抗热毒宁注射液栀子蛋白单克隆抗体的研制与鉴定

利用栀子脂溶性蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛选获得1株抗栀子蛋白的单克隆抗体2H8.该单克隆抗体亚类鉴定为IgG2b,轻链为Kappa链.2H8腹水效价为1:204 800.Western blot试验证实,2H8能与栀子蛋白反应,识别相对分子质量为58.5 kDa左右的特异性蛋白质条带.以2H8腹水作为一抗建立了斑点酶联免疫吸附试验方法(Dot-ELISA),最小检出量为19.5 ng.本研究为快速检测热毒宁注射液蛋白的试剂盒的研制奠定了基础.     

SDS-PAGE Analysis of Components in Serum with Anti-asthma Activity Derived from Rats

目的:探索针刺抗哮喘大鼠血清差异组份的研究方法.方法:用蛋白质SDS-PAGE技术,对针刺抗哮喘血清进行组份差异分析.结果:SDS-PAGE电泳显示了针刺与不针刺血清中差异蛋白的存在:1)与正常对照组相比,ADX Acup组血清组份Ⅰ和Asthma_Acup 组血清组份Ⅰ,均有一染色增高条带,其分子量为62.1kDa;2)与正常对照组相比,ADX Acup组血清组份Ⅲ有二条染色增高条带,其分子量分别为36.1kDa、12.3 kDa;3)与正常对照组相比,ADX Acup组血清组份Ⅲ有一条染色降低条带,其分子量为34.6kDa.提示针刺对血清蛋白具有上调和下调的双向调节作用.结论:针刺抗哮喘大鼠血清中存在不同的差异组份.针刺对血清蛋白具有上调和下调的双向调节作用.     

基于蛋白质组学分析参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制

目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H₂O₂)诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制。方法:体外培养H9c2细胞,H₂O₂诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)检测细胞存活率,高效液相色谱法(HPLC)进行肽段分级,超高效液相色谱-质谱联用技术检测H9c2细胞的蛋白表达,使用MaxQuant(v1.5.2.8)进行数据检索,高分辨质谱定量分析筛选差异表达蛋白,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达蛋白进行生物信息学分析,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内脂质结合蛋白2(Plin2)和原肌球蛋白1(Tpm1)的蛋白表达水平进行验证。结果:通过谱图解析鉴定有48608个特异性肽段,5903个可定量蛋白。与模型组比较,SGI组有82个差异表达的蛋白,其中有22个蛋白上调,60个蛋白下调。GO分析结果显示,差异表达蛋白主要参与程序性细胞死亡调节、细胞增殖调控、心血管系统发育和细胞迁移等生物进程。KEGG分析结果表明,这些蛋白与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),黏着斑和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt),Ras相关蛋白1(Rap1)等通路有关。Western blot结果显示,与模型组比较,SGI能显著增加Plin2蛋白表达水平,显著降低Tpm1蛋白表达水平(P<0.01),与蛋白质组学结果一致。结论:提示SGI可能通过调控PPAR,黏着斑,PI3K/Akt和Rap1等通路抑制细胞凋亡,从而拮抗H₂O₂诱导细胞氧化损伤,但需要后续实验进一步验证研究。     

SDS-PAGE analysis of components in serum with anti-asthma activity derived from rats treated by acupuncture

目的：探索针刺抗哮喘大鼠血清差异组份的研究方法。方法：用蛋白质SDS-PAGE技术，对针刺抗哮喘血清进行组份差异分析。结果：SDS—PAGE电泳显示了针刺与不针刺血清中差异蛋白的存在：1）与正常对照组相比，ADXAcup组血清组份Ⅰ和Asthma_Acup组血清组份Ⅰ，均有一染色增高条带，其分子量为62．1kDa；2）与正常对照组相比，ADXAcup组血清组份Ⅲ有二条染色增高条带，其分子量分别为36．1kDa、12．3kDa；3）与正常对照组相比，ADXAcup组血清组份Ⅲ有一条染色降低条带，其分子量为34．6kDa。提示针刺对血清蛋白具有上调和下调的双向调节作用。结论：针刺抗哮喘大鼠血清中存在不同的差异组份。针刺对血清蛋白具有上调和下调的双向调节作用。     

