小檗碱对脑出血大鼠脑水肿和血肿周围脑组织中HIF-1α、VEGF表达水平的影响

目的探究小檗碱对脑出血SD大鼠脑水肿及血肿周围脑组织中低氧诱导分子-1α(HIF-1α)与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法将104只健康成年SD大鼠随机分为假手术组、脑出血组和小檗碱治疗组。采用注射未凝自体动脉血的方法建立脑出血模型,小檗碱治疗组大鼠于造模后腹腔注射小檗碱溶液40 mg/kg,假手术组、脑出血组大鼠腹腔注射等体积的0.9%氯化钠溶液。采用免疫组织化学法检测脑出血后不同时间点血肿周围脑组织中HIF-1α和VEGF的表达情况,并应用干湿比重法测定脑组织的含水量。结果 1脑出血组及小檗碱治疗组大鼠的HIF-1α、VEGF阳性表达率均显著高于假手术组(P<0.05),小檗碱治疗组大鼠的HIF-1α、VEGF阳性表达率均明显低于脑出血组(P<0.05)。2脑出血后,HIF-1α和VEGF阳性表达率随时间延长进行性增加,并于术后72小时达到高峰;同一时间点,小檗碱治疗组大鼠HIF-1α、VEGF的表达明显低于脑出血组(P<0.05);HIF-1α表达与VEGF表达呈正相关(r=0.564,P<0.01)。3脑组织含水量呈进行性增加且于术后72小时达到高峰;同一时间点,小檗碱治疗组大鼠的脑组织含水量明显低于脑出血组(P<0.05)。结论小檗碱可以显著减少脑出血后脑组织的含水量,降低血肿周围组织中HIF-1α和VEGF的表达,促进脑损伤的修复。     

七氟烷对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌的保护作用及其机制

目的 探讨七氟烷对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠心肌的保护作用及其机制.方法 健康雄性SD大鼠45只,随机分为A、B、C、D、E组,每组9只大鼠.A组大鼠在心肌MIRI模型制备过程中,分离出左冠状动脉前降支(LAD)后,在其下方穿线但不结扎,观察160 min;B组在建立大鼠MIRI模型后,结扎LAD 40 min,随后松开结扎线再灌注120 min;C组大鼠在B组操作的基础上,再灌注开始时吸入体积分数0.024的七氟烷15 min,然后停止吸入七氟烷继续再灌注105 min;D组于MIRI模型制备前1 h先腹腔注射HIF2α阻滞剂PT238510 mg/kg,其后操作同C组;E组于大鼠LAD结扎前15 min经颈内静脉注射AREG蛋白50μg,其余操作同D组.比较各组大鼠缺血前、缺血15 min、再灌注2 h末的心率和血压的变化,并比较各组大鼠心梗质量占左心室质量的比值、Bax/Bcl-2比值的变化.结果 时间、分组、时间与分组交互作用对大鼠平均动脉压有明显影响(F时间=101.41,F组间=10.23,F交互=6.93,P<0.05);除A组外,其余各组大鼠不同时间点平均动脉压比较差异有显著性(F=16.07～34.08,P<0.05).再灌注2 h末,与B组相比,C、E组平均动脉压明显上升(F=13.62,P<0.05),而D组与B组比较差异无显著性(P>0.05).C、D组与B组以及D组与E组大鼠心梗质量占左心室质量比值比较差异有显著性(t=14.24～20.01,P<0.05).A～E组大鼠心肌组织Bax/Bcl-2比值比较差异有显著性(F=27.92,P<0.05).A、C组与B组以及C、E组与D组大鼠心肌组织Bax/Bcl-2比值比较差异有显著性(t=5.04～6.79,P<0.05).结论 七氟烷后处理对大鼠心肌具有保护作用,且该保护作用可以通过HIF2α-AREG通路来实现.     

局部注射超声微泡促进BMP 2在大鼠体内骨骼肌表达的研究

目的分析局部注射超声微泡对BMP 2在大鼠体内骨骼肌中表达的促进作用。方法将30只大鼠平均分为1组(空白对照)、2组(直接注射质粒)、3组(注射质粒目的基因+微泡),并向三组大鼠股四头肌中注射造影剂、生理盐水和BNM 2-EGPF,每组再分为A、B组,于7 d、14 d分别处死大鼠,检测BMP 2的表达状况。结果 7 d后,3组中A组大鼠的BMP 2阳性表达率高于1组中A组大鼠和2组中A组大鼠(P0.05),14 d后,3组中B组大鼠的BMP 2阳性表达率高于1组中B组大鼠和2组中B组大鼠(P0.05)。结论局部注射超声微泡能够提高BMP 2在大鼠骨骼肌中的表达含量,可为临床治疗骨折疾病提供新思路。     

