去甲斑蝥素抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长及其机制研究

目的：探讨去甲斑蝥素抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长的作用及其分子机制,为开发抗骨肉瘤新药提供实验基础。方法：以不同浓度的去甲斑蝥素处理骨肉瘤U2OS细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,Caspase-3、8、9活性检测试剂盒检测其活性。结果：5、10、20、40、80μg/mL的去甲斑蝥素明显抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并呈剂量依赖关系,48h的IC50值为26.15μg/mL;20μg/mL去甲斑蝥素作用12、24、48h诱导U2OS细胞的凋亡率分别为：7.8%、26.3%和43.9%,并出现明显的凋亡特征性形态变化;去甲斑蝥素处理U2OS细胞48h后Caspase-3、8、9的活性明显增强。结论：去甲斑蝥素可通过激活Caspase级联活化而抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并诱导凋亡。     

去甲斑蝥素对体外两种肿瘤细胞生长的影响

目的 :观察去甲斑蝥素对体外人肝癌细胞SMMC - 772 1及人胃癌细胞SGC - 790 1生长的影响。方法 :以人肝癌细胞SMMC - 772 1及人胃癌细胞SGC - 790 1为材料 ,用MTT法检测去甲斑蝥素对体外人肝癌细胞SMMC- 772 1及人胃癌细胞SGC - 790 1的抑制作用 ,并比较两者作用差异。结果 :去甲斑蝥素对体外人肝癌细胞SMMC -772 1及人胃癌细胞SGC - 790 1的生长均有影响 ,其中对肝癌细胞的作用更佳。结论 :去甲斑蝥素对体外人肝癌细胞SMMC - 772 1及人胃癌细胞SGC - 790 1的生长有不同程度的抑制作用     

去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长及侵袭的影响

目的探讨去甲斑螯素(NCTD)对人胆囊癌 GBC-SD 细胞系生长、侵袭的影响。方法体外培养人胆囊癌 GBC-SD 细胞;实验分 NCTD 组(6个浓度梯度组,每组6孔)和对照组(n=6),分别用四唑盐比色法(MTT)、Matrigel 实验及过河实验、FCM 检测 NCTD 对 GBC-SD 细胞的杀伤抑制率、侵袭运动能力、细胞周期和凋亡率。结果 NCTD 对 GBC-SD 细胞生长有明显抑制作用,半数抑制浓度(IC_(50))为56.18μg/ml;在5μg/ml时即抑制 GBC-SD 细胞的体外侵袭和迁移运动能力;随浓度升高,NCTD 抑制作用增强,GBC-SD 过膜细胞减少、过膜细胞死亡增多,过河时间明显延长(P<0.01),呈剂量-时间效应关系。FCM 分析显示 NCTD 组 G_2+M 期细胞明显增多,S 期细胞减少,细胞凋亡率上升。结论 NCTD 不仅能抑制人胆囊癌 GBC-SD 细胞生长,亦可在低浓度下抑制其体外侵袭能力;机理可能与抑制 CBC-SD 细胞增殖,干扰生长周期,抑制 DNA 合成,诱导细胞凋亡和直接抑制 GBC-SD 细胞迁移运动有关。     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨去甲斑蝥素对HepG2细胞凋亡的影响。方法：采用形态学观察和流式细胞分析技术。结果：去甲斑蝥素作用HepG2细胞后,凋亡小体形成,凋亡率增加。结论：去甲斑蝥素诱导HepG2细胞凋亡。     

