化学材料修饰红细胞非ABO系统血型抗原的研究

目的　考察甲氧基聚乙二醇 (mPEG)衍生物与红细胞膜蛋白共价结合 ,遮蔽红细胞上的非ABO系统的血型抗原的效果。方法　选择 3种端基的mPEG衍生物 (mPEG BTC、 NHS、 ALD)修饰红细胞 ,分别观察它们对红细胞抗原性、形态结构及功能的影响。结果　携带BTC端基的mPEG遮蔽抗原效果较好 ,并对红细胞结构、功能、变形性无影响 ;而且修饰后的红细胞无叠连现象 ,红细胞沉降率 (ESR)有所降低。结论　mPEG修饰后的红细胞在解决临床输血中经常遇到的偏型、血型、配型困难等问题具有重要的研究价值     

mPEG-SPA对红细胞A、B抗原的遮蔽及稳定性初步研究

目的探讨mPEG-SPA修饰对A、B、AB三种血型红细胞上A、B抗原的遮蔽效果及稳定性。方法采用合适浓度的mPEG-SPA修饰不同血型红细胞,并分别保存在O型血浆中以观察红细胞凝集情况、保存在原血浆和MAP液中以测定游离血红蛋白。结果连续保存45d,显微镜下观察mPEG-SPA修饰的红细胞在O型血浆中未见凝集,在原血浆中保存21d时血浆游离血红蛋白≤0.29g/L;在MAP液中保存35d时游离血红蛋白≤1g/L。结论在保存期内,经mPEG-SPA化学修饰的A、B、AB三种血型红细胞的抗原遮蔽效果稳定、游离血红蛋白指标均符合临床输血要求。     

甲氧基聚乙二醇遮蔽猕猴红细胞表面类人B抗原的研究

目的　观察mPEG对猕猴类人B抗原的修饰效果及mPEG修饰后的红细胞给动物输血的安全性。方法　用 3mg/ml的mPEG修饰遮蔽猕猴红细胞表面的类人B血型抗原 ,吸收放散法检测猕猴血型及mPEG对猕猴红细胞血型的修饰结果 ;红细胞变形仪等检测mPEG修饰对红细胞的变形能力、结构与功能的影响 ;荧光素标记 ,自体回输实验检测红细胞存活率 ;异体回输实验观察修饰后红细胞对受血猴的血液、尿液的影响。结果　mPEG修饰可以遮蔽猕猴类人B抗原的抗原性 ,不影响所修饰红细胞结构、功能及体内存活 ;mPEG修饰的类人B型红细胞输给类人A型血的猕猴 ,未发生输血反应 ;受血猴的血细胞、血液生化及尿液各项指标与输血前相比 ,无明显变化。结论　mPEG修饰可遮蔽猕猴红细胞表面类人B抗原的抗原性 ,mPEG修饰红细胞在受血猴体内是安全的。     

甲氧基聚乙二醇遮蔽红细胞表面抗原制备通用型血液的初步研究

目的 :探讨mPEG遮蔽红细胞表面抗原、制备通用型血液的可能性。方法 :使用mPEG修饰人红细胞 ,观察其对红细胞的影响。结果 :随着mPEG剂量的增高 ,红细胞的A、B和D抗原逐步减弱。在一定浓度下mPEG修饰不影响红细胞的形态、结构、功能及变形性 ,然而高浓度的mPEG修饰可能会使红细胞寿命缩短。结论 :尽管还有很多问题需要解决 ,mPEG修饰法制备通用型血液具有进一步研究的价值     

甲氧基聚乙二醇修饰改造RhD(+)血型的初步研究

Rh血型与ABO血型一样是重要的血型系统，Rh血型不符会引起严重的输血反应及新生儿溶血病。中国人群中RhD阴性血型的比例仅为0．2％-0．5％，将RhD阳性红细胞改造成RhD阴性红细胞在临床输血中有重要的意义。本研究用4种不同端基的甲氧基聚乙二醇(mPEG)，修饰A型、B型、AB型和O型的RhD( )红细胞，比较4种mPEG衍生物对RhD抗原的修饰效果。同时观察mPEG修饰对红细胞形态、结构和功能的影响。结果表明，mPEG—BTC(苯并三唑端基PEG)较其他3种PEG的修饰效果好，在1mmol／L时可以有效地遮蔽红细胞表面RhD抗原，而对红细胞形态、渗透脆性、自身溶血、乙酰胆碱酯酶、胆固醇、ATP、2，3-DPG含量以及变形性无影响。结论：初步实现了将RhD( )红细胞修饰改造成RhD(-)红细胞的目的。     

