人淋巴细胞的凋亡与适应性反应

目的:检测小剂量辐射或膜氧化剂处理的淋巴细胞对其后的辐射或膜氧化剂引起的细胞凋亡效应,以确定适应性反应是否改变辐射或膜氧化剂引起人淋巴细胞凋亡的敏感性。方法:自供血者静脉取血,分离出单核细胞,在RPMI1640培养液中培养。在37℃用60Coγ射线适应性剂量0.1Gy(剂量率为0.01Gy·min-1)照射,攻击剂量2Gy(剂量率为1.0Gymin-1)照射离开37℃培养的细胞。膜氧化剂诱导适应性实验,以叔丁基过氧化氢加入细胞悬液内,分别在0℃或37℃培养30min,用冰预冷的培养液洗去药物,再培养一定时间。用DNA解螺旋荧光分析(FADU)和末端转移酶反应测定…     

紫外线照射后哺乳动物细胞DNA的期外合成

本实验用~3H-TdR掺入,液体闪烁测量法测定细胞DNA期外合成的方法,测定了小鼠和大鼠的肠淋巴结细胞、人和大鼠外周血淋巴细胞、S-180V肿瘤细胞等经紫外线照射后的UDS,观察到UDS掺入量随辐照度增加而增加。在同一辐照剂量下,以小鼠肠淋巴结细胞的UDS值最高,其次是人外周血淋巴细胞和S-180V肿瘤细胞,而大鼠外周血淋巴细胞和肠淋巴结细胞最低。     

促有丝分裂原对辐射引起人T淋巴细胞间期死亡的防护效应

辐射引起人T淋巴细胞的间期死亡可因用植物血凝素(PNA)和刀豆素A(Con A)处理而得到保护。先把T淋巴细胞和T细胞亚群(即早T和晚T细胞)同能粘附于玻璃的单核细胞分开,继而用lsopa-que-Ficoll梯度分离法和玫瑰花形成法的联合技术进一步提纯。提纯的T淋巴细胞,先用1%的PHA-M,5μg/ml的Con A或10μg/ml的脂多糖(LPS)处理,然后以0～600伦剂量进行照射,再置于CO_2培养箱中孵育。根据核固缩变化来测定淋巴细胞的死亡,并在照射后20小时时,测定其活存部分。据观察,用PHA处理过的T淋巴细胞的培养物中,细胞活存数比对照培养物高出15～20%。在早T和晚T细胞亚群中,均可看到PHA防护淋巴细胞间期死亡的效应。在辐射引起核固缩变化上,用Con A处理的防护效应,晚T细胞比早T细胞亚群更明显。LPS没有防止早T细胞亚群间期死亡的效应。     

辐射诱导人细胞系CEM、外周血单个核细胞DNA修复基因hHR21~(sp)的表达研究

目的　研究辐射对人T淋巴细胞白血病细胞系 (CEM)、外周血单个核细胞的hHR2 1sp基因转录表达水平的影响及意义。方法　分别对人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和正常人外周血单核细胞在UV或γ辐射后不同时间提取细胞总RNA ,通过RT PCR与hHR2 1sp 基因特异引物杂交 ,以 β actin为内参照放射影像密度扫描检测人T淋巴细胞白血病细胞系CEM、单核细胞DNA修复基因表达。结果　在UV 辐射、γ 辐射后早期 (3～ 6h) ,人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和淋巴细胞hHR2 1sp基因的表达水平明显增加 ,照射后 6hhHR2 1sp基因的表达水平增加最多且UV辐射更明显 ,在晚期 (9h)降低。比较人细胞系CEM和淋巴细胞两者hHR2 1sp基因的表达水平 ,γ辐射 (3Gy)后淋巴细胞对hHR2 1sp基因表达高于人细胞系CEM ,且表达增加时间较长 ,达 9h ;而人细胞系CEM受到γ辐射后早期表达增加 ,在 6～ 9h后表达降低。结论　人T淋巴细胞白血病细胞系 (CEM)和人淋巴细胞的DNA修复基因hHR2 1sp基因在一定剂量辐射 (UV、γ辐射 )范围内其表达水平随辐射剂量增加而诱导表达水平增高 ,且对UV辐射更敏感 ;提示hHR2 1sp基因在人细胞系CEM细胞和人单核细胞在照射损伤后表达增加 ,可能是促进单核细胞损伤修复的原因之一。     