斑蝥素及去甲斑蝥素对小鼠毒性靶器官的影响

目的:比较斑蝥素及去甲斑蝥素对小鼠的毒性作用及两者靶器官损伤程度的差异。方法:取Balb/c小鼠,采用概率单位法计算获得斑蝥素与去甲斑蝥素的半数致死量(median lethal dose,LD_(50))。以1/2 LD_(50)作为毒性研究给药剂量,连续灌胃给药2周。2周后取血检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),尿素氮(BUN)水平,取肝、肾、小肠和膀胱进行病理组织学观察比较。结果:斑蝥素和去甲斑蝥素LD_(50)分别为2.045,20.966 mg·kg~(-1)。分别以1/2 LD_(50)给药剂量给小鼠灌胃2周后,血清学检测结果表明,与正常组比较,斑蝥素组无显著差异;去甲斑蝥素可导致ALT,BUN水平显著性升高。肝、肾病理结果表明,与正常组比较,斑蝥素组肝肾轻微病变,去甲斑蝥素组可见肝脏炎性细胞浸润,肝细胞空泡变样,肾小球和小管弥漫性损伤。小肠病理结果表明,斑蝥素组导致肠道淋巴结肿大并分叶,去甲斑蝥素组症状较轻。膀胱病理表明,斑蝥素组发现血管炎症、膀胱移行上皮或黏膜层炎症反应,去甲斑蝥素组轻微移行上皮炎症反应。结论:临床前动物模型结果表明,去甲斑蝥素的毒性主要表现在肝脏和肾脏,斑蝥素的毒性作用主要表现为小肠和膀胱。     

去甲斑蝥素诱导肿瘤细胞凋亡机制及临床应用前景的研究

去甲斑蝥素在肿瘤尤其是晚期肿瘤的治疗中有着非常好的应用前景.其机制可能与干扰肿瘤细胞生长周期,抑制DNA的合成代谢,影响细胞的有丝分裂、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭转移有关.其制剂已经越来越多地应用于临床实践中,并日益受到重视.本文综述近年来国内外NCTD抗肿瘤的作用机制及临床应用情况.     

去甲斑蝥素对小鼠免疫系统的影响

目的:观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对小鼠免疫器官及免疫细胞功能的影响。方法:小鼠注射 NCTD 5天,测量脾重;跟踪骨髓有核细胞数量变化;MTT 法测定脾 T 淋巴细胞转化率;脾 Tc 淋巴细胞毒性试验。结果:NCTD 1mg/kg 每日注射1次,对小鼠免疫器官及淋巴细胞功能无显著影响。每日注射2次,骨髓细胞数有一过性降低,但在停药后能较快恢复。结论:去甲斑蝥素对机体免疫系统及功能无明显损害。     

去甲斑蝥素通过调节Hedgehog信号通路对卵巢癌耐药细胞株肿瘤干细胞活性的影响

目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对两种不同的卵巢癌耐药细胞株中肿瘤干细胞活性的影响,探讨NCTD抑制卵巢癌耐药细胞株细胞增殖的可能机制.方法:采用低浓度加量持续诱导法构建卵巢癌顺铂和紫杉醇耐药细胞株,分别命名为A2780Cis顺铂耐药株和SKOV3Pac紫杉醇耐药株.采用CCK-8活性实验检测NCTD对卵巢癌耐药细胞株...     

去甲斑蝥素诱导K562细胞凋亡的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:用流式细胞仪测定NCTD对K562细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:NCTD对K562细胞有较强的增殖抑制作用;在作用24小时后达到凋亡高峰;24小时各浓度NCTD作用后,G_1期细胞百分数均减少,S期与G_2+M期细胞百分数均增加,呈现G_2+M期阻滞现象。结论:NCTD可诱导K562细胞凋亡,抑制瘤细胞分裂增殖,且有明显的时间和剂量效应。     

去甲斑蝥素和康莱特对肝癌病人肝动脉化疗栓塞术后肝功能影响的观察

目的：观察去甲斑蝥素和康莱特对原发性肝癌行经皮动脉化疗栓塞术(TACE)后肝功能的保护作用。方法：对去甲斑蝥素和康莱特并用与否的59例患者的肝功能进行析因设计的双因素方差分析。结果：使用去甲斑蝥素与不使用l周后总胆红素、直接胆红素和白蛋白数值不同，不使用胆红素较高，而白蛋白则较低。康莱特则对TACE后胆红素和白蛋白无明显影响。结论：使用去甲斑蝥素可改善TACE术后患者肝功能情况，而康莱特则无此效果。这也提示在使用中药相关的药品时，应当结合中医的辨证原则而应用。     

