浙江蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒蛋白水解酶的分离纯化及其理化性质研究

应用DEAE-Sephadex A-50,Sephadex G-75,Sephadex G-200和QAE-SephadexA-25柱层析,从浙江蝮蛇毒中分离纯化出一种具有酪蛋白水解活性的蛋白水解酶a,称之为蛋白酶a.纯化后的蛋白酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳鉴定,均呈现一条区带。等电点为6.4.用凝胶过滤及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其分子量为68000,糖蛋白染色法表明蛋白酶a是一糖蛋白。紫外吸收光谱表明蛋白酶a在277nm波长处有最大吸收,消光系数E_(277nm)~(0.1%)=0.681.蛋白酶a含有丰富的天冬氨酸、谷氨酸和赖氨酸。     

一步等电聚焦纯化羊血铜锌超氧化物歧化酶

本文用水平板制备等电聚焦电泳纯化了羊血红细胞铜、锌超氧化物歧化酶。其粗酶液经过一步等电聚焦比活力由271.6u/mg蛋白提高到6254u/mg蛋白,纯化倍数提高了22.2倍,活力回收72.9％。聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳均呈一条带,等电点为pH6.8。     

螺旋藻酸性多糖的电泳方法研究

利用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺梯度胶电泳及等电聚焦电泳对从螺旋藻中分离出的酸性多糖进行了研究。结果表明，螺旋藻酸性多糖的琼脂糖凝胶电泳呈单一斑点，与其他几种硫酸化多糖相比，迁移率有较大差异；利用聚丙烯酰胺梯度胶电泳可按分子质量大小将其分成3个组分，该结果与高效液相检测结果比较，两者基本吻合；螺旋藻酸性多糖的等电聚焦电泳呈单一条带，分布范围在pH值6．67～7．72。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子等电聚焦分析

目的：建立重组人成纤维细胞生长因子的等电聚焦电泳法。方法：利用载体两性电解质和聚丙烯酰胺,采用毛细管灌胶不自制平板胶,并从凝胶浓度、电极溶液等方面优化重组人成纤维细胞生长因子的等电聚焦电泳条件。结果：pH梯度曲线线性因归方程为Y＝－1．2593X＋10．808,γ=0.9939。重组人成纤维细胞生长因子的等电点为9．4（n=5,RSD=1.0％）。结论：该法简便,实用,重复性好,为碱性多肽或蛋白的等电点测定提供了实验依据。     

园背角无齿蚌抗肿瘤有效成份的研究：ⅠHB—Ⅱ糖蛋白的分析鉴定

对ＨＢ有效组份分离，纯化得到ＨＢ－Ⅱ，经不连续聚丙烯胺园盘电泳检查，显示一条色带，用凝胶柱层法测定共ＭＷ为１７９００Ｄ，用园盘等电聚焦法测定其ＰＩ值为４．７６，该成份含蛋白质４７．２３％，含糖为２１．１７％，含硫酸基０．４４％，推测其为一种糖蛋白，该成份具有抗肿瘤活性。     

平颏海蛇神经毒组份X的纯化及性质特点

经CM—Sephadex C 25,Sephadex G 50及CM—Sephadex C 50三步柱层析,从平颏海蛇(Lapemis hardwickii)毒腺提取物中分离出神经毒组份X—2—4(Fr.X—2—4)。经三种不同类型的电泳鉴定,Fr.X—2—4为单一组份,其分子量为8000,等电点为pH 8.45。小鸡颈二腹肌及电生理实验证明,此组份为突触后神经毒,放射性配基结合实验表明,该毒份抑制~(125)I标记的眼镜蛇神经毒素与胆碱受体结合,其IC_(50)为7.45 nmol/L。拉曼光谱提示该神经毒的二级结构主要是β折叠和无规卷曲。     

秦艽种子蛋白质的提取及SDS电泳研究

目的 探讨秦艽种子的提取方法、最佳变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳体积分数,为秦艽种子蛋白的研究和种质的鉴别奠定基础.方法 采用添加样品缓冲液研磨提取和不添加任何物质研磨提取2种方法对秦艽种子蛋白进行提取,用体积分数为7.5%,10%,15%和20%的4种不同凝胶对提取的种子蛋白进行SDS电泳.结果 添加样品缓冲液研磨...     

