补阳还五汤有效部位对局灶性脑缺血再灌注后caspase表达的作用

目的 研究补阳还五汤中4类有效部位抗脑缺血再灌注损伤作用是否是通过抑制脑组织caspase表达而实现的.方法 采用大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血模型,缺血2 h再灌注46 h,分别于缺血前和缺血后12、24、36 h给予由补阳还五汤提取的生物碱、苷、多糖和苷元,以尼莫地平为对照药.以免疫组化法检测caspase-1、caspase-3、caspase-8蛋白表达.结果 脑缺血再灌注后,缺血侧脑组织caspase-1、caspase-3蛋白表达增强,caspase-1主要表达在脉络膜,caspase-3在海马、皮质和髓质均有表达.补阳还五汤中生物碱、苷、多糖和苷元均可抑制caspase-1表达,尼莫地平对caspase-1表达无显著影响.生物碱可抑制海马和髓质区caspase-3表达,苷和苷元可抑制海马、皮质和髓质caspase-3表达,尼莫地平可抑制海马和髓质caspase-3表达,而多糖对其无显著影响.各组caspase-8表达均无显著差异.结论 补阳还五汤中生物碱、苷、多糖和苷元可能通过抑制caspase-1表达,减少炎性细胞因子的产生,从而对抗缺血后炎症反应.生物碱、苷和苷元可能通过抑制caspase-3表达,抑制缺血后神经元凋亡,从而对抗神经元迟发性死亡.生物碱、苷、多糖和苷元可能是补阳还五汤抗缺血性脑损伤的主要物质基础.     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠TLR4表达的影响

目的探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织TLR4表达的影响。方法 72只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组按给药后7、14、21 d 3个时间点再各分3组,用免疫组化、Western blot、RT-PCR法检测各组不同时间点TLR4的蛋白和基因表达。结果模型组和补阳还五汤组各时间点TLR4蛋白和mRNA表达均高于假手术组(P<0.05),补阳还五汤组在第7、14天TLR4蛋白表达明显低于模型组,但TLR4mRNA水平在第7天、14天却明显高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补阳还五汤通过调节缺血后脑组织TLR4的表达可能是其治疗脑缺血的作用机制之一。     

补阳还五汤有效部位配伍对脑缺血大鼠及其神经功能的影响

目的:研究补阳还五汤主要有效部位配伍后对大鼠脑缺血损伤的保护作用及神经功能的影响.方法:采用正交实验设计方法,将组成补阳还五汤3个主要有效部位(黄酮、生物碱、总苷)用量配比不同的9个组合,将66只SD大鼠随机分为11个组,补阳还五汤9个组方组、模型组和正常组每组6只,将补阳还五汤主要有效部位组合用生理盐水溶解配成混悬液,再灌注同时灌胃给药,评价其对神经功能损伤的保护,并测定血浆中的超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.结果:与模型组相比,补阳还五汤9个有效部位组方均能使大鼠的神经功能缺损症状减轻,且各时间点大鼠血浆中SOD活力均有所增加,MDA含量均有所降低,其中Com6、Com8和Com9效果较突出.结论:补阳还五汤有效部位组方能减轻脑缺血大鼠神经功能损伤,具有较好的脑保护作用.     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠血清细胞因子的影响

目的：观察补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠血清细胞因子的影响。方法：采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型,在缺血后24h采静脉血,以酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清中IL-1、IL-6和IL-10含量的变化。结果：脑缺血24h大鼠血清中IL-1、IL-6、IL-10水平均显著升高（P〈0.01）;中医方剂补阳还五汤均能显著降低脑缺血模型大鼠血清中IL-1和IL-6水平（P〈0.01）,显著升高IL-10水平（P〈0.01）。结论：补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠血清细胞因子的影响是其对脑缺血保护作用的可能机制之一。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的：观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法：采用大鼠大脑中动脉结扎模型研究补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血保护作用。结果：补阳还五汤可呈剂量依赖性降低脑组织Na^＋，NO，MDA浓度，抑制NOS，增强SOD，Na^＋-K^＋ATPase，Ca^2＋ ATPase活性，提高K^＋浓度及减轻脑水肿。结论：补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血有保护作用。     

补阳还五汤四类有效部位对大鼠脑缺血再灌注后Caspase表达的作用

目的:研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-1、Caspase-3)蛋白表达的变化,探讨补阳还五汤四类有效部位对它的影响.方法:采用线栓法,建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)后脑缺血再灌注模型.将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生物碱组、苷组、苷元组、多糖组和尼莫地平对照组,采用免疫组化法测定脑组织Caspase-1、Caspase-3蛋白表达的变化.结果:脑缺血2 h再灌注46 h后,在脉络膜可以见到Caspase-1表达增强,生物碱、苷、多糖、苷元可以抑制Caspase-1表达;在海马区、皮质区和髓质区均可见到Caspase-3蛋白表达增强,生物碱、苷、苷元和尼莫地平可以抑制Caspase-3表达.结论:补阳还五汤具有抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,生物碱、苷、多糖和苷元可能为其抗缺血性脑损伤的主要物质基础,其作用机制可能与抑制Caspase-1、Caspase-3蛋白的表达,拮抗脑缺血后神经元凋亡有关.     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经功能、脑梗死体积和血清IL-10含量的影响