矽肺模型大鼠肺组织及血清中瓜氨酸化组蛋白H3等的表达及其意义

目的 探讨矽肺模型大鼠肺组织及血清中瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)等的表达及其意义.方法雄性Wistar-Kyoto大鼠30只,随机分为矽肺组和对照组,每组15只大鼠.矽肺组大鼠气管内一次性注入50 g/L的SiO2混悬液1 mL建立矽肺大鼠模型,对照组大鼠气管内一次性注入等体积的生理盐水.两组大鼠均常规饲养,第28...     

卡铂缓释微球对大鼠皮下移植瘤模型中瘤组织BCL-2和BAX蛋白表达的影响

目的通过检测瘤组织BCL-2和BAX蛋白的变化,初步探讨卡铂缓释微球在大鼠皮下移植瘤模型中诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法将90只成年SD大鼠建立皮下移植瘤模型并将其随机分为空白对照组、生理盐水组和卡铂缓释微球组,每组各30只。按照给药时间分为0、3、7、14、21天5个观察时间点,在每一时间点取三组大鼠瘤组织进行TUNEL染色检测细胞凋亡以及免疫组织化学染色检测BCL-2和BAX蛋白的含量。结果开始给药时三组大鼠肿瘤细胞凋亡指数比较无显著差异(P>0.05);给药后3、7、14、21天,与空白对照组及生理盐水组相比,卡铂缓释微球组大鼠肿瘤细凋亡指数明显升高(P<0.05)。开始给药时三组大鼠瘤组织BCL-2和BAX蛋白阳性率比较无显著差异(P>0.05);给药后3、7、14、21天,与空白对照组及生理盐水组相比,卡铂缓释微球组大鼠BCL-2蛋白阳性率明显下降,BAX蛋白阳性率明显升高(P<0.05)。结论卡铂缓释微球靶向给药可以增加肿瘤组织内BAX蛋白的表达,减少BCL-2蛋白的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。     

OPN基因抑制对宫颈癌Hela细胞生长侵袭影响与VEGF和MMP-2关系

目的研究骨桥蛋白OPN基因抑制对宫颈癌细胞VEGF和MMP-2合成以及生长侵袭能力的影响。方法通过已构建好的OPN抑制的宫颈癌Hela细胞模型,以转染重组质粒(OPN基因抑制组OPN-1和OPN-2)与两个对照组转染空质粒cp DNA3.1(+)组和不转染质粒(Hela细胞组)。细胞水平上,用MTT法和Boyden小室肿瘤侵袭实检测各组Hela细胞增殖、侵袭能力的情况;在分子水平上,用ELISA、RT-PCR和Wester-bloting法测定各组细胞VEGF和MMP-2的表达。结果 OPN基因抑制组与对照组比,OPN基因抑制组增殖能力明显降低、凋亡率增加,VEGF和MMP-2表达显著减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论宫颈癌Hela细胞OPN基因抑制,可降低VEGF和MMP-2合成,抑制宫颈癌细胞增殖,提示OPN基因可能通过调节VEGF与MMP-2的途径控制宫颈癌细胞的侵袭和增殖。     

神经肽Y干预对海人酸致痫大鼠海马组织神经肽Y表达的影响

目的探究神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)干预对海人酸致痫大鼠海马组织NPY表达的影响。方法将36只雄性Wistar大鼠平均分为生理盐水组(NS组)、海人酸致痫大鼠组(KA组)、NPY干预组(NPY组),每组各12只。KA组和NPY组大鼠大脑海马CA3区注射海人酸,制作大鼠慢性癫痫模型;同时NPY组大鼠造模成功后行基因转染手术,采用立体定位仪向大鼠脑室注射10μl(滴度为5×10~(11)μg/ml)重组腺相关病毒载体神经肽Y(recombinant adeno-associated virus vector neurpeptide Y,r AAV2/1-NPY-EGFP),向NS组大鼠海马CA3区注射等量的生理盐水。各组大鼠分别于基因转染2周和4周后,取海马组织保存于液氮中,每组每个时间点选取6只大鼠,采用免疫组织化学法检测各组大鼠NPY的表达情况。采用双盲法统计结果,应用半定量积分方法将每个时间点的大鼠CA3区NPY的阳性细胞率和阳性细胞着色强度进行分级记分,评估海马组织NPY表达阳性强度。结果基因转染2周后,KA组和NPY组大鼠海马组织NPY阳性细胞率、阳性细胞着色强度及免疫组织化学评分(immunohistochemical score,IHS)均显著高于NS组(P<0.05),但KA组与NPY组上述指标比较均无显著差异(P>0.05)。基因转染4周后,KA组大鼠海马组织NPY阳性细胞率、阳性细胞着色强度及IHS评分均显著高于NPY组和NS组,但NPY组和NS组上述指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论癫痫发作过程中内源性NPY表达水平明显上调,NPY参与了抗癫痫的过程,外源性NPY对癫痫的发作具有抑制作用。     

