玉米苞叶对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞凋亡及Bcl-2和p53蛋白表达的影响

目的探讨玉米苞叶煎剂对实验性动脉粥样硬化(AS)家兔血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和p53蛋白表达的影响。方法选用大耳白家兔,利用高脂饲料复制家兔动AS模型,随机分为模型组、玉米苞叶煎剂组和正常对照组。实验9 w后确认两组动物造模成功,其中一组给予玉米苞叶煎剂治疗,28 m l/kg.d-1(玉米苞叶1.4 g/m l),实验17 w后,处死家兔,观察主动脉内膜的病理形态学改变,采用流式细胞术检测VSMCs凋亡率以及凋亡相关基因Bcl-2和p53蛋白表达。结果模型组VSMCs凋亡率明显高于对照组(P<0.05),p53和Bcl-2蛋白表达均增强(P<0.05),肉眼观察,主动脉内膜出现典型的AS斑块,动脉管腔极度狭窄。玉米苞叶煎剂组VSMCs凋亡率明显降低(P<0.05);p53和Bcl-2蛋白表达均下调(P<0.05);主动脉斑块面积较模型组明显减小,动脉管腔狭窄减轻。结论玉米苞叶通过影响p53和Bcl-2蛋白表达而影响AS家兔VSMCs凋亡;同时缩小AS斑块面积,具有显著治疗家兔AS作用。     

玉米苞叶对动脉粥样硬化家兔平滑肌细胞凋亡及p53和Fas蛋白表达的影响

目的：探讨玉米苞叶防治动脉粥样硬化（AS）的机制。方法：选用大耳白家兔，复制家兔AS模型，随机分为动脉粥样硬化模型组，玉米苞叶组和正常对照组，成模后给予玉米苞叶煎剂治疗，8w后处死家兔，采用流氏细胞术检测平滑肌细胞的凋亡率以及凋亡相关基因p53和Fas蛋白表达。结果：模型组血管平滑肌细胞的凋亡率明显高于对照组（P＜0．05），p53和Fas蛋白的表达增强（P＜0．05），主动脉壁肉眼观测出现典型斑块。玉米苞叶组平滑肌细胞的凋亡率明显低于模型组（P＜0．05），p53和Fas蛋白表达下调（P＜0．05）；主动脉斑块面积较模型组明显减小，结论：玉米苞叶通过调节p53和Fas蛋白表达而调节AS家兔平滑肌细胞凋亡。     

玉米苞叶煎剂对动脉粥样硬化家兔血管外器官病变的形态学影响

目的 观察玉米苞叶煎剂对AS家兔血管外各器官病变的形态学影响.方法 选用大耳白家兔,雌雄各半,随机分为对照组、高脂组、玉米苞叶煎剂组,复制高脂食饵性家兔AS模型,观察玉米苞叶煎剂预防性用药后对家兔血脂及内脏各器官的病理形态学影响.结果 玉米苞叶煎剂组TC、TG较高脂组明显降低(P<0.01);高脂组各脏器(心、肝、脾、肺、肾)与对照组相比均有明显病理变化,玉米苞叶煎剂组各脏器病变较高脂组明显减轻.结论 玉米苞叶煎剂不但可以减轻AS家兔血管病变,且对心、肝、脾、肺、肾各脏器的高脂损伤同样有干预作用.     

玉米苞叶降低动脉硬化家兔白细胞凋亡及CD44表达

目的　探讨玉米苞叶对动脉粥样硬化模型动物外周血白细胞凋亡和CD4 4表达的影响。方法　将家兔分为正常对照组、动脉硬化模型组、低剂量组 (造模 9w后给予低剂量玉米苞叶煎剂 )、高剂量组 (造模 9w后给予高剂量玉米苞叶煎剂 )。 1 7w后测血脂和血中白细胞凋亡率及CD4 4表达量 ,观察主动脉形态变化。结果　①模型组白细胞凋亡率 (6 58± 2 53) % ,CD4 4表达量 6 97± 1 41 ,均显著高于正常组 (P <0 0 1 ) ,②白细胞凋亡率和CD4 4表达量在低剂量组分别为 3 1 1± 1 50、4 76± 0 57;高剂量组为 3 74± 1 66、4 64± 0 42 ,均显著低于模型组 (P <0 0 1 )。结论　玉米苞叶煎剂可显著降低动脉硬化家兔白细胞凋亡率和CD4 4表达量 ,且这种作用不是通过降血脂实现的。     