肝宝胶囊对肝纤维化大鼠肝脏差异蛋白表达的影响

目的:研究肝宝胶囊对肝纤维化大鼠肝脏差异蛋白表达的影响。方法:大鼠注射二甲基亚硝胺造模,造模4周后,分为模型组和药物组,连续给药4周,处死剖取肝脏,肝脏经液氮研磨,加入裂解液,充分溶解,超声破碎处理,高速离心分离上清,提取上清液(肝脏总蛋白)。双向电泳(2-DE)分离,Image Master 2D 6.0软件进行差异蛋白表达分析,串联时间飞行质谱仪(MALDITOF/TOF)鉴定蛋白质。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,肝宝胶囊组的2-DE图谱蛋白共检出差异蛋白40个;经质谱鉴定的差异蛋白点有10个,分别为:转铁蛋白、Ⅰ型细胞骨架角蛋白10、Ⅱ型细胞骨架角蛋白1b、细胞角蛋白8多肽、甲基丙二酸半醛脱氢酶、氨甲酰磷酸合酶、热休克蛋白5、钙调素、羧酸酯酶1、谷胱甘肽S-转移酶。结论:肝宝胶囊对肝纤维化大鼠肝脏蛋白的表达与模型组比较有显著的差异;肝宝胶囊对肝纤维化大鼠肝脏蛋白的影响可能是通过多种蛋白参与的涉及多种代谢及细胞通路和细胞调控以及相互作用的复杂过程来实现的。     

不同分子量段黄芪多糖的肠道粘附及对肠道呼吸道防御素分泌的研究

目的:研究不同分子量段黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide,APS)对肠道及呼吸道防御素(defensins,DF)分泌的影响及其在肠道派伊氏结(Peyer’s patch,PP)的黏附。方法 :皮下注射环磷酰胺/克霉唑制备黏膜免疫低下小鼠模型,灌胃给予总APS及不同分子量段APS连续5日,ELISA测定肠道及呼吸道灌洗液中DF;制备离体小鼠潘氏细胞,加入不同分子量段APS,共孵育后ELISA检测α-DF;对不同分子量段APS进行荧光素衍生化,采用激光共聚焦显微镜观察荧光素衍生化APS在小鼠肠道PP的粘附。结果 :157.7kDa、69.9kDa分子量段APS 139mg/kg灌胃给予对模型小鼠肠道及呼吸道DF分泌减少均有明显对抗作用,其强度高于相同多糖含量的总APS;157.7kDa的APS在终浓度10～1000μg/ml范围内对离体潘氏细胞有直接刺激α-DF分泌作用;荧光素衍生化的APS157.7kDa与肠道作用后,存留于肠道粘膜的荧光强度为249,远高于荧光素衍生化的APS1.4kDa和右旋糖酐的60和39。结论 :较大分子量的APS可促进肠道、呼吸道黏膜免疫,该作用可能与较大分子量APS更多黏附于肠道有关。     

基于HSF1高表达H9c2细胞的参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用探讨

目的:建立热休克转录因子1(HSF1)高表达的H9c2细胞系,考察在HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液(SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法:构建GV1422-HSF1的重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至H9c2细胞中,用遗传霉素(G418)来筛选稳定转染细胞株,并用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSF1和热休克蛋白70(HSP70)mRNA和蛋白的表达情况,来鉴定HSF1高表达的H9c2细胞系(H9c2-HSF1)是否建立成功。用H2O2(300μmol·L-1)处理H9c2-HSF1细胞0.5 h构建氧化损伤模型,考察HSF1高表达的情况下参芎葡萄糖注射液预处理对细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)漏出量、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,同时Western blot检测HSF1和HSP70蛋白表达情况。结果:Real-time PCR和Western blot实验结果显示:筛选出来的稳定转染细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P0.01),表明H9c2-HSF1细胞系构建成功。经参芎葡萄糖注射液预处理6 h,H2O2损伤0.5 h后,与H9c2+H2O2组和H9c2-HSF1+H2O2组比较,对应给药组细胞的HSF1和HSP70蛋白表达显著上调(P0.01),细胞存活率显著增高(P0.01),LDH,CK释放量和MDA含量显著减少(P0.01);ROS含量显著降低,GSH-Px和SOD活性明显升高。结论:本研究成功构建了HSF1高表达H9c2细胞系,并发现HSF1高表达能明显增强参芎葡萄糖注射液抗氧化损伤作用,其机制可能不在于增加细胞清除ROS能力,但可能与上调HSP70表达相关,需要进一步研究。     