血管内皮生长因子及细胞间黏附分子-1在糖尿病大鼠内耳的表达及其临床意义

目的探讨糖尿病大鼠内耳中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达水平及其临床意义。方法将48只Wistar大鼠随机分为对照组和糖尿病组,每组各24只。对照组大鼠普通饲养;糖尿病组大鼠高脂、高糖饲养,并腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg,当空腹血糖>16.65 mmol/L时显示造模成功,分别于0、4、8、12周时取出实验大鼠耳蜗进行免疫组化观察。结果 0、4、8、12周,糖尿病组大鼠血管壁厚度均显著大于对照组(P<0.05),两组大鼠VEGF和ICAM-1表达水平差异均具有显著性(P<0.05);VEGF和ICAM-1表达水平呈正相关(r=0.931,P<0.01)。结论糖尿病大鼠内耳血管壁增厚;VEGF和ICAM-1在糖尿病大鼠内耳的表达增强,两者表达水平呈正相关。     

超声微泡破裂法促进骨形态发生蛋白-2在大鼠骨髓间充质干细胞表达的研究

目的探讨超声微泡破裂法对基因重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)质粒GV 147-rhBMP 2-GFP在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的转染、表达的促进作用。方法选取8周龄Sprague-Dawley雄性大鼠分离培养BMSCs,传至第3代时胞悬液分为3组:A组(单纯细胞组),B组(质粒组,仅加质粒GV 147-rhBMP 2-GFP)及C组(超声+微泡+质粒组);转染后48 h用倒置荧光显微镜观察质粒转染情况及细胞生长状况,RT-PCR检测细胞转染后的目的基因表达。对数据进行分析。结果 48 h后可在倒置荧光显微镜下,观察到质粒组及超声+微泡+质粒组部分细胞胞浆内发出绿色荧光,其中单纯细胞组未见绿色荧光,超声+微泡+质粒组的绿色荧光表达量高于B组;RT-PCR检测显示C组BMP-2基因m RNA相对表达量较B组高。结论超声微泡破裂法能增加外源性rhBMP-2基因在大鼠骨髓间充质干细胞转染率和表达水平,有望为骨折的基因治疗提供一种新型方法。     

RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌细胞Eca-109抑制效应的体内体外表达分析

目的探讨分析RNA干扰缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对食管鳞癌细胞Eca-109抑制效应的体外及体内的表达情况。方法选取研究用Eca-109细胞,设计RNA干扰片断h-EGFR构建重组质粒pGensil-1-EGFR转染目的基因片段。测定EGFR蛋白/mRNA表达,挑选转染成功的基因修饰细胞株分别植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,且随机分为未转染组与实验组。运用免疫组化技术检测各组裸鼠HIF-1α蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组HIF-1αmRNA表达,最后测量裸鼠移植瘤的重量及体积。结果 Eca-109中HIF-1α蛋白伴随氯化钴浓度的升高而升高。并且HIF-1α蛋白水平在缺氧后12小时升高,24小时后降低,且持续减少。转染后EGFR mRNA的阳性表达率为26.55%、9.48%、4.60%,依次降低,P<0.01。其中EGFR siRNA水平最低。转染后EGFR mRNA阳性表达率为24.30%、34.11%、34.05%,与未转染组(78.27%)相比显著降低(P<0.01)。经RTPCR分析,实验组裸鼠EIF-1αmRNA表达较少,与未转染组相比差异无显著性(P>0.05)。实验组裸鼠HIF-1α蛋白表达的灰度值显著低于未转染组(P<0.01)。接种1周后裸鼠均出现肿瘤,实验组裸鼠移植瘤体积为(0.20±0.13)cm3,重量为(0.21±0.05)g,均显著少于未转染组。结论 HIF-1α蛋白的表达与氯化钴浓度及缺氧有关,RNA干扰缺氧诱导的HIF-1α只发生在蛋白水平,而非基因水平,RNA干扰技术可以成功抑制食管鳞癌细胞HIF-1α基因,阻碍肿瘤细胞生长、增殖,降低肿瘤恶性程度,值得临床应用与推广。