目的:观察补阳还五汤对局灶性脑缺血模型大鼠神经功能、脑梗死体积和血清细胞因子含量的影响。方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型,在缺血后24h进行神经功能行为评分,采用TTC染色法测定脑梗死体积,采静脉血以酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中IL-10含量的变化。结果:脑缺血24h后大鼠神经功能行为评分、脑梗死体积和血清中IL-10水平均显著升高(P<0.01);中医方剂补阳还五汤能显著降低神经功能行为评分,减少脑梗死体积,升高血清IL-10水平(P<0.01)。结论:补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑损伤具有保护作用,其对血清细胞因子的影响是其对脑缺血保护作用的可能机制之一。     

基因芯片分析补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠的保护作用机制

目的 :用基因芯片分析补阳还五汤 (BYHWT)对脑缺血再灌注损伤大鼠的基因表达影响 ,探讨其保护作用机制。方法 :以博星公司定制的包含 512条大鼠的cDNA基因表达谱芯片 ,研究脑缺血 2h再灌注 2 4h的大鼠脑组织基因表达谱 ,并观察补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的基因表达影响。结果 :脑缺血 2h再灌注 2 4h的大鼠脑组织共筛选出差异表达基因 149条 ,其中 69条基因表达上调 ,80条表达下调 ;脑缺血同时灌胃BYHWT大鼠脑组织共筛选出差异表达基因 31条 ,其中 2 5条基因表达上调 ,6条表达下调。结论 :补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的许多基因表达变化都有调节作用 ,是其保护脑缺血再灌注损伤的机制。     

补阳还五汤合六味地黄汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织bFGF表达的影响

目的观察补阳还五汤合六味地黄汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的影响及反方是否有协同作用。方法采用改良Haruo Nagasawa法复制老龄大鼠脑缺血模型,随机分为补阳还五汤合六味地黄汤组（即健脑通络汤组）、六味地黄汤组、补阳还五汤组、模型组、假手术组,观察各组术后24 h、72 h、7 d后脑组织bFGF的表达。结果六味地黄汤和补阳还五汤合用能协同提高急性持续脑缺血大鼠bFGF的表达,其作用优于单用,其中单用补阳还五汤优于单用六味地黄汤。结论通过诱导内源性bFGF的表达,可能是健脑通络汤进行脑保护的机制,补阳还五汤与六味地黄汤合用优于单用补阳还五汤。     

补阳还五汤及其有效部位组方对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元损伤的影响

目的：比较研究补阳还五汤及其有效部位组方对脑缺血再灌注后海马CA1区病理形态结构的影响。方法：采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血模型,分别腹腔注射补阳还五汤及其有效部位组方,于再灌注后5d取脑观察海马CA1区神经元密度和超微病理的变化。结果：补阳还五汤及其有效部位组方均可防止脑缺血再灌注后海马CA1区神经元密度的降低,对海马CA1区超微病理变化均有改善作用,两才的改善程序相近。结论：补阳还五汤及其有效部位组方对脑缺血再灌注后海马CA1驱神经元迟发性损伤具有保护作用。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子及其受体Flk1的影响

目的探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Fetal liver kinase1,Flk1)的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、补阳还五汤组,大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测各组动物脑内VEGF、Flk1的表达和蛋白水平,同时评价动物神经功能。结果在正常大鼠脑内有少量VEGF和Flk1阳性细胞,脑缺血后VEGF和Flk1阳性细胞增加;与模型组比较,尼莫地平、补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,增强VEGF和Flk1的表达,提高VEGF蛋白水平(P<0.05);于7、14d补阳还五汤作用强于尼莫地平(P<0.05)。结论补阳还五汤增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及Flk1的表达和提高VEGF蛋白水平,是其抗脑缺血的可能作用机制之一。     

补阳还五汤及其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后caspase表达的影响

目的研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织caspase-1、3、8表达的影响。方法采用颈内动脉线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)再灌注模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定缺血脑组织中caspase-1、3、8 mRNA的表达。结果脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组caspase-1、3、8表达较假手术组均显著增强(P<0.05)。生物碱组、苷组caspase-1表达显著低于模型组(P<0.05);补阳还五汤组、生物碱组、苷组、三七总皂苷组caspase-3与模型组比较均显著降低(P<0.05);生物碱组caspase-8表达较模型组显著降低(P<0.05)。三七总皂苷组caspase-8表达较假手术组显著增强(P<0.05)。结论补阳还五汤及其有效部位通过抑制缺血后脑组织caspase-1、3、8的表达,从而有可能对抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,保护缺血脑组织。     

