TEM型β内酰胺酶新亚型TEM-166编码基因的克隆表达

目的了解临床分离大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的基因型。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的全编码基因并对PCR产物进行序列分析;PCR产物克隆入pHSG398质粒并在感受态细胞大肠埃希菌JM109中进行表达,琼脂稀释法测定转化子菌株对β内酰胺类抗菌药的敏感性。结果大肠埃希菌Ayfy2926中TEM型β内酰胺酶的基因型为一种新亚型,TEM-166(GenBank注册号FJ197316);与TEM-1相比,仅有1个氨基酸差异(Arg120→Gly);与TEM-1转化子菌株相同,TEM-166转化子菌株对哌拉西林高度耐药,对第三代头孢菌素、亚胺培南敏感,β内酰胺酶抑制剂可显著降低克隆表达菌株的耐药性。结论TEM-166为TEM型β内酰胺酶的新亚型,是一种非超广谱β内酰胺酶。     

19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM型β-内酰胺酶的研究

目的 检测全国19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的TEM型ESBLs.方法 收集2004～2005年全国19家医院对头孢他啶耐药的大肠埃希菌98株和肺炎克雷伯菌109株,琼脂稀释法测定菌株MICs,PCR扩增blaTEM基因.扩增阳性菌株进行接合实验,测定接合子MICs并PCR扩增blaTEM基因.扩增阳性的菌株和接合子以等电聚焦电泳(IEF)检测其β-内酰胺酶等电点.对具有典型TEM型ESBLs表型的菌株进行测序和变性高效液相色谱(DHPLC)分析.进一步收集检出突变菌株的宿主患者及其所在病房分离的对头孢他啶不敏感的菌株,进行测序、DHPLC分析,以及ERIC-PCR和RAPD分型.结果 实验菌株中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL阳性率分别为84.7%和68.8%,blaTEM基因阳性率分别为67.3%和69.7%.仅1株大肠埃希菌P34表达TEM-12型ESBL,其他均为TEM-1(广谱β-内酰胺酶).P34宿主患者分离的21株大肠埃希菌中有18株表达TEM-12,且所有菌株均为同一克隆.该患者住院期间所在病房分离的11株对头孢他啶不敏感大肠埃希菌均表达TEM-1,与P34均不是同一克隆,但不同患者间存在菌株的水平传播.结论 TEM型ESBLs已在中国出现,但仍罕见,不是导致菌株对头孢他啶耐药的主要原因.本研究在国内首次报道了TEM-12型ESBL,该菌株虽未引起流行,但仍应引起重视.必须加强感染控制,防止TEM型ESBLs在中国的传播.     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究

目的：了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法：用SHV型β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应(PCR)检测；编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析；对产SHV型β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测。结果：58株产ESBLs大肠埃希菌中，只有3株细菌产生SHV型β内酰胺酶(5．2％)，其中1株产生SHV—11(非ESBLs)，另2株产生SHV—12(ESBLs)；3株产SHV型β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。结论：临床分离产ESBLs大肠埃希菌中，SHV型β内酰胺酶的基因型为SHV—11和SHV—12，SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型β内酰胺酶菌株间克隆传播。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的 了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型和基因型分布情况.方法 对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增分析,选部分产物测序.结果 88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs（35.2%）菌株.产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%.PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型（90.3%）,其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型.结论 我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型和基因型分布情况。方法对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增分析,选部分产物测序。结果88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs(35.2%)菌株。产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%。PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型(90.3%),其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型。结论我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β—内酰胺酶基因分型的初步研究

