太子参药材的快速分子鉴定

为建立一种简便快捷的太子参分子鉴定方法,对太子参药材及其混伪品的r DNA-ITS片段进行比对分析,找出特异性片段,设计太子参鉴别引物,并优选扩增条件,扩增产物经100×SYBR Green I染色后紫外光下观察。结果显示,PCR扩增反应液(包括DNA Taq聚合酶预混液5.5μL,Tzs-2F,Tzs-2R各10 pmol,DNA模板20~80 ng,双重灭菌蒸馏水加至25μL)经95℃预变性1 min,95℃变性5 s,56℃退火延伸15 s,30个循环,72℃后延伸30 s后,在扩增产物中加入1μL100×SYBR Green I混匀后于紫外光下呈绿色荧光的为太子参,混伪品无绿色荧光出现。40 min内即可完成DNA提取、扩增等整个鉴定过程。该方法能特异性扩增太子参DNA,紫外光下肉眼观察即可鉴定药材的真伪,且操作简捷、结果准确、利于推广,可为快速鉴定中药材的真伪提供参考。     

基于特异性聚合酶链式反应方法鉴别九味羌活丸中水稻源性成分掺伪

目的 通过DNA条形码技术和建立特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,有效鉴别九味羌活丸中的水稻源性成分掺伪问题.方法 通过建立特异性PCR技术对九味羌活丸中掺伪的水稻源性成分样品的GOS9序列进行扩增,并对PCR反应体系与程序、方法学和系统适用性进行考察,从而对掺伪水稻源性成分进行鉴别.结果 该引物体系只针对水稻源性成...     

聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法对太白贝母鉴别检验的适用性探讨

目的：探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）对于太白贝母的适用性。方法：采集太白贝母野生及栽培品,收集市场上太白贝母伪品,利用性状、PCR-RFLP鉴别法、DNA序列分析三种方法分析太白贝母与常见伪品的区别。结果：从性状上看,太白贝母栽培品与伪品往往非常相似,较难辨别;通过PCR-RFLP方法可以正确、客观的鉴别太白贝母与常见伪品,基于ITS2 的DNA条形码方法进一步验证了PCR-RFLP法的准确性。市场上太白贝母的伪品多为伊犁贝母。结论：PCR-RFLP鉴别法可准确鉴别太白贝母与其伪品;市场上太白贝母伪品较多,应加强监管。     

位点特异性PCR鉴别桃仁中掺入苦杏仁的方法分析

目的:由于中药材传统真伪鉴别方法的局限性,本研究拟通过位点特异性聚合酶链式反应(PCR)建立一种能够快速鉴别桃仁中掺有苦杏仁的方法.方法:通过比对苦杏仁与桃仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)基因序列,寻找单核苷酸多态性(SNP)位点并设计特异性鉴别引物.利用不同的苦杏仁和桃仁样品进行PCR扩增,对影响PCR反应体系...     

基于ITS2序列及二级结构鉴别维吾尔药材黑加仑及混伪品

目的 建立了基于核基因内部转录间隔区(ITS2)序列及二级结构鉴别维吾尔药材黑加仑及其混伪品(黑加仑葡萄和异果小檗)的方法。方法 对维吾尔药材黑加仑及其混伪品的ITS2序列进行聚合酶链式反应(PCR)扩增并双向测序,Codon Code Aligner软件对测序峰图进行序列拼接,用MEGA 6.0软件对拼接后的序列进行多重比对。计算种内、种间遗传距离,构建邻接法(Neighbor-Joining, N-J)系统聚类树,预测其ITS2二级结构。结果 经PCR扩增测序后,黑加仑药材ITS2序列长度均为238 bp, GC含量为57.14%～57.98%,A₁为主体单倍型;黑加仑葡萄药材序列长度均为226 bp, GC含量为47.79%,仅为一个单倍型;异果小檗药材序列长度均为223 bp, GC含量为53.36%,仅为一个单倍型。并且维吾尔药材黑加仑的种内遗传距离明显小于种间遗传距离。二级结构表明黑加仑及混伪品其螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋角度均有明显差异。结论 ITS2序列可以作为鉴定维吾尔药材黑加仑及其混伪品的DNA条形码,为维吾尔药材黑加仑的用药安全提供...     