平颏海蛇神经毒组分Ⅷ的分离纯化及毒理的初步研究

平颏海蛇毒腺提取物用CM-Sephadex C25柱层析,经醋酸铵缓冲液梯度洗脱,获得19个蛋白组分。经离体小鸡颈二腹肌标本检验,其中14个具有突触后神经毒作用。组分XⅡ再经Sephadex G 50和CM-Sephadex C 50层析纯化后得到组分XⅢ-2-4,该组分用Sephadex G 50过滤呈单一蛋白吸收峰,经三种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为电泳纯蛋白。其等电点为8.3,表观分子量为8200。小鼠ipLD_(50)为94μg/kg(86～102μg/kg)。其对小鸡颈二腹肌标本的神经肌肉传导的阻断作用经反复冲洗360min,结果表明是难于逆转的。根据氨基酸组成分析、分子量测定以及对神经肌肉传导阻断的难逆转结果,推测平颏海蛇神经毒素XⅢ-2-4可能属于突触后长链神经毒。     

浙江省天南星族药用植物新鲜块茎的等电聚集电泳分析

目的：为天南星族药用植物的分类和鉴定提供依据。方法：以聚丙烯酰胺／凝胶等电聚焦电泳（IEF）方法对天南星族植物7种4变种1变形18个样品蛋白质进行分析。结果：不同属植物的电泳谱之间有明显差异。结论：利用IEF谱带差异可准确地区分犁头尖属、半夏属和天南星属。     

浙江省天南星族药用植物新鲜块茎的等电聚焦电泳分析

目的为天南星族药用植物的分类和鉴定提供依据.方法以聚丙烯酰胺/凝胶等电聚焦电泳(IEF)方法对天南星族植物7种4变种1变型18个样品蛋白质进行分析.结果不同属植物的电泳谱之间有明显差异.结论利用IEF谱带差异可准确地区分犁头尖属、半夏属和天南星属.     

蝮蛇毒纤溶酶的分离纯化及性质研究

目的 :寻找一种分离纯化蝮蛇毒纤溶酶的工艺并研究其理化性质。方法 :采用DEAE SepharoseCL 6B和HeparinCL 6B层析方法 ,从蝮蛇毒中分离纯化纤溶酶。结果 :蝮蛇毒纤溶酶经HPLC为单一峰 ,等电聚焦电泳为一条带 ,其等电点为 4.5 5 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为 2 9.4kD。该酶对热不稳定 ,在 pH6～ 9时稳定 ,氨基酸组成分析表明含酸性氨基酸较多。结论 :用此工艺可制得高纯度的蝮蛇毒纤溶酶。     

临床分耐药菌中超广谱β—内酰胺酶特性研究

本文报道我国临床分离超广谱β－内酰胺酶的特性。采用超声破碎法提取β－内酰胺酶，超薄层（０．４ｍｍ）聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测定等电点ｐＩ，采用凝胶过滤层析法测定分子量，紫餐分光光度法测定酶动力学参数。     

猪胸腺素分子量及等电点的测定

<正> 本文以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质,分别引入SDS和Ampholine,进行恒流电泳和恒压聚焦测定了山东省莱阳生化制药厂生产的猪胸腺素的分子量和等电点。一、分子量标准蛋白质:牛血清白蛋白(MW68000)、卵清白蛋白(MW45000)、碳酸酐酶(MW32000)、乳球蛋白(MW18000)、核糖核酸酶(MW13700),以上标准品均为Polyscien-ces制品,细胞色素 C(Sigma,MW12384)。     

