TNF-α对去子宫大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的 探讨TNF-α对去子宫大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法 应用子宫切除术建立去子宫Sprague—Dawley大鼠模型。体外培养卵巢颗粒细胞并加60ng／ml外源性TNF-α。应用荧光显微镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 模型组较正常对照组凋亡增加；TNF-α组较模型组凋亡进一步加剧。结论 外源性TNF-α促进去子宫大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。提示TNF-α可能加速了子宫切除所致卵巢早衰过程。     

罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。     

蛤蚧乙醇提取液对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:研究蛤蚧乙醇提取液对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法:3月龄和6月龄Wistar雌性大鼠各20只,每个月龄组随机分为实验组和对照组,每组各10只.实验组以蛤蚧乙醇提取液2 g(原药)/kg·d灌胃,对照组以体积相当的0.9%氯化钠液灌胃,15日后取各组大鼠卵巢经脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和碘化丙啶(PI)染色、磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(AnnexinV/PI)双染经流式细胞术(FCM)检测颗粒细胞凋亡及其周期分布情况.结果:TUNEL检测颗粒细胞凋亡数3月龄和6月龄实验组分别是34±7个和53±11个,对照组分别为48±9个和76±17个,差异有高度统计学意义(P<0.01);PI检测的颗粒细胞凋亡率3月龄和6月龄实验组分别为(6.06±2.01)%和(12.16±3.26)%,对照组分别为(8.23±2.13)%和(23.69±6.28)%,差异有统计学意义(P<0.05),但是细胞周期的分布差异却无统计学意义(P>0.05);Annexin V/PI检测的颗粒细胞早期凋亡率3月龄和6月龄实验组分别为(6.71±3.11)%和(23.74±6.28)%,对照组分别为(19.05±5.78)%和(36.55±8.35)%,差异有高度统计学意义(P<0.01).3月龄和6月龄实验组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡均明显少于对照组(P<0.01或P<0.05).结论:蛤蚧乙醇提取液能有效抑制大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡,从而改善大鼠卵巢功能,并可能由此延缓大鼠卵巢的衰老.     

GATA4基因沉默对多囊卵巢综合征模式大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及相关机制

目的:GATA4基因沉默对多囊卵巢综合征(PCOS)模式大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和转染GATA4-siRNA沉默组(GATA4-siRNA)转染PCOS卵巢颗粒细胞48h后,Western blot检测各组细胞中GATA4、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:NCsiRNA组的GATA4、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义(P0.05),GATA4-siRNA组的细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组,GATA4、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组(P0.01)。结论:沉默PCOS模式大鼠卵巢颗粒细胞中GATA4表达,可促进细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

米非司酮对小鼠卵丘颗粒细胞超微结构的影响

目的:观察米非司酮对小鼠卵丘颗粒细胞超微结构的影响。方法:雌性昆明小鼠40只,随机均分为4组:对照组(A组),米非司酮0.048mg/kg组(B组)、0.143mg/kg组(C组)、0.429mg/kg组(D组)。4组动物均于动情前期一次灌胃给药,10h后取其双侧卵巢组织,透射电镜观察4组小鼠成熟卵泡内卵丘颗粒细胞超微结构的变化。结果:与A组相比,B组小鼠卵丘颗粒细胞的间隙变宽,部分线粒体水肿明显。C组细胞外形不规则,细胞间隙宽,可见髓样小体,线粒体更加肿胀,呈空泡状。D组细胞胞浆内有凋亡现象出现,胞浆内可见部分凋亡小体,细胞核形态不规则。结论:米非司酮可损伤小鼠成熟卵泡中卵丘颗粒细胞超微结构,随着剂量的增加,凋亡现象明显。     

bcl-2、P~(53)、Fas蛋白表达与卵巢上皮癌细胞凋亡的相关性研究

目的：探讨ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｆａｓ基因与卵巢上皮癌细胞凋亡的关系。方法：４４份卵巢癌术后石蜡包埋组织切片，应用原位末端标记法及免疫组化法进行相关检测。结果：卵巢上皮癌组织中有细胞凋亡和ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｆａｓ蛋白的表达，阳性率分别为７５．００％、４３．１８％和４５．４５％。ｂｃｌ－２、Ｐ５３蛋白表达与卵巢上皮癌细胞凋亡呈负相关，Ｆａｓ蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。上述４项指标在卵巢浆液性囊腺癌和卵巢粘液性囊腺癌之间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｆａｓ基因可能通过调控细胞凋亡参与卵巢上皮癌的发生与发展。     

CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达

目的:探讨内质网应激相关因子CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达。方法:收集因PCOS不孕、行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞(PCOS组,n=45)及因男方因素不孕、行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞(对照组,n=45),应用RT-PCR和Western blotting方法检测患者卵巢黄体颗粒细胞CHOP/GADD153的表达。结果:PCOS组CHOP/GADD153 mRNA水平(0.45±0.20)及蛋白水平(0.62±0.26)均较对照组(分别为0.40±0.18、0.56±0.17)有增高趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:内质网应激标志蛋白CHOP/GADD153在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达无明显改变,推测PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞内质网应激尚处于保护性阶段。     

MicroRNAs在新生鼠卵巢中的表达研究

目的:探讨microRNAs(miRNAs)对原始卵泡的形成和发育的影响。方法:取1d龄新生小鼠卵巢,制备卵巢切片,利用原位杂交技术观察mir-143、let-7a、let-7b、let-7c和mir-125b在新生小鼠卵巢中的表达情况。结果:1d龄新生小鼠卵巢内只含有大量原始卵泡,mir-143、let-7a、let-7b、let-7c和mir-125b表达于这些原始卵泡的颗粒细胞内,在卵母细胞中不表达。结论:miRNAs可能通过调控原始卵泡颗粒细胞的增殖和/或分化,或通过调控下游靶基因表达直接或间接地影响卵泡形成和发育中的重要因子(FSH、抗苗勒氏管激素、生长分化因子9等),从而对原始卵泡的形成和生长启动产生影响。     

胰岛素对卵巢颗粒细胞的作用

卵泡生长和排卵需要颗粒细胞的正常增殖和功能表达,胰岛素是促进颗粒细胞增殖和发挥生理功能的重要因子,通过多条信号途径与其他因子相互作用,精密地调节颗粒细胞增殖、物质代谢、合成甾体激素。多囊卵巢综合征(PCOS)患者高胰岛素血症和胰岛素抵抗导致颗粒细胞增殖抑制、功能失调,抑制卵泡的正常生长和排卵。     

米非司酮治疗卵巢过度刺激综合征的实验研究

目的:探讨米非司酮在减轻卵巢过度刺激综合征(OHSS)上的作用。方法:未成年Wistar雌鼠皮下注射PMSG和hCG,建立鼠OHSS模型。米非司酮治疗组于注射hCG后24h,皮下注射米非司酮5mg或10mg。48h后取腹腔灌洗液,用分光光度计测定腹腔灌洗液中亚甲蓝含量,以评估腹膜的通透性。双侧卵巢称重后进行匀浆。通过Bligh-Dyer法提取脂质,薄层色层法(TLC)纯化PAF,获卵巢PAF,用Pinckard法制备兔血小板,将获得的卵巢PAF与制备的兔血小板放入血小板聚集仪中,测定血小板的聚集功能,并与OHSS模型组和正常对照组比较。结果:①注射hCG48h后米非司酮组卵巢重量5mg组与OHSS模型组比降低了20.83%。②从尾静脉注入亚甲蓝后30min,腹腔灌洗液中美兰的含量米非司酮5mg组与OHSS模型组比较降低了31.10%、10mg组降低了21.65%。③卵巢PAF含量米非司酮5mg组显著低于OHSS模型组,P<0.01。但10mg组与OHSS模型组比差异无显著性(P>0.05)。结论:米非司酮在一定程度上降低了OHSS鼠卵巢的重量、腹膜血管通透性和卵巢PAF含量,有减轻OHSS程度的作用。     

孕二烯酮对大鼠卵巢颗粒细胞分泌甾体激素及芳香化酶的作用

目的:观察孕二烯酮对离体原代培养大鼠颗粒细胞分泌雌、孕激素功能及芳香化酶表达的抑制作用。方法:用活细胞计数法(CCK-8法)计算细胞存活率及半数抑制率(IC50)。加入卵泡刺激素和雄烯二酮刺激颗粒细胞分泌激素。用磁性均相酶联免疫法测定培养液中雌、孕激素含量。用大恒MIVNT显微图象分析软件分析免疫组化方法中芳香化酶表达。结果:孕二烯酮杀伤细胞的IC50为41μg/ml(95%可性限38.6-44.1μg/ml)。孕二烯酮5μg/ml,10μg/ml和20μg/ml在不影响活细胞数的情况下对颗粒细胞分泌雌激素的抑制率分别为4.5%,14.3%,38.7%;而其对分泌孕激素的抑制率分别为42.8%,53.1%和61.9%。免疫组化亦证明孕二烯酮能影响颗粒细胞中芳香化酶的表达。结论:孕二烯酮能直接抑制离体培养的大鼠颗粒细胞分泌雌、孕激素;且可能是通过抑制芳香化酶的活性而产生作用。     

