维拉帕米对血清诱导的兔视网膜色素上皮细胞增殖调节作用的研究

目的 :研究维拉帕米 (Verapamrl,Ver)对兔视网膜色素上皮 (RPE)细胞增殖的抑制作用。　 方法 :用流式细胞仪 (FCM )检测Ver对兔RPE细胞增殖周期的影响。　结果 :Ver能明显抑制血清诱导的兔RPE细胞的增殖 ,可使细胞更多地滞留在G1期 ,阻止细胞由G1期进入S期 ,并具有浓度依赖性和时间依赖性。　结论 :Ver能明显抑制血清诱导的兔RPE细胞增殖 ,可望成为新的防治增殖性玻璃体视网膜病 (PVR)的药物之一。     

羊膜对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖影响的实验研究

目的　观察羊膜是否对视网膜色素上皮细胞 (Retinalpigmentepithelial ,RPE)的生长有影响 ,探讨羊膜用于治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (Proliferativevitreoretinopathy ,PVR)的潜在可能性。方法　运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆在不同浓度 (4 0、80、160 μg ml)及不同作用时相点 (2 4、48、96h)对人RPE增殖的影响。 结果　①在第 2 4小时 ,3个浓度羊膜匀浆均对人RPE增殖起抑制作用 ,而且随浓度增加抑制作用减弱 ,抑制率 (5 0 774%、2 7 3 87%、14 80 2 % )间相差显著 (P <0 0 5 ) ;在第 48、96小时 ,羊膜匀浆在低浓度时 ,对人RPE增殖起抑制作用 ,而在中、高浓度为促增殖作用 ,其中在第 48小时抑制率 (4 494%、-0 944 %、-3 693 % )间相差不显著 (P >0 0 5 ) ,在第 96小时时抑制率 (8 3 88%、-9 42 5 %、-17 65 1% )间相差显著 (P <0 0 5 )。②羊膜匀浆浓度为 40 μg ml ,各时相点对人RPE均为抑制增殖 ,抑制率间相差非常显著 (P <0 0 1) ;在浓度为 80 μg ml、160 μg ml时 ,随着作用时间延长 ,羊膜匀浆对人RPE增殖的作用逐渐由抑制变为促进作用 ,抑制率间相差显著 (P <0 0 5 )。结论　羊膜匀浆在低浓度 ,短时间内对人RPE增殖有抑制作用 ,而在高浓度、长时间则对RPE增殖有促进作用。羊膜匀浆用     

维拉帕米对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用

目的 评价钙通道拮抗剂维拉帕米(verapamil)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖的影响.方法 在原代培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中分别加入不同浓度的维拉帕米溶液(0.1、1、1 ×101、1×102、1 ×103、1 ×104μmol/L),于培养72、96和120 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在酶标仪上测630 nm处吸光度值,与无血清培养液对照组比较.计算不同条件下维拉帕米对细胞增殖的抑制率.结果 维拉帕米在1×10-1～1×104μmol/L浓度范围内对RPE的细胞增殖有明显抑制作用,此抑制作用具有浓度依赖性.维拉帕米在细胞培养72、96和120 h后,对人RPE细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)分别为10.35、5.92和3.85 μmol/ml.结论 维拉帕米对体外培养的原代人RPE细胞的增殖有抑制作用,具有预防和治疗增殖性玻璃体视网膜病的潜在价值.     