派特灵对HeLa细胞增殖迁移能力及PI3K/Akt信号转导通路的影响

目的:探索派特灵对HeLa细胞增殖迁移侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的影响。方法:①将HeLa细胞分为空白组,派特灵组(3.906,2.604,1.953,1.563,1.302,1.116,0.977 g·L~(-1)),加药干预24 h,镜下观察细胞形态变化,并采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,计算派特灵对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。②将HeLa细胞分为空白组,顺铂组(0.01 g·L~(-1)),派特灵高、中、低质量浓度组(2.974,1.487,0.991 g·~(-1)),采用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法检测派特灵对HeLa细胞增殖能力的影响,使用划痕实验检测细胞的迁移情况,采用侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力的变化。③增设抑制剂LY294002组(0.006 g·L~(-1)),采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测派特灵对PI3K,Akt,重组人B细胞淋巴瘤因子-xl(Bcl-xl),B细胞淋巴瘤/白血病相关d蛋白(Bad)表达的影响。结果:①与空白组比较,镜下观察显示,用药组细胞数目减少,细胞形态不完整;MTT比色法显示,派特灵对HeLa细胞增殖有显著抑制作用(P0.01),计算得出派特灵对HeLa细胞的IC_(50)为2.974 g·L~(-1)。②CCK-8法显示,与空白组比较,培养24,36,48 h,所有用药组均对HeLa细胞增殖有抑制作用(P0.01);与顺铂组比较,各时间点派特灵中、低质量浓度组对HeLa细胞增殖抑制作用减弱(P0.01);划痕实验显示,与空白组比较,各加药组均能抑制HeLa细胞的迁移能力(P0.01),派特灵高质量浓度组细胞迁移率低于顺铂组(P0.05);Transwell实验显示,与空白组比较,各加药组HeLa细胞穿膜数减少(P0.01),与顺铂组比较,派特灵中、低质量浓度组细胞穿膜数升高(P0.01)。③Western blot显示,与空白组比较,派特灵高、中、低剂量及LY294002组的PI3K,Bcl-xl,Akt表达量下降(P0.05,P0.01),Bad表达量增高(P0.01);与派特灵高质量浓度组比较,派特灵低质量浓度组的PI3K,Akt,Bcl-xl蛋白表达升高(P0.01),Bad表达降低(P0.01)。结论:派特灵能抑制HeLa细胞增殖迁移侵袭能力,符合一定量效和时效关系,可能与其影响PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。     

南蛇藤提取物对人胃癌SGC-7901细胞蛋白组学的影响

目的:探讨南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)在人胃癌细胞中的可能作用靶点。方法:采用细胞活力实验检测COE对细胞生长增殖的抑制作用,计算COE的半数抑制浓度(50%concentration of inhibition,IC50)。蛋白质组学技术寻找COE作用前后的差异表达蛋白;并通过蛋白免疫印迹法(Western blot)对部分蛋白进行验证。结果:COE能够抑制SGC-7901细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;其24 h的IC50为70.14 mg·L~(-1)。COE(70 mg·L~(-1))作用SGC-7901细胞24 h后,与空白组比较有9个蛋白质点发生下调,4个蛋白质点发生上调;这些蛋白可能是COE在胃癌细胞中的作用靶点。Western blot验证了COE对热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27),抗增殖蛋白(prohibitin),丝切蛋白(cofilin-1),膜联蛋白A5(annexin A5)表达的影响,与蛋白质组学结果相一致。结论:COE对胃癌细胞具有显著的抑制作用,筛选出的差异表达蛋白为COE的抗肿瘤机制研究提供新的依据。     