基于特异性PCR的梅花鹿茸和马鹿茸区分

目的:开发及验证梅花鹿和马鹿茸的特异性聚合酶链式反应(PCR)筛选方法。方法:采集梅花鹿茸、马鹿茸、鹿茸混淆品、香港市场流通的鹿类产品、非鹿科动物、植物和真菌类样品。对鹿类线粒体基因组进行排序,设计及筛选特异性引物,采用特异性PCR对样品进行区分,并进行条件优化和方法学验证。结果:共收集77份样品,对87份线粒体基因组DNA排序并设计9个特异性引物组合。经验证后,CNIP-f/CNIP-r和CELA-f/CELA-r分别选作梅花鹿和马鹿的特异性引物组合,通过PCR可获得223 bp的梅花鹿和248 bp的马鹿特异性条带,作为区分梅花鹿茸和马鹿茸的依据。结论:该方法能作为中药鉴别的补充方案,用于质量控制中涉及动物制品的种属,进一步完善鹿茸饮片鉴别体系。     

宽体金线蛭的特异性PCR分子鉴定

[目的] 实验旨在通过寻找宽体金线蛭单核苷酸多态性（SNP）位点,设计宽体金线蛭的特异性鉴别引物,建立宽体金线蛭特异性聚合酶链式反应（PCR）检测方法,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别。[方法] 通过比对宽体金线蛭与其常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）序列,寻找宽体金线蛭COI基因序列内SNP位点,设计特异性鉴别引物。[结果] 进行PCR后仅宽体金线蛭能够扩增得到149 bp的条带,混伪品不能扩增出明显目的条带。向扩增产物中加入SYBR Green I核酸染料染色,宽体金线蛭样品在紫外灯下显黄绿色荧光,混伪品不显荧光。[结论] 该方法能够准确快速鉴别宽体金线蛭与其常见混伪品,为中药材市场上宽体金线蛭的快速鉴别提供技术支持。     

鹿茸、鹿角的位点特异性PCR鉴别

目的:建立一种快速、高效、简便的鹿茸、鹿角位点特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:通过比较梅花鹿、马鹿及其混伪品的COI,Cytb基因序列差异,根据Cytb片段上的3个SNP (single nucleotide polymorphism)变异位点设计出一对鹿茸的特异性鉴别引物LR-238上游和LR-238下游,并对影响PCR结果的主要因素退火温度,PCR循环次数,模板DNA浓度,Taq酶用量和及影响重复性的Taq酶种类和PCR仪型号等进行方法学考察和优化。结果:进行方法学考察确定最优鉴别条件的基础上,当PCR退火温度为56℃,循环次数为35次的条件下,鹿茸、鹿角正品均能扩增出约250 bp片段,其他9种混伪品麋鹿、白唇鹿、水鹿、坡鹿、黇鹿、骡鹿、驯鹿、驼鹿、狍及阴性对照无条带。不同来源的药用的马鹿亚种东北马鹿、塔河马鹿、天山马鹿、阿拉善马鹿、阿勒泰马鹿、新西兰马鹿,梅花鹿亚种东北梅花鹿、华南梅花鹿样品使用建立的位点特异性PCR鉴别方法均产生约250 bp特异性鉴别条带。结论:该文设计的鉴别引物具有高度的专属性,所建立的位点特异性PCR鉴别方法可用于鹿茸、鹿角的准确鉴别。     

基于trnL-trnF序列分析的何首乌PCR-RFLP分子鉴别

目的:建立何首乌(Fallopia multiflora)DNA分子鉴别技术。方法:对何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF(trnL基因和trnF基因间隔区)序列进行比较分析。结果:何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF差异率为2.1%～22%,何首乌种内各居群间trnL-trnF差异率为0%～1.5%。基于何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF序列的差异,找出一个位于trnL5'-trnL3'间区的何首乌特征性Xba I酶切位点(T↓CTAGA),用Xba I酶对不同采集地的何首乌样品trnL-trnF序列扩增产物酶切后均得到含约804～819 bp和256 bp两个片段的PCR-RFLP图谱,而其混淆品trnL-trnF序列扩增产物因不能被Xba I酶切,图谱呈单一条带。结论:利用建立的PCR-RFLP方法可以很好地区分何首乌及其混淆品植物。     

基于DSS标记特异性PCR鉴别冷背药材木槿皮基原植物及其混伪品

目的 冷背药材作为宝贵的药材资源,但因其本身的特殊性和复杂性,导致其鉴别成为中药鉴定中的难题,因此亟需建立冷背药材的鉴别方法。该研究利用DNA特征序列（DSS）标记,建立一种冷背药材木槿皮基原植物木槿及其混伪品的特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴别方法。方法 基于叶绿体基因组序列分析获得木槿皮的候选DSS标记,使用DNA测序手段对DSS标记进行验证,基于得到的可靠DSS标记设计木槿皮基原植物特异性鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行耐受性和适用性的考察。结果 将扩增产物的测序结果与DSS比对后得到了1个可用于鉴定木槿的DSS标记,揭示了木槿正混伪品的区别特征,根据DSS标记设计出一对木槿正品特异性鉴别引物,使用该引物进行PCR扩增和凝胶电泳后木槿均出现约270 bp的单一明亮条带,而其4种混伪品均无此条带。结论 该研究得到的1个DSS标记可用于木槿的真伪鉴定,基于此DSS标记设计的特异性鉴别引物可准确、简便的鉴别木槿皮的基原植物及其混伪品,为木槿正伪品的分子鉴定提供了新的方法与思路。     

