新生期小鼠卡介苗接种后免疫因子的增龄性变化

目的检测卡介苗免疫后小鼠脑组织匀浆液和血清中细胞因子的变化,为进一步研究新生期卡介苗接种影响小鼠中枢神经系统神经发生的分子机制研究做准备。方法实验分1周、2周、3周3个时间点,将新生24 h内的SPF级C57BL/6小鼠随机分为卡介组和对照组,每组12只,分别在新生24 h内背部皮下注射卡介苗和PBS。分别在生后1周、2周、3周采用摘眼球法采血,之后冰上无菌取海马组织并匀浆。用ELISA酶联免疫吸附法,分别测各时间点各实验组小鼠脑组织匀浆和血清中的IL-1β、IL-4、IL-10和TNF-α含量。结果 (1)与对照组相比,接种后1周、2周、3周时,卡介组小鼠海马中细胞因子IL-4和IL-10均多于对照组(P<0.05),血清中IL-4多于对照组(P<0.05);IL-10在第1周和第2周多于对照组(P<0.05)。与对照组相比,接种后1周、2周、3周时,卡介组小鼠海马中细胞因子IL-1β和TNF-α均少于对照组,血清中TNF-α少于对照组;IL-1β在第1周和第2周于对照组(P<0.05)。(2)同一时间点海马中的细胞因子含量远多于血清中含量。(3)随时间的推进,海马和血清中IL-4和IL-10有降低趋势;而小鼠海马和血清中IL-1β和TNF-α有增加趋势。结论新生期接种卡介苗成功后,可致小鼠海马和血清中的细胞因子浓度发生动态改变:与对照组相比,海马和血清中IL-4和IL-10的含量升高,且随时间有下降趋势,但IL-1β和TNF-α的含量降低,且随时间有增加趋势。     

Aβ1-42对大鼠脑组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响

目的 探究Aβ1-42寡聚体对大鼠大脑的氧化应激损伤的影响.方法 经过Morris水迷宫实验,挑选出逃避潜伏期少于60s的60只实验大鼠随机等分为4组,设为正常组、PBS对照组、Aβ1-42纤维组、Aβ1-42寡聚体组.将Aβ1-42纤维或Aβ1-42寡聚体注射于大鼠右侧脑室制成实验动物模型;PBS对照组采用同样的方法给予注射等量的PBS;正常组不作任何处理.使用可见分光光度计检测大鼠脑组织的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性变化及丙二醛(MDA)的含量水平变化情况.借助于光学显微镜观察苏木精-伊红(HE)染色的各组大鼠海马组织的形态学变化.结果 与正常组及PBS组比较,Aβ1-42纤维组和Aβ1-42寡聚体组大鼠皮质MDA含量(分别为7.826±1.696、11.247±1.948)及海马MDA(分别为9.818±1.900、15.090±2.425)含量增加(P<0.05),皮质SOD(分别为29.829±6.340、18.649±6.070)和海马SOD(分别为51.097±8.381、31.634±8.680)活性下降(P<0.05),皮质GSH-Px(分别为133.113±17.506、79.503±19.936)和海马GSH-Px(分别为154.819±23.688、102.800±28.332)活性下降(P<0.05),其中,以Aβ1-42寡聚体组的变化更明显.HE染色可知,Aβ1-42纤维体及Aβ1-42寡聚体可使大鼠大脑海马区的神经元损伤,其中,Aβ1-42寡聚体对神经元的毒性损伤作用更严重.结论 Aβ1-42纤维、Aβ1-42寡聚体都可通过氧化应激损伤引起大鼠脑组织神经元的损伤,以Aβ1-42寡聚体氧化损伤作用更大.     

原花青素抑制Aβ25-35诱导的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y分泌Aβ1-42

目的 研究原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导的人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)淀粉样肽产生的影响及可能的作用机制.方法 以Aβ25-35体外处理SH-SY5Y细胞诱导细胞损伤模型,应用PC和(或)Wnt/β-catenin信号通路的内源性抑制剂分泌型蛋白Dickkopf-1(Dkk1)干预.设立...     

