p38MAPK与心肌缺血/再灌注损伤的研究进展

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是丝裂原活化蛋白激酶家族中的重要成员,可以激活一系列发挥重要作用的细胞反应,如炎症反应及细胞的增殖、分化、凋亡和侵袭。心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)是体外循环术后心肌损伤的重要原因,其发生不仅与氧化应激、细胞凋亡等因素有关,而且与心肌胰岛素抵抗(MIR)有关。p38MAPK不仅与心肌的氧化应激、细胞凋亡有密切的关系,在MIR中也通过影响葡萄糖转运蛋白4的表达和转位而发挥重要作用。目前,针对MIRI的发病机制采取的治疗措施均不能发挥较好的保护作用。故对p38MAPK在MIRI中的作用进一步研究,可能为p38MAPK作为预防和治疗MIRI理想的靶点提供更合理的依据。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤后的磷酸化及其意义

目的:观探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化及其意义.方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型.将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=6)和缺血再灌注组(n=24),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2,12,24,72 h等4个时间段(每时间段6只).应用Western Blot法检测视网膜组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白的表达变化.结果:p38 MAPK在缺血再灌注组各时间点的视网膜组织内的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无统计学上的变化(P＞0.05).p-p38 MAPK的表达水平在缺血再灌注组12 h时即有明显升高,24 h时达到高峰,72 h时仍维持较高的表达水平,与正常对照组相比有统计学著差异(P＜0.01).结论:p38 MAPK信号通路的激活可能与缺血再灌注所造成的视网膜损伤有密切关系.     

糖尿病心肌对缺血/再灌注损伤敏感化及其线粒体机制的研究进展

糖尿病患者的心肌保护问题一直备受关注。糖尿病心肌对缺血再/灌注损伤敏感化会削弱一些心肌保护措施的效果,这可能是糖尿病患者心肌缺血事件高发和高病死率的重要原因。糖尿病患者由于氧化应激、胰岛素抵抗等原因,导致心肌对缺血/再灌注损伤的敏感性增高。抑制线粒体的氧化应激可以有效减轻心肌缺血/再灌注损伤,对糖尿病心肌有保护作用,但其作用机制尚不清楚。     

p38／Fas／FasL对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用

目的探讨p38／Fas／FasL对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用。方法SD大鼠20只随机分成2组（假手术组、模型组）,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,30min后剪断结扎线制作心肌缺血再灌注模型。对心肌组织进行苏木精一伊红（H—E）染色,观察心肌组织病理变化;免疫印迹（WesternBlotting）检测Fas、Fas配体（FasL）、p38促分裂素原活化蛋白激酶（p38MAPK）以及磷酸化p38MAPK（P—p38MAPK）在缺血再灌注心肌组织中的表达;TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡模型。结果H—E染色结果显示,模型组心肌纤维变性;Western Blotting结果显示模型组大鼠心肌组织中Fas、FasL、p38MAPK及P—p38MAPK蛋白的表达明显增高;TUNEL结果显示模型组的心肌组织中细胞凋亡明显增多。结论心肌缺血再灌注时Fas、FasL、p38MAPK和P—p3SMAPK表达明显增多,且与细胞凋亡率呈正相关,提示心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡可能是通过激活Fas／FasL／p38MAPK途径实现的。     

p38抑制剂对缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的探讨p38抑制剂对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响。方法将44只大鼠随机分为4组:对照组(9只)、缺血组(15只)、缺血再灌注组(10只)和干预组(10只)。对照组大鼠只暴露心脏,缺血组大鼠制备心肌缺血模型,缺血再灌注组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,干预组大鼠在左冠状动脉前降支结扎前30 min注射p38抑制剂SB20358(100μg·kg-1),其余操作均与缺血再灌注组一致。观察各组大鼠心肌组织形态学变化及心肌组织中p38、c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)水平的变化。结果对照组大鼠心肌组织中未检测到p38、ERK1/2和JNK蛋白。缺血组缺血60、90 min时大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著高于缺血30 min时,差异均有统计学意义(P<0.05);各个时间点,干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著低于缺血组和缺血再灌注组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着再灌注时间的延长,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平逐渐降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。随着缺血和再灌注时间延长,缺血组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有升高,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MAPK中p38参与心肌缺血再灌注损伤,但JNK和ERK1/2的作用不显著。     

