转化生长因子β1与大鼠心肌细胞肥大关系的实验研究

目的 探讨转化生长因子β1(TGF—β1)与大鼠心肌细胞肥大的关系。方法 培养新生大鼠心肌细胞，检测[^3H]—亮氨酸掺入量和心房利钠因子(ANF)的表达判断心肌细胞肥大，同时检测肥大心肌细胞TGF—β1表达。结果 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和TGF—β1均能增加心肌细胞[^3H]—亮氨酸掺入和ANF表达，两者合用效果更显著；AngⅡ还促进心肌细胞自分泌TGF—β1。结论 AngⅡ诱导心肌细胞分泌TGF—β1，AngⅡ和TGF—β1在诱导心肌细胞肥大中有协同作用。     

17β-雌二醇对体外机械牵张诱导心肌细胞肥大的影响

目的:研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对体外机械牵张诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:以机械牵张刺激体外培养的新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,采用免疫荧光方法分析心肌细胞表面积、Western blot方法检测肥大指标之一β-MHC的表达,以观察E2对机械牵张诱导的心肌细胞肥大的影响,并采用Western blot方法检测心肌细胞整合素β1(inte-grinβ1)表达的变化。结果:与对照组相比,机械牵张24 h后,心肌细胞表面积、心肌细胞胎儿型蛋白β-MHC表达增加,表明机械牵张24 h可诱导心肌细胞肥大。同时,机械牵张24 h心肌细胞整合素β1水平亦显著增加。100 nmol/L E2预处理30 min可明显减轻机械牵张诱导的心肌细胞表面积和β-MHC蛋白水平的增加,降低机械牵张诱导的心肌细胞整合素β1增加,该效应可被雌激素受体非特异性拮抗剂ICI182780逆转。结论:一定水平的E2可改善机械牵张诱导的心肌细胞肥大反应,并且能降低机械牵张诱导的integrinβ1表达的增加。     

α受体阻滞剂对心肌细胞肥大的作用

目的：观察α受体阻滞剂酚妥拉明对肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的作用．方法：在培养新生大鼠心肌细胞上．通过测量心肌细胞表面积和[3H]-Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大．结果：肾上腺素要明显增加心肌细胞表面和[3H]-亮氨酸([3H-Leu]的掺入量,α受体阻滞剂酚妥拉明能阻断肾上腺素增加心肌细胞表面积和[3H]-Leu掺入量的作用．结论:α受体阻滞有减轻肾上腺素诱导心肌细胞肥大的作用．     

肾上腺素致心肌细胞肥大的机制

目的：探讨肾上腺素致心肌细胞肥大中的机制。方法：在培养新生大鼠心肌细胞上,通过测量心肌细胞表面积和[^3H]—Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果：肾上腺素能明显增加心肌细胞表面积和[^3H]—Leu的掺入量,α受体阻滞剂(酚妥拉明)、β受体阻滞剂(心得安)、百日咳毒素(FIX)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂(calphostin C)均可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和[^3H]—Leu的掺入量增加。结论：肾上腺素诱导的心肌细胞肥大与肾上腺能受体(α受体和β受体)激动有关,并通过G蛋白和PKC介导。     

BAPTA对去甲肾上腺素刺激的大鼠心肌细胞蛋白合成及c-fos和β-MHC表达的影响

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)刺激导致的心肌细胞肥大中,钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c-fos和β-MHC表达之间的关系.方法去甲肾上腺素(10-5mol/L)刺激原代培养的心肌细胞,细胞内钙离子络合剂BAPTA(20 μmol/L)阻断钙信号通路,通过3H-leucine掺入测定蛋白质合成,RT-PCR测定c-fos及β-MHC mRNA的表达.结果NE刺激组的心肌细胞3H-leucine摄入量、c-fos及β-MHC的表达均显著高于正常对照组(P＜0.01),BAPTA阻断后明显降低(P＜0.01),单纯BAPTA阻断组的3H-leucine摄入量和β-MHC的表达低于正常对照组(P＜0.01),在正常对照组及单纯BAPTA阻断组未见c-fos明显表达.结论Ca2 信号通路不但参与NE刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加、c-fos及β-MHC的过度表达,且在正常心肌细胞蛋白质合成及β-MHC表达中也起重要作用.     

IGF-Ⅰ促心肌细胞的肥大作用及信号转导途径

目的研究IGF-Ⅰ对培养的新生小鼠细胞的促肥大作用及信号转导途径,方法测定了IGF-Ⅰ作用下[4.5-3H]亮氨酸在心肌细胞的参入及genistoin,PD98059,wort mannin和chelerythrine chloride的阻断作用,结果IGF-Ⅰ明显地促进增加心肌细胞的[4.5-3H]亮氨酸的掺入作用,而且这种作用可以被genistein PD98059和chelerythrine chloride阻断,但不受wormannin的影响.     