[目的]超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是一种新的β-内酰胺酶(BIA)，主要产生于大肠埃希菌和克雷伯菌属，能水解三代头孢菌素和单环酰酶类，并被BIA抑制剂所抑制，ESBLs的产生和播散给临床感染的治疗带来极大挑战，质粒介导的。ESBLs已发现110多种，根据亚型编码基因同源性不同分为TEM、SHV和非TEM非SHV三类，其中以TEM和SHV型最多见，多由经典TEM-1、TEM-2和SHV-1发生点突变而来，编码基因中数个位点，各地区流行的ESBLs亚型各不相同，我们对江西南昌地区2001．9—2002．5临床分离的34株表型为产。ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌分别用TEM、SHV和CTX—M型。ESBLs特定引物进行PCR扩增电泳分析。[方法]细菌质粒DNA提取与PCR扩增：采用碱裂解法提取质粒DNA行PCR扩增引物，按有关文献进行，设大肠埃希菌ATCC25922标准产酶大肠埃希菌(TEM-10、TEM-12、TEM-29和SHV-1、SHV-7、CTX—M—3)为对照，DNA电泳分析：按有关文献进行，采用1％琼脂糖凝胶电泳，电泳1～2h后，在紫外投射下观察。[结果]34株产ESBLs的菌株经质粒DNA提取，行电泳分析显示菌株均存在阳性条带，再用三种特定引物分别行质粒DNA耐药基因PCR扩增，结果TEM型引物内扩增阳性为26株，CTX—M型引物扩增阳性4株，而SHV型引物则无1例出现阳性，另4株使用三种引物行PCR扩增得未到阳性结果。文献报道，大肠埃希菌产ESBLs的亚型以TEM型为主，肺炎克雷伯菌则以。TEM、SHV型兼有，我们认为未发现SHV型可能与本次分离到的实验菌株以大肠埃希菌为主有关。有4株用三种引物扩增耐药基因未能获得阳性结果，可能还存在其他亚型的ESBLs耐药基因，也不捧除这4株是表型确证法检测中出现的假阳性株。[结论]本研究未能对扩增耐药基因作进一步基因测序研究，因此，不能确定耐药基因亚型的具体型号和深入分析。     

大肠埃菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的基因分型

目的：分析我院大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBLs)的主要基因型。方法：用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌，用Etest检测其最低抑菌浓度（MIC），分别用TEM，SHV和CTX-M通用引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增并对PCR产物进行序列分析。结果：大部分产ESBLs菌株体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感，PCR扩增结果显示TEM，SHV和CTX-M的阳性率分别为68%，39%和83%，序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM-1基因，CTX-M扩增产物均属于CTX-M-3基因，而SHV扩增产物则分别属于SHV-12，SHV-11或SHV-1基因，结论：CTX-M-3和SHV-12是我院产ESBLs菌株的主要基因型；尚未发现TEM起源ESBLs。     

惠东地区泌尿系感染病原菌中产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药特征及基因分型研究

目的分析惠东地区泌尿系统感染病原菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药性特征及基因分型,评估惠东地区大肠埃希菌的流行病学特点,明确大肠埃希菌对各种抗菌药物的敏感性,为临床合理用药提供指导。方法随机抽取2010~2014年惠东地区10所医院门诊及住院的200例泌尿系统感染患者作为研究对象,取患者尿中段标本,分离大肠埃希菌,共计450株,对分离菌株作药物敏感性试验,同时采用荧光定量法确定ESBLs菌株的基因分型。结果本组450株大肠埃希菌,PCR扩增检测结果:TEM型阳性238株,占52.9%;CTX-M型阳性173株,占38.4%;SHV型阳性5株,占1.1%;CTX-M+TEM型阳性34株,占7.6%。且SHV型及TEM型序列分析结果提示,分别为SHV-1型与TEM-1型。结论惠东地区主要面临着TEM型ESBLs菌株的威胁,且ESBLs菌株有其复杂性与多样性特征,在临床用药时需严格参照药敏试验结果合理选择抗生素,以降低菌株的耐药率,提高药物的抗菌活性。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药特征及基因分型