溶脲脲原体感染对大鼠睾丸Sertoli细胞FasL表达的影响

溶脲脲原体（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ Ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ,ＵＵ）是泌尿生殖道感染的常见病原体,可导致睾丸明显的病理损伤,且与不育有关。本文以对数生长期的ＵＵ、热灭活ＵＵ和ＵＵ上清液体外感染或作用于大鼠的Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞,观察Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞表面 ＦａｓＬ表达的变化。实验证明,活ＵＵ、热灭活 ＵＵ和 ＵＵ上清感染后,Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞表面 ＦａｓＬ表达均增加,其中以活ＵＵ感染的影响最为明显。提示睾丸组织的免疫豁免与其局部的ＦａｓＬ功能性表达有关;在感染时,Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞通过上调ＦａｓＬ的表达以维持睾丸局部免疫豁免的保护机制。     

Effects of Aging on Ovarian Fecundity in Terms of the Incidence of Apoptotic Granulosa Cells

Purpose: The objective was to determine the effects of women'sage on the ovarian fecundity as assessed by the incidenceof apoptotic granulosa cells. Methods: Twenty-eight normo-ovulatory women underwentovulation induction for standard IVF. The husbands of thesewomen showed severe male infertility factors. The womenwere divided into four groups according to their ages. Womenunderwent follicle aspiration after the administration ofhuman menopausal gonadotropin plus human chorionicgonadotropin. The nuclei of granulosa cells were examinedby using fluorescence microscopy, and the incidence of apoptotic granulosa cells was tabulated. Results: Granulosa cells in the older women revealed asignificant increase in the number of apoptotic cells. Thenumber of total oocytes and the number of mature oocytesobtained significantly decreased with age. However, endometrial thickness and follicular estradiol, progesterone, andfree testosterone levels were not significantly different amongfour different age groups. Conclusions: Age increases apoptotic changes in granulosacells and consequently decreases the ovarian fecundity.     

绿茶提取物对人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的影响及其作用途径

目的:探讨绿茶提取物(green tea extract,GTE)对人卵巢癌SKOV3细胞株生长增殖的影响及其作用途径。方法:应用MTT法观察SKOV3细胞生长增殖的情况;光学显微镜观察SKOV3细胞的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测SKOV3细胞周期及凋亡的情况;DAPI标记法观察细胞凋亡形态变化;Western blotting检测p-ERK1/2、ERK1/2、Caspase-3及Bcl-xl等相关蛋白的表达水平。结果:随GTE浓度的增加及作用时间的延长,SKOV3细胞存活率逐渐降低(P<0.01),SKOV3细胞数目逐渐减少,细胞受损逐渐增多;经GTE(80μg/L)处理24h、48h、72h的SKOV3,G0/G1期细胞比例与对照组比均显著减少(P<0.01),S期细胞比例及sub-G0期细胞比例与对照组比均显著升高(P<0.01),而添加GTE24h后,G2/M期细胞比例与对照组比明显升高(P<0.05);DAPI标记示有典型的凋亡小体;经GTE(40μg/L、80μg/L)作用24h后与对照组比,SKOV3细胞中p-ERK1/2、Bcl-xl蛋白表达下调,p-ERK1/2分别为0.334±0.030、0.053±0.140(P<0.01);Bcl-xl分别为0.410±0.026、0.267±0.020(P<0.01);Caspase-3蛋白分别为0.128±0.090、0.287±0.028,与对照组相比显著升高(P<0.01),而ERK1/2蛋白则未见明显变化(P>0.05)。结论:GTE在体外能有效地抑制SKOV3细胞的生长,其作用途径可能是通过抑制ERK信号通路的转导,导致细胞周期阻滞,并下调Bcl-xl、上调Caspase-3,最终导致SKOV3细胞凋亡。     

Effects of Controlled Ovarian Hyperstimulation on Oocyte Quality in Terms of the Incidence of Apoptotic Granulosa Cells

