RNA干扰技术特异性抑制骨肉瘤survivin的表达

目的:体外转录合成survivin siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U2-OS中抑制survivin的表达情况.方法:体外转录合成survivin序列特异性双链RNA(dsRNA),转染U2-OS细胞株中,用RT-PCR和Western blot法检测转染前后survivin基因的mRNA和蛋白的表达,MTF法检测细胞增殖,观察U2-OS细胞生物学特性的改变.结果:转染特异性siRNA的细胞其survivin mRNA及蛋白表达均下调,干涉后细胞的增殖受到抑制.结论:体外转录合成特异性survivin siRNA能有效抑制骨肉瘤细胞株U2-OS中survivin的表达,抑制细胞的增殖,RNA干扰技术为骨肉瘤的治疗提供了一种新策略.     

应用RNAi技术沉默survivin基因对肾癌786-O细胞的影响

目的 运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特异性阻断肾癌786-O细胞系中survivin基凶的表达,并研究survivin沉默后对786-O细胞的影响.方法 用真核转录载体pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFPmiR构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体法转染肾癌786-O细胞,通过RT-PCR、免疫组化分别检测survivin基因的mRNA和蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长的影响.结果 干扰载体有效地阻断了786-O细胞中survivin基因在mRNA与蛋白水平上的表达,细胞活性受到抑制.结论 RNAi技术沉默survivin基因可以下调肾癌786-O细胞survivin基因的表达,抑制细胞的活性.     

Survivin在肾透明细胞癌786-O细胞株中表达的实验研究

目的:检测抗凋亡基因survivin在肾透明细胞癌786-O细胞株中的表达并探讨其临床意义.方法:运用MTT(四唑盐比色)法检测细胞生长状态并绘制生长曲线,运用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)法和免疫组化法检测786-O细胞株中survivinmRNA及survivin蛋白的表达情况.结果:检测出786-O细胞株中有survivin mRNA的表达,survivin蛋白的表达亦呈阳性,而正常肾细胞无阳性表达.结论:survivin mRNA及survivin蛋白在肾透明细胞癌中均有明显的表达,利用这一表达特异性,为以survivin基因为靶点的肾癌基因治疗研究提供了实验依据.     

RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用

目的 探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786 0增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响.方法 构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组.应用RT-PCR技术检测786-0细胞p38 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达.CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-0细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低.与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3～5 d时的增殖率均降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1) μmol/mL vs (5.4±0.2)μmol/mL,P＜0.05].siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞.转染24 h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降(P＜0.01).结论 通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础.     

YY1基因在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞功能的影响

目的探讨YY1基因在肾癌组织中表达及小干扰RNA(siRNA)对人肾癌786-O细胞增殖和侵袭的影响。方法以Real-Time PCR检测转录因子YY1在20对肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将siRNA转染入人肾癌786-O细胞中,Real-Time PCR和Western印迹法检测YY1转染效率;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力,Real-Time PCR检测基质金属蛋白酶MMP9及钙黏附蛋白E-cadherin mRNA表达水平。结果与癌旁组织相比,20对癌组织中YY1 mRNA表达量显著增高(P<0.01)。转染人肾癌786-O后,siRNA-YY1组细胞YY1mRNA的表达抑制率达66%(P<0.01),蛋白表达水平也明显低于siRNA-NC组。与NC组相比,siRNA-YY1组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期,细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01)。此外,与NC组相比,MMP9及E-cadherin mRNA水平有显著差异(P<0.01)。结论 YY1在肾癌组织中高表达,靶向沉默YY1可以在体外显著抑制肿瘤细胞的生长和侵袭能力。YY1特异性siRNA作为一种治疗肿瘤的新途径值得进一步研究。     

腺病毒重组人白细胞介素24对肾癌细胞株786-O 细胞生长和凋亡的影响

目的探讨腺病毒重组人白细胞介素24(IL-24)对肾癌细胞株786-O细胞的生长和凋亡的影响。方法将培养的肾癌细胞株786-O细胞随机分为空白对照组、阴性对照组(转染腺病毒重组人IL-24对照组)及实验组(转染腺病毒重组人IL-24组)。取对数生长期肾癌细胞株786-O,构建腺病毒重组人IL-24及对照并转染至肾癌细胞株786-O实验组细胞及阴性对照组细胞。使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测肾癌细胞株786-O生长能力;采用流式细胞术检测肾癌细胞株786-O凋亡情况;应用Western Blot检测肾癌细胞株786-O中MMP-9蛋白的表达水平。结果实验组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞表面磷脂酰丝氨酸表达水平高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞中MMP-9蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力、细胞膜表面磷脂酰丝氨酸表达水平、MMP-9蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染腺病毒重组人IL-24可抑制肾癌细胞株786-O细胞的生长并诱导细胞凋亡,腺病毒重组人IL-24可能通过下调MMP-9诱导肾癌细胞株786-O细胞的凋亡。     