目的了解山东中医药大学附属医院分离的大肠埃希菌中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株的耐药特征及CTX-M型、TEM型、SHV型基因流行状况。方法采用双纸片法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M酶、TEM酶、SHV酶基因型DNA序列分析确认TEM及SHV基因亚型,K-B法进行药敏试验。结果 83株大肠埃希菌中45株ESBLs表型确证试验阳性,检出率为54.2%,PCR扩增结果显示83株大肠埃希菌中CTX-M型基因扩增阳性44株(53.0%),TEM型阳性32株(38.6%),SHV型阳性1株(1.2%),TEM型和SHV型测序结果分别为TEM-1亚型和SHV-1亚型。产ESBLs大肠埃希菌,除对亚胺培南、美罗培南未见耐药外,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦和头孢西丁耐药性较低,耐药率分别为13.3%、17.8%和31.1%,产ESBLs大肠埃希菌,除了对头孢菌素、单环β内酰胺类抗生素具有很高耐药性外,对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、环丙沙星和庆大霉素具有较高耐药性,耐药率均高于60%。结论该院产ESBLs大肠埃希菌基因型以CTX-M型为主。产ESBLs大肠埃希菌呈现多重耐药趋势。     

珠海地区妇幼保健院大肠埃希菌产ESBLs的基因型研究

目的 了解珠海地区妇幼保健院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌基因特点.方法 收集珠海地区两家妇幼保健院临床分离的316株大肠埃希菌,用法国生物梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析仪检测其表型,再用双纸片法确定,所有产酶菌株用PCR的方法扩增其TEM,CTX M和SHV基因.结果 316株大肠埃希菌检出138株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,占43.7％（138/316）;138株产ESBLs大肠埃希菌PCR检测的结果为TEM型阳性的有72株,CTX M型阳性的有59株,SHV型阳性的有7株,检出率分别为52.2％（72/138）,42.8％（59/138）和5.1％（7/138）;同时携带TEM型和CTX M型的共23株,占16.6％（23/138）.结论 珠海地区妇幼保健院的大肠埃希菌产ESBLs的阳性率高,其基因型别主要以TEM型和CTX-M型为主,同一菌株可携带有两种型别的ESBLs.     

产超广谱β-内酰胺酶表型及基因型特征的研究

目的分析大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBL）的基因型分布情况。方法用表型确证试验确定临床标本中产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别用TEM、SHV和CTX-M通用引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增,鉴定其基因型。结果 66%的菌株为TEM基因型,14%的菌株为SHV基因型,10%的菌株为CTX-M型。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBL）的基因型分布以TEM基因型为主,部分菌株为SHV、CTX-M型。同一菌株内可以产生2种不同基因型的超广谱β-内酰胺酶。     

2010~2012年安徽池州地区TEM、SHV、CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶分布特征

目的 研究池州地区分离的大肠埃希菌(E.coli)、肺炎克雷伯菌(K.pn)质粒编码的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分子流行病学特征.方法 收集2010年9月至2012年4月期间从临床标本中分离的菌株,采用法国生物梅里埃(Bio-Merieus)全自动细菌分析系统鉴定,大肠埃希菌294株,肺炎克雷伯菌178株,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定的ESBLs表型筛选和确证试验,确定该地区ESBLs的发生率,并用质粒提取试剂盒提取ESBLs阳性菌株的质粒DNA,通过特异性引物,聚合酶链反应(PCR)及核酸电泳分析上述菌株所携带的耐药基因并进行基因分型.结果 该地区17.3%的大肠埃希菌和19.7%肺炎克雷伯菌产ESBLs,其中大肠埃希菌耐药质粒编码TEM型、SHV型和CTX-M型基因的百分率分别为49.0%、37.2%、39.2%,肺炎克雷伯菌分别为48.6%、25.7%、42.8%.结论 该地区产ESBLs菌株已经达到一定的比例,并且出现有些菌株同时携带两种或两种以上应的耐药基因,临床上严格控制,合理使用抗菌药物已经刻不容缓.     