The effects of Buyang Huanwu Decoction on hemorheological disorders and energy metabolism in rats with coronary heart disease

Ethnopharmacological relevance

Buyang Huanwu Decoction (BYHWD), a traditional Chinese medicine (TCM) formula, has been recognized as a clinical treatment for coronary heart disease (CHD) with qi deficiency and blood stasis syndrome. The effects of BYHWD on hemorheological disorders and energy metabolism in CHD with qi deficiency and blood stasis syndrome are still unclear.

Aim of the study

To investigate whether the ameliorative effects of BYHWD on CHD rats with qi deficiency and blood stasis syndrome are associated with the regulation of hemorheological disorders and energy metabolism.

Materials and methods

The rats were lavaged with 25.68, 12.84 and 6.42 g/kg BYHWD (g weight of mixed crude drugs/kg body weight), respectively, once a day for 21 days. The body weight, exhaustive swimming time and tongue characters were observed and recorded. The whole blood viscosity and plasma viscosity were determined by hematology analyzer. The level of fibrinogen (Fbg) in plasma was determined by using Fbg assay kit. The platelet aggregation induced by adenosine diphosphatase was measured by semi-automatic whole blood platelet analyzer. The level of blood glucose (BG) was determined by LifeScan. The activity of Na⁺-K⁺-ATPase in heart tissues was detected by spectrophotometer.

Results

BYHWD improved the exterior signs of qi deficiency and blood stasis syndrome in rats with CHD, including the body weight, exhaustive swimming time and tongue quality. The whole blood viscosity in rats treated with 25.68 g/kg BYHWD decreased at the shear rate of 10 s⁻¹ (P < 0.05) and the plasma viscosity decreased in rats treated with 25.68 and 12.84 g/kg BYHWD (P < 0.05). The plasma Fbg level and the platelet aggregation decreased in rats treated with 25.68 g/kg BYHWD (P < 0.01). The results also revealed that the BG level decreased and the Na⁺-K⁺-ATPase activity in heart tissues increased in rats treated with 25.68 and 12.84 g/kg BYHWD (P < 0.01).

Conclusion

The results suggest that the ameliorative effects of BYHWD on CHD rats with qi deficiency and blood stasis syndrome are mediated by the improvement of hemorheological disorders and energy metabolism.     

补阳还五汤对脑缺血大鼠海马组织circRNA-miRNA-mRNA转录网络的影响

目的 研究补阳还五汤对脑缺血大鼠海马组织环状RNA (circular RNA,circRNA)-微小RNA (microRNA,miRNA)-mRNA转录网络的影响,探讨其治疗脑缺血的作用机制.方法 运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q-TOF/MS)分析补阳还五汤化学成分;SD大鼠随机分为对...     

Comparative study on brain pharmacokinetics of Buyang Huanwu Decoction in normal and cerebral ischemia rats using brain microdialysis combined with LC-MS/MS

Objective: To conduct a comparative study on the brain pharmacokinetics of seven ingredients (i. e. senkyunolide A, ferulic acid, formononetin, calycosin, ononin, calycosin-O-β-D-glucopyranoside, and paeoniflorin), which were the compounds of Buyang Huanwu Decoction (BHD), in normal and cerebral ischemia rats administrated intragastrically with BHD. Methods: The samples of normal and permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO) rats were collected by using brain microdialysis technique. The concentrations of seven ingredients were determined by the HPLC-MS/MS method. After the BHD were administrated intragastrically to the rats for seven consecutive days, brain microdialysis probes were inserted into the hippocampus of rats, and then the brain microdialysates were collected at 20 min time intervals for 5 h. The separation of the seven ingredients and internal standard (IS) was carried out on an ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm) chromatographic column, using a mobile phase consisting of acetonitrile (containing 0.1% formic acid) and water (containing 0.1% formic acid) for gradient elution within 13 min. The ionization was conducted using an ESI source in positive ion mode. Multiple reaction monitoring mode was used for quantification of ingredients in BHD. Results: Linearity, accuracy, precision, matrix effect and stability of LC-MS/MS method were all satisfactory, successfully applied to compare the pharmacokinetics of the analytes between normal and model rats after intragastric administration of BHD. Compared with the normal group, the model group after the administration of the BHD showed that T1/2 of formononetin and ononin were longer, and except for calycosin-O-β-D-glucopyranoside (P < 0.01), there was no significant difference between the normal group and the model group. The Cmax of senkyunolide A and calycosin of model group were increased, while the Tmax of senkyunolide A was decreased, and except for the Tmax of PF, the differences between the two groups were statistically significant (P < 0.01). Conclusion: The LC-MS/MS method combined with microdialysis was successfully applied to the comparative study of brain pharmacokinetics of seven ingredients in BHD. After intragastric administration of BHD, there were differences in the pharmacokinetics of seven ingredients in the brain hippocampus between normal rats and model rats, probably related to the characteristics of the ingredients and the effects of cerebral ischemia on the absorption and distribution of the ingredients.     