受照射动物外周血淋巴细胞中自发DNA合成活性的变化

受52及103mC/kg照射的绵羊淋巴细胞中出现3H-TdR(税氧胸腺嘧啶核苷)自发掺入DNA增加,受照动物淋巴细胞中自发DNA合成活性改变伴随外周血淋巴细胞中总蛋白量的增加.实验用18只茨冈种母绵羊,γ射线照射31、52及103mC/kg,非照射绵羊淋巴细胞DNA中~3H-TdR自发掺入量为200～1200cpm/10~6细胞.动物适应饲养环境2周后,淋巴细胞DNA中~3H-TdR自发掺入量为428cpm/106细胞,之后则无变化.照射52mC/kg时,绵羊淋巴细胞DNA中~3H-TdR自发掺入量在第5天提高到几乎5倍,7～10天增加到2～3倍,然而受103mC/kg照射动物该指标在照后1～7天增高约5～10倍.还发现52及103mC/kg照射母绵羊淋巴细胞中,总蛋白含量增加,但增加的高峰发生在绵羊淋巴细胞DNA中.~3H-TdR自发掺入量最大增长期以后.因此,照射诱导的淋巴细胞DNA中~3H-TdR自然掺入量增高,不仅是外周血淋巴细胞     

氡及其子体对大鼠免疫器官的影响

目的　通过大鼠吸入氡及其子体后免疫器官的变化 ,初步探讨氡及其子体对免疫系统的影响。方法　雄性SD大鼠吸入氡及其子体的累积剂量分别达 6 6 ,111和 174工作水平月(WLM)后 ,收集支气管肺灌洗液 (bronchoalveolarlavagefluids,BALF) ,观察BALF中细胞计数和分类的变化。采用单细胞凝胶电泳 (Singlecellgelelectrophoresis,SCGE)技术 ,检测胸腺和脾脏细胞DNA链断裂情况。同时了解大鼠脾脏指数的改变。使用RT PCR方法检测BALF细胞中IL 6mRNA的表达情况。结果　大鼠吸入氡及其子体后 ,各暴露组BALF中淋巴细胞比例与对照组相比明显减少 ,而粒细胞增多 (P <0 0 5 )。大鼠暴露达 174WLM后胸腺和脾脏细胞DNA链断裂的迁移长度显著增加。111和 174WLM暴露组的脾脏指数与对照组相比明显降低。 174WLM暴露组BALF细胞中IL 6mRNA的相对表达量显著高于对照组 (P <0 0 1) ,6 6和 111WLM暴露组与对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　在本实验暴露剂量下 ,氡及其子体可改变BALF中淋巴细胞和粒细胞的比例 ,导致胸腺和脾脏细胞DNA的断裂损伤 ,从而影响免疫器官的结构和功能。     

甲状腺滤泡细胞对γ射线与质子照射反应的比较:1.DNA损伤、微核形成、细胞凋亡、细胞存活和细胞周期分布等的基本特征

目的 :研究不同质的辐射对甲状腺滤泡上皮细胞 DNA和染色体损伤、细胞杀死及细胞周期的影响。方法 :大鼠甲状腺细胞 FRTL - 5在 DMEM/ F12培养基中培养 ,以 6 0 Co源照射 0～ 12 Gy(剂量率 1.5 Gy/ min)和同步加速器产生的 2 5 0 Me V质子照射 (剂量率约 0 .7Gy/ min)。照射后不同时间收获 FRTL- 5细胞。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素 (FITC)共轭溴脱氧尿苷 (Brd U)参入核酸的自由 3′端 ,以激光扫描细胞仪测量 DNA链的断裂 ;用胞质分裂阻断方法测定微核 ;以荧光素共轭 annexin V标记 ,用激光扫描细胞仪测定细胞凋亡 ;用…     

电离辐射和过氧化氢诱导中国仓鼠卵巢(CHO)细胞DNA损伤效应的比较

目的 :阐明在过氧化氢 (H2 O2 )和电离辐射的作用下 ,DNA损伤的诱导、修复和细胞失活之间的关系。方法 :1CHO- 10 A细胞在α基本培养基加胎牛血清培养 ,指数生长 ,用 3H -胸苷标记 (2 .2× 10 3Bq/ml)。 X线照射细胞 ,剂量率 4Gy/m in。用一定浓度 H2 O2 的培养基经 4℃、30min培养细胞后 ,多次冲洗。2细胞种植于培养皿中 ,8d后经乙醇固定并染色 ,大于 5 0个细胞的群落作为存活者。 3单链断裂 (ssb) :DNA培养液换 5 m l碱性溶液 ,避光 30 min,用2 ml HCl溶液阻止 DNA变性 ;2 ml DNA悬液进行超声波处理 ,再加 1.2 m l的 1%十二烷…     