大肠埃希菌中AmpC酶和质粒介导的ampC基因的发生和检测

目的从临床分离的大肠埃希菌(E.coli)中检测AmpC酶及质粒介导的ampC基因。方法选择从临床分离的可疑产ESBLs和AmpC 2种酶的40株大肠埃希菌,用NCCLS推荐的微量肉汤稀释法检测耐药表型,三维酶试验检测AmpC酶和ES-BLs,PCR扩增质粒型ampC基因和ESBLs基因,肉汤交配法检测质粒型ampC基因的接合传递性。结果在三维试验中,40株菌中有39株产β-内酰胺酶,其中21株产ESBLs和AmpC 2种酶,15株单产ESBLs,3株单产AmpC酶。在PCR扩增试验中,8株扩增出质粒介导的ampC基因,7株为C IT型,1株为DHA型;34株扩增出b laTEM、b laCTX-M、b laOXA 3型ESBLs基因中的至少1个型,未扩增出b laSHV。8株携带质粒型ampC基因的菌株,共筛选出9株接合子。结论AmpC酶已在我院的大肠埃希菌中出现,由质粒编码的AmpC酶可在细菌间传递。     

社区及院内感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药及耐消毒剂基因分析

目的了解本地区社区获得性和医院内感染大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率，分析和研究其耐药基因和耐消毒剂基因的携带情况。方法收集从临床标本分离的大肠埃希菌95株，经ESBLs确证试验将其中38株阳性菌株分为医院与社区获得性感染2组，用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因TEM、SHV、CTX-M-1以及耐消毒剂基因qacE△1-sull。结果社区获得性大肠埃希菌ESBLs的检出率为30％，医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率为55％。17株社区获得性感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％，CTX-M-1的检出率为35％，SHV的检出率为6％，耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为53％。21株医院内感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％，CTX-M-1的检出率为43％，SHV的检出率为14％，耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为62％。结论本地区医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率明显高于社区获得性感染大肠埃希菌ESBLs的检出率。社区获得性和医院内感染ESBLs大肠埃希菌耐药基因均以TEM型为主，耐消毒剂基因的携带率2组没有组间差异。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌儿童分离株的耐药性和基因型检测

目的 研究我院临床分离的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLs基因型与耐药表型的关系.方法 收集我院2007年1-3月临床分离的92株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用K-B纸片法作药敏试验,酶抑制剂增强法表型确证,应用PCR、产物测序,确定ESBLs基因型.结果 我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检出率分别为50.6%和57.3%;产ESBLs菌株对亚胺培南100%敏感,产ESBLs大肠埃希菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟和环丙沙星的耐药率分别为88.2%、14.7%、5.9%和29.0%,产ESBLs肺炎克雷伯菌则分别为75.6%、35.6%、28.9%和5.2%.92株产ESBLs菌株中,共检出7种β内酰胺酶基因型,TEM型酶的检出率为70.7%,均为TEM-1广谱酶, CTX型、SHV型ESBLs的检出率分别为66.3%和44.6%,其中CTX-M-14阳性率为48.1%;SHV基因型都在肺炎克雷伯菌中检出.结论 我院临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药情况严重,且其耐药表型也不尽相同.CTX-M型是我院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

大肠埃希菌质粒介导头孢菌素酶基因型研究

目的 调查大肠埃希菌中质粒头孢菌素酶(AmpC酶)的基因型分布以及耐药性.方法 收集对头孢西丁耐药的24株大肠埃希菌,根据头孢菌素酶和超广谱内酰胺酶(ESBLs)各种已知基因序列设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定AmpC酶基因以及ESBLs的基因型分布;接合试验证实质粒ampC基因有无可转移性.结果 24株耐头孢西丁的大肠埃希菌中13株产CMY型类似AmpC酶,1株产DHA-1型AmpC酶;PCR检测发现ESBLs TEM型15株,CTX-M型2株,SHV型1株.结论 耐头孢西丁的大肠埃希菌中发现CMY型类似AmpC酶和DHA-1型AmpC酶.药敏结果对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感.     

