Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对脂多糖抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸的影响

目的探讨Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors, mGluRs)激动剂对脂多糖(LPS)抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸(glutamate, Glu)的影响.方法应用同位素标记法测定C6胶质瘤细胞对[3H]-D,L-Glu的摄取.应用Hoechst染色法、噻唑蓝比色法(MTT)分别检测C6胶质瘤细胞的凋亡、细胞活力.结果LPS(4、6 μg/Ml)显著抑制C6胶质瘤细胞摄取[3H]-D,L-Glu,抑制率分别达 17.6%和 22.2%.Ⅱ组mGluRs激动剂 DCG-Ⅳ 100 μmol/L 和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4 100 μmol/L 逆转LPS对C6胶质瘤细胞摄取[3H]-D,L-Glu的抑制作用,这种逆转作用分别被Ⅱ、Ⅲ组mGluRs拮抗剂 APICA和MSOP取消.结论DCG-Ⅳ和L-AP4逆转LPS引起的C6胶质瘤细胞Glu摄取抑制,提示Ⅱ、Ⅲ组mGluRs激动剂通过促进Glu摄取,降低细胞外Glu浓度,从而发挥神经保护作用.     

Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂逆转1-甲基-4-苯基吡啶离子抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸

目的：探讨Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors，mGluRs)激动剂对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-metyl-4-phenylpyridinium，MPP~ )抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸(glutamate，Glu)的影响。方法：应用同位素标记法测定C6胶质瘤细胞对培养液中[~3H]-D，L-谷氨酸的摄取。结果：Ⅱ组mGluRs激动剂(2S，2’R，3’R)-2-(2’，3’-di-carboxycyclopropyl)glycine(DCG-Ⅳ)和Ⅲ组mGluRs激动刺L( )-2-amino-4-phosphonobutyric acid(LAP4)100μmol·L~(-1)可以逆转MPP~ 抑制C6胶质瘤细胞摄取Glu的作用，而Ⅱ组mGluRs拮抗剂(RS)-1-Amino-5-phosphonoinan-1-carboxylic acid(APICA)和Ⅲ组mGluRs拮抗剂(RS)-α-methvlserine-O-phosphate(MSOP)可以完全阻断其激动剂的逆转作用。 结论：激活C6胶质瘤细胞上的Ⅱ、Ⅲ组mGluRs可以通过促进谷氨酸转运体摄取Glu、进而降低细胞外液的Glu浓度。     

6-羟基多巴胺诱导PC12细胞释放谷氨酸及死亡不受Ⅰ组亲代谢型谷氨酸受体配基的影响(英文)

目的:探讨Ⅰ组亲代谢型谷氨酸受体(mGluR)配基对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞死亡及谷氨酸(Glu)释放的影响。方法:培养PC12细胞,以100μmol/LⅠ组mGluR激动剂(RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine(DHPG)和拮抗剂DL-2-amino-3-phosphonopropionic acid(DL-AP3)预先剌激细胞1h,再加入6-OHDA100μmol/L共孵育24h,显微镜下观察细胞形态变化,用TUNEL法检测凋亡细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,并用高效液相色谱检测Glu的释放量。结果:6-OHDA 降低PC12细胞存活率(P<0.01),其诱导的Glu释放呈浓度和时间依赖性。Ⅰ组mGluR配基不能减少6-OHDA引起的PC12细胞死亡,也不影响6OHDA引起的Glu释放量。结论:Ⅰ组mGluR配基对6-OHDA引起死亡的PC12细胞无保护作用。     

II、III组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对脂多糖抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸的影响

目的：探讨II、III组亲代谢型谷氨酸受体（metabotropic glutamate receptors，mGluRs）激动剂对脂多糖（LPS）抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸（glutamate，GIu）的影响。方法：应用同位素标记法测定C6胶质瘤细胞对[^3H]-D，L-Glu的摄取。应用Hoechst染色法、噻唑蓝比色法（MTT）分别检测C6胶质瘤细胞的亡、细胞活力。结果：LPS（4、6μg／mL）显著抑制C6胶质瘤细胞摄取[^3H]-D，L-Glu，抑制率分别达17．6％和22．2％。Ⅱ组mGluRs激动剂DCG-IV100μmol／L和III组mGluRs激动剂L-AP4 100pznol／L逆转LlX3对C6胶质瘤细胞摄取[^3H]．D，L-GIu的抑制作用，这种逆转作用分别被Ⅱ、ⅡI组mGluRs拮抗剂APICA和MSOP取消。结论：DCG-IV和L-AP引起的C6胶质瘤细胞Glu摄取抑制，提示II、III组mGluRs激动剂通过促进Glu摄取，降低细胞外Glu浓度，从而发挥神经保护作用。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂逆转1-甲基-4-苯基吡啶离子抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸

目的 :探讨Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropicglutamatereceptors ,mGluRs)激动剂对 1 甲基 4 苯基吡啶离子 (1 methyl 4 phenylpyridinium ,MPP )抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸 (Glu)的影响。方法 :应用同位素标记法测定星形胶质细胞对培养液中 [3 H] D ,L 谷氨酸的摄取 ,应用四氮唑 (MTT)比色法检测星形胶质细胞的活性。结果 :MPP 15 0、2 0 0 μmol·L-1可以明显抑制星形胶质细胞摄取Glu ,抑制率达 5 8.3%和 70 .1% ,但并不影响细胞活性 ;Ⅱ组mGluRs激动剂 (2S ,2’R ,3’R) 2 (2’ ,3’ dicar boxycyclopropyl)glycine (DCG IV ) 0 .1、 1、 10 ,10 0 μmol·L-1和Ⅲ组mGluRs激动剂L( ) 2 amino 4 phosphonobutyricacid (L AP4 ) 1、10、10 0 μmol·L-1可以逆转MPP 对星形胶质细胞摄取Glu的抑制作用。结论 :MPP 抑制星形胶质细胞摄取Glu可能与直接影响谷氨酸转运体 (GluTs)的功能有关 ,激活星形胶质细胞上的Ⅱ、Ⅲ组mGluRs可以通过促进GluTs摄取Glu、进而降低细胞外液的Glu浓度而发挥神经保护作用。     

亲代谢型谷氨酸受体配基对黑质6-羟基多巴损毁大鼠的抗氧化作用

目的　探讨亲代谢型谷氨酸受体 (mGluRs)配基对帕金森病 (PD )模型大鼠的抗氧化作用。方法　采用 6 羟基多巴单侧黑质损毁建立帕金森病大鼠模型 ,应用化学比色法测定血清总抗氧化能力 (T AOC)、抑制活性氧能力 (ROS)和谷胱甘肽 (GSH )含量。结果　与模型对照组相比 ,Ⅰ组mGluRs拮抗剂 (SIB 1893 ) ,Ⅱ组mGluRs激动剂 (APDC) ,Ⅲ组mGluRs激动剂 (L SOP )和L DOPA均能增加血清T AOC和GSH水平 ,提高清除ROS能力 ,尤以APDC组作用最明显。结论　Ⅰ组mGluRs拮抗剂和Ⅱ、Ⅲ组mGluRs激动剂对 6 羟基多巴损毁大鼠具有部分抗氧化功能 ,有利于机体减轻氧化应激所致的损伤     

mGluR5拮抗剂SIB-1893逆转6-OHDA抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸的作用

目的 :研究亲代谢型谷氨酸受体 5 (mGluR5 )拮抗剂 (E) 2 甲基 6 (2 苯乙烯 )嘧啶 (SIB 1893)及6 羟基多巴胺 (6 OHDA)对星形胶质细胞摄取谷氨酸功能的影响。方法 :取新生大鼠脑星形胶质细胞作原代培养 ,根据 [3 H]标记的D ,L 谷氨酸摄入量判断细胞的谷氨酸摄取功能。应用高效液相色谱法(HPLC)与荧光检测器联用的方法检测培养液中的谷氨酸水平 ;乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定细胞活力。结果 :6 OHDA呈浓度依赖性抑制星形胶质细胞谷氨酸摄取功能、降低细胞活力 ,但不诱导细胞释放谷氨酸 ;SIB 1893不影响正常星形胶质细胞的谷氨酸摄取量 ,但可以增加 6 OHDA损伤组的谷氨酸摄取量。结论 :6 OHDA的神经损伤机制可能与其抑制星形胶质细胞谷氨酸摄取功能有关 ,SIB 1893则能逆转 6 OHDA引起的谷氨酸摄取抑制效应 ,具有神经保护作用     