大萼香茶菜甲素对白血病细胞株Kasumi-1体外作用的研究

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxin A,MA）体外对Kasumi-1细胞增殖、分化、凋亡的作用。方法：以不同质量浓度的（4、8、12、16μg/mL）MA体外作用于Kasumi-1细胞,运用细胞计数、MTT比色法检测细胞生长抑制率;细胞形态学、细胞免疫表型CD11b、CD13检测研究细胞分化;细胞形态学、Hoechst 33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;DNA亚二倍体及Annexin-V/PI双标记检测细胞凋亡率;质谱分析技术检测用药前后细胞小分子蛋白变化。结果：MA对Kasumi-1细胞有明显的抑制增殖作用,呈现作用时间和剂量的量效关系。较低浓度MA可以诱导细胞分化,CD11b表达明显上升,且有剂量量效关系;高浓度促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体,亚G1峰显著增加,Annexin-V＋/PI-表达升高,Hoechst33258荧光染色出现凋亡特征性改变,琼脂糖电泳观察到DNA＂梯状条带＂。质谱分析显示,药物作用组与空白组对照分析出现13个差异蛋白峰,质荷比集中在1053-8581之间。结论：MA能抑制Kasumi-1细胞增殖,促进细胞分化,诱导细胞凋亡的作用。     

甲型H1N1流感病毒NA蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备

目的:利用原核系统表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白,制备NA特异性单克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术扩增A/Shenzhen/71/09病毒株NA基因,通过原核表达系统表达含6×His标签NA重组蛋白,利用镍离子亲和柱进行纯化。使用NA蛋白以100g/只剂量免疫BALB/C小鼠,3次免疫后,利用杂交瘤技术筛选分泌NA特异性单克隆抗体的细胞株,采用Western-blot方法对单抗进一步验证。结果:成功克隆A/Shenzhen/71/09NA基因,长度约1400bp。将NA基因克隆入原核表达载体pET-21b(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌包涵体中检测到目的蛋白,分子量约50kd。采用尿素变性处理后借助6×His标签对蛋白进行纯化。用纯化蛋白免疫小鼠,将脾细胞与SP2/0细胞融合,使用ELISA检测细胞上清NA抗体,共筛选1株持续分泌NA抗体的杂交瘤细胞株7C11。Western-blot验证该单克隆抗体可以特异性结合NA抗原。结论:成功表达甲型H1N1流感NA蛋白,获得1株分泌NA抗体的单克隆细胞株,从而为后续甲流诊断及疫苗研制奠定基础。     

