肿瘤中微卫星不稳定的发生机制及研究意义

微卫星（microsatellite，MS）是由1～6个核苷酸组成单元串联重复排列而成的DNA序列，故又称短串联重复序列（short tandem repeats，STRs）、简单重复顺序（simple sequences repeats，SSRs）。MS广泛分布于原核和真核生物基因组中，在人类基因组DNA序列中，平均约隔6kb便含有一个MS，约占人基因组的10％，多位于基因之间的间隔区域及内含子、启动子中，也有一些基因的外显子中含有MS。由于MS呈高度多态且按孟德尔共显性方式稳定遗传，自发性突变率很低（10^-5～10^-4），序列一般较短，易于扩增，所以在连锁分析、人类进化研究、个体识别、亲子鉴定、基因定位作图等方面得到了广泛的应用。     

微卫星DNA监控技术培育近交系大、小鼠的研究

目的采用微卫星DNA技术来监控大、小鼠仔代基因状况，有选择性地进行交配繁殖，以达到快速培育新的近交系动物。方法利用PCR扩增微卫星DNA技术对封闭群SD和Wistar大鼠交配以及近交系C57和BALB／c小鼠所交配繁殖的仔代鼠进行了微卫星DNA多态性分析，与母代SD大鼠（母代C57小鼠）相似系数高的与中的、中的与低的进行定向交配繁殖。结果对于大鼠F2代均为杂合多态的位点，没有纯合位点；到F10代时基因纯合位点达28个，纯合基因位点率为93．3％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为6％～20％。对于小鼠F2代多态性位点为14个，纯合基因率为53．3％；到F10代时基因纯合位点达29个，纯合基因位点率为96．7％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为3％～10％。采用皮肤移植方法验证了F10代大、小鼠为近交系。结论建立了一种新的快速培育近交系动物的方法，打破了传统近交系的培育方法，为今后研究分析动物间的血缘关系和遗传距离奠定了基础。     

微卫星DNA分析国内24个近交系小鼠遗传状况

目的利用微卫星位点对国内24种近交系小鼠进行遗传状况分析。方法用前期筛选的富含多态性和等位基因数多的30个小鼠微卫星位点,合成荧光标记引物,对近交系小鼠基因组DNA进行PCR的扩增,经STR扫描对各近交系小鼠品系进行基因分型。结果在24个近交系小鼠品系中,有16个品系在品系内在30个位点上均具有相同基因型。而在不同品系间同一位点具有多态性,可初步对不同品系进行鉴别区分。其余品系内个别动物存在多态性。结论所选位点可以参考用于近交系小鼠遗传质量检测分析,并进行初步品系检测鉴定。     

微卫星DNA监控近交系小鼠的重组近交系培育研究

目的采用微卫星DNA技术监控近交系小鼠仔代基因状况，有选择性地进行交配繁殖，以达到快速培育新的重组近交系动物。方法利用PCR扩增微卫星DNA技术对近交系C57和BALB／c小鼠所交配繁殖的仔代鼠进行了微卫星DNA多态性分析，与母代C57小鼠相似系数高的与中的进行定向交配繁殖。结果F2代小鼠多态性位点为14个，纯合基因率为53．3％；到F10代时基因纯合位点达29个，纯合基因位点率为96．7％。每代相似系数具有不断上升的趋势，上升率为3％一10％。采用皮肤移植方法验证了F10代小鼠为近交系。结论建立了一种新的快速培育重组近交系动物的方法，打破了传统近交系的培育方法，为今后研究分析动物间的血缘关系和遗传距离奠定了基础。     

人类基因组中短串联重复序列的研究及应用现状

短串联重复序列(short tandem repeat,STR)也称做微卫星(Microsatellite)DNA。广泛存在于真核生物基因组中,具有高度的多态性,作为新一代遗传标记,STR以其独特的优势保存下来,使分子生物学方面的研究发生了翻天覆地的变化。     

利用PCR技术分析微卫星DNA进行小鼠的遗传监测

建立用PCR技术检测小鼠微卫星DNA多态性的方法，并用该法对九种近交系小鼠不同染色体上的五个微卫星DNA位点进行了分析，发现微卫星DNA普遍存在，且多态性极变（67.1%)表明该法是极有希望的一种在基因水平上进行小鼠遗传监测的又一手段，将发展为我国实验动物遗传检测的一种常规方法，也是我们构建高分辨率遗传图谱进行其它实验动物及人类遗传研究的极佳途径。     

