果导致软骨细胞凋亡加快。     

骨关节炎患者软骨细胞人类白细胞抗原表达及对外周血单核细胞增殖的影响

目的 通过观察骨关节炎软骨细胞人类白细胞DR抗原(HLA-DR)表达及软骨细胞体外刺激自体外周血单核细胞(PBMC)增殖反应,探讨软骨细胞的抗原呈递作用.方法 依据1986年美国风湿病学会(ARA)制定的膝骨关节炎诊断标准,收集16例膝骨关节炎患者软骨标本及5例股骨颈骨折患者软骨标本,进行软骨细胞培养及白细胞介素-1α(IL-1α)刺激后软骨细胞培养,采用流式细胞技术检测HLA-DR表达;将软骨细胞与自体PBMC共同培养,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法测定PBMC增殖反应.结果 对照组和骨关节炎组HLA-DR的表达值(%)分别为0.61±0.18和1.82±0.28;经IL-1α刺激后,两组HLA-DR表达均增高,分别为1.62±0.25和3.89±0.43,骨关节炎组均高于对照组(P＜0.01).对照组和骨关节炎组软骨细胞吸光度(A)490值分别为0.162±0.018和0.452±0.035,骨关节炎组明显高于对照组(P＜0.001).结论 膝骨关节炎软骨细胞能够表达HLA-DR,且经IL-1α刺激后HLA-DR表达增高;骨关节炎软骨细胞有刺激PBMC增殖的潜能,为其发挥提呈抗原作用提供更多依据.     

强直性脊柱炎患者抗组蛋白抗体测定及其临床意义

以酶联免疫吸附试验及免疫印染技术对７８例强直性脊柱炎患者的血清进行抗总组蛋白及组蛋白亚单位抗体测定，发现抗总组蛋白抗体水平在ＡＳ组显著高于正常对照组及痛风性关节炎组，在活动期ＡＳ组高于非活动期组，其阳性率达２８％，在有虹膜炎的ＡＳ组显著高于无虹膜炎组，抗Ｈ３抗体与虹膜炎有显著性关联，结果提示高水平ＡＨＡ和Ｈ３抗体ＡＳ病情活动及与ＡＳ并发虹膜炎有关。     

血清抗Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原自身抗体的测定及其意义

目的为了解衰老过程中细胞外基质胶原的变化，建立了血清抗Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原抗体水平的测定方法并探讨其意义。方法采用酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）测定方法，观察１０８名老年人和３９名中年人血清中抗Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原自身抗体水平。参照Ｂｕｙｚｅｒｅ方法计算样品抗体水平。以混合的健康人血清作标准对照，用每份待测样品的吸光度值与标准对照的吸光度值的百分比表示抗体的相对水平。结果老年组抗Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原自身抗体水平分别为１１５５±２８６、１２３２±３８０、１１６５±４７６；中年组分别为９８９±７０、１０６５±２７８、９７５±２８８。两组间各项分别比较，差异均有显著性（均为Ｐ＜００５）。结论（１）建立了血清抗Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原自身抗体ＥＬＩＳＡ测定法。所测得的结果稳定、精确、重复性好。（２）老年组抗Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ型胶原自身抗体水平均明显高于中年组     

甲型肝炎患者血清抗独特型抗体及特异性免疫复合物的动态观察及意义

对甲肝患者血清IgM及IgG型抗HAV—抗Id及甲肝特异性免疫复合物(SCIC)进行了动态观察。发现抗HAV—抗Id及SCIC在甲肝急性期均以IgM型为主,恢复期以IgG型为主,与甲肝抗体急性期以IgM,恢复期以IgG型为主相符。恢复后期两者均大部分转阴,而甲肝抗体仍多数阳性。提示:1.抗HAV—抗Id及SCIC的出现与甲肝的病理过程相符,均为一过性出现;2.恢复后期,作为SCIC抗原成分的HAV已被基本清除,SCIC可能参与了此清除过程;3.HAV病毒血症时间很短,但甲肝抗体能长期存在,可能与抗HAV—抗Id发挥HAV“内影像”作用有关。     

骨关节炎患者膝关节软骨细胞的离体培养及形态学特征观察

目的建立膝关节患者关节软骨细胞体外培养体系,为其相关研究奠定基础。方法取15例人工膝关节置换术患者的软骨组织,采用组织原代培养法获得膝关节软骨细胞,传代培养。倒置相差显微镜观察细胞形态,绘制生长曲线,苏木素伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、MMP-1、MMP-13、TNF-α免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果原代培养的人软骨细胞大量呈梭形、短梭形,少部分呈多角形,传代3次后出现树突生长细胞。形态学、免疫荧光染色显示细胞培养3代以内可保持表型稳定,多数软骨细胞维持梭形、短梭形,核为圆形或椭圆形。苏木精伊红阳性染色为细胞核呈紫蓝色,软骨细胞基质呈红色,周围胞浆呈紫红色、阿利新蓝染色后,胞质和胞膜呈深蓝色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色可见胞质和胞膜清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光。结论成功建立了的软骨细胞分离、培养体系,且3代以内细胞生长良好。     

丙型肝炎患者血清抗核抗体的测定及临床研究

目的 评估慢性丙型肝炎(CHC)患者抗核抗体(ANA)的阳性率,同时探讨CHC患者ANA与肝功能及临床指标的关系.方法 选择2006年1月～2007年5月北京佑安医院住院的慢性丙肝患者共105例,测定血清ALT、AST、TBiL、ALB、ANA、HCV-RNA水平.结果 ANA阳性率为26.7% (滴定度>1∶100),ANA阳性患者年龄较阴性患者大(55.29岁±9.39岁 vs 47.24岁±15.09岁,P=0.01).而在性别、丙肝病毒定量、ALT、AST、TBiL和ALB上差异不显著.结论 ANA在慢性丙肝患者检出率与年龄关系密切,年龄越大ANA阳性率越高.与患者肝功水平、病毒的复制与否无关.     

虾青素对骨关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的影响

目的研究虾青素对骨关节炎(OA)软骨细胞氧化损伤及炎性的逆转作用。方法选择15只5月龄新西兰兔,采用内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板的OA动物模型制作方法,体外分离培养软骨细胞。以假手术组细胞为正常对照组,造模组细胞为OA软骨细胞,分别加入10、20、30μg/ml虾青素(低、中、高剂量);从第9周开始,每周处死1组动物,分离培养软骨细胞。连续8 w,DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Griess法测定培养上清中氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,RT-PCR法检测各组细胞相关炎性因子(IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转录调节因子p53基因mRNA的表达。结果 DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,对照组与模型组差异显著(P<0.01);虾青素低、中、高剂量组与模型组差异显著(P<0.01)。模型组中NaNO2、SOD、GSH-Px与对照组差异显著(P<0.01);NaNO2、SOD、GSH-Px水平虾青素低、中、高剂量组与模型组差异显著(P<0.01,P<0.05)。模型组中IL-1β、iNOS、p53基因mRNA的表达量与对照组及各剂量虾青素组差异显著(P<0.01)。结论虾青素对OA软骨细胞的氧化损伤及炎性有逆转作用,具有研发成为OA治疗药物的潜能。