用泛端粒PNA和全染色体特异DNA探针联合FISH检测人淋巴细胞完全和不完全染色体互换

人们已经观察到辐射诱导的染色体畸变中有明显的不完全易位存在。由于一些易位片段太小,可能不会被荧光原位杂交(FISH)的全染色体染色所检测到,因此,研究了用泛端粒肽核酸(PNA)探针和全染色体DNA特异探针的联合FISH检测辐射诱导的人淋巴细胞完全和不完全染色体互换。方法:培养人淋巴细胞52h后,用氚β射线对细胞进行0.9Gy的低剂量照射,剂量率为0.019Gy/h。在中期用RNA酶处理,然后用乙酸和甲醇(1∶3)固定30min,接着用KCl、蛋白酶K处理,4%的多聚甲醛固定10min。变性后,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的端粒PNA探针杂交1.5h,再用对1、2…     

WR-2721对免疫反应性T淋巴细胞的放射防护作用

S-2-(3-氨基丙基氨基)乙基硫代磷酸(WR-2721)保护正常组织抗电离辐射,而对实体瘤只有微弱保护或无保护作用。根据这种差异和该化合物在人体中毒性低,认为WR-2721在放疗病人中可减轻正常组织的损伤。因为辐射有明显的免疫抑制作用,故对免疫系统的化学防护有特殊的价值。典型的放射防护剂对急性致死率是有效的,但不保护免疫系统。Yuhas发现WR-2721保护小鼠脾空斑形成细胞(复合的T细胞依赖性B细胞终点)是高效的(DMF=3.46)。近来认为T淋巴细胞对肿瘤的排斥和再生长比B淋巴细胞更重要。作者研究W     

照射后人肿瘤细胞系DNA合成的抑制和恢复

本文分析8种人肿瘤细胞系对γ射线诱导DNA合成抑制与恢复的敏感性,这些细胞在辅射诱导DNA双链断裂的频度与DNA双链断裂的重结合方面有所不同.研究的5种鳞癌和3种肉瘤细胞株,在完全培养基中加入7.4×10~2Bq/ml~(14)C-TdR,培养36～48小时至细胞呈指数增长后,在无放射性培养基中继续培养4～6小时,然后加3.7×10~(4)Bq/ml~?H-TdR,脉冲标记10分钟,最后收集细胞,分成两等份,将每一份的DNA沉淀到分离滤器上,以~?H和~(14)C的每分钟计数(cpm)之比来估算DNA的合成率.     

X线照射大鼠离体胸腺、脾细胞后核质体粘度的变化

辐射诱发的DNA损伤和修复,不仅影响到多聚核苷酸链,对DNA的超螺旋也有作用.本文通过对大鼠胸腺(T)细胞和脾(S)细胞核质体粘度和沉降率的检测,比较了经X线照射后,T、S细胞DNA超螺旋的损伤和修复.实验用的T、S细胞取自雌性Sprague-Dawley大鼠,悬浮于无Ca~(++)、Mg~(++)的Hank's液中(25×10~6细胞/ml).制备好的细胞悬液应尽快用于照射,辐照采用西门子710H X线机,剂量率为1.75Gy/min,一次照射剂量范围为0.6～19.2Gy,对照用模拟照射,研究修复现象的细胞照射后应在37℃下温浴适     

外源一氧化氮对大鼠胰岛细胞损伤机制研究

目的：研究外源NO对胰岛细胞的损伤机制和功能的影响。方法：采用DNA电泳技术以及单细胞电泳检测NO对胰岛细胞的凋亡和DNA的损伤作用；通过测定胰岛素含量检测胰岛细胞在NO作用下的合成和分泌功能。结果：外源NO能导致胰岛细胞DNA的断裂形成彗星细胞，DNA电泳显示典型梯状条带，大剂量NO形成死亡条带；同时NO能抑制胰岛细胞合成和分泌胰岛素。结论：外源NO可导致胰岛细胞凋亡、DNA断裂损伤并抑制其合成分泌胰岛素的功能。     

室内氡暴露居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率

目的：观察室内氡暴露居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率。方法：采用单核细胞凝胶电泳和微核检测两种方法。观察了我国甘肃省窑洞内氡暴露居民及对照居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率。结果：窑洞和普通住房居民（室内空气中氡浓度分别为200－350Bq.m^－3及37．5-77.1Bq.m^－3)的细胞迁移发生率分别为1．68％和1．43％，人发生细胞迁移百分别为57．1％和54．3％。50岁以上窑洞和普通住房居民细胞迁移和人发生细胞迁移率分别为2．14％、75．0％和2．00％、64．7％。窑洞和普通住房居民微核细胞发生率分别为1．07％和0．78％。结论：窑洞居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率略高于普通住房居民，P值接近0．05。     

