秋水仙碱对LPS诱导巨噬细胞TNF—α基因表达的抑制作用

细胞微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，Ｃｏｌ．，１０μｍｏｌ／Ｌ）可抑制ＬＰＳ激活的小鼠巨噬细胞株ＰＵ５－１．８产生ＴＮＦ－α及减少其基因表达，而Ｃｏｌ．衍生物β－Ｌｕｍｉｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ对微管无作用，对ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ积累亦无影响，其它微管聚合抑制剂长春新碱、长春花碱等则有类似Ｃｏｌ．的抑制作用。用ｒｕｎ ｏｎ核转录试验和ｍＲＮＡ半寿期检测证实Ｃｏｌ．ＴＮＦ－α ｍＲＮＡ积累     

秋水仙碱对肿瘤坏死因子—α基因表达的影响

微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ）可抑制ＬＰＳ刺激ＰＵ５－１．８细胞的ＴＮＦ－ａ基因表达，以前工作曾证实Ｃｏｌ主要抑制ＴＮＦ－αｍＲＮＡ的转录。本研究进一步证实这种抑制作用呈延迟性，即Ｃｏｌ需作用３小时才能充分表现其负性影响。而且这种抑制作用可被蛋白合成抑制剂放线菌酮（ＣＨＸ）完全阻断。单用Ｃｏｌ对ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ－αｍＲＮＡ稳定性无明显影响，而与ＣＨＸ联用时则可明显延长ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ－αｍＲＮＡ半衰期。以上资料堤示，Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α基因表达的影响可能是对其在转录及转录后水平综合影响的结果。     

秋水仙碱抑制巨噬细胞合成肿瘤坏死因子—α机制的初步探讨

我们以前证实微管聚合抑制剂Ｃｏｌ（秋水仙碱）可抑制分泌ＴＮＦ—α。本文进一步证实Ｃｏｌ并非干扰将ＴＮＦ—α胞外的分泌过程，因Ｃｏｌ不引起ＴＮＦ—α在细胞内的潴留，而是抑制ＴＮＦ—α的产生。因为：（１）阻断新合成蛋白分泌过程的试剂Ｍｏｎ（莫能菌素），能完全抑制ＴＮＦ—α的释放，将大量ＴＮＦ—α阻留在细胞内。如加用Ｃｏｌ．则Ｍｏｎ阻留于胞内的ＴＮＦ—α明显减少；（２）Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示Ｃｏｌ可抑制ＴＮＦ—α前体一２６ＫＤ蛋白的产生。如在ＬＰｓ刺激的不同时间加Ｃｏｌ，其抑制效应在２～８ｈ内逐渐消失，若同时给予ＬＰＳ与Ｃｏｌ．则Ｃｏｌ的抑制效果最好，说明Ｃｏｌ作用于ＴＮＦ—α生物合成早期。在分子水平上，Ｃｏｌ明显减低ＬＰＳ诱导的ＴＮＦ—αｍＲＮＡ水平。以上资料提示Ｃｏｌ主要通过抑制ＴＮＦ—αｍＲＮＡ转录而减少ＴＮＦ—α的合成。     

秋水仙碱对单核细胞产生细胞因子的影响

微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌ，１０－５ｍｏｌ／Ｌ）可抑制ＬＰＳ刺激人单核细胞分泌１７ｋＤＴＮＦ－α及膜相关２６ｋＤＴＮＦ－α；与之相反，它却可促进ＩＬ－１β（多为分泌型）的分泌，而对ＩＬ－１α（多为膜相关型）则表现为抑制作用。对于ＩＬ－６，Ｃｏｌ无明显影响。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析显示，Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α及ＩＬ－１βｍＲＮＡ产生亦表现为相反作用，即对前者抑制，对后者促进作用。     

抗细菌核心糖脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放TNF－α和IL－6及其mRNA表达的影响

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能分别降低细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可能通过与ＬＰＳ的结合而中和ＬＰＳ，从而降低或阻碍了效应细胞炎性细胞因子ｍＲＮＡ的表达，达到降低相应细胞因子的作用。     