尿液分离产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及耐药机制分析

目的探究尿液分离产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学特征及其耐药机制。方法收集南京大学医学院附属鼓楼医院2016年1—12月尿液分离大肠埃希菌308株,通过药敏试验筛选产ESBLs及磷霉素耐药菌株;PCR扩增ESBLs基因及磷霉素相关耐药基因;采用多位点序列分型(MLST)对菌株进行遗传相关性分析,采用接合试验验证耐药基因的转移性。结果 308株尿液分离大肠埃希菌中产ESBLs菌株168株(54.54%);产ESBLs菌株中检出磷霉素耐药菌株18株(10.71%,18/168)。其中,ESBLs耐药基因携带率分别为bla_(SHV) 88.9%(16/18)、bla_(CTX-M) 77.8%(14/18)、bla_(TEM-208) 5.6%(1/18);bla_(TEM-1b) 61.1%(11/18);fosA3基因的携带率为83.3%(15/18)。MLST分型主要为ST131(27.78%)。接合试验表明,fosA3阳性菌株的耐药性均具有可转移性。结论产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素的耐药率仍处于较低水平。fosA3基因是造成磷霉素耐药的主要机制,该基因位于可接合的质粒上,易于水平传播,需要高度重视。     

尿液分离产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及耐药机制研究

目的 探究尿液分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及其耐药机制。方法 收集南京大学医学院附属鼓楼医院2016年1-12月尿液分离大肠埃希菌308株，通过药敏试验筛选产ESBLs及磷霉素耐药菌株；PCR扩增ESBLs基因及磷霉素相关耐药基因；采用多序列位点分型（MLST）对菌株进行遗传相关性分析，采用接合试验验证耐药基因的转移性。结果 308株尿液分离大肠埃希菌中产ESBLs的菌株168株（54.54％）；产ESBLs菌株中检出磷霉素耐药菌株18株（10.71%）。其中，ESBLs耐药基因携带率为blaSHV 88.9%（16/18）、blaCTX-M 77.8%（14/18）、blaTEM-208，5.6%（1/18）；blaTEM-1b 61.1%（11/18）；fosA3基因的携带率为83.3％（15株）。 MLST分型主要为ST131（27.78%），接合试验表明，fosA3阳性菌株的耐药性均具有可转移性。结论 产ESBLs的大肠埃希菌对磷霉素的耐药率仍处于较低的水平，fosA3基因是这些菌株磷霉素耐药的主要机制，该基因位于可接合的质粒上，易于水平传播，需要高度重视。 关键词：大肠埃希菌； 产超光谱β内酰胺酶； 磷霉素； 耐药机制     

产ESBLs的大肠埃希菌耐药性的转移与基因型的研究

目的 证实临床分离的部分产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌可以把耐药基因转移给敏感的受体菌.方法 用PCR及DNA测序方法检测16株产ESBLs的大肠埃希菌的耐药基因类型,通过接合试验了解耐药基因在细菌间的传递,分别对供体菌和转移接合子进行抗生素药敏试验.结果 从16株产ESBLs的大肠埃希菌中共检出TEM,SHV,OXA-1群和CXT-M-1群4种β-内酰胺酶基因,检出率分别为100%(16/16),93.75%(15/16),12.5%(2/16)和37.5%(6/16).接合试验中得到了4株转移接合子,均携带了blaCTX-M-1基因,经测序分析与供体菌同源性为100%.转移接合子与供体菌具有相似的药敏试验结果.结论 临床分离的产ESBLs大肠埃希菌可以把耐药基因传递给敏感的受体菌,有效控制细菌耐药基因的转移对临床具有重要意义.     

多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究

目的确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌E3株所产β-内酰胺酶编码基因序列及亚型.方法肺炎克雷伯菌E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌,聚合酶链反应(PCR)扩增其β-内酰胺酶编码基因片段,克隆入pGEM-Teasy载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型,重组细菌表型鉴定.结果E3株同时产SHV和TEM型2种β-内酰胺酶,其中SHV基因片段含812个核苷酸,编码产物有266个氨基酸,应为SHV-11型β-内酰胺酶;TEM基因片段含973个核苷酸,编码产物有288个氨基酸,应为TEM-1型β-内酰胺酶.含TEM-1和SHV-11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性.结论E3株肺炎克雷伯菌同时产生SHV-11和TEM-1 2种ESBLs,其可影响ESBLs的表型检测结果.