藏红花的药理研究进展

目的 :总结藏红花的化学成分、药用价值的研究概况。方法 :文献学方法。结果 :藏红花自古便是活血化瘀的良药 ;最新研究发现藏红花还具有广谱抗癌活性 ,对白血病、卵巢癌、结肠癌、横纹肌肉瘤、乳头肉瘤、扁平细胞瘤和软组织肉瘤等都具有较强的抑制作用 ,而且毒性小。另外 ,藏红花还具有治疗冠心病 ,抑制肝炎病毒 ,增强免疫力等药效。结论 :藏红花具有很高的药用价值 ,大量生产藏红花将具有广阔的应用前景。     

西红花全球生态适宜区预测及生态特征

目的:预测西红花在全球的生态适宜区并分析其生态特征。方法:利用西红花124个样本分布点和30个环境因子数据,采用最大熵(MaxEnt)模型预测西红花在全球的生态适宜区,运用受试者工作特征曲线(ROC)进行模型评价并分析其生态特征。结果:西红花全球适生区主要分布于北半球地中海沿岸的欧洲国家,遍布于欧洲南部、北部及东部,部分分布于亚洲西部、南部及东南部。模型评估结果显示,训练集和测试集的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.985和0.967,表明该模型的预测效果良好。结论:最冷季度平均降水量、最冷季度平均温度、昼夜温差与年温差比值、温度变化方差、土壤阳离子交换能力、最暖季度平均降水量和最冷月份最低温是影响西红花地理分布的关键环境因素,研究结果可为西红花的引种选址和资源保护提供参考。     

西红花与红花的抗血栓作用研究

目的 比较西红花Crocus sativus水提物与红花Carthamus tinctorius水提物及其主要活性成分的抗血栓作用.方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、西红花酸(50 mg/kg)组、羟基红花黄色素A(50 mg/kg)组、西红花水提物(200 mg/kg)组、红花水提物(700 mg/kg)组和阿司...     

西红花中类胡萝卜素生物合成途径研究进展

以西红花苷为代表的脱辅基类胡萝卜素类化合物是传统中药西红花Crocus sativus的主要药效成分,具有广泛的抗氧化、抗炎、抗粥样动脉硬化、抗癌、抗抑郁等药理活性。西红花中类胡萝卜素的生物合成途径包括以甲羟戊酸起始合成牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸至玉米黄质的传统上游路径,以及裂解玉米黄质特异性合成西红花酸及西红花苷的下游途径。对近年来西红花中类胡萝卜素代谢途径相关关键酶基因的研究现状进行综述,为进一步解析合成西红花苷等类胡萝卜素衍生物的下游途径指明方向,更为后续采用代谢工程的手段提高西红花苷等药效物质产量提供理论依据。     

基于网络药理学的藏药西红花“治一切肝病”的药理作用分析＊

目的 在藏医药理论体系中，西红花为“治一切肝病”的药，本文通过网络药理学的研究方法，探讨藏药西红花防治肝病的临床应用范围及作用机制。 方法 根据西红花成分的专属性、生物利用度及相关文献报道筛选目标化合物。利用PharmMaper数据库对目标化合物开展靶点预测分析，建立“成分-靶点”网络，开展网络拓扑分析；并进行PPI分析、KEGG通路富集等生物功能注释；通过OMIM、Disgenet数据库获取肝病相关基因，建立“成分-靶点-疾病”网络。 结果 筛选出19个西红花的目标化合物，获得潜在靶点80个；经生物功能注释分析发现与肝癌、肝纤维化、乙型肝炎、非酒精性肝病等七种肝病相关度较高的通路有PI3K-Akt、MAPK等12条。推测西红花防治肝病的可能关键靶点为SRC和EGFR。 结论 初步明确西红花在防治肝病的临床应用范围及可能的作用机制，为丰富完善藏医药理论开发肝病新药提供了科学支撑。     

西红花特征图谱研究及真伪鉴别

目的建立一种西红花Crocus sativus特征图谱分析方法,并用以鉴别西红花中掺假栀子Gardenia jasminoides。方法采用HPLC法,色谱柱为ZorBax XDB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.5%醋酸水溶液-0.5%醋酸甲醇溶液梯度洗脱,检测波长为254 nm,分析时间为45 min,体积流量为1.0 mL/min。结果通过多批样品的检测,共标出8个特征峰,建立的分析方法有较好的重复性,能够显著区分西红花和栀子。结论方法稳定、可靠、简便,为西红花质量控制和真伪鉴别提供参考。     