金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞耐药逆转作用

目的:探讨金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞的耐药逆转作用及其可能的作用机制。方法:分别以不同质量浓度(2.5~80 mg·L-1)的金丝桃苷及不同质量浓度(1.25~40 mg·L-1)的长春新碱作用于体外培养的HCT8和HCT8/VCR细胞48 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率,计算各组细胞金丝桃苷和长春新碱的半数抑制浓度(IC50)及金丝桃苷抑制率为5%的药物浓度;采用非毒性剂量金丝桃苷分别与不同质量浓度(1.25~40 mg·L-1)的长春新碱联合作用HCT8/VCR细胞,检测长春新碱的IC50,计算逆转倍数;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3,Caspase-9蛋白活性的变化。结果:金丝桃苷非细胞毒性剂量为0.82mg·L-1。0.82 mg·L-1金丝桃苷可使长春新碱对HCT8/VCR细胞的IC50从65.97 mg·L-1下降至9.94 mg·L-1,逆转倍数为6.63;与单独用长春新碱组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组细胞凋亡率,Caspase-3,Caspase-9蛋白活性均显著提高(P0.01)。线粒体膜电位检测发现,与单独用长春新碱组及金丝桃苷组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组低荧光强度相对细胞数所占比率显著提高(P0.01)。结论:长春新碱与金丝桃苷联合应用后可增强Caspase-3,Caspase-9蛋白活性,降低线粒体膜电位,提高HCT8/VCR细胞的凋亡率,从而产生耐药逆转作用。     

Anti-proliferative and apoptosis induction activities of extracts from Thai medicinal plant recipes selected from MANOSROI II database

Ethonopharmacological relevances

Traditional medicines have long been used by the Thai people. Several medicinal recipes prepared from a mixture of plants are often used by traditional medicinal practitioners for the treatment of many diseases including cancer. The recipes collected from the Thai medicinal text books were recorded in MANOSROI II database. Anticancer recipes were searched and selected by a computer program using the recipe indication keywords including Ma-reng and San which means cancer in Thai, from the database for anticancer activity investigation.

Aim of study

To investigate anti-cancer activities of the Thai medicinal plant recipes selected from the “MANOSROI II” database.

Materials and methods

Anti-proliferative and apoptotic activities of extracts from 121 recipes selected from 56,137 recipes in the Thai medicinal plant recipe “MANOSROI II” database were investigated in two cancer cell lines including human mouth epidermal carcinoma (KB) and human colon adenocarcinoma (HT-29) cell lines using sulforhodamine B (SRB) assay and acridine orange (AO) and ethidium bromide (EB) staining technique, respectively.

Results and conclusions

In the SRB assay, recipes NE028 and, S003 gave the highest anti-proliferation activity on KB and HT29 with the IC₅₀ values of 2.48 ± 0.24 and 6.92 ± 0.49 μg/ml, respectively. In the AO/EB staining assay, recipes S016 and NE028 exhibited the highest apoptotic induction in KB and HT-29 cell lines, respectively. This study has demonstrated that the three Thai medicinal plant recipes selected from “MANOSROI II” database (NE028, S003 and S016) gave active anti-cancer activities according to the NCI classification which can be further developed for anti-cancer treatment.     

藤黄总酸对实验性肿瘤及肿瘤细胞体外生长的抑制作用

目的 :研究藤黄总酸的体内外抗肿瘤活性。方法 :以抑瘤率和生命延长率观察药物的体内抗肿瘤活性 ,以药物对肿瘤细胞株的抑制率为指标 ,探讨其体外抗瘤作用。结果 :藤黄总酸 (8,4 ,2mg/kg)iv对Heps、EC及S1 80 的肿瘤生长具有明显的抑制作用 (P <0 0 1 ) ;ip(1 5 ,0 75 ,0 375mg/kg )能显著延长Heps、EAC、S1 80 腹水型小鼠移植瘤的存活天数 ;藤黄总酸对人肝癌细胞BEL 74 0 2及人肺腺癌细胞SPC A1有较强的抑制作用。结论 :藤黄总酸对肿瘤细胞的体内外生长有明显抑制作用。     