亲代谢型谷氨酸受体对基底神经节多巴胺和谷氨酸释放的调节

亲代谢型谷氨酸受体 (metabotropicglutamaterecep tors,mGluRs)是一类与G蛋白偶联的调节离子通道和第二信使生成酶的新型谷氨酸受体 ,在基底神经节 (basalganglia ,BG)分布非常广泛。分布于BG的各亚型mGluRs受体能够调节多巴胺 (dopamine ,DA)和谷氨酸 (glutamate,Glu)的释放 ,其调节效应与脑区、受体亚型以及药物浓度等相关。mGluRs多样性的发现及其在调节BG神经传递中的作用为治疗PD提供了有益的靶标     

代谢型谷氨酸受体与应激损伤

代谢型谷氨酸受体 (mGluRs)在应激性损伤中的作用日益受到重视 ,它可参与GC水平的调节 ,影响谷氨酸神经毒性作用和突触可塑性 (LTP、LTD)的诱导 ,由此表明mGluRs在应激性损伤中可能占有重要的地位。由于不同类型的mGluRs具有不同的作用 ,机制较为复杂 ,因此 ,今后还需进一步加强mGluRs与应激性损伤关系的研究     

6-羟基多巴的细胞毒作用与谷氨酸转运的关系

目的探讨6-羟基多巴(6-OHDA)导致细胞毒性与谷氨酸(glutamate,Glu)递质水平和谷氨酸转运体的相关性。方法大鼠脑黑质内定位注射6-OHDA,制备帕金森病(Parkinson's disease,PD)动物模型;用在体微透析技术收集大鼠纹状体细胞外液;用高效液相色谱法测定PD大鼠纹状体和PC12细胞的细胞外液中Glu的水平;用流式细胞仪和酶标仪检测细胞凋亡率和细胞活性;通过测定L-［³H］-Glu的摄取能力确定谷氨酸转运体的功能。结果6-OHDA诱导PC12细胞和大鼠损毁侧纹状体释放Glu增加,使PC12细胞凋亡和活性降低,而PC12细胞和突触体上的谷氨酸转运体功能显著下降。结论6-OHDA引起的神经毒性与其增加Glu释放和降低谷氨酸转运体功能有关。     

补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究

目的运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞仪观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果 BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用最强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论补肾方BS可能具有神经保护作用.     

IGF-1对6-OHDA诱导神经元氧化损伤的保护作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法 以25、50、100、150、200 μmol/L 的6-OHDA 处理PC12细胞,在12、24、48 h用MTT 法检测6-OHDA 对PC12细胞活性的影响,筛选最佳的实验浓度和观察时间。实验分为3组：对照组、6-OHDA组（150 μmol/L处理24 h）和IGF-1+6-OHDA组（IGF-1 100 nmol/L预处理2 h,后加入150 μmol/L 6-OHDA处理24 h）,MTT法检测各组细胞活性;免疫荧光染色法检测细胞活性氧（ROS）水平;Hoechst33342/PI双染法检测细胞凋亡。结果 随6-OHDA浓度的增加和作用时间的延长,PC12细胞的活性呈梯度降低,150 μmol/L 6-OHDA浓度和处理后24 h作为本研究的最佳的实验浓度和观察时间。与6-OHDA组比较,IGF-1+6-OHDA组PC12细胞活力增强、ROS水平下降、细胞凋亡减少。结论 IGF-1预处理能减少6-OHDA引起的PC12细胞氧化损伤及凋亡,增加细胞活性,为防治帕金森病提供了潜在的治疗策略。     

Antioxidant and neuroprotector effect of Lepidium meyenii (maca) methanol leaf extract against 6-hydroxy dopamine (6-OHDA)-induced toxicity in PC12 cells

Reactive oxygen species (ROS) are normally produced during cell metabolism, there is strong evidence to suggest that ROS produced in excess impair the cell and may be etiologically related to various neurodegenerative diseases. This study was undertaken to examine the effects of Lepidium meyenii (MACA) methanol leaf extract on neurotoxicity in PC12 cell exposed to 6-hydroxydopamine (6-OHDA). Fresh samples of “maca” leaves were processed in order to obtain foliar extracts and to evaluate the neurobiological activity on PC12 cells, subjected to the cytotoxic effect of 6-OHDA through the determination of the capacity antioxidant, cell viability and cytotoxicity assays on PC12 cells. The results of the tests of antioxidant activity, showed maximum values of 2262.37 and 1305.36 expressed in Trolox equivalents (TEAC), for the methanolic and aqueous fractions respectively. Cell viability assays at a dose of 10?μg extract showed an increase of 31% and 60% at 6 and 12?h of pretreatment, respectively. Cytotoxicity assays at the same dose and exposure time showed a 31.4% and 47.8% reduction in lactate dehydrogenase (LDH) activity and an increase in superoxide dismutase (SOD) activity. The results allow us to affirm that the methanolic foliar extract of “maca” presents in vitro neurobiological activity of antioxidant protection, increase in cell viability and reduction of cytotoxicity against oxidative stress generated by 6-OHDA. In conclusion, the present study shows a protective role for Lepidium meyenii leaf extract on 6-OHDA-induced toxicity by an antioxidant effect.     