异氟烷预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶水平的影响

 目的 探讨异氟烷预处理对心肌缺血再灌注大鼠心肌p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）水平的影响。方法 雄性Wistar大鼠90只,体重270~390 g。腹腔注射硫代仲丁巴比妥钠150 mg/kg麻醉后,阻断左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h,建立心肌缺血再灌注损伤模型。取60只大鼠,随机分为6组（n=10）,于缺血前CON组静脉注射0.9%生理盐水;SB组经3 min静脉注射p38 MAPK抑制剂SB203580 1.5 mg/kg;DMSO组经3 min静脉注射SB203580溶剂DMSO 0.2 mL;ISO组吸入1.0MAC异氟烷30 min后停止吸入15 min;SB+ISO组和ISO+SB组分别在吸入异氟烷前即刻和吸入异氟烷后即刻静脉注射SB203580 1.5 mg/kg。再灌注2 h后采用氯化硝基四氮唑蓝染色法测定心肌梗死面积。取剩余的30只大鼠,随机分为5组（n=6）,CON组、SB组、ISO组、SB+ISO组和ISO+SB组所有处理同前。缺血前即刻、再灌注后2 h即刻取心肌标本,采用Western blot法测定p38 MAPK的表达水平。结果 与CON组比较,SB组、ISO组、SB+ISO组和ISO+SB组心肌梗死面积降低（P<0.05）。再灌注后的CON组和ISO组p38 MAPK水平高于缺血前CON组（P<0.05）。结论 异氟烷预处理和p38 MAPK抑制剂SB203580对心肌有保护作用,但p38 MAPK未参与异氟烷预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制。     

依布硒啉通过调节MAPK通路发挥心肌缺血再灌注保护作用的研究

目的 研究依布硒啉对心肌缺血再灌注的保护作用及与MAPK通路的相关性。 方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为假手术组(Sham)、缺血再灌注对照组(IR-Control)、依布硒啉+缺血再灌注组(Ebselen+IR)和依布硒啉组(Ebselen)。建立心肌缺血再灌注模型。通过HE染色观察及组织学损伤评分评价各组心肌凋亡坏死情况,Elisa法测定血清TNF-α、IL-6、组织TGFβ1表达情况,蛋白免疫印迹法测定各组MAPK通路相关蛋白表达情况。 结果 相较于缺血再灌注对照组,依布硒啉预处理后显著降低了再灌注所导致的心肌坏死、炎症和水肿,在组织学损伤评分上分值更低,依布硒啉预处理显著降低了缺血再灌注所造成的TNF-α上升(P<0.05)及IL-6、TGFβ1的上升(均P<0.01)。缺血再灌注损伤组的JNK和p38的磷酸化水平较假手术组显著增加,p-JNK上升了0.34±0.06,p-p38上升了0.42±0.10,p-ERK1/2下降了0.35±0.07,均P<0.001。缺血再灌注+依布硒啉组则减轻了由缺血再灌注所造成的磷酸化JNK和p38的上升与ERK1/2水平的降低,p-JNK下降了0.17±0.05(P<0.001),p-p38下降了0.16±0.03(P<0.01),p-ERK1/2提高了0.09±0.02(P<0.05)。 结论 依布硒啉处理可有效发挥心肌缺血再灌注保护作用,其具体机制可能与MAPK通路调节相关。      

p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠肠缺血再灌注肺损伤中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在小鼠肠缺血再灌注肺损伤的作用。方法10周龄健康雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血再灌注+SB239063处理组(SB239063组),SB239063组于术前1h腹腔注入p38MAPK抑制剂SB239063(3mg/kg),另两组注入等量生理盐水。采用夹闭C57BL/6小鼠肠系膜前动脉45min后再灌注6h的方法造成肠缺血再灌注损伤模型。处死小鼠取肺标本,蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化p38MAPK蛋白水平,RT-PCR检测肺组织TNF-α和IL-1βmRNA表达,H-E染色观察肺组织病理学改变。结果肠缺血再灌注导致明显肺损伤,肺组织p38MAPK活化明显增加,TNF-α和IL-1β基因表达水平明显升高(与假手术组比较P<0.01);SB239063可抑制肺组织p38MAPK活化,减轻小肠缺血再灌注引起的肺损伤,并下调肺组织TNF-α和IL-1βmRNA表达(与缺血再灌注组比较P<0.05)。结论p38MAPK在小鼠肠缺血再灌注肺损伤中起重要作用,抑制p38MAPK活化可减轻肠缺血再灌注肺损伤。     

p38MAPK对大鼠肾缺血再灌注损伤早期MMP-9表达的调控

目的 探讨p38MAPK对大鼠肾缺血再灌注后MMP-9表达的调控情况及它们在肾缺血再灌注损伤中的作用.方法 48只健康雄性SD大鼠,分组建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,测定各组实验大鼠血清肌酐水平的变化,应用免疫组化二步法检测p38MAPK、MMP-9表达的变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注各组血清肌酐水平升高,缺血45min再灌注,24h达高峰(P＜0.01).MMP-9蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血45min再灌注6h有少量表达,再灌注12、24h及72h呈阳性表达,在24h达高峰(P＜0.01);p38MAPK蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血45 min,再灌注6、12h及24 h呈阳性表达,12h达高峰(P＜0.01).p38MAPK,MMP-9蛋白的表达与血清肌酐水平的变化呈显著正相关.结论 肾缺血再灌注可激活p38MAPK,活化的p38MAPK可以上调MMP-9蛋白的表达,可能促进了肾缺血再灌注损伤的发生和发展.     