Aβ42及其C端亚单位疫苗接种正常SD大鼠后产生高滴度的抗Aβ42抗体

目的探讨Aβ42及其C端亚单位肽疫苗接种正常成年SD大鼠后能否产生高滴度的抗Aβ42抗体。方法 将Aβ36-42与不同载体偶联制成的亚单位疫苗和Aβ42全肽疫苗分别接种于SD大鼠。用Western blotting方法和间接ELISA法检测其血清和脑匀浆上清液中的抗体的特异性以及滴度，并用HE染色对大鼠的脑、肝、脾和肾进行形态学观察。结果 第2次接种后各实验组的血清均开始有抗Aβ42抗体产生，且抗体滴度随接种次数的增多而增高，第4次接种后各实验组血清的抗Aβ42抗体滴度均达到1：10000以上，同时脑匀浆上清液也检测到低滴度的抗Aβ42抗体；实验鼠的大脑、肝、脾和肾均未发现病理性变化。结论 Aβ42及其亚单位疫苗(Aβ36-42)接种于正常SD大鼠后，均能产生高滴度的抗Aβ42抗体，且重要脏器未发现病理改变。     

Aβ1-42通过TLR4影响小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症因子IL-1β和IL-6释放

目的探讨Aβ1-42对小鼠巨噬细胞RAW264.7向炎症性细胞转变的影响及机制。方法 RAW264.7细胞分别经过LPS与Aβ1-42刺激,RT-PCR和Western blot检测GM-CSF受体CSF2RA和CSF2RB的表达水平,ELISA检测在Aβ1-42刺激下的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平;采用TLR4抑制剂分别干预LPS和Aβ1-42处理后的RAW264.7,检测CSF2RA与CSF2RB受体的表达变化,炎症因子IL-1β、IL-6的释放。结果 RAW264.7细胞表面GM-CSF受体CSF2RB在LPS与Aβ1-42处理后表达水平均比对照组升高(P0.05),而CSF2RA表达没有显著性改变;炎症因子IL-6与IL-1β在Aβ1-42刺激后分泌增加,同时TLR4抑制剂抑制LPS和Aβ1-42对细胞的刺激。结论 Aβ1-42通过TLR4促进小鼠RAW264.7细胞炎症因子IL-6、IL-1β的分泌。     

Aβ1-42诱导的AD小鼠模型学习记忆能力的变化

目的研究不同剂量β淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)小鼠模型的学习记忆功能的变化。方法在C57BL/6J小鼠双侧海马注射不同浓度的Aβ1-42各1μL诱导AD模型,并在对照组注射等量溶剂(生理盐水)。注射7天后,应用水迷宫(MWM)对小鼠进行学习和记忆功能的测定。结果与对照组相比,低剂量Aβ1-42(1μg/μL)处理对小鼠学习记忆功能未产生显著影响;而高剂量Aβ1-42(5μg/μL)处理组与对照组比较,潜伏期明显延长(0.05)、周边活动时间百分比增加(0.05)、平台象限活动时间百分比减少(0.05)、平台穿越次数减少(0.05)。结论双侧海马注射5μg(5μg/μL,1μL)的Aβ1-42能够显著地影响小鼠的学习和记忆功能,是制备小鼠AD模型的有效方法。     

中老年小鼠通过长期运动改善Aβ1-42诱导的认知功能障碍

目的　观察中老年小鼠通过长期自主跑轮运动改善β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）所致认知功能障碍及其机制。 方法　中老年BABL/c小鼠（12月龄）随机分为4组,①溶剂对照静坐组（VS）,②溶剂对照长期自主跑轮运动组（VR）,③Aβ1-42静坐对照组（AS）,④Aβ1-42长期自主跑轮运动组（AR）,按分组条件分别予以自主跑轮或静坐6个月,双侧海马注射Aβ1-42或等量溶剂。注射两周后进行相关检测。 结果　Western blot显示中老年小鼠长期运动致海马泛素化蛋白下降0.2倍（P<0.05）。新物体识别实验显示AR组新物体识别指数高于AS组0.42倍（P<0.05）;Y迷宫自发交替实验显示AR组的入臂正确率较AS组升高0.21倍（P<0.05）。荧光分光光度检测显示AR组海马蛋白酶体活性高于AS组0.18倍（P<0.05）;Western blot显示AR组小鼠海马泛素化蛋白沉积较AS组小鼠减少0.21倍（P<0.05）;免疫组化结果显示AR组Aβ1-42沉积减少（P<0.01）。 结论　中老年小鼠长期自主跑轮运动可维持海马蛋白酶体活性,改善Aβ1-42导致的认知功能障碍。     