玉米苞叶煎剂对动脉粥样硬化家兔血清内皮素、前列环素及病理形态学影响

为研究玉米苞叶对动脉粥样硬化的治疗作用 ,通过建立高脂食饵性兔动脉粥样硬化模型 ,观察了玉米苞叶煎剂治疗用药后对血清内皮素、6 酮 前列腺素及主动脉粥样硬化病理形态学的影响。结果发现 ,模型组血清内皮素和 6 酮 前列腺素较对照组均明显降低 ,每日饲饮含硅量 2mg (kg·d)玉米苞叶煎剂 10 0mL 只 (低剂量组 )或含硅量 4mg (kg·d)玉米苞叶煎剂 10 0mL 只 (高剂量组 )。于实验 17周末发现 ,血清内皮素较模型组有所上升 ,6 酮 前列腺素F1а较模型组明显升高 (模型组为 6 6± 2 6 ,低剂量组为 12 2 .4± 2 .4 ,高剂量组为 117± 6 4 ,P <0 .0 5 ) ,内皮素与前列环素比值也明显降低 (模型组为 7.0± 1.2 ,低剂量组为 5 .1± 1.4 ,高剂量组为 5 .7± 1.3,P <0 .0 5 ) ,主动脉内膜粥样斑块病变程度和面积较模型组明显减轻和缩小。结果提示 ,玉米苞叶煎剂具有保护动脉内膜损伤 ,调节内皮细胞血管活性物质分泌 ,治疗家兔动脉粥样硬化作用     

西洋参叶二醇组皂苷对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的观察西洋参叶二醇组皂苷(PQDS)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法将组织贴块法培养的大鼠胸主动脉VSMC随机分为5组:空白组、模型组及PQDS 25,50,100mg/L组。应用MTT法检测各组VSMC的生长率,以流式细胞术检测细胞周期构成比和增殖指数(PI),以TUNEL法检测细胞凋亡率。结果PQDS可明显减低VSMC的增殖能力,使VSMC的G_0/G_1期构成比显著升高,PI值显著下降;亦能明显增加VSMC的凋亡率。结论PQDS具有抑制VSMC增殖及诱导其凋亡作用。     

木贼提取物对大鼠动脉粥样硬化早期血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究木贼正丁醇提取物对大鼠动脉粥样硬化（AS）早期主动脉平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法选用雄性SD大鼠，随机分为正常对照、模型、阻性药对照及提取物组。复制食饵性AS早期模型，同时给予提取物预防性给药。以吉非罗齐为阳性药对照。实验9w，观察主动脉壁病理形态学变化，流式细胞术定量检测主动脉壁平滑肌增殖及凋亡率。结果木贼正丁醇提取物组平滑肌凋亡率明显高于模型组（P〈0．01），增殖指数低于模型组（P〈0．01）。结论木贼正丁醇提取物可促进AS早期平滑肌凋亡，抑制其增殖，具有阻断AS早期病变进展的作用。     