猪视网膜色素上皮细胞的体外培养

目的：将猪视网膜色素上皮(RPE)细胞进行体外培养，为研究RPE细胞的功能及治疗有关眼底疾病提供细胞来源。方法：采用胰酶2次消化法分离猪RPE细胞，15％DMEM培养液培养，每天倒置显微镜观察细胞生长情况，并作流式细胞仪分析培养细胞的细胞周期。以免疫组织化学法鉴定培养细胞的来源。结果：离体培养细胞初期呈圆形，富含黑色素，12～24h贴壁呈圆形、梭形及不规则形。传代后细胞渐趋透明。免疫组化证实RPE细胞均为鼠抗人角蛋白染色阳性。细胞周期分析提示体外培养的RPE细胞保持正常的繁殖能力。结论：培养的细胞可作为体外猪RPE细胞的来源。     

苏拉明对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的 探讨苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,aPE)DNA合成的影响，为防治增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)提供理论依据。方法 将不同浓度的苏拉明加入培养的人RPE细胞，分别于48h、96h后用氚-标脱氧胸苷(tritium—labelled thymidine deoxyri-bose，^3H—TdR)掺入法测定DNA合成抑制率；以300mg／L苏拉明作用于RPE细胞，用流式细胞仪(flowe,cytometry，FCM)分析RPE细胞周期。结果 苏拉明在100～400mg／L范围内对培养的人RPE细胞DNA合成有明显的抑制作用，且具有剂量-效应及时间-效应关系；FCM显示苏拉明将RPE细胞阻抑于G2／M期。结论 苏拉明能抑制RPE细胞DNA合成，可作为防治PVR的药物进一步研究。     

转移生长因子β2对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成增殖影响的研究

目的：为研究转移生长因子β2（TGF－β2）对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法：取自愿者贡献的眼球并游离其视网膜色素上皮细胞，用DMEM加10％血清及MEM氨基酸和庆大霉素，进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸、转移生长因子β2（TGF－β2）及TGF－β2＋LPA进行视网色素上皮细胞增殖试验，用细胞染色法进行细胞计数，提取视网膜色素上皮细胞DNA，用Spectrophotometer进行DNA定量测定。结果：含有和／或缺乏1％小牛血清的两种LPA（10uM）均明显刺激视网膜色素上细胞增殖，但这种细胞的增殖被2nG/ml的转移生长因子－β2所阻滞。结论：增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）是一种以细胞增殖为主的疾病，参与增殖的主要细胞为视网膜色素上皮细胞，转移生长因子－β2能阻滞体外培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖，应用TGF－β2治疗由RPE细胞引起的PVR疾病，仍需进一步深入研究。     

吡咯二硫代氨基甲酸乙酯干预人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的 研究PDTC对体外培养的人视网膜色素上皮（hRPE）细胞增殖及细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞（hRPE），采用MTT法和免疫组化图像分析系统研究不同浓度PDTC对hRPE细胞增殖及细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）表达的影响。结果 作用24h组．浓度0．062g／L以上PDTC可有效抑制RPE细胞增殖，并呈浓度依赖性。作用48h组，浓度0．031g／L以上PDTC即可有效抑制RPE细胞增殖，亦呈浓度依赖性。浓度0．062g／L以上PDTC作用24h组PCNA表达水平较阴性对照组明显下降，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论 PDTC可以抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞的增殖，抑制效应与药物浓度和作用时间正相关，其作用机制可能与降低细胞内PCNA表达有关。PDTC可望成为治疗增殖性玻璃体视网膜病变新的药物。     

紫杉醇抑制原代培养人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的研究紫杉醇（Taxol）对体外原代培养人视网膜色素上皮（human Retinal Pigment Epithelium,hRPE）细胞增殖的抑制作用及机制。方法体外分离、原代培养hRPE细胞,采用免疫细胞化学方法对其进行鉴定。不同浓度紫杉醇（0、0.005、0.05、0.5、5mg/L）处理hRPE细胞一定时间,采用形态学观察、细胞生长曲线及MTT法检测药物对hRPE细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测药物对hRPE细胞的细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用。结果原代培养的hRPE细胞胞浆富含色素,随传代次数增加,黑色素颗粒逐渐减少直至消失。用抗人细胞角蛋白抗体进行免疫细胞化学鉴定hRPE细胞呈特异的阳性反应。细胞生长曲线及MTT法显示：紫杉醇作用于hRPE细胞24h和72h,其抑制细胞生长增殖的IC50值分别为5.24和3.24mg/L。流式细胞分析术检测结果显示：0.5mg/L紫衫醇作用细胞48h即可显著延迟hRPE细胞G2/M期进展并诱导凋亡（P〈0.05）。透射电镜观察显示：0.5mg/L紫杉醇作用后细胞表面微绒毛减少,电子密度增加,细胞器减少,异染色质聚集成团、边聚等。结论紫杉醇通过阻滞G2/M期进展和诱导凋亡显著抑制hRPE细胞生长增殖。     

孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮细胞CD44的表达变化

目的 研究兔孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞CD44的表达,及其与孔源性视网膜脱离病理变化的关系.方法 90只健康有色兔随机分为5组建立不同模型:Ⅰ组:孔源性视网膜脱离组,28只眼;Ⅱ组:孔源性视网膜脱离伴玻璃体积血组,27只眼;Ⅲ组:单纯视网膜裂孔组,18只眼;Ⅳ组:玻璃体切除组,17只眼;Ⅴ组:空白对照组,90只眼.分别于手术后不同时间点(1、3,7、14,21、28 d)摘取各组兔眼眼球,用酶消化和机械分离法分离RPE细胞,制成细胞悬液,荧光免疫法标记CD44,用流式细胞仪检测各组RPE细胞膜上CD44的表达水平.结果 Ⅰ组和Ⅱ组模型眼均发生视网膜脱离,Ⅲ组和iv组模型眼未发生视网膜脱离.Ⅰ、Ⅱ组中RPE细胞CD44的表达明显高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,Ⅰ、Ⅱ组RPE细胞CD44表达水平在术后1 d即增高,7 d左右达到高峰,继而下降,Ⅰ、Ⅱ组与V组RPE细胞CD44的表达差异有极显著性意义(均P0.05).结论 孔源性视网膜脱离中RPE细胞CD44表达增强,RPE细胞CD44的表达变化与孔源性视网膜脱离的病理发展关系密切.     

视网膜色素上皮细胞来源外泌体与老年性黄斑病变

老年性黄斑病变（age-related macular degeneration,AMD）也被称为年龄相关黄斑变性、增龄性黄斑变性。多双眼发病,病发时一般双眼先后或同时发病,出现中心暗点、视物变形等视觉障碍,多发生在50 岁以上的中老年中,且感染几率会随着年龄的增长而增加,成为导致当今中老年失明的重要原因。眼科领域普遍认为视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞分泌的外泌体很可能参与AMD 的发生与发展。RPE 细胞通过分泌携带内容物的外泌体,将其转移到邻近或远处细胞,完成细胞间的信息交流,并对细胞造成一定程度的影响,参与细胞生长与转移、血管生成,在免疫调节、炎症反应等诸多病理生理过程中发挥重要作用。在对RPE 细胞外泌体进行深入研究的同时,也发现了外泌体对AMD 早期诊断和治疗的新潜力,为AMD 的研究带来了新的方向。     

兔视网膜色素上皮细胞的体外培养及超微结构研究

目的：将兔视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞进行体外培养,观察其超微结构。方法：用胰酶消化法培养兔ＲＰＥ细胞并传代。扫描电镜和透射电镜观察其超微结构。结果：原代培养的ＲＰＥ细胞含大量色素呈多角形,传代的细胞透明呈梭形。电镜显示它们具有细胞极性,含黑色素颗粒、各种细胞器、细胞间连接复合体,与体内一致。结论：培养的大量细胞可用于ＲＰＥ的体外实验研究。     