DNA分析法快速诊断21三体综合征

目的：建立适合于快速诊断21三体的DNA分析方法。方法：用PCR法扩增21号染色体上2个串联重复序列D21S1435和D21S2055基因座，聚丙烯酰胺凝胶电泳，传染分型，根据谱带的条数和浓度判断是否为21三体，根据谱带的位置，与父母的基因型比对，判断三体的亲代来源。结果：应用此法检出所有核型分析确诊和游离型21三体，能准确地判断出三体的亲代来源。结论：该法无须细胞培养，适用于含一定DNA的各种有核细胞样本，检测过程简便，快速，较传统方法省时，省力，适于大范围的21三体综合征筛查。     

微卫星DNA多态性在十种近交系小鼠遗传监测中的应用研究

目的：研究微卫星DNA多态性在近交系小鼠遗传监测中的应用。方法：选取小鼠不同染色体上的16个微卫星位点，应用PCR技术对常用的10个近交系小鼠进行了微卫星DNA多态性分析。结果：14个微卫星DNA具有稳定扩增效果，在同一品系不同个体之间表现单态性；在不同品系之间表现多态性。结论：运用所筛选的14个位点进行微卫星多态性分析，能够快速、经济地对近交系小鼠进行遗传监测。     

微卫星DNA序列在人-鼠脐血移植模型中的应用

目的　评价微卫星 DNA序列在人 -鼠脐血异种移植中的应用价值。方法　采用 PCR扩增短串联重复序列 (PCR- STR)技术及克隆形成细胞体外培养方法 ,观察移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响。结果　 1静脉输注 1～ 5× 10 7个 MNC/只鼠可使受鼠体内表达供者 DNA,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠可以重建小鼠造血功能 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关。结论STR- PCR分析可以从分子水平对移植物植入状态进行微量和准确的鉴定 ,该方法为人 -鼠脐血移植模型的鉴定提供了简便、快捷的手段     

肿瘤组织进行法医DNA分析的研究进展

肿瘤研究与法医DNA分型之间的关系可能并不明确,因为筛选法医分析用短患联重复序列(STR)一条重要的标准就是不能与已知疾病遗传标记之间有关联.然而,在一些特殊情况下肿瘤组织也可能用于法医DNA分型,例如对失踪人员或者灾难遇害者的个人识别,生前采集的活体组织可能是留下的唯一可用于DNA分析的样本.     

Prader-Willi综合征分子分型诊断方法的初步研究

【目的】探讨Prader—Willi综合征（PWS）的短串联重复序列（STR）连锁分析诊断方法，为遗传咨询提供相关信息。【方法】对一例临床疑似病例经甲基化特异性PCR（MS—PCR）确诊为PWS后．应用15号染色体特定区域的STR进行家系连锁分析，探讨其在PWS分子缺陷类型诊断方面的可行性。【结果】STR连锁分析结果显示该患者为父源缺失型PWS。【结论】STR连锁分析是一种可准确诊断PWS并明确其分子缺陷类型的好方法：国人相关区域的STR位点及其多态信息等有待进一步研究．以完善并最终建立该方法。     

人类短串联重复序列的应用研究

短串联重复序列（Short Tandem Repeat,STR）作为继限制性片段长度多态性之后的第2代遗传标记,自20世纪80年代末,90年代初得到开发利用以来,在检测方法手段及应用领域等都得到了不断的拓展,现已广泛应用于遗传制图、基因定位、遗传病的诊断、群体遗传学的研究、法医学鉴定等,是目前应用最广泛的遗传标记。本文就STR的研究概况和应用作一综述。     

一种快速提取小鼠基因组DNA的方法

本文建立一套简易、快速从小鼠肝(肾)组织中提取高分子量DNA的方法，此法产组高、比较经济．其纯度可直接应用于PCR进行小鼠遗传监测。     

利用微卫星多态性检测造血干细胞移植后嵌合体的研究

目的利用微卫星DNA的多态性,检测造血干细胞移植后嵌合体。方法用无关个体的单个核细胞混合标本在体外模拟混合嵌合体,采用聚合酶链反应(PCR)结合聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染色和凝胶成像分析技术半定量检测嵌合体。结果本方法的敏感性为1.25%～5%,不同位点敏感性不同;混合模拟标本扩增产物分析计算所得嵌合率与扩增前供体细胞比例呈显著直线相关(r=0.97～0.98,P<0.001),不同位点间相关性有所差异,以各位点的平均值进行线性分析更趋于直线相关(r=0.998)。结论STR-PCR结合凝胶电泳成像分析技术是一种敏感、准确、可靠、经济的嵌合体半定量检测方法。     