miR-223对粒细胞性白血病细胞增殖影响及作用机理

通过在体外将miR-223 duplex转染至粒系白血病细胞株（HL-60、NB4）,观察其对粒系白血病细胞增殖作用的影响,来探讨miR-223对白血病细胞诱导分化及作用机理。以白血病HL-60、NB4细胞株为靶细胞,采用MTT法和半固体集落法观察不同浓度的miR-223对HL-60、NB4细胞增殖的影响;流式细胞术观察粒系细胞分化的表面标志（CD11b＋、CD15＋）表达;RT-PCR检测miR-223对c/EBPα、NFI-A转录因子表达的影响以及用免疫印迹反应观察相应蛋白的表达情况。结果表明：（1）低浓度的miR-223（10nM、20nM）均抑制HL-60、NB4细胞增殖（P〈0.05或P〈0.01）,但在HL-60细胞中随着其浓度的增加（50nM、100nM）,抑制作用与对照组相比无差异;而NB4细胞中随浓度增加抑制作用却没有增强（P〈0.05）。半固体集落培养结果显示与MTT结果相一致。（2）流式细胞术检测用不同浓度的miR-223转染粒系细胞中发现,粒系细胞表面标志CD11b＋表达在低浓度（10nM、20nM）下随其浓度升高而增加,但浓度增至50nM、100nM时表达有所下降;而CD15＋在HL-60细胞中表达无显著差异,NB4细胞中表达趋势与CD11b＋一致。（3）两细胞在miR-223作用前后提取总RNA分别进行RT-PCR检测显示,NB4细胞中NFI-A转录因子表达随浓度增加而降低,分别低于未经处理的0.6倍、2.0倍、1.1倍和1.5倍。c/EBPα基因表达随浓度增加而增加,分别是未经处理细胞的1.5倍、2.0倍、1.8倍和2.0倍。而在HL-60细胞中c/EBPα基因表达无明显差异,NFI-A仅在20nM浓度下表达下降差异显著,低于未经处理细胞的3.0倍。对NB4细胞中的NFI-A蛋白免疫印迹分析发现,经miR-223处理过的细胞中NFI-A蛋白含量随浓度增加而有所下降。结论：转染一定浓度miR-223至粒系白血病细胞中,能够抑制恶性细胞克隆增殖,其作用机制有可能通过竞争性抑制NFI-A转录因子表达,恢复与分化相关的c/EBPα转录因子的表达,来诱导粒系白血病细胞向成熟方向分化。     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

耳鸣(肾精亏损型)临床资料研究

[目的]对2007年11月至2008年11月就诊的主观性耳鸣患者246例,排除其他中医证型,主要研究肾精亏损型耳鸣患者耳鸣的临床特征,变化规律及耳鸣产生的影响等.[方法]选择肾精亏损型耳鸣患者,记录临床症状及体征,采用电测听及耳鸣匹配、听觉脑干诱发电位(ABR)等方法检查,并将资料进行统计分析.[结果]患者年龄以51～60岁最多见,其次为61～70岁.耳鸣响度的自我评分与响度匹配值之间无关联.大多数病例的耳鸣病程在一年之内.大部分患者受耳鸣困扰的程度在中度以下.ABR测试结果听力正常者占25%,右侧和左侧听神经传导至脑干功能障碍患者分别占13%和19%,双侧听神经传导功能障碍占16%.[结论]临床耳鸣患者多数为肾精亏损型,年龄以51～60岁最多见,男女比例相当,大部分患者听神经传导障碍和脑干功能障碍,高音调耳鸣患者居多.     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

针灸治疗椎动脉型颈椎病的取穴规律分析

目的:探寻椎动脉型颈椎病针灸取穴规律。方法:检索CNKI、VIP,建立椎动脉型颈椎病针灸取穴数据库,采用SPSS17.0统计软件统计描述。结果:治疗椎动脉型颈椎病的针灸穴位共计72个,使用频次为1005次;所用腧穴归属为督脉、足少阳胆经、经外奇穴、足太阳膀胱经及足阳明胃经频次最多,其累积频率达82.29%;其中风池穴的频率为19.11%;夹脊穴的频率为17.13%;百会穴的频率为12.3%,三穴累积频率达64.28%。结论:针灸治疗本病,以疏通局部经络,调节阴阳气血,临床选取督脉、足少阳胆经、奇穴以及风池、夹脊、百会三穴治疗最多。     