川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠p38MAPK和TNF-α表达的影响

目的:探讨川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法:30只Wistar大鼠被随机分为3组:假手术组、缺血再灌注损伤(IR)组、川芎嗪预处理组(LI).建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,应用酶联免疫吸附法,测定心肌TNF-α和IL-6水平;用免疫组化S-P法,检测p38MAPK蛋白的表达.结果:LI组与IR组比较,TNF-α、IL-6均显著降低(P＜0.01),p38MAPK蛋白阳性表达显著减弱(P＜0.01).结论:川芎嗪可降低p38MAPK的活性,抑制TNF-α和IL-6的表达而发挥心肌保护作用.     

TNF-α在MODS鼠心肌中的表达及p38MAPK的调控作用

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在多器官功能障碍综合症(MODS)鼠心肌损伤中的作用及D38MAPK的调控机制。方法采用盲肠结扎并穿刺(CLP)来制作MODS模型。在不同时相点观察大鼠血清生化指标(GPT、BUN、Cr、CPK-MB)、TNF-α浓度及其mRNA在心肌的表达、心肌p38MAPK的活性。结果CLP术后血清TNF-α浓度进行性升高,CPK-MB显著提高。正常心肌组织不表达TNF-αmRNA,MODS时可见大量表达,且p38MAPK明显激活。血清TNF-α的水平及其mRNA在心肌中的表达与CPK-MB呈显著正相关。直用p38MAPK抑制剂SB203580后,p38MAPK激活受抑,血清TNF-α浓度显著降低,TNF-α在心肌中的表达减少,心肌损害明显减轻。结论TNF-α的大量释放及其在心肌中显著表达是MODS鼠心肌损伤的原因之-,通过调控p38MAPK信号通路可对心肌起保护作用。     

肺缺血再灌注损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)活性的变化及意义

目的探讨肺缺血再灌注损伤时丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）活性的变化规律及意义。方法取健康Sprague-Dawley大鼠建立在体肺缺血再灌注模型,左肺门夹闭30min,复灌0、10、30、60、90、120min,采用蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测肺组织中3种丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）：ERK（extracellular signal regulated protein kinase,ERK1／2）、JNK（c—Jon NH2-terminal protein kinase,JNK）和p38MAPK在假手术对照（Sham）组、缺血30min和缺血后再灌注不同时间点的活性变化。结果与假手术对照组相比,ERK、JNK的活性随缺血和再灌注时间的延长而逐渐升高直到复灌120min。p38的活性只在缺血及缺血早期激活而在复灌30rain后活性恢复至假手术对照组水平。缺血／再灌注各时点组间ERK、P38、JNK蛋白水平差异无统计学意义（P＞0．05）。结论3种丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）在肺缺血再灌介导细胞凋亡中发挥不同的作用。     

来氟米特活性代谢产物A771726对高糖诱导足细胞凋亡的抑制作用

目的 观察来氟米特活性代谢产物A771726对高糖诱导足细胞凋亡的影响,探讨来氟米特对足细胞损伤的保护作用及可能的机制.方法 条件永生的人肾小球足细胞系分为正常糖组、高糖组、甘露醇高渗对照组、高糖+SB202190[p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路特异性抑制剂]组及高糖+A771726(来氟米特活性代谢产物)组.Western印迹法检测足细胞p38MAPK及磷酸化p38MAPK(p-p38)活性;流式细胞仪检测足细胞凋亡率.结果 (1)高糖刺激足细胞激活p38MAPK信号通路,p-p38蛋白表达明显增加,正常糖组和高渗对照组仅有少量p38活化;SB202190组及A771726组p-p38蛋白表达量较高糖组明显下降.(2)流式细胞仪检测到高糖刺激足细胞24 h后可见细胞凋亡增加,48 h凋亡最为明显,为(18.6±0.7)%,显著高于正常糖及高渗对照组;SB202190组及A771726组足细胞凋亡率较高糖组分别下降26%和17%,差异有统计学意义.结论 来氟米特活性代谢产物A771726能够减少高糖所致的足细胞凋亡,机制可能与其抑制p38MAPK活化相关.