低剂量照射TK6和U937细胞的效应:诱导p53及其对细胞周期延迟和适应性反应的作用

目的 :研究小剂量辐射对 TK6 (含有野生型 p5 3的淋巴母细胞 )和 U937(p5 3突变的单核粒细胞白血病细胞 )细胞周期的影响和诱导对随后大剂量的适应性反应。方法 :TK6和 U 937细胞系在 RPMI 16 40培养液中悬浮培养。所有实验接种密度为 2× 10 5 / ml的细胞悬液 ,在实验前 2 0 h照射 ,用剂量率为 0 .75和 0 .88Gy min- 1 的 6 0 Coγ射线 ,第一次照射诱导剂量 ,随后在不同时间给与攻击剂量。细胞周期分布和周期素用双色流式细胞仪测定。用 Western-blot方法测量 p5 3和 p2 1。用胞质分裂阻滞技术测定微核。按核质破碎和浓缩等核形态学…     

氯霉素所致再生障碍性贫血发病机理的研究

用造血细胞GM-CFU、F-CFU培养及淋巴细胞姐妹染色体互换(SCE)研究了11例氯霉素所致再障贫血(CAP-AA)的发病机理。所有病人的GM-CFU、F-CFU明显低于正常(P<0.01),多数不生长。1例检出有抑制正常GM-CFU生长的细胞活性。病人SCE频率明显高于正常(P<0.01)。证实CAP-AA的发病机理系CAP在遗传素质敏感个体中直接损伤细胞DNA,使造血干细胞和微环境联合缺陷所致。     

DNA损伤在电离辐射诱导凋亡中的重要性:重度联合免疫缺陷突变和DNA倍体对小鼠淋巴细胞系辐射敏感性的影响

目的 :通过研究重度联合免疫缺陷 ( scid)突变和 DNA倍体对电离辐射诱导小鼠淋巴细胞系凋亡敏感性的影响 ,判定 DNA损伤是否是凋亡的关键始动因子。方法 :采用γ射线 ( 1 3 7　 Cs,剂量率约为 0 .9Gy/ min)或DNA相关的 1 2 5 　 I衰变 (细胞在培养基内培育约 2 4小时 ,其中含 5 0～ 10 0 Bq/ m l的 1 2 5 　 I-碘代脱氧尿苷 )比较野生型及 scid纯合或杂合突变小鼠前 B和前 T细胞系在照射后致死的敏感性和凋亡产生速率。用小鼠前 T细胞系假 2倍体和倍体克隆研究 DNA倍体的不同对细胞的辐射敏感性和凋亡的影响。应用荧光显微镜观察凋…     

质膜是辐射诱发损伤和死亡的一种敏感靶子:超微结构研究

辐射诱发电泳泳动率、膜运输功能和膜受体的变化是由于质膜的损伤或其局部形态学的变化所引起。本文用50、100,500R X线在体外照射正常人外周血淋巴细胞、来源于人支气管癌的上皮细胞株(AT-264)以及由Burkitt氏淋巴瘤培养的细胞株(Raji)。照射后15分钟、1小时、3小时制样,用电镜观察辐射诱发该三类人的细胞质膜损伤的超微结构变化,为照射后质膜功能的生化和生物物理变化提供形态学证据。结果如下:(1)外周血淋巴细胞:50R照射后15分钟质膜出现局限性隆起,一些细胞质膜出现裂孔。100、500R照射后15分钟,细胞表面质膜隆起范围扩大,并     

电离辐射剂量率、照后培养时间和生长因子对人外周血淋巴细胞克隆存活和以凋亡为特征的分裂间期细胞死亡的影响

目的 :通过人外周血淋巴细胞凋亡和增殖细胞死亡观察剂量率、照后恒温培养时间和生长因子对电离辐射诱导的分裂间期细胞死亡的作用。方法 :将健康成人静脉血淋巴细胞在 RPMI 16 40培养基中培养 16 d。开始培养 6 d换半液 ,随后每隔 2 d换液 1次 ,经流式细胞仪检测 96 %～ 97%的细胞处于 G0 期。用高剂量率 (HDR,45 Gy/ h)或低剂量率 (L DR,0 .0 2 4Gy/ h)的 1～3Gy1 3 7　 Csγ射线照射 G0 期淋巴细胞。在 3Gy L DR组开始照射的第 1天 ,同时进行 HDR组照射 (HDR1) ,并在 3Gy L DR组结束照射的第 6天进行另一组 HDR照射 (HDR6…     

狗淋巴细胞经 PHA 刺激后的环一磷酸腺苷含量及辐射的影响

淋巴细胞受~(60)Coγ线照射后 DNA 合成能力受到明显抑制。值得注意的是,周围血的淋巴细胞在受照射时并不处在活跃的周期中,而是处在静止状态。经过非特异性的促分裂素 PHA 的刺激,2天后才开始有 DNA的合成,也在这时才表现出 DNA 合成的障碍。因此,照后即刻,细胞内潜在损伤如何经过一定时间发展表现为 DNA 合成的抑制是值得探讨的问题。