股骨头坏死病因的相关因素分析

目的:基于中国股骨头坏死数据库(China osteonecrosis of the femoral head database,CONFHD)资料分析股骨头坏死(Osteonecrosis of the femoral head,ONFH)病因的相关因素。方法:纳入CONFHD中2016年7月至2018年12月收录的病例资料,由数据库工程师从数据库中导出资料,包括患者的性别、年龄、病因、受伤类型、饮酒史(饮酒年限、饮酒频率、饮酒量)、激素应用史(激素应用时间、原发病类型、激素应用途径、激素种类)。结果:本研究共纳入病因资料完整的ONFH患者1290例。创伤性239例(18.53%),酒精性692例(53.64%),激素性359例(27.83%)。男1011例(78.37%),女279例(21.63%)。男性患者中创伤性138例(13.65%)、酒精性653例(64.59%)、激素性220例(21.79%),女性患者中创伤性101例(36.20%)、酒精性39例(13.98%)、激素性139例(49.82%);男性中酒精性比例最高,女性中激素性比例最高。1290例中,年龄≤30岁169例,激素性71例(42.01%);年龄31~40岁254例,酒精性146例(57.48%);年龄41~50岁324例,酒精性202例(62.35%);年龄51~60岁319例,酒精性185例(58.00%);年龄61~70岁158例,酒精性67例(42.41%);年龄≥71岁66例,创伤性和酒精性均为25例(各占37.88%)。受伤类型资料完整的创伤性ONFH患者144例,股骨颈骨折126例(87.50%)。饮酒史资料完整的酒精性ONFH患者544例,男性537例(98.71%),年龄41~50岁者172例(31.62%),饮酒年限6~10年149例(27.39%),饮酒次数5次≤每周饮酒<6次与每周饮酒≥7次均为127例(各占23.35%),每周饮酒量3001~3500 mL 222例(40.81%)。激素应用史资料完整的激素性ONFH患者210例,男112例(53.33%)、女98例(46.67%);激素应用时间14~10950 d,中位数365 d;原发病中免疫系统疾病50例(23.81%),比例最高,其余依次为皮肤、泌尿及血液系统等疾病;激素应用途径,口服125例(59.50%);激素应用种类,强的松68例(32.38%),比例最高,其余依次为地塞米松、甲强龙、泼尼松龙等。结论:酒精、激素、创伤仍是排在前3位的ONFH发病诱因;酒精性ONFH患者,多数饮酒时间>5年,每周饮酒次数>5次;激素性ONFH患者,激素应用时间中位数为365 d,应用途径主要是口服,排在前3位的药物为强的松、地塞米松、甲强龙,原发病主要为免疫、皮肤、泌尿、血液系统疾病;创伤性ONFH患者受伤类型以股骨颈骨折为主。     

辨证与辨病相结合辨治乳腺增生病

探讨乳腺增生病中医辨证分型的客观依据,泌免疫变化与中医辨证分型的相关性进行了总结和研究,医药辨治乳腺增生病的新思路。对乳腺增生病的红外光扫描诊断、病理分类、内分以期能够使微观医学与宏观辨证相结合,以开拓中医药辨治乳腺增生病的新思路。     

中药产业竞争力提升战略研究

本文运用了竞争力理论与战略理论，分析了中药产业竞争力提升的环境与条件，提出了提升中药产业竞争力的三大战略目标、三大总体战略、四条战略举措及三个实施阶段与重点任务。     

往来寒热证58例辨证论治探讨

收集我院门诊自2000年10月至2003年9月接诊的往来寒热证患者58例,实验室检查排除疟疾(血涂片均未找见疟原虫),分别从少阳辨证论治33例,从膜原辨证论治25例,疗效满意。     

咳嗽六经辨治初探

六经皆有咳嗽,寒热皆可致咳,治疗上不可拘于一理一方,当穷究其机,辨证施治,方能事半功倍。以六经辨证为纲,分析《伤寒杂病论》对咳嗽的有关论述,以期提高咳嗽的临床疗效。     

中医“治未病”理论的研究

治未病是中医学重要的防治思想,即预防疾病的发生和发展,防惠于未然的预防学思想,即未病之前,防止疾病的发生;已病之后,防止疾病的传变,强调以“预防为主”。本文从治未病的渊源;治未病思想的实质内容;“治未病”理论的应用;“治未病”临床研究进展等几方面解释治未病。