银杏内酯A和B混合物对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用

目的研究银杏内酯A和B混合物(ginkgolide A and ginkgolide B,GKAB)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型观察GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药对脑梗死体积、脑含水量、行为学症状及组织形态学(光镜)的影响。结果GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药呈剂量依赖性减少pMCAO大鼠脑梗死体积、降低脑含水量、改善行为学症状及减轻脑组织形态改变。50、25mg/kg组与模型组相比均有显著性差异(P<0.01、0.05)。结论GKAB对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用。     

补阳还五汤对中风后遗症“气虚血瘀”大鼠模型血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型血管内皮生长因子(VEGF)的表达及补阳还五汤对其表达的影响。方法:采用机械开颅电凝法阻断大脑中动脉24h后,用随机电脉冲刺激仪每天刺激大鼠2h,连续刺激15天,复制中风后遗症"气虚血瘀"大鼠模型。治疗组在造模结束后灌服补阳还五汤水煎液,连续给药15天。通过重量法观察脑含水量的变化,并采用免疫组织化学方法和酶联免疫方法检测VEGF的表达和蛋白水平。结果:与模型组相比,补阳还五汤能降低模型大鼠脑含水量(P<0.05),VEGF阳性细胞数量明显增多(P<0.05),蛋白水平提高(P<0.05)。结论:补阳还五汤能改善中风后遗症大鼠脑水肿,并增强VEGF的表达和蛋白水平,这可能是其发挥抗脑缺血损伤作用的机制之一。     

不同剂型补阳还五汤对窒息性大鼠心肺复苏后NSE水平的干预作用

目的：采用大鼠窒息型心脏骤停模型,观察血清和脑组织匀浆液神经元特异性烯醇化酶（NSE）浓度,并用不同剂型补阳还五汤剂进行干预,研究大鼠心肺复苏（CPR）后血清和脑组织匀浆NSE浓度的影响。方法：成年雄性Sprague—Dauley（SD）大鼠32只,随机分为假手术对照组（A组）、复苏组（B组）、补阳还五汤饮片组（C组）、补阳还五汤颗粒剂组（D组）。建立窒息型大鼠心肺复苏模型,各组于自组循环恢复后24h取样;采用双抗体夹心免疫吸收分析法（ELISA）测定血清和脑组织匀浆液NSE的水平并进行比较。结果：与假手术组比较,复苏组和各药物组大鼠血清NSE显著升高;与复苏组比较,各药物组大鼠血清NSE显著下降,但各药物组间差异无统计学意义;与假手术组比较,复苏组和各药物组大鼠脑组织NSE显著升高,与复苏组比较,各药物组脑组织匀浆NSE显著下降,但各药物组间差异无统计学意义。结论：NSE可作为心肺复苏后判断脑损伤的标志。大鼠心肺复苏后血清和脑组织匀浆NSE浓度升高。补阳还五汤饮片和颗粒剂能在不同程度上改善脑损伤指标,具有一定的脑保护作用,两者之间差异无统计学意义。     

补阳还五汤及其精简方抗脑缺血损伤功效比较

目的评价补阳还五汤及其精简方对脑缺血损伤的保护作用。方法体内实验:SD大鼠按体质量随机分为假手术组、局灶性脑缺血(MCAO)模型组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方组,每组10只,观察各组大鼠体质量、脑梗死面积和脑含水量等指标的变化。体外实验:采用过氧化氢(H2O2)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)致损,建立体外氧化应激细胞模型,将PC12细胞分为正常组、空白对照组、补阳还五汤组和补阳还五汤精简方不同浓度组(0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.5 mg/mL)及模型组,MTT法考察补阳还五汤及其精简方对模型细胞的保护作用。结果体内实验表明,补阳还五汤及其精简方给药7 d后,均能恢复MCAO模型大鼠的体质量、降低脑梗死面积、减轻脑组织水肿,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),两方组间比较差异无统计学意义(P0.05);体外实验表明,补阳还五汤及其精简方与细胞作用2 h即能发挥保护作用,对H2O2所致的氧化应激损伤有明显的保护作用,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),细胞存活率升高,同一浓度两方组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论体内外实验均表明,补阳还五汤精简方在抗脑缺血损伤方面功效显著,且药效不亚于补阳还五汤,在保证药效的前提下大大节约了中药资源。