尾加压素Ⅱ致体外培养乳鼠心肌细胞肥大效应研究

目的 观察尾加压素Ⅱ(Urotensin Ⅱ,U Ⅱ)对心肌细胞肥大的效应.方法 以体外培养的SD乳鼠心肌细胞为实验模型,分为正常对照组,单纯U Ⅱ作用组,环胞素A(CsA)阻断组.用real-time PCR方法分析β-MHC、 CaN(钙调神经磷酸酶)mRNA表达的变化,用免疫印迹法(Western blot)研究心肌肥大过程中β-MHC、CaN蛋白表达的变化,探讨U Ⅱ对心肌细胞肥大的影响.结果 ①随着U Ⅱ浓度的增加,心肌细胞β-MHC、CaN mRNA和蛋白表达明显增加,其中10-8 、10-7 mol/L U Ⅱ组与对照组相比较差异显著(P<0.05);②用10-8 mol/L U Ⅱ处理心肌细胞12、24、48 h,随着时间增加,心肌细胞β-MHC、CaN mRNA和蛋白表达呈递增趋势,其中处理24 h组与正常对照组有显著差异(P<0.05);③预先用环胞素A 5μmol/L(cyclosporin A CsA)处理正常心肌细胞24 h,然后用10-8 mol/L U Ⅱ作用24 h,心肌细胞β-MHC、CaN mRNA和蛋白表达与正常心肌细胞经10-8 mol/L U Ⅱ单纯作用24 h差异有显著意义(P<0.05).结论 U Ⅱ能够诱导心肌细胞的肥大,环胞素A(CsA)能阻断此效应,CaN参与了U Ⅱ诱导的心肌肥大过程.     

miR-155下调心肌细胞ATR1α表达改善心肌细胞肥大

目的 研究微小RNA(miR)-155对心肌细胞肥大的影响,以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1α亚型(angiotensinⅡreceptor subtype 1α,ATR1α)在其中的作用.方法 AngⅡ诱导体外培养大鼠心肌细胞H9C2 (2-1)肥大,将miR-155模拟物(mimics)和miR-155抑制物(inhibitors)转染入心肌细胞.测量心肌细胞表面积.实验分为对照组、AngⅡ组、模拟物组、miR-155抑制物组、AngⅡ加模拟物组、AngⅡ加抑制物组.实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达.逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、p肌球蛋白重链(β-MHC)、ATR1α mRNA表达水平.Western blot法检测ATR1α蛋白表达水平.结果 与AngⅡ组比较,AngⅡ加模拟物组处理可降低心肌细胞ANP、β-MHC mRNA及ATR1a mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),心肌细胞表面积降低(P＜0.05);AngⅡ加抑制物组处理ATR1α mRNA和蛋白表达水平增加(P＜0.05),但ANP、β-MHC mRNA表达水平及心肌细胞表面积改变差异无统计学意义(P＞0.05),仅miR-155 mimics或miR-155 inhibitors处理各项指标均改变差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-155过表达抑制心肌细胞肥大;ATR1α可能为其负性调控作用靶点.     

过氧化物酶体增殖激素型受体对AngⅡ诱导肥厚心肌细胞的影响

目的 探讨同时激活PPARα、PPARs激活剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞的影响.方法 体外原代培养新生大鼠心肌细胞,分别以不同浓度非诺贝特(PPARα激活剂)和或吡格列酮(PPARγ激活剂)预处理24 h后,加用AngⅡ刺激诱导肥大心肌细胞模型.采用软件分析细胞表面积,以MTT比色法测定心肌细胞活力,用RT-PCR法检测α-MHC和胚胎基因β-MHC mRNA的表达.结果 与对照组相比,非诺贝特、吡格列酮显著逆转了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,抑制AngⅡ引起细胞活力改变,增加α-MHC mRNA表达,降低β-MHC mRNA的表达,α/β-MHC mRNA比值明显增加;相对两药处理组,上述指标与两药合用组无显著差异(P＞0.05).结论 PPARs信号通路激活能有效预防心肌细胞肥大,PPARαγ配体合用未见明显叠加效应.     

钙调神经磷酸酶介导碱性成纤维细胞生长因子诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的:观察钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法:在原代培养的大鼠心肌细胞上,应用双波长荧光光度计检测心肌细胞游离Ca2+浓度;应用对硝基苯磷酸(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)作底物测定CaN活性;根据3H-亮氨酸参入水平评估各种信号通路阻断剂对bFGF刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的影响.结果:bFGF刺激心肌细胞24 h后,胞内游离Ca2+浓度较对照组增高272%(P＜0.01);同时,bFGF刺激的心肌细胞CaN活性较对照组增高173%(P＜0.01).bFGF(60μg·L-1)刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入较对照组增高106%(P＜0.01);CsA(0.1～10 μmol·L-1)可以浓度依赖的方式抑制bFGF刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入.此外H7(PKC抑制剂)和50 μmol·L-1PD98059(MAPK抑制剂)亦可完全阻断bFGF刺激的心肌细胞3H-亮氨酸参入.结论:Ca2+/CaN信号通路参与bFGF诱导心肌细胞肥大的信息传递.另外,丝裂素活化蛋白激酶及蛋白激酶C可能亦是bFGF刺激心肌细胞肥大的重要信号传递途径.