抗细菌核心糖脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放TNF…

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ和ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１，ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＴＮＦ－α的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能分别降低细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可能通过与ＬＰＳ的结     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

PGE2与LTB4在微管对TNF—α合成调节中的作用

本研究证实完善的微管功能对下ＴＮＦ－α的合成是必要的。如用秋水仙碱抑制微管聚合，则可减少ＭΦ产生ＴＮＦ－α，Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α的抑制作用部分是由于该药引起前列腺素Ｅ２升高所致，因为用环加氧酶抑制剂消炎痛阻断ＰＧＥ２合成，可部分拮抗Ｃｏｌ的这一抑制作用。此外，Ｃｏｌ可抑制花生四烯酸的另一产物白三烯的产生，然而补充外源性ＬＴＢ４并不影响Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α的抑制作用。     

LPS和几种促炎细胞因子促进人血管平滑肌细胞iNOS mRNA的表达

ＬＰＳ、ｒｈｌＬ－１β、ｒｈＩＬ－６、ｒｈＴｈＦ－ａ和ｒｈＩＦＮ－γ单独或两两组合加于培养的人血管平滑肌细胞（ｈＶＳＭＣ）,测定了ｈＶＳＭＣＮＯＳ活性,ｃＧＭＰ含量,ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达丰度和培养液中ＮＯ２浓度。ＬＰＳ和细胞因子都能诱导ｈＶＳＭＣ表达ｉＮＯＳ　ｍＲＮＡ,升高ｈＶＳＭＣ　ＮＯＳ活性、ｃＧＭＰ含量和培养液中ＮＯ２浓度;ＴＮＦ－ａ是受试细胞因子中唯一能与另外三种细胞因子分别组合都显示出协同效应的细胞因子;ＬＰＳ和其余三种细胞因子间的两两组合都没有显示出协同效应;本研究结果表明：ＬＰＳ、ｒｈＴＮＦ－α、ｒｈＩＬ－１β、ｒｈＩＬ－６、ｔｈＴｈＦ－α、ｔｈＩＦＮ－γ都能诱导ｈＶＳＭＣ合成ＮＯ;ＴＮＦ－α可能是诱导ｈＶＳＭＣｉＮＯＳ表达的致炎细胞因子中最为重要的。     

PGE_2与LTB_4在微管对TNF－α合成调节中的作用

本研究证实完善的微管功能对ＴＮＦ－α的合成是必要的。如用秋水仙碱（Ｃｏｌ）抑制微管聚合，则可减少ＭΦ产生ＴＮＦ－αＣｏｌ对ＴＮＦ－α的抑制作用部分是由于该药引起前列腺素Ｅ＿２（ＰＧＥ＿２）升高所致，因为用环加氧酶抑制剂消炎痛（Ｉｎｄｏｍ，）阻断ＰＧＥ＿２合成，可部分拮抗Ｃｏｌ的这一抑制作用。此外，Ｃｏｌ可抑制花生四烯酸的另一产物白三烯（ＬＴＢ＿４）的产生，然而补充外源性ＬＴＢ＿４并不影响Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α的抑制作用。     

微管功能对单核细胞分泌细胞因子的影响

用秋水仙碱阻断微管聚合，可使ＬＰＳ诱导的人单核细胞ＴＮＦ－α减少，ＩＬ－１β明显增加，反之，用Ｔａｘｏｌ阻断微管解聚，则能抑制ＴＮＦ－α及ＩＬ－１β的产生，而对ＩＬ－６的分泌则有明显刺激作用。以上资料提示微管聚合有利于ＩＬ－６的产生，而微管解聚则促进ＩＬ－１β的释放，对于ＴＮＦ－α的合成似科需要微管动态的聚合与解聚。     