Alzheimer病与血管性痴呆患者脑脊液中β-淀粉样蛋白1-42水平的对照研究

目的 :探讨脑脊液 (CSF)中β -淀粉样蛋白1-42 (β -amyloidprotein1-42 ,Aβ1-42 )的水平对Alzheimer病 (AD)的诊断价值 ,寻找AD理想的生物学标志。方法 :将符合美国国立神经病、语言障碍和卒中研究所 -老年性痴呆及相关性疾病协会 (NINCDS -ADRDA)的”很可能AD”标准的 2 2例AD患者 ,同时将 2 0例血管性痴呆 (vasculardementia ,VD)和 2 1例正常对照 (normalcontrol,NC)纳入研究。用酶联免疫吸附法 (ELISA)分别检测AD组、VD组和NC组CSF中的Aβ1-42 水平。同时评定 :AD、VD组患者的简易智能量表 (MMSE)、HACHINSKI缺血量表及临床痴呆量表 (CDR)等参数。结果 :三组CSF中Aβ1-42 平均浓度 (x±s) (pg/ml)如下 :AD组 343.94± 16 5 .87;VD组 4 6 6 .6 5± 2 2 2 .4 6 ;NC组 4 80 .4 0± 2 17.16 ,AD组明显低于NC组 (P <0 .0 5 ) ;虽然AD组低于VD组、VD组低于NC组 ,但差异均无显著性(P >0 .0 5 ) ;AD组CSF中Aβ1-42 浓度与CDR、MMSE评分明显相关 (P <0 .0 5 )。结论 :Alzheimer病患者CSF中Aβ1-42浓度降低是其重要的实验室表现 ,可以作为AD的辅助的诊断指标     

A1zheimer病与血管性痴呆患者脑脊液中β-淀粉样蛋白1-42水平的对照研究

目的探讨脑脊液(CSF)中β-淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein1-42, Aβ1-42)的水平对Alzheimer病(AD)的诊断价值,寻找AD理想的生物学标志. 方法将符合美国国立神经病、语言障碍和卒中研究所-老年性痴呆及相关性疾病协会(NINCDS-ADRDA)的"很可能AD"标准的22例AD患者,同时将20例血管性痴呆(vascular dementia, VD)和21例正常对照(normal control, NC)纳入研究.用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测AD组、VD组和NC组CSF中的Aβ1-42水平.同时评定AD、VD组患者的简易智能量表(MMSE)、HACHINSKI缺血量表及临床痴呆量表(CDR)等参数.结果三组CSF中Aβ1-42平均浓度(x±s)(pg/ml)如下AD组343.94±165.87;VD组466.65±222.46;NC组480.40±217.16,AD组明显低于NC组(P<0.05); 虽然AD组低于VD组、VD组低于NC组,但差异均无显著性 (P>0.05); AD组CSF中Aβ1-42浓度与CDR、MMSE评分明显相关(P<0.05).结论Alzheimer病患者CSF中Aβ1-42浓度降低是其重要的实验室表现,可以作为AD的辅助的诊断指标.     

β-淀粉样多肽1-42(Aβ42)多克隆抗体的制备及其鉴定

目的：β—淀粉样多肽1—42(Amyloid β1-42，简称Aβ42)是存在于阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)患者脑组织中的特异病理改变之物，同时它在AD患者的脑积液及血浆中有所改变。我们制备Aβ42多克隆抗体及其建立测定方法，是希望找到—个特异性鉴定AD的生物指标。方法：将Aβ42多肽与匙孔虫戚血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫新西兰白兔从而产生抗—Aβ啦多克隆抗体。此特异性抗体可用于ELISA、Western印迹法和免疫组织化学的方法中，并可测定AD脑组织中的特异性淀粉样沉淀物。结果：通过免疫组织化学法鉴定此抗—Aβ42多克隆抗体，结果显示在AD患者的脑组织淀粉样沉淀物中呈阳性。同时应用Western印迹法对Aβ42抗体进行了鉴定，结果显示Aβ42多肽的分子量与Aβ42多肽标准的4．5kDa分子量相一致。结论：我们所制备的Aβ42多克隆抗体能与Aβ42抗原呈特异性结合，这就为研究淀粉样前体蛋白(APP)在生理学和病理生理学上的机制提供了—个有效工具。     