生川乌配不同比例生半夏对乳鼠心肌细胞的毒性作用

目的:以半数抑制浓度及细胞搏动频率为指标,评价生川乌与生半夏合用对原代乳鼠心肌细胞的毒性影响及与生半夏比例的关系.方法:分离出生3d内的SD乳鼠心肌细胞进行原代培养.生川乌组(Ⅰ组),生川乌配生半夏1∶0.25(Ⅱ组),1∶0.5(Ⅲ组),1∶1(Ⅳ组)分别以生川乌终质量浓度0,0.016,0.078,0.235,0.392,0.548,0.705,0.861,1.018 g·mL-1(高效液相色谱法测得乌头碱含量分别为0,1,5,15,25,35,45,55,65 mg·L-1)染毒心肌细胞,分别培养1,2,4,12h,观察各时间点细胞搏动频率,以MTT法检测培养12h时细胞存活率,应用概率单位法计算半数抑制浓度(IC50).结果:①染毒12h,生川乌组抑制率(CI)显著高于其他配伍组(P＜0.01),且随着生半夏比例的提高,抑制率降低.②Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组的IC50分别为0.446,0.460,0.530,0.575 g·mL-1.③在生川乌终质量浓度0.016 ～0.078 g·mL-1内,1～2h细胞搏动频率增高,4～12h搏动频率降低.在0.235 ～0.861 g·mL-1内,1h时细胞搏动频率降低,2h时搏动频率高于1h,但低于正常水平,4～12 h频率低于1h.给药1.018 g·mL-1,细胞立即停搏.结论:生半夏配伍生川乌降低了生川乌的毒性,且有明显的剂量依赖关系.     

三氧化二砷抑制小鼠乳腺癌细胞MA-891生长作用及其对端粒酶活性的影响

目的:探讨As2O3在诱导小鼠乳腺癌细胞MA-891凋亡过程中的作用,以及对端粒酶及其亚单位mTERT mRNA活性表达的影响,为进一步进行小鼠体内实验提供理论和实验依据。方法:以小鼠乳腺癌细胞株MA-891为研究对象,将不同浓度的As2O3与MA-891细胞共培养不同时间后,MTT法检测As2O3对MA-891细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测As2O3对MA-891细胞凋亡的影响;TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后MA-891细胞中端粒酶活性的改变;RT-PCR检测As2O3对MA-891细胞鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)的影响。结果:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长,24,48 h的半数生长抑制浓度(IC50)分别为9.68,5.50μmol.L-1。5,10,20μmol.L-1的As2O3诱导MA-891细胞24 h后,细胞凋亡率依次为30.21%,48.26%,57.43%。5,10,20μmol.L-1的As2O3作用MA-891细胞24,48 h后,端粒酶活性显著下降,抑制程度呈明显的时间和浓度依赖性;银染条带也显示出相同结果。RT-PCR产物显示mTERT mRNA表达显著下降并呈时间和浓度依赖关系。结论:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长、诱导细胞凋亡,可能是通过抑制细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性而发挥作用。     

小蓟水提液对4种癌细胞生长抑制作用的研究

目的:研究小蓟水提液对癌细胞生长的抑制作用。方法:细胞形态观察、活细胞计数法和克隆形成率法研究小蓟水提液对人白血病细胞K562、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞Hela、胃癌细胞BGC823生长的抑制作用。结果:小蓟水提液可使4种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、裂碎等变化,生长受到明显抑制,抑制率最高可达86.03%。结论:小蓟有确切的抑癌作用。     

胃康舒宁对胃癌细胞株体外生长及细胞周期的影响

目的:观察中药复方胃康舒宁对胃癌细胞株SGC-7901体外生长情况及细胞周期的影响.方法:以胃康舒宁200,400,800 mg·L-1作用细胞24,48,72,96 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)和流式细胞仪方法检测细胞抑制率和细胞周期各时相比率变化.结果:与空白对照组相比,胃康舒宁各组细胞抑制率明显升高(P＜0.05),其中G0/G1期细胞周期比率明显升高(P＜0.05).结论:胃康舒宁能体外抑制胃癌细胞的生长,且能将细胞周期阻滞在G0/G1期.     

柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白血病细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响

目的：观察柴胡皂甙ｄ（ＳＳｄ）对人急性早幼粒白血症细胞（ＨＬ６０）糖皮质激素受体（ＧＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用及对细胞生长的影响。方法：用从柴胡中提取的单体成分ＳＳｄ，以＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法和流式细胞仪观察细胞生长，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析ＳＳｄ对ＧＲ ｍＲＮＡ的改变。结果：经ＳＳｄ作用后，ＨＬ６０细胞＾３Ｔ－ＴｄＲ掺入率明显降低，呈时间和剂量依赖关系，ＳＳｄ１０μｇ／