细胞骨架系统对TNF—α产生的影响

本文证实细胞微管聚合抑制剂秋水仙碱、长春花碱、长春新碱等均可明显抑制脂多糖刺激的大鼠腹腔巨噬细胞合成肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）。微管解聚抑制剂重水与Ｔａｘｏｌ亦可使ＴＮＦ－α产生轻度减少，提示微管的聚合与解聚对ＴＮＦ－α的正常产生都非常重要，其中聚合功能对ＴＮＦ－α合成的调节尤其重要。此外，微丝聚合抑制剂细胞松弛素Ｂ亦可轻度抑制ＴＮＦ－α的产生，说明微丝亦参与对ＴＮＦ－α合成的调节。     

云芝多糖增强巨噬细胞M—CSF的表达与分泌

为揭示云芝多糖作用与巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ表达与分泌的关系,采用活性测定,斑点杂交等方法,将云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ表达及分泌的影响进行了探讨。结果显示,腹腔注射云芝多糖可以提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中的Ｍ－ＣＳＦ活性,并使巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ ｍＲＮＡ的含量增加;应用ｍＲＮＡ合成抑制剂及蛋白合成抑制剂的研究发现,ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ及ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅｆ均能阻断云芝多糖对小     

细胞骨架系统对TNF－α产生的影响

本文证实细胞微管聚会抑制剂秋水仙碱、长春花碱、长春新碱等均可明显抑制脂多糖刺激的大鼠腹腔巨噬细胞合成肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）。微管解聚抑制剂重水与Ｔａｘｏｌ亦可使ＴＮＦ－α产生轻度减少，提示微管的聚合与解聚对ＴＮＦ－α的正常产生都非常重要，其中聚合功能对ＴＮＦ－α合成的调节尤其重要。此外，微丝聚合抑制剂细胞松弛素Ｂ亦可轻度抑制ＴＮＦ－α的产生，说明微丝亦参与对ＴＮＦ－α合成的调节。     

α-黑素细胞刺激素体外对星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子的影响

目的：研究α－黑素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）对ＬＰＳ诱导星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子的影响。探讨α－ＭＳＨ的抗炎作用机制。方法：分别用ＬＰＳ或α－ＭＳＨ＋ＬＰＳ处理体外培养的大鼠脑星形胶质细胞,用Ｇｒｉｅｓｓ试剂测定ＮＯ,以ＭＴＴ显色法检测ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α,采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外培养的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ显著增高;若同时给予ＬＰＳ和α－ＭＳＨ,可明显降低ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α的产生以及ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结论：Ｒ昧α－ＭＳＨ抑制星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子与其抑制中枢神     

脂多糖诱导地鼠肺泡巨噬细胞中一氧化氮对TNF—α的调节作用

对地鼠肺进行灌洗,利用灌洗液分离纯化出肺泡巨噬细胞（ＡＭ）,并进行培养。脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,分 别加入一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂和一氧化氮（ＮＯ）供体,观察ＮＯ和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨ＮＯ 对ＴＮＦ－α的作用关系。结果显示：ＬＰＳ刺激ＡＭ使ＮＯ和ＴＮＦ－α含量均增加（Ｐ＜０．０１）,特异性ｉＮＯＳ抑制剂使活化 的ＡＭ分泌产生ＴＮＦ－α上调,ＮＯ供体可显著抑制ＴＮＦ－α的释放。不同的ＮＯ抑制剂和ＮＯ供体使ＮＯ和ＴＮＦ－α含 量变化不同。提示 ＮＯ和 ＴＮＦ－α是 ＡＭ分泌的炎症细胞因子, ＮＯ对 ＴＮＦ－α存在着调节作用。     