芍药苷对6羟基多巴胺致PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨芍药苷对6羟基多巴胺(6-OHDA)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的细胞损伤保护作用及其可能机制.方法:体外培养PC12细胞,用6-OHDA建立细胞损伤模型.MTT和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定存活率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax的mRNA表达,Hochest33342/PI双染检测细胞凋亡率.结果:25、50、100 μmol·L-1芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,降低LDH漏出率,增加Bcl-2 mRNA和减少Bax mRNA表达.结论:芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能与调节Bax、Bcl-2表达有关.     

Intracellular dopamine oxidation mediates rotenone-induced apoptosis in PC12 cells

Aim: To study the role of dopamine (DA) in rotenone-induced neurotoxicity in PC12 cells. Methods: Cell viability was assessed by detecting the leakage of lactate dehydrogenase (LDH) into the medium. Apoptosis rate was measured by flow cytometry. Caspase-3-1ike activity was measured by fluorescence assay using the probe Ac-DEVD-AMC. The level of intracellular hydrogen peroxide and other peroxides in PC12 cells were quantified by loading cells with 2‘-7‘-Dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) in fluorescence assay. Lactic acid was measured spectrophotometrically. The DA levels in PC 12 cells weredetermined by HPLC-ECD. Results: A 48-h incubation of PC 12 cells with rotenone caused an apoptotic cell death and elevated intracellular reactive oxygen species (ROS) and lactic acid accumulation. Intracellular DA depletion with reserpine significantly attenuated rotenone-induced ROS accumulation and apoptotic cell death. No change was found in rotenone-induced ROS accumulation when cells were co-treated with deprenyl. Brief treatment with reserpine at the end of rotenone treatment had no effect on rotenone-induced neurotoxicity. However, when cells were first incubated with deprenyl, a monoamine oxidase-B inhibitor for 30 min then co-incubated with rotenone plus deprenyl, a brief treatment with reserpine enhanced cell injury. Conclusion: Rotenone-inducedapoptosisinPC12 cells was mediated by intracellular dopamine oxidation.     

硫化氢抑制葡萄糖调节蛋白78减轻6-OHDA诱导的PC12细胞损伤

目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过改变葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达参与其对抗6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法应用具有神经毒性的6-OHDA损伤PC12细胞为帕金森病细胞模型,以硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;DFCH-DA染色检测细胞内活性氧（ROS）的水平;Rh123染色检测细胞线粒体膜电位（MMP）;Western blot检测GRP78的表达。结果200μmol/L的6-OHDA引起PC12细胞的存活率显著降低,ROS生成增加及MMP降低,且诱导了GRP78的高表达。应用25~400μmol/L的NaHS预处理30 min,呈浓度依赖性抑制6-OHDA引起的细胞存活率降低,其中400μmol/L的NaHS作用最明显,此浓度也可以显著减少6-OHDA引起的ROS增多,提高MMP,同时明显抑制6-OHDA诱导的GRP78高表达。结论 H2S具有抗6-OHDA氧化应激损伤的PC12细胞保护作用,抑制内质网应激分子GRP78的表达可能是其机制之一。     

盐酸埃他卡林对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究盐酸埃他卡林(Ipt)对谷氨酸(Gli)所致细胞损伤的保护作用。方法 采用培养PC12细胞,MTT法测细胞存活率。结果 Ipt 1×10~(-10)～1×10~(-4)mol·L~(-1)可拮抗Glu介导的神经毒作用,提高细胞存活率,该保护作用可被10 μmol·L~(-1)格列苯脲(ATP敏感性钾通道拮抗剂)所取消。结论 Ipt可拮抗Glu介导的神经毒作用,该保护作用可能与ATP敏感性钾通道相关。