Aβ42及亚单位疫苗诱导小鼠抗体产生及其中和Aβ42的细胞毒性

目的 :探讨Aβ4 2 及其亚单位肽疫苗接种小鼠后特异性抗Aβ4 2抗体的产生情况。方法 :75只 6wk龄雄性BALB/c小鼠 ,随机分为 5组 :即对照组、Aβ4 2 组 ,Aβ3 6 - 42 组、Aβ1- 15 组和FAβ1- 15组。分别用PBS MF59佐剂 ,Aβ4 2 MF59,Aβ36～ 4 2 七聚赖氨酸 (MAP) MF59,Aβ1- 15 MAP MF59,Aβ1- 15 MAP 福氏佐剂 ,免疫BALB/c小鼠 4次。用间接ELISA法 ,检测各组免疫小鼠血清和脑组织匀浆上清液中特异性抗体的滴度。将Aβ42 、Aβ3 6 - 42 和Aβ1- 15 与培养的PC12细胞共同培养 7d ,用MTT比色法检测 3种抗原肽对PC12细胞的毒性。将各组免疫小鼠的血清加入到含 2 0mg/LAβ4 2 的培养基中 ,再与培养的PC12细胞一起培养 7d ,用MTT比色法测定PC12细胞的存活率。结果 :第 2次免疫后 ,各实验组小鼠的免疫血清均有抗Aβ42 抗体产生 ,且抗体滴度随接种次数的增多而增高。同时 ,在脑组织匀浆上清液中也可检测出低滴度的抗Aβ4 2 抗体。Aβ42 可降低PC12细胞的存活率 ;而不同浓度的Aβ3 6 - 42 和Aβ1- 15 则对PC12细胞的存活率无显著影响。将 4组疫苗免疫血清和 2 0mg/LAβ42 同时加入培养基中培养PC12细胞时 ,可显著提高其存活率。结论 :Aβ42 及其亚单位疫苗 (Aβ1- 15 及Aβ36～ 4 2 )结合MF59佐剂免疫B     

Aβ_(15)老年性痴呆疫苗接种小鼠的剂量优化研究

目的探讨Aβ15老年性痴呆疫苗接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠的最优化剂量。方法将本室前期制备的重组Aβ15疫苗分别以25.0、12.5及6.25μg三种剂量接种Tg2576转基因小鼠及C57小鼠,比较其诱导小鼠产生的抗体滴度大小;Western检测抗体与Aβ42结合的特异性;免疫组化检测小鼠产生的抗体是否能特异性结合老年斑。结果 25、12.5μg两种剂量均能诱导机体产生高滴度的抗体,6.25μg剂量未能诱导小鼠产生特性抗体;相同的接种次数下,C57小鼠产生的抗体滴度较Tg2576转基因小鼠高;接种小鼠产生的特异性抗体均能和Aβ42及老年斑结合。结论 Aβ15疫苗接种小鼠的最优化剂量为12.5μg,Tg2576转基因小鼠对Aβ疫苗有轻度免疫耐受。     

葡萄糖对新生大鼠胰β细胞影响的图像分析研究

实验选用Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠，于出生后第２天起腹腔注射葡萄糖共６天。出生后第１０天剖腹取胰腺，常规石蜡包埋，免疫组织化学ＰＡＰ法显示β细胞、使用图像分析仪测量胰岛大小、β细胞免疫阳性切面面积及其相对灰度。结果显示：实验组β细胞免疫阳性反应面积明显增大。提示葡萄糖可促进新生大鼠胰β细胞胰岛素含量的增多。     

激活素A对小鼠巨噬细胞分泌IL-1β的影响

目的：探讨激活素A对小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用及其机制。方法：免疫组化观察激活素ⅡA型受体（ActRⅡA）在巨噬细胞上的表达，ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中IL-1β分泌水平，采用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-1βmRNA、ActRⅡA mRNA及激活素受体相互作用蛋白2（ActRIP2）mRNA的表达。结果：激活素A可以促进原代培养小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1β mRNA表达，并呈剂量依赖关系；激活素A对LPS活化的小鼠原代培养腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1βmRNA的表达具有抑制作用，并呈剂量依赖关系。免疫组化染色证实ActRⅡA在巨噬细胞中高表达，激活素A对巨噬细胞表达ActRⅡA mRNA具有促进作用，采用抗ActRⅡA抗体可以阻断激活素A促进IL-1βmRNA表达作用，进一步检测表明激活素作用后ActRIP2 mRNA表达亦增加。结论：激活素与LPS比较可能是IL-1分泌的弱激动剂，激活素单独应用显示刺激IL-1分泌作用，而与LPS共同作用，则呈现抑制LPS强刺激作用；激活素可能通过ActRⅡA-ActRIP2受体信号传导途径，调控巨噬细胞IL-1β分泌与合成。     