Abstract：

Objective To explore the therapeutic effects of leflunomide metabolite A771726 on high glucose-induced podocyte injury and understand its mechanism.Methods The conditionally immortal human glomeroular podocytes were divided into nomal glucose group (NG) ,high glucose group (HG),mannitol group (MA),high glucose with SB202190 (a p38MAPK inhibitor) group and high glucose with active leflunomide metabolite A771726 group.The levels of p38MAPK and p-p38 protein were determined by Western blot.And the rate of podocyte apoptosis was evaluated by flow cytometry.Results (1) Podocytes with high glucose could activate the p38MAPK signaling pathway.The p-p38 protein expression was significantly elevated.Little activation of the pathways was observed in Groups NG and MA.As compared to HG,the p-p38 protein expression was significantly lowered in SB202190 and A771726 groups.(2) Apoptosis increased in podocytes with high glucose after 24 h.The apoptotic rate of group HG was the most dramatic at 48 h(18.6 ±0.7)%.It was significantly higher than those of Groups NG and MA.The group of high glucose with SB202190 and high glucose with active leflunomide metabolite A771726 could reduce the podocyte apoptosis by 26% and 17% respectively versus the HG group.And the difference was statistically significant.Conclusion Leflunomide can inhibit high glucose-induced podocyte apoptosis.And this effect may be involved in its inhibition of activation of p38MAPK.     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞中p38MAPK表达的影响

目的探讨辛伐他汀对p38信号通路在人脐静脉内皮细胞中表达的影响，以期阐明其在防治糖尿病大血管并发症中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，分别以糖尿病特有因素：高葡萄糖、高胰岛素、糖基化终末产物(AGE)和过氧化氢刺激人脐静脉内皮细胞，同时用辛伐他汀进行干预，用ELISA法检测不同刺激及干预因素条件对HUVEC中p38MAPK磷酸化蛋白表达的影响。结果高葡萄糖、高胰岛素、AGE和过氧化氢均可激活p38MAPK，使其磷酸化表达量增加，辛伐他汀可抑制p38MAPK磷酸化蛋白表达增加。结论辛伐他汀在预防糖尿病大血管并发症的作用机制中，可能与p38MAPK有关。     

P38MAPK在妊娠期糖代谢异常大鼠肾脏组织中的表达

目的初步研究P38MAPK在妊娠期糖代谢异常大鼠肾脏组织中的表达水平。方法选取雌性sD大鼠60只,雄性SD大鼠15只,分为高糖高脂饮食-孕鼠组（SFP）和非孕鼠组（SFV）,普通饮食一孕鼠组（NP）和非孕鼠组（NV）。相应组分别受孕,于妊娠第20天四组大鼠心内取血,检测血糖、胰岛素水平,并计算胰岛素抵抗指数。用RT—PCR法检测大鼠肾脏组织中P38MAPK的表达水平。结果SFP组的空腹血糖值、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数与其他三纽相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）,证明妊娠期糖代谢异常大鼠模型建立成功;P38MAPK mRNA在肾脏组织中有表达,并且：①P38MAPKmRNA在SFP组的表达水平明显升高,与其他三组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。②P38MAPKmRNA在SFV组和NP组的表达水平均升高,但是二者之间差异无统计学意义（P〉0．05）。⑧P38MAPK mRNA在SFV组和NP组的表达水平与NV组相比升高明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论P38MAPK可能参与了妊娠期糖代谢异常疾病的肾脏损伤过程。     

P38信号通路与糖尿病特有因素关系的探讨

目的：探讨P38信号通路(P38MAPK)在糖尿病大血管并发症中的作用。方法：分别以糖尿病特有因素：高葡萄糖、糖基化终产物(AGEs)、高胰岛素和过氧化氢刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，观察HUVECs P38MAPK磷酸化蛋白表达。结果：高葡萄糖、AGES、高胰岛素和过氧化氢均可做为独立因素激活P38MAPK，使其磷酸化表达量增加。结论：高葡萄糖、AGES生成增多、高胰岛素和氧化应激是糖尿病患者合并大血管并发症的易患因素；P38MAPK可能在糖尿病大血管并发症的发生、发展中起关键作用。     

兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛诱导海马组织p38 MAPK磷酸化

目的: 观察蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)模型中海马组织内p38 MAPK及其磷酸化的时相变化特点,初步探讨CVS导致缺血性脑损伤的分子机制. 方法: 用Western blot方法检测兔SAH后CVS时海马组织内p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白的表达变化.结果: p38 MAPK在SAH组各时间点的海马组织内的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无明显变化(P > 0.05).p-p38 MAPK的表达水平在SAH组1 d时即有明显升高,4 d时达到高峰,7 d时仍维持较高的表达水平,与正常对照组相比有显著差异(P < 0.01),分别是其在正常组海马组织中表达水平的3.1,7.9和6.2倍.结论: p38 MAPK信号通路的激活可能与SAH后CVS所造成的海马神经元的损伤有密切关系.