尾加压素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响.方法 采用体外培养大鼠VSMC,将不同浓度UⅡ与VSMC孵育不同时间,应用MTT法检测VSMC增殖,流式细胞仪检测VSMC凋亡.结果 体外培养的大鼠VSMC在浓度为(0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L) 的UⅡ培养液中孵育24 h后,其A值分别为0.457±0.072,0.531±0.065,0.568±0.094,0.614±0.102,0.676±0.048,0.754±0.093;细胞凋亡率分别为2.20%±0.46%,2.80%±0.86%,7.79%±1.70%,13.31%±2.57%,18.71%±1.39%,23.32%±2.88%;表明UⅡ呈浓度依赖性诱导大鼠VSMC增殖和凋亡.在终浓度为10-7mol/L UⅡ的培养液中分别孵育0、6、12、24、48、72 h后,其A值分别为0.499±0.062,0.558±0.081,0.629±0.114,0.685±0.061,0.715±0.131,0.803±0.097;细胞凋亡率分别为1.74%±0.42%,2.36%±0.86%,9.88%±1.45%,16.50%±1.68%,23.14%±2.33%,26.09%±1.66%;表明UⅡ呈时间依赖性诱导大鼠VSMC增殖和凋亡.结论 UⅡ可以诱导VSMC增殖与凋亡,这一双重作用可能是UⅡ参与血管重塑性疾病的作用机制之一.     

胰岛素对SHR大鼠血管平滑肌细胞体外增殖相关基因表达的影响

目的　探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖相关基因表达的影响。方法　用贴块法分离培养VSMC ,应用含 4 4 8个与细胞增殖相关基因靶基因芯片分析大鼠血管平滑肌细胞在胰岛素干预后基因表达的差异 ,RT PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGFβ、PDGF、MatrixGla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平 ,采用免疫组织化学检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白 (α SMactin)。结果　胰岛素组VSMC的3 H TdR掺入值 (cpm)比对照组高 5 4 .6 % (P <0 0 1) ;基因芯片分析发现与细胞增殖相关等 36个基因的mRNA胰岛素干预前后培养的细胞表达差异 (8 0 4 % ) ;RT PCR检测MatrixGla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量 ,胰岛素组明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,同时bFGF、TGFβ、PDGF的表达也是胰岛素组明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;α SMactin免疫组化结果显示对照组的α SMactin比胰岛素组染色深。结论　提示胰岛素介导大鼠血管平滑肌细胞增殖是多基因效应 ,胰岛素促进了VSMC的增殖与VSMC表型转换有关。     

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原和凋亡抑制蛋白表达的影响

目的:通过观察葛根素对培养的脐动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白(Survivin)表达的影响,探讨葛根素抑制平滑肌细胞增殖的机制。方法:分离培养人脐动脉平滑肌细胞,加入不同浓度葛根素与细胞孵育,采用免疫组化法检测血管平滑肌细胞的PCNA表达;提取RNA,采用Rt-PCR检测Survivin表达水平,并经核苷酸序列分析验证,灰度扫描测定Survivin/GAPDH(s/G)比率。结果:葛根素抑制血管平滑肌细胞的PCNA表达(P=0.0000);葛根素组Survivin/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)(s/G)比率较对照组低。结论:葛根素具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用。     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞增殖的影响

目的 观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物. 方法 采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入小同浓度辛伐他汀(0.01～10.00μmol/L)培养6～48 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素结合的植物凝集素(FITC-UEA-I)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数. 结果 辛伐他汀显著抑制骨髓源SPC增殖,0.01μmol/L辛伐他汀作用24 h,SPC数量减少了(5.8±3.1)%(对照组与0.01μmol/L辛伐他汀组分别为4070±184与3833±126,P<0.05).辛伐他汀可促进EPC增殖,其促进作用随辛伐他汀浓度增加及作用时间延长而增加,1.00μmol/L辛伐他汀作用24 h EPC数量增加(2.0±0.1)倍(对照组与1 μmol/L辛伐他汀组分别为1249±146与3762±138,P<0.01). 结论 辛伐他汀抑制SPC增殖,促进EPC增殖,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能.     