微卫星序列不稳定性与食管癌发病风险的相关性研究

目的食管癌的发生、发展与个体的遗传背景关系密切。文中旨在研究食管癌发病风险与STR基因座多态性的相关性,为深入探索食管癌的发生机制提供一种新的研究途径。方法采用PCR方法结合毛细管电泳对南京地区246例食管癌患者作为病例组(包括高分化鳞癌组52例、中分化鳞癌组138例、低分化鳞癌组56例)和对照组(156例健康个体)的静脉血样进行15个STR基因座的多态性分析,并根据2组在15个STR基因座的等位基因频率分布的差异性来推断与食管癌发生相关的易感因素或抗性因素。结果高分化鳞癌组与对照组在D19S433、D8S1179基因座的等位基因分布差异有统计学意义(P<0.05),中分化鳞癌组与对照组在15个STR基因座的等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05),低分化鳞癌组与对照组在D3S1358基因座的等位基因分布差异有统计学意义(P<0.05)。高分化鳞癌组与对照组在D19S433、D8S1179基因座的等位基因14、11之间差异有统计学意义(P<0.05),OR均>1,在D19S433、D8S1179基因座的等位基因14.2、10之间差异有统计学意义(P<0.05),OR均<1。低分化鳞癌组与对照组在D3S1358基因座的等位基因15之间差异有统计学意义(P<0.05),OR<1。结论 D8S1179、D19S433、D3S1358基因座可能与食管癌相关联。D8S1179、D19S433基因座的等位基因11、14是与食管癌发生相关的易感因素。D8S1179、D19S433、D3S1358基因座的等位基因10、14.2、15是与食管癌发生相关的抗性因素。     

天麻简单重复序列反应体系的初步研究

目的: 探讨兰科药用植物天麻(Gastrodia elata Bl.)简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)PCR循环中退火温度及反应体系中各主要成分对反应的影响.方法: 根据Genebank登录的天麻微卫星序列设计引物, 并对反应体系中各影响因素进行优化.结果: 所设计引物可扩增出预期的条带,并构建了清晰稳定的SSR指纹图谱,最终建立的25 μl反应体系为:Taq DNA酶1U、Mg2 1.2～1.6 mmol/L、引物各0.4～0.6 μmol/L、模板DNA 40～60 mg/L和dNTPs 0.20 mmol/L.结论: 首次初步确立了适合天麻SSR的最佳退火温度及反应体系中各主要成分的最佳浓度,为天麻的SSR分子标记及遗传多态性分析奠定了一定基础.     

Prader-Willi综合征分子分型诊断方法的初步研究

 【目的】探讨Prader—Willi综合征（PWS）的短串联重复序列（STR）连锁分析诊断方法，为遗传咨询提供相关信息。【方法】对一例临床疑似病例经甲基化特异性PCR（MS—PCR）确诊为PWS后．应用15号染色体特定区域的STR进行家系连锁分析，探讨其在PWS分子缺陷类型诊断方面的可行性。【结果】STR连锁分析结果显示该患者为父源缺失型PWS。【结论】STR连锁分析是一种可准确诊断PWS并明确其分子缺陷类型的好方法：国人相关区域的STR位点及其多态信息等有待进一步研究．以完善并最终建立该方法。     

(GTG)5探针产生的DNA指纹图在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的探讨用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5进行近交系小鼠的DNA指纹分析。方法用非放射性标记的寡聚核苷酸探针(GTG)5制作BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H近交系小鼠的DNA指纹图,对这四个品系的小鼠进行遗传检测,分析各品系内和品系间的遗传变异性。结果(GTG)5探针可产生具有良好多态性的DNA指纹图,平均图带数为8~12条。各品系内的DNA指纹图平均相似系数(-x)在0.96~1.00的范围内,具有相同指纹图的概率(P)均在3.1×10-1以上,极显著地高于品系间的相似系数(0.22~0.39)和相同指纹图的概率(P<1.07×10-4)。结论(GTG)5可用于制作近交系小鼠的DNA指纹图以对其进行遗传检测。     

新西兰小鼠血清抗DNA抗体水平的研究

目的::研究新西兰小鼠NZB、NZW、及其杂交子代(NZB×NZW)F1小鼠血清抗DNA抗体的水平差异.方法:酶联免疫吸附分析检测新西兰小鼠血清IgG及IgM型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度.结果:与亲代NZB及NZW相比,其F1子代小鼠IgG型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度明显增高(P＜0.01),IgM型抗dsDNA及抗ssDNA抗体滴度则比NZW增高(P＜0.01),比NZB反而降低.结论:致病性IgG型抗DNA抗体是促使新西兰小鼠狼疮发病的主要原因.     

小鼠细胞间隙连接蛋白基因的克隆和序列分析

通过提取小鼠细胞总RNA,采用RT-PCR的方法,扩增了连接蛋白Cx43的cDNA整个氨基酸编码区域,并将其克隆到了pGEM质粒中的EcoR．I位点。对序列的分析显示其有1146bp,编码382个氨基酸。与已有大鼠、牛及人相应序列比较,存在部分差异。该重组质粒工作的完成。为其表达、调控等方面的研究奠定了基础。