含尿嘧啶DNA糖基化酶的聚合酶链反应检测血清HBV DNA

为探讨含ｄＵＴＰ／尿嘧啶ＤＮＡ糖基化酶（ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）ＰＣＲ试剂（抗污染ＰＣＲ试剂，ＰＣＲ－ｄＵＴＰ／ＵＤＧ）抗ＰＣＲ产物污染的能力及其在临床检测中的应用，采用该试剂检测２０４份病毒性肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与普通ＰＣＲ试剂比较。结果显示：抗污染ＰＣＲ试剂有较强的抗污染能力，至少可阻止１００ｎｇ的ＰＣＲ产物的污染。该试剂与地戈辛素探针分子杂交所测结果的符合率（８９．３２％）高于普通ＰＣＲ与分子杂交所测的符合率（８１．４５％）。表明抗污染ＰＣＲ试剂的应用有利于防止ＰＣＲ产物的污染，提高ＰＣＲ的准确性和特异性。     

聚合酶链反应检测血清HBV—DNA

评价聚合酶链反应法检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义及其优越 性。方法：用ＰＣＲ法测定８１例血清ＨＢＶ标志物阳性的ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与固相放射免疫测定法作比较。     

用尿嘧啶—DNA—糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染

聚合酶链反应灵敏度极高，痕量的ＰＣＲ产物能污染新的ＰＣＲ体系导致假阳性结果。我们通过在所有的ＰＣＲ扩增中渗入ｄＵＴＰ使ＰＣＲ产物含“ｄＵ”，在以后的ＰＣＲ扩增前用尿嘧啶－ＤＮＡ糖基化酶处理，然后加热去除ＵＤＧ活性防止了产物污染。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV—DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传梁科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原－抗体更加灵敏、可靠。     

巢式聚合酶链反应检测血清HBV DNA对乙肝治疗的临床意义

【摘要】 目的 研究使用巢式聚合酶链反应检测血清中HBV DNA对治疗乙肝的临床意义。方法 筛选146例乙型肝炎病毒（HBV）感染者,先采用ELISA检测HBVM作为参照,再分别采用FQ PCR和nPCR检测参与研究的HBV病人HBV DNA,并判断HBV的复制和活动情况。另外选择49名健康者作为对照组。结果 PCR模板1和PCR模板4中的HBV DNA阳性率都很高,PCR模板1中ELISA检测的阳性率与套式聚合酶链反应（nPCR）和实时荧光定量PCR（FQ PCR）检测HBV DNA的阳性率差异显著（P＜005）。PCR模板2中ELISA检测阳性率与nPCR和FQ PCR检测HBV基因的阳性率,无明显差异（P＞005）。nPCR法和FQ PCR法的结果对比可见,nPCR的阳性率显著高于FQ PCR,具有明显差异（P＜005）。nPCR的阳性率要比ELISA的阳性率高很多,具有明显差异（P＜005）。ELISA阳性率比对照组高很多,具有明显差异（P＜005）。结论 采用nPCR检测技术诊断HBV疾病的检出率高、特异性强,对HBV疾病的诊断具有很高的实用价值,可在临床推广应用。     

用顺序特异引物聚合酶链反应技术行HLA—A抗原DNA分型

作者采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立了汉族人群ＨＬＡ－Ａ,位点ＤＮＡ分型方法。研究采用ＰＣＲ－ＳＳＰ对３４５例肾移植供受者样本ＤＮＡ行ＨＬＡ－Ａ位点基因分型均获得成功,共检出Ａ位点等位基因总数６３５个,其中纯合子５５例,杂合子２９０例,可准确分辨ＨＬＡ－Ａ位点等基因２０个,无假阳性和假阴性出现,重复率１００％,总耗时５小时分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证     

Sybr greenⅠ实时定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的探讨

目的　选择以SybrgreenⅠ作为荧光指示剂做实时PCR (SYBR法 ) ,检测乙肝病毒 (hepatitisBvirus ,HBV )DNA ,并与国产TaqMan荧光实时定量PCR方法比较。 方法　对 189例临床血清标本DNA分别进行常规PCR和SybrgreenⅠ荧光PCR检测。 结果　使用国产TaqMan荧光实时定量PCR方法测得 10 6例HBVDNA阳性 ,67例阴性 ,16例判断困难。使用SybrgreenⅠ实时定量PCR方法测得 117例HBVDNA阳性 ,72例阴性 ,使用SybrgreenⅠ实时定量PCR方法测得HBVDNA阳性熔解曲线Tm值为 83 .67± 0 .95℃。其中 10 6例阳性和 67例阴性与使用国产TaqMan荧光实时定量PCR方法所测阴阳性一致 ,二者定量的回归系数为 0 .941。使用国产TaqMan荧光实时定量PCR方法判断困难的 16例中 ,11例SybrgreenⅠ实时定量PCR方法判断为阳性 ,但定量拷贝数很低 ,其中最大值为 1.68× 10 3 拷贝/ml,最小值为 4.3 7× 10 2 拷贝 /ml ,平均值为 83 9拷贝 /ml ;另 5例判断为阴性。结论　使用SybrgreenⅠ荧光素进行实时定量PCR检测HBVDNA的敏感度要高于国产TaqMan的荧光实时定量PCR方法 ,能够适合目前临床上及时有效准确检测标本的要求。     