内毒素诱导大鼠急性肺损伤巨噬细胞炎症蛋白-2的表达及巨噬细胞的作用

目的和方法：采用斑点及原位杂交方法,检测内毒素性急性肺损伤（ ＡＬＩ） 大鼠肺组织巨噬细胞炎症蛋白－ ２（ ＭＩＰ－ ２） ,单核细胞趋化蛋白－ １（ ＭＣＰ－ １） ｍ ＲＮＡ 表达,观察脂多糖（ＬＰＳ） 刺激猪肺血管内巨噬细胞（ＰＩＭ） ＭＩＰ－ ２ｍＲＮＡ 表达,及其培养上清肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα） 、白介素－ ８（ＩＬ－ ８） 含量变化,探讨肺损伤的机制。结果：ＡＬＩ 鼠肺组织ＭＩＰ－ ２ 、ＭＣＰ－ １ ｍ ＲＮＡ 表达显著增加,分别于致伤后３ ｈ 和６ ｈ 达峰值（ Ｐ＜ ０－０１） ;血浆及肺组织匀浆髓过氧化物酶（ ＭＰＯ） 活性亦显著增加,但峰值靠后;肺组织ＭＩＰ－ ２ ｍ ＲＮＡ 表达与血浆及肺匀浆ＭＰＯ 活性呈显著正相关（ Ｐ＜ ０－０５） 。原位杂交显示肺巨噬细胞（ Ｍ） 是ＭＩＰ－ ２ 的主要分泌细胞。ＬＰＳ 刺激的ＰＩＭ 分泌ＴＮＦα早,ＩＬ－ ８ 则晚而长。结论：肺Ｍ通过分泌ＭＩＰ－ ２ 、ＴＮＦα、ＩＬ－ ８ 等在ＡＬＩ 发生、发展中可能起重要作用     

反义TNF-α寡脱氧核苷酸降低感染性休克小鼠死亡率

目的：观察反义肿瘤坏死因子－α寡脱氧核苷酸对ＬＰＳ诱导的感染性休克小鼠的影响,为采用反义技术降低感染性休克死亡率的早期临床试验奠定基础。方法：通过腹腔注射ＬＰＳ建立感染性休克小鼠模型。采用腹腔注射方法,通过ＤＯＴＡＰ转染导入系统,使反义ＴＮＦ－α革酸作用于小鼠单核吞噬细胞系统;采用ＲＴ－ＰＣＲ,ＥＬＩＳＡ检测ＴＮＦ－α的ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平。反义ＴＮＦ－αＯＤＮ降低了ＬＰＳ诱导的感染性休克小     

云芝多糖增强巨噬细胞M-CSF的表达与分泌

为揭示云芝多糖作用与巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ表达与分泌的关系,采用活性测定、斑点杂交等方法,将云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ表达及分泌的影响进行了探讨。结果显示,腹腔注射云芝多糖可以提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中的Ｍ－ＣＳＦ活性,并使巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的含量增加;应用ｍ ＲＮＡ 合成抑制剂及蛋白合成抑制剂的研究发现,ａｃｔｉｎｏｍ ｙｃｉｎ Ｄ及ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍ ｉｄｅ均能阻断云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的诱导     

肿瘤坏死因子－α在诱导巨噬细胞体外杀伤溶组织内阿米巴滋养体中的作用

一氧化氮是活化的巨噬细胞（Ｍ）在体外杀溶组织内阿米巴滋养体的主要效应分子。本文试图探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）所诱导的Ｍ体外杀伤溶组织内阿米巴滋养体的作用是否与其ＮＯ合成有关。结果表明：（１）ＴＮＦ－α本身不能直接诱导Ｍ产生ＮＯ以杀伤阿米巴，但若与γ－干扰素联合应用，则Ｍ杀伤阿米巴的效力及ＮＯ产量的增加呈显著的线性相关。ＴＮＦ－α抗血清和ＮＯ合成酶抑制剂，一甲基精氨酸（Ｌ－ＮＭＭＡ）可抑制其协同作用。（２）脂多糖（ＬＰＳ）和γ－干扰素共同活化的Ｍ产生的ＴＮＦ－α和ＮＯ的量呈显著的线性相关。ＴＮＦ－α抗血清抑制ＴＮＦ－α和ＮＯ及杀伤阿米巴效力分别为９３％，５３％和８６％，而Ｌ－ＮＭＭＡ虽降低了ＮＯ产量至７４％和杀伤阿米巴效力到８３％，却不影响ＴＮＦ－α的分泌。（３）同样，ＴＮＦ－α也能够与ＬＰＳ共同活化Ｍ产生ＮＯ杀伤阿米巴。这些结果证明ＴＮＦ－α所诱导的Ｍ体外杀伤阿米巴作用与ＮＯ合成途径有关。