Purpose: The aim was to investigate which ovarian hyperstimulation protocol performed in the same patients causes development of oocytes of good quality. Methods: Twenty normo-ovulatory women underwent three different controlled ovarian hyperstimulation protocols for in vitro fertilization–embryo transfer. Patients underwent follicle aspiration after administration of human chorionic gonadotropin (hCG). The total number of retrieved oocytes, the number of mature oocytes, and the rate of mature oocytes were examined. Recovered granulosa cells were stained with Hoechst 33258 and examined by fluorescence microscopy to estimate the incidence of apoptotic cells. Results: The total number of oocytes and the number of mature oocytes in gonadotropin-releasing hormone agonist (GnRHa) + human menopausal gonadotropin (hMG) + hCG and hMG + hCG cycles were higher than those in the natural cycle (P < 0.0001). The rate of mature oocytes in hMG + hCG cycle was the highest among the three protocols (P < 0.04). In the mural granulosa cells, the incidence of apoptotic cells in the GnRHa + hMG + hCG cycle was significantly higher than those of the natural (P < 0.002) and hMG + hCG cycles (P = 0.0002). The incidence of apoptotic cumulus granulosa cells in the GnRHa + hMG + hCG cycle was significantly higher than those of natural and hMG + hCG cycles (P < 0.002). Moreover, the incidence of apoptotic cumulus granulosa cells in the hMG + hCG cycle was significantly lower than that in the natural cycle (P < 0.01). Conclusions: These results indicated that hMG + hCG is the most appropriate controlled ovarian hyperstimulation protocol among the three examined with regard to oocyte quality.     

米非司酮对人子宫内膜细胞凋亡及促血管生成因子表达的影响

目的:探讨米非司酮对人子宫内膜细胞凋亡以及促血管生成因子血管生成素1(Ang 1)、血管生成素2(Ang2)、血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞因子(b FGF)表达水平的影响。方法:采用MTS法检测不同浓度米非司酮对子宫内膜细胞的毒性,采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术和Western Blot检测细胞凋亡,并用实时荧光定量聚合酶链反应检测促血管生成因子的表达。结果:米非司酮浓度增加,细胞活力随之减小;米非司酮作用时间增长,细胞活力随之减小,24、48、72小时的IC 50分别为18、15、12μg/ml。与对照组相比,不同浓度的米非司酮对子宫内膜细胞凋亡率显著增加(P0.05),Caspase蛋白表达水平降低。15μg/ml的米非司酮对细胞48小时处理后,与对照组相比,Ang-1和b FGF基因表达水平显著降低(P0.01),而VEGF与Ang-2基因表达水平明显增加(P0.05)。结论:米非司酮能诱导人子宫内膜细胞凋亡,促血管生成因子VEGF与Ang-2的高表达以及Ang-1和b FGF的低表达,这可能是米非司酮治疗围绝经期功能失调性子宫出血的重要机制。     

胰岛素对体外培养小鼠卵巢颗粒细胞Foxo1mRNA表达的影响

目的:研究胰岛素对体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Foxo1mRNA表达的影响.方法:未成熟小鼠卵巢颗粒细胞原代培养,添加不同浓度胰岛素,实时定量PCR(RT-Q-PCR)检测颗粒细胞Foxo1mRNA的表达.结果:RT-Q-PCR证实小鼠卵巢颗粒细胞具有Foxo1mRNA表达,且10ng/ml胰岛素作用30分钟可减少Fox...     

茶多酚对新生大鼠卵巢发育的影响

目的:探讨茶多酚对新生大鼠卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法:受孕11.5dSD大鼠灌胃茶多酚(100mg/kg,qd)直至分娩,分别用多聚甲醛固定出生后1d、2d、4d、8d龄雌仔鼠卵巢(A组),同时将正常出生后1d的雌幼SD大鼠腹腔注射茶多酚(50mg/kg×1-8d),分别固定出生后2d、4d、8d龄卵巢(B组);所有卵巢经HE染色,观察不同发育阶段的卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化方法观察叉头转录因子(FOXO3a)、促凋亡因子(Bim)和抗凋亡因子(MnSOD2)在卵巢组织中的表达水平,并以母、幼均未处理的正常同龄大鼠卵巢为对照(C组)。结果:在茶多酚干预组(包括A组和B组)卵巢内,1d、2d龄未装配卵泡比例及4d、8d龄原始卵泡比例均高于C组;A组、B组中卵母细胞TUNEL阳性率显著低于C组;FOXO3a、MnSOD2在A组的1d、2d、4d龄卵巢中的表达高于C组,但二组间的Bim表达水平相一致。结论:茶多酚能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗,可能有益于延长卵巢的生殖寿命;茶多酚可能通过上调FOXO3a的活性从而抑制原始卵泡的发育启动,同时通过激活其下游靶分子MnSOD2抑制卵母细胞的凋亡,促进卵母细胞的存活。