聚合酶链反应和原位杂交检测成人肾炎肾组织HBV DNA

目的 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与成人肾小球肾炎（肾炎）之间的联系,及研究ＨＢＶ对肾脏的致病作用。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和原位杂交（ＩＳＨ）技术检测３９例血清ＨＢＶ标志物阳性的成人肾有活检组织ＨＢＶ ＤＮＡ的存在状态。结果 用ＰＣＲ法测定肾活检组织抽提物ＨＢＶ ＤＮＡ１７／３９例阳性（４３．６％）,其中５例ＰＣＲ阳性者再且地高辛素标记的ＨＢＶ ＤＮＡ探针原位杂交,测定肾活检石腊包埋切     

聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒核酸的实验研究

以国产DNA聚合酶和试剂建立聚合酶链反应,检测乙型肝炎病毒DNA,如以溴乙啶荧光显带可检出1fg HBV DNA,继以分子杂交则至少可检出0.1fg,灵敏性与国外报告相近。两组引物可分别获得208bp和415bp的扩增分子,与按序列计算的结果一致,并可与HBV DNA探针杂交,表明反应的特异性。试用于检测20例慢性活动性肝炎病人血清,检出HBV DNA17例,而斑点杂交仅可检出6例。     

荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的价值

目的分析使用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测结核分支杆菌的应用价值。方法收集首都医科大学附属北京同仁医院临床各科室各类结核病或疑似结核病患者检测标本178例,使用FQ-PCR法进行结核分枝杆菌脱氧核糖核酸检测,标本同时进行抗酸染色显微镜下观察。结果 FQ-PCR法和抗酸染色涂片法对不同来源标本检测结核分枝杆菌的结果存在较好的一致性(Kappa=0.615,P<0.01)。使用FQ-PCR法检测结核分枝杆菌的阳性检出率为12.9%,抗酸染色涂片法的阳性检出率为6.2%,二者比较差别有统计学意义(χ2=4.682,P<0.05)。结论 FQ-PCR法检测标本中的结核分枝杆菌的灵敏度高于传统的抗酸染色涂片法,可作为结核病病原学诊断的优先方法。     

巢式PCR方法检测长春地区单纯疱疹病毒感染状况

目的:探讨巢式PCR方法检测单纯疱疹病毒（HSV）的临床应用价值,同时对HSV-1、HSV-2在生殖器疱疹（GH）、梅毒(syphilis)、念珠菌病candidiasis)、非淋菌性尿道炎（NGU）、淋病(gonorrhea)、尖锐湿疣(CA)6种性病患者（STD）及其性伴和健康人群中的感染情况及分布特点进行对比研究。 方法:应用HSV-1糖蛋白D（gpD）基因序列和HSV-2糖 蛋白G（gpG）基因序列为靶基因,设计了普通PCR和巢氏PCR方法,检测6种STD患者及其性伴和健康人群中HSV的感染情况。结果:6种STD患者共1223人,HSV-1阳性率15.70％（192/1223）,HSV-2阳性率28.29％（346/1223）,HSV总阳性率43.41％（538/1223）; 检测性伴153例,HSV-1阳性率12.42％(19/153),HSV-2阳性率21.57％(33/153) ,HSV总阳性率34.0％（52/153）;检测健康人群263例,HSV-1阳性率3.42％（9/263）,HSV-2阳性率6.08％ （16/263）,HSV总阳性率9.51％（25/263）。 结论 :STD患者中HSV-2感染率高于HSV-1感染率; STD患者及其性伴中HSV-1、HSV-2感染率均高于健康人群。      

选择性聚合酶链反应检测 2.2.15 细胞内HBV cccDNA

0 引言1986年美国Sells等(The Mount Sinal Medical Center)将HB V基因转染到人肝癌细胞(HepG2)中,获得了能表达HBV标志的细胞株2.2.15细胞,并以此作为模型筛选抗HBV的药物,进行基因结构及功能的研究. 然而HBV在2.2.15细胞中复制方式与自然感染的肝细胞有何不同,有无HBV 的共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA, cccDNA)存在, 各学者说法不一[1.2],我们应用选择性PCR技术,检测了2.2.15细胞内的HBV cccD NA,现简报如下.     

聚合酶链反应检测175例早期钩端螺旋体病患者...

We have developed a sensitive assay for leptospira, using the polymerase chain reaction (PCR). On the basis of the published nucleotides sequence of 23S rRNA gene from Leptospira interrogans serovar canicola strain Moulton, primers were chosen to produce an amplified fragment of 123 bp. Primer A: 5'GAT CTA ATT CGC TGT AGC AGG3' and primer B: 5'ACT TTC ACC CTC TAT GGT CGG3' Eight different svs. of Leptospira interrogans could all be detected by PCR, but the DNAs from L. biflexa. Leptonema bacteria, virus and human could not produce the specific amplified fragment. The assay detected approximately 10 fg of purified leptospiral DNA and 1 microliter serum of experimental animal. Positive results were obtained from simulated positive samples containing a single organism leptospiral DNA. The diagnostic test (proved by "gold standards": Clinical diagnosis; blood culture and MAT) showed that the sensitivity was 92.00%; the specificity 94.35%; the accuracy 92.54%; the positive predictive value 98.17%; the negative predictive value 78.13%; the positive likelihood ratio 16.25; and the negative likelihood ratio 0.0848. The diagnosis of early leptospirosis by using PCR may become a significant addition to diagnostic means.