溶栓素的分离纯化及特性测定

目的研究一种高效分离纯化溶栓素的方法并测定其pI和相对分子质量(Mr)。方法采用阴、阳离子交换色谱等技术分离纯化溶栓素并通过对缓冲体系的pH值、离子强度的调节及对初始供试品pH值的调节来优化纯化过程,以等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF PAGE)和SDS PHGE方法分别测定纯品的pI和Mr。结果溶栓素达到简捷、高效分离纯化的目的,电泳鉴定为一条蛋白质带,并测定溶栓素的pI为4 .5 0、Mr 为35 10 0。结论溶栓素的纯化工艺达到高纯度纯化程度,为进一步研究溶栓素奠定了基础     

湖北地产麦冬、湖北麦冬和短葶山麦冬的SDS-PAGE研究

目的：研究湖北地产麦冬、湖北麦冬与短葶山麦冬蛋白的十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,为三种麦冬的分类和品质鉴别研究提供新的方法和依据。方法：用SDS—PAGE技术对湖北地产麦冬、湖北麦冬与短葶山麦冬的块根进行分析比较,用BIO一1D凝胶成像分析仪对电泳结果进行了摄影分析,测定了各品种水溶性蛋白的相对分子量,聚类分析图则显示了几种麦冬亲缘关系的远近。结果：湖北地产麦冬、湖北麦冬与短葶山麦冬的SDS—PAGE谱带、水溶性蛋白相对分子量和聚类关系均有明显的区别。结论：SDS—PAGE（十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳）研究可用于三种麦冬的分类和品质鉴别研究。     

单克隆抗体的纯化与IgG亚类鉴定

本文报告了以SPA亲和层析、pH梯度洗脱技术纯化McAb的效果,纯化物以SDS—聚丙烯酰胺电泳、ELISA及中和试验检测。也报告了以免疫双扩散沉淀技术对脊髓灰质炎(polio)Sabin—1,IS—11株McAb之IgG亚类,轻链型别鉴定的结果。     

霍乱弧菌产生的可溶性血凝素的提纯与鉴定

将霍乱弧菌CA401株移种于发酵罐,搅拌通气培养,离心除去菌体,用25～50％饱和硫酸铵提取粗制可溶性血凝素(HA)(霍乱血凝素)。继在4℃用Sephadex G75凝胶柱层析,收集具有HA活性的部份,样品以pH4～9的梯度进行等电聚焦(IEF),可溶性HA活     

大鲵皮肤分泌液中抗菌肽的鉴定及生物活性研究

目的鉴定大鲵皮肤分泌液中抗菌肽,研究其部分生物活性。方法 5%醋酸浸提和Sephadex G-50、G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化抗菌肽;采用抑菌圈法检测抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳和等电聚焦电泳鉴定其抗菌活性成份。结果大鲵皮肤分泌液中含有抗菌活性物质。对革兰阴性菌、革兰阳性菌和真菌均具有较强的抗菌活性;电泳检测显示该小分子多肽相对分子质量约为4 300,具有较强的碱性。结论首次从大鲵皮肤分泌液中分离纯化到一种抗菌肽,此抗菌肽可能是一个具有较强阳离子特征的碱性肽。     

脑脊液寡克隆蛋白检测在神经系统疾病中的诊断意义

早在70年代末,Thompson等即对聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳作过一些改良并把它用于脑脊液寡克隆蛋白检测。国内也在80年代陆续有这方面的报道。本文就我院收治的234例病人脑脊液寡克隆蛋白的结果进行分析。     

人精子甘露糖受体的部分特性研究

目的分离纯化人精子甘露糖受体并测定其分子量和等电点。方法用亲和层析法分离纯化人精子甘露糖受体,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其分子量,等电聚焦电泳法测定其等电点。结果人精子甘露糖受体的分子量为66.3 ku,等电点为pH=5.1。结论用亲和层析法分离得到人精子甘露糖受体,并测得其分子量和等电点,可为后续开展人精子甘露糖受体有关理化特性和医用价值的研究积累有价值的资料。