不同光照时长对体外培养人视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡的影响

目的 研究不同光照时长对体外培养的人视网膜色素上皮细胞（hRPE）凋亡的影响,筛选出最佳建造光损伤模型的光照时长,为后续研究视网膜光损伤机制及光损伤保护提供必要的实验基础.方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞（h RPE）,用三基色冷光灯模拟自然光源,选取（2500 ±500） Lux作为基础光照强度,以不同光照时长（2、4、6h）对细胞进行照射,建立光损伤模型.分别采用MTS法和流式细胞术检测细胞活力及早期凋亡率,比较给予不同光照时长后,hRPE的活力及早期凋亡率的差异.结果 与空白对照组比较,不同光照时长（2、4、6h）均能抑制细胞活力及引起细胞凋亡;光照时间越长,细胞损伤越严重,光照6h组细胞活力下降明显（P＜0.05）;光照组细胞早期凋亡率较空白对照组升高（P＜0.05）,光照组间比较,光照4h组早期凋亡率升高明显（P＜0.05）.结论 不同光照时长均可造成hRPE不同程度的损害;给予4h时长光照后,hRPE损伤以早期凋亡为主,同时又保有较高的细胞活力,故选取4h作为最佳建造光损伤模型的光照时长.     

p21/WAF1基因对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察p21／WAF1基因对体外培养的人视网膜色素上皮(hRFE)细胞增殖的影响。方法hRFE细胞原代、传代体外培养，通过脂质体介导将p21／WAF1基因转人体外培养的hRPE细胞。免疫组织化学法检测p21蛋白表达水平，并用MTT法检测其对hRFE细胞增殖抑制的作用，同时利用流式细胞仪来分析p21／WAF1基因对细胞周期的影响。结果 MTT法显示p21／WAF1基因抑制hRPE细胞的增殖。流式细胞仪检测显示转染后Go／G1期比例明显增加，S期比例减少。结论 p21／WAF1基因可有效地抑制hRPE细胞的增殖活性。     

视网膜色素上皮细胞光损伤模型的建立与评估

目的 通过不同光照时间和光照强度,探索建立最佳视网膜色素上皮细胞光损伤模型,为视网膜光损伤细胞造模方法提供理论依据.方法 选取原代大鼠视网膜色素上皮细胞和大鼠视网膜色素上皮细胞系,LED白色冷光灯模拟自然光源,选取(2500、5000、7500、10000 Lux)作为光照强度,以不同光照时间(6、12 h)对细胞进行照射,建立光损伤模型,镜下观察细胞形态,采用MTT法检测细胞活力.结果 光照处理后,RPE细胞活力受到抑制,随着光照强度及时间增强,细胞活力降低明显,原代细胞6 h 7500、10000 Lux和12 h 5000、7500、10000 Lux,细胞系6 h 10000 Lux和12 h 7500、10000 Lux,视网膜色素上皮细胞活力均低于空白组(P<0.01).结论 RPE细胞活力受光照时间及强度抑制,原代细胞较细胞系对光损伤更敏感.     

吲哚美辛对视网膜色素上皮细胞增殖、DNA合成及凋亡的影响

目的 探讨吲哚美辛(IN)对体外培养的人胚胎视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、DNA合成及凋亡的影响.方法 分别采用MTT法和核酸蛋白分析仪测定IN对RPE细胞增殖及DNA合成的影响;用透射电镜和吖啶橙荧光染色对凋亡细胞作定性、定量分析.结果 与空白对照组相比,IN处理组RPE细胞数量减少,DNA浓度降低,细胞凋亡数增多,差异均有显著性意义(均P<0.05).结论 IN能抑制RPE细胞增殖和DNA合成,并能诱导细胞凋亡;在一定范围内,凋亡细胞数量随IN浓度增加和作用时间延长而明显增多.     

E2F decoy对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响

为探讨转录因子E2Fdecoy策略对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用，在阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000介导下将1μmol/LE2Fdecoy或无义decoy转入人RPE细胞中，用MTT法检测其对细胞增生活性的影响，RT-PCR检测细胞中PCNAmRNA表达水平的变化。结果显示：转录因子E2Fdecoy能抑制RPE细胞的增生，为增生性玻璃体视网膜病变（PVR）提供了新的基因治疗手段。