不同Aβ多肽与佐剂组合免疫小鼠对Th1/Th2平衡的调节作用

目的 观察野生型和突变型Aβ40及Aβ42与不同佐剂组合对T淋巴细胞亚型的不同刺激和调节作用,以探讨降低Aβ免疫毒性反应的可能途径。方法 BALB/c小鼠随机分组：铝（Al）佐剂对照组、Aβ42+福氏佐剂（CFA）组、Aβ42+Al组、Aβ40+Al组、Aβ40（E22A）+Al组,每组8只。经初次免疫和3次加强免疫,检测抗体效价,培养脾淋巴细胞,分别用各自抗原刺激,48h后用双抗夹心ELISA试剂盒检测培养液中IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-4的含量。72h后用CCK-8法检测脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果 经Aβ免疫的4个试验组血清中均有特异性抗Aβ的抗体产生。脾淋巴细胞经各自抗原刺激后,均出现脾淋巴细胞特异性增殖反应。细胞培养上清中细胞因子检测结果显示,Aβ42+CFA组分泌的代表Th1型的细胞因子含量最高,Aβ40（E22A）+Al组则有显著降低（P <0.01）。其中Aβ40及突变型+Al组与Aβ42+Al组相比,分泌的Th1型细胞因子也有明显降低（P<0.05）。结论 Aβ40（E22A）+Al组对T细胞的毒性作用最低,在机体的免疫反应中可能具有更好的安全性。     

睾酮对可溶性Aβ1-42寡聚体注射联合去势诱导的空间学习记忆损害的改善作用

目的:探讨睾酮改善复合模型大鼠空间学习记忆损害的作用机制.方法:采用双侧海马CA1区分别注射Aβ1-42寡聚体10 μg(2 μg/μl)联合去势,建立阿尔茨海默病(AD)样动物模型(复合模型).在睾酮时效与量效实验的基础上复合模型大鼠随机分为4组,即复合模型组、睾酮组(皮下注射睾酮0.75mg/d,连续8 d)、氟他胺组(双侧海马分别注射氟他胺5 μg/d,连续8 d),氟他胺+睾酮组(联合给药).结果:血清睾酮浓度给药48 h后达高峰,与给药剂量呈高度依赖性.0.75mg组对空间学习记忆的改善作用最明显,而氟他胺可阻断睾酮的作用,但其对血清睾酮浓度无影响.结论:复合模型大鼠更适合用于老年期AD发病机制的研究,睾酮对复合模型大鼠空间学习记忆的改善作用可能是通过雄激素受体途径完成.     

胚胎及新生期大鼠胃肠道胰岛淀粉样多肽与生长抑素的免疫组？…

为探讨胚期及新生儿大鼠胃肠道的胰岛淀粉样多肽与其他生物活性物质的关系，用免疫组织化学ＰＡＰ法，在相邻切片分别显示第１５－２１ｄ大鼠台及新生大鼠胃肠道的ＩＡＰＰ免疫反应性细胞和生长抑素细胞，观察了ＩＡＰＰ与ＳＳ在胚胎及新生大鼠胃肠道的定位分布。结果表明：第１５ｄ胚胎，胃肠道内未见ＩＡＰＰ和ＳＳ－ＩＲ细胞。第１７ｄ胚胎，ＩＡＰＰ－与ＳＳ－ＩＲ细胞均少，免疫染色较弱，着色较浅，免疫反应性细胞散布分化未完     

丰富环境对慢性睡眠剥夺小鼠大脑皮层和海马Aβ1-42及相关代谢分子BACE1的影响

目的：探讨丰富环境（enriched environment, EE）对慢性睡眠剥夺小鼠前额叶皮层和海马Aβ1-42及相关代谢分子β位点淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1, BACE1)表达的影响。方法：3月龄SPF级健康雄性昆明小鼠40只,体重21～25 g,随机分为4组：标准环境对照（control, Ctrl）组、睡眠剥夺（sleep deprivation, SD）组、EE组和SD+EE组。采用改良的多平台睡眠剥夺模型建模,每天干预19 h,EE组及SD+EE组分别每天进行8 h EE干预。采用Y迷宫法及新物体识别对小鼠进行行为学分析;免疫荧光法检测小鼠前额叶皮层与海马Aβ1-42沉积情况;Western blot法检测前额叶皮层和海马组织中BACE1蛋白的表达水平。结果：与Ctrl组小鼠相比,SD组小鼠学习记忆功能和认知功能减退（P<0.01）,前额叶皮层及海马Aβ1-42和BACE1蛋白的表达均有不同程度的升高（P<0.01）;EE组小鼠学习记忆功能和认知功能提高（P<...