西红花的化学成分和药理活性研究进展

西红花主产于伊朗、希腊、意大利、西班牙、印度、中国、日本等国家,可用于食品染料和香料。现代药理学研究表明,西红花具有强身健体的功效。目前国内外已经从西红花中分离得到了100多种化合物,主要有萜类、黄酮类、蒽醌类等,并具有治疗精神类疾病、神经退行性疾病、学习记忆障碍、心血管疾病、动脉粥样硬化、高脂血症、糖尿病、高血压、胃溃疡、脂肪肝以及抗癫痫、抗惊厥等多种活性。系统总结了西红花的化学成分和药理活性,为西红花的深入开发提供参考。     

Carb/NH2-SPE-GC-MS法快速监测飞龙掌血中4大类农药残留

 目的 建立一种Carb/NH₂-SPE-GC-MS方法快速监测飞龙掌血根皮中4大类40种农药残留。方法 采用Carb/NH₂固相萃取小柱同时处理4类农药样品,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行40种农药残留痕量测定。结果 Carb/NH₂-SPE-GC-MS法与《中国药典》收录的农药残留前处理方法比较,都不具有统计学差异(P>0.05),在处理飞龙掌血多种农药残留时更为简便可行。4大类40种农药在10～200 ng·mL^-1内线性关系良好(r>0.998 2),检测限LODs均在2.5 ng·mL^-1左右,40种农药的精密度、稳定性和加样回收率基本满足方法学考察要求。结论 本实验建立的Carb/NH₂-SPE-GC-MS方法操作简单、快速、灵敏度高,能够对飞龙掌血药材中多组分农药残留进行准确的定性和定量分析。     

重组幽门螺杆菌菌毛蛋白FLaA IgY乙基纤维素微囊对胃炎小鼠的治疗作用

 目的 研究重组幽门螺杆菌菌毛蛋白FlaA IgY-硫糖铝乙基纤维素微囊对幽门螺杆旋菌(Helicobacter pylori)感染小鼠的治疗和清除效果。方法 采用有机溶剂蒸发技术制备经硫糖铝处理后的IgY乙基纤维素微囊。模拟胃部环境,检测在不同pH的正常胃蛋白酶浓度(0.02 mg·mL^-1)和异常胃蛋白酶浓度(0.04 mg·mL^-1)的条件下不同浓度硫糖铝对rFlaA IgY的保护效果。将rFlaA IgY-硫糖铝微囊按0.8、1.6、3.2及6.4 mg·g^-1·d^-14种不同剂量灌服实验组小鼠,通过检测治疗前后血清中抗幽门螺杆旋菌抗体水平以及胃黏膜的尿素酶水平,评价不同浓度rFlaA IgY对小鼠胃部幽门螺杆旋菌的治疗和清除效果。结果 结果表明,40%的硫糖铝处理过的IgY在pH 3.0条件下的模拟胃液中能维持77.87%~82.14%的活性达8 h,而在pH 2.0的模拟胃液条件中处理8 h能保持57.76%~63.28%,在pH 1.0模拟胃液中处理8 h能保持21.52%~22.79%。制备的rFlaA IgY-硫糖铝乙基纤维素微囊的包封率为83.79%,5 h体外释放率为95.92%。各组小鼠经rFlaA IgY微囊治疗后血清中幽门螺杆旋菌抗体水平与阳性对照组相比均显著下降(P<0.001)。当使用剂量为0.8 mg·g^-1·d^-1时,对幽门螺杆旋菌的清除率为50%,当剂量为1.6 mg·g^-1·d^-1时,幽门螺杆旋菌清除率为70%,当剂量为3.2 mg·g^-1·d^-1时,H. pylori清除率为80%,当剂量达到6.4 mg·g^-1·d^-1时,H. pylori的清除率可达100%。结论 40%的硫糖铝对rFlaA IgY具有很好的保护作用,可以作为rFlaA IgY的保护剂。 rFlaA IgY-硫糖铝乙基纤维素微囊具有良好的缓释效果,经口服对小鼠胃部幽门螺杆旋菌感染具有良好的治疗和清除效果。     

西红花及其活性成分对肝脏疾病作用及其机制的研究进展

西红花Crocus sativus是一种具有多种生理功能的传统药食两用物质,已有大量研究报道其可以预防和治疗精神类疾病、神经退行性疾病、心血管疾病以及高脂血症等疾病。研究结果表明,西红花主要通过其抗炎、抗氧化、抗凋亡和调节脂质代谢等药理作用对各种肝脏疾病产生治疗效果。对西红花及其活性成分治疗肝脏疾病的药理作用及其作用机制进行综述,为西红花在临床上发挥更广泛的治疗作用及其抗肝脏疾病作用的深入研究提供科学合理的参考。