Livin反义寡核苷酸诱导人肾癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对人肾癌细胞株786.O Livin mRNA及蛋白表达的抑制作用以及对细胞凋亡的影响.方法 设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体辅助转染至786-O细胞内.采用RT-PCR检测转染后Livin mRNA的变化,细胞免疫化学、激光扫描共聚焦显微镜观察Livin蛋白在细胞内的分布、转染后表达的变化及细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,激酶法测定Caspase3活性的变化.结果 转染Livin ASODN后,RT-PCR显示786-O细胞表达Livin mRNA减少(P＜0.01),激光扫描共聚焦显微镜下见细胞表达Livin蛋白减少、细胞形态发生变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),Caspase3活性明显增加(P＜0.01).结论 Livin ASODN能明显下调786-O细胞Livin基因的表达,诱导细胞凋亡.抑制Caspase3活性是Livin抑制细胞凋亡的途径之一.     

HER-2 siRNA对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:观察表皮生长因子受体2(HER-2)siRNA转染SKOV-3细胞抑制HER-2表达后对卵巢癌细胞耐药性的影响.方法:体外转录合成HER-2序列特异性双链RNA(dsRNA),转染SKOV-3细胞株中,RT-PCR方法检测转染前后HER-2基因的mRNA的表达,MTT法检测顺铂对转染前后卵巢癌细胞的生长抑制率.结果:HER-2siRNA转染72 h后,对SKOV-3细胞HER-2 mRNA表达明显抑制.在不同浓度顺铂(0.05～50μg/ml)的作用下,转染HER-2 siRNA与转染非特异性siRNA、空白对照组相比,差异有十分显著性意义(P＜0.01).细胞对顺铂的敏感性约提高10倍.结论:体外转录合成的siRNA能有效抑制SKOV-3细胞中HER-2的表达,提高细胞对顺铂的敏感性,RNA干扰技术为卵巢癌的治疗提供了一种新策略.     

siRNA干扰BIRC6对肾癌786-O细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究杆状病毒IAP重复序列蛋白6（BIRC6）在肾癌组织中的表达,并探讨BIRC6沉默对786-O细胞凋亡和自噬的影响。方法 收集2016年2月~2018年12月梅州市人民医院肾癌手术切除标本20例,通过免疫组化检测BIRC6蛋白在肾癌组织中的表达水平。将肾癌786-O细胞分为两组,对照siRNA组和BIRC6 siRNA组;通过lipofectamine 2000将BIRC6小干扰RNA（BIRC6-siRNA）及其对照siRNA（con-siRNA）转染到肾癌786-O细胞,Western blot检测转染后BIRC6蛋白表达水平,CCK8和流式细胞术分别检测BIRC6-siRNA和5-FU人肾癌786-O细胞活力和凋亡的影响,Western blot检测细胞自噬相关蛋白Beclin和LC3A/B的表达水平。结果 免疫组化结果显示BIRC6蛋白在肾癌组织中的表达显着高于正常肾组织,转染BIRC6-siRNA后786-O细胞的BIRC6蛋白表达水平显著降低。12.5、25、50、100和200 μg/mL的5-FU诱导786-O细胞后,BIRC6-siRNA组细胞增殖抑制率显著高于con-siRNA组,差异具有统计学意义（P<0.01）;流式检测结果显示,BIRC6-siRNA组肾癌786-O细胞凋亡率显著高于con-siRNA组,差异具有统计学意义（P<0.01）;BIRC6-siRNA组肾癌786-O细胞Beclin和LC3A/B蛋白表达显著低于con-siRNA组。结论 siRNA干扰BIRC6能够抑制肾癌786-O细胞自噬,促进5-FU诱导的细胞凋亡,促进肾癌786-O细胞对5-FU的敏感性。     

RNA干扰抑制细胞外基质COL6A1基因表达对肾癌786-0细胞增殖和侵袭的影响

研究小干扰RNA(siRNA)抑制COL6A1基因表达对肾癌786-0细胞增殖和侵袭能力的影响。设计合成靶向COL6A1基因的siRNA,瞬时转染肾癌细胞株786-0,利用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测RNA干扰后COL6A1基因沉默效果,在RNA干扰后1、2、3天应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;应用transwell小室侵袭实验检测肾癌细胞侵袭能力。靶向COL6A1的siRNA成功抑制肾癌细胞株786-0中COL6A1信使RNA(mRNA)及蛋白表达(P<0.05),经MTT测定,肾癌细胞生长受到抑制(P<0.05);transwell小室侵袭实验表明,COL6A1被抑制后,肾癌穿膜细胞数明显减少,侵袭力降低(P<0.05)。应用siRNA技术可有效地抑制COL6A1基因的表达,抑制786-0细胞的体外增殖和侵袭。