The possible role of hydrogen sulfide as a smooth muscle cell proliferation inhibitor in rat cultured cells

Hydrogen sulfide (H₂S) was recently suggested to be a possible endogenous gasotransmitter in physiological concentration. For the purpose of understanding its possible role in the regulation of the cardiovascular system, we explored the potential effect of H₂S on the proliferation of cultured aortic vascular smooth muscle cells (VSMCs) of rats and mitrogen-activated protein kinase (MAPK) as a signaling transduction pathway. Vascular smooth muscle cells were cultured in vitro and the cells were divided into six groups: (1) control group, (2) serum group, (3) endothelin group, (4) NaHS group, (5) serum + NaHS group, and (6) endothelin + NaHS group. VSMC proliferation was measured by [³H]thymidine ([³H]TdR) incorporation and MAPK activity in the VSMCs was determined by radioactivity assay. The results showed that endothelin-1 increased VSMC [³H]TdR incorporation 2.39-fold (P 0.01) and MAPK activity 1.62-fold (P 0.01), as compared with controls. Hydrogen sulfide at 5 × 10^–5mol/l, 1 × 10^–4mol/l, and 5 × 10^–4mol/l decreased VSMC [³H]TdR incorporation by 16.8%, 26.60%, and 37.40%, respectively, and reduced MAPK activity by 7.37% (P 0.05), 23.39%, and 33.57%, respectively (P 0.01). The results demonstrated that H₂S could dose-dependently suppress the proliferation of VSMCs through the MAPK pathway.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的作用及其机理。方法:本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC、用细胞计数和流式细胞仪(FCM)进行VSMC增殖和凋亡的检测。结果:(1)不同浓度AngⅡ对VSMC增殖均有显著促进作用、呈剂量依赖关系至10μmol/L时趋于饱和,AngⅡ能促进VSMC从G_0/G_1期进人S期、进行DNA合成,AngⅡ的促增殖作用为一快相作用。(2)Losartan和CGP42112A均能不同程度地取消AngⅡ对VSMC的促增殖作用。(3)100μmol/L AngⅡ能很好地诱导VSMC凋亡的发生、且随时间延长而增加,CGP42112A能阻止凋亡的发生而Losartan则不能。结论:本实验显示AngⅡ能通过ATR-1和ATR-2共同促进VSMC进入合成期、进行增殖反应,同时证实AngⅡ能诱导VSMC发生凋亡,可能主要由ATR-2介导。     

可罗卡林对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察对大鼠主动脉平滑肌细胞起负调节作用的可罗卡林(cromakalim对同型半胱氨酸(hcy)刺激的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)增殖及c—myc基因表达的影响。方法：在建立hcy诱导的平滑肌细胞增殖模型后，应用流式细胞术观察VSMC增殖周期的变化；并用免疫细胞化学方法观察可罗卡林对VSMC增殖及c—myc基因蛋白表达的影响。结果：可罗卡林使VSMC处于G0／G1期的细胞数显著增多(P＜0．01)，S期G2 M期的细胞数显著减少(P＜0．01．)，能够抑制hcy诱导的VSMC增殖和c—myc基因蛋白表达的增加。结论：可罗卡林对hcy诱导的VSMC增殖有显著的抑制作用，其作用机制与抑制c—myc基因表达有关。     

重组腺病毒AdCat对血管平滑肌细胞

目的探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响.方法用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒(AdCat)转染人血管平滑肌细胞,采用Western blot 方法检测血管平滑肌细胞过氧化氢酶的表达,应用细胞计数方法观察血管平滑肌细胞的增殖活性,应用流式细胞术和Hoechst 33258 染色等方法对血管平滑肌细胞的凋亡进行研究.结果Western blot显示AdCat转染后血管平滑肌细胞过氧化氢酶表达明显增多;细胞计数显示AdCat组明显抑制细胞增殖,与阴性对照组、空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术显示AdCat组与阴性对照组、空白对照组比较凋亡率明显增加(P<0.01).经Hoechst 33258染色后,AdCat组凋亡细胞明显多于空白对照组.结论重组腺病毒AdCat转染导致血管平滑肌细胞过氧化氢酶过度表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖,促进血管平滑肌细胞的凋亡.     

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法: 将p38特异性抑制剂SB203580(25 μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果: SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降（P<0.01）。结论: 阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。     

Effects of differential endothelial cells growth stage on the proliferation and migration of vascular smooth muscle cells

Endothelial injury and SMC proliferation and migration are the same common pathophysiological processes of many cardiovascular diseases such as artherosclerosis, hypertension, diabete and restenosis. So it is very important to determine their functional interaction under pathology conditions.