甲氧基聚乙二醇修饰红细胞解决自身免疫性疾病所致配血困难研究

目的观察红细胞(RBC)经甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)修饰后对血型抗原的遮蔽作用,评估其解决自身免疫性疾病等所致配血困难的效果。方法以mPEG-SPA体外修饰正常人RBC,用微柱凝胶血型卡检测对A、B、RhD、RhC、RhE血型抗原的免疫遮蔽作用,并比较不同分子量不同浓度mPEG-SPA的遮蔽效果;观察修饰前后RBC的变形性、渗透脆性、自身溶血率,判断修饰对RBC功能的影响;比较修饰前后自身抗体阳性患者血清与相同ABO血型标本交叉配血时的凝集情况。结果mPEG-SPA修饰不影响RBC的变形性、渗透脆性、自身溶血率等特性,对A和B血型抗原基本没有遮蔽作用,而分子量20000的mPEG-SPA浓度达2mmol/L或分子量10000的mPEG-SPA为6mmol/L时,能有效地遮蔽RhD、RhC和RhE抗原,可有效消除受血者自身抗体和其他相应抗体所致的凝集现象。结论mPEG-SPA修饰可有效遮蔽Rh血型抗原并解决自身抗体所致的配血困难。     

mPEG修饰红细胞的动物实验

本研究采用异硫氰酸荧光素标记鼠、猕猴、猪和人的修饰与未修饰自体和异体红细胞（RBC）并给小鼠和猕猴实施输注，观察回输体内RBC24小时存活率的变化和差异。结果发现：未修饰小鼠RBC在小鼠体内24小时存活率为74％，2．0mmol／Lm PEG—SPA修饰的小鼠RBC在小鼠体内24小时存活率为45％，两者间有显著差异；未修饰人RBC在小鼠体内24小时存活率为8％，2．0mm01／Lm PEG—SPA修饰人RBC在小鼠体内24小时存活率为5％，两者间无显著差异，修饰的猕猴RBC自体回输后24小时的存活率大于90％，而修饰的人RBC和猪RBC在给称猴回输后2小时其存活率已降至零。结论：RBC标记方法及不同种实验小鼠的选择对小鼠实验结果影响不大，但mPEG种类和浓度对鼠RBC寿命的有一定程度影响。用鼠RBC做自体回输来评价mPEG修饰人RBC的中mPEG是否影响人红细胞的寿命是不可靠的，修饰人RBC回输给小鼠可以作为评价修饰人RBC寿命和安全性的动物模型， 大哺乳动物异种RBC输注很难观察到修饰RBC的存活率和寿命长短。适合评价修饰人RBC寿命和安全性的大动物模型有待于进一步探索。     

马来酰亚胺苯甲氨酯聚乙二醇修饰膜蛋白掩盖AB和RhD抗原制备通用血型红细胞

聚乙二醇（PEG）上的活性基团结合在红细胞表面掩盖血型抗原是制备通用血型红细胞的途径之一，这些PEG链有很强的水合作用，能覆盖红细胞表面的大片区域，阻断血型抗原与抗体结合。甲基氧PEG-5000（mPEG-5000）是常用的红细胞修饰剂，主要修饰蛋白上的氨基基团。在氯化氰脲酸（CnCl）催化下，mPEG-5000与红细胞膜上氨基形成共价键连接，掩盖Rh抗原和A或B抗原。CnCl—PEG-5000浓度越高，血型抗原的覆盖效果越好。由于微环境下A和B血型抗原处无氨基基团或者氨基基团不能被CnCl—PEG-5000修饰，不能完全阻断抗-A、B与A和B血型抗原结合。本文报道用马来酰亚胺苯甲氨酯聚乙二醇（Mal—Phe—PEG）修饰红细胞A、B和RhD抗原的方法。     

mPEG修饰解决血型匹配困难的体外研究

本研究的目的是通过nPEG修饰红细胞表面抗原以期找到一种解决临床疑难配血的方法。收集了含高效价抗体及发生临床配血困难病例的血清共29例，分析了病因及所含的抗体，并采用1．0mmol／L的mPEG-BTC与献血者红细胞混合，25℃孵育1小时，用聚凝胺法和抗人球蛋白法检测对比mPEG修饰前后的红细胞与29例血清的凝集情况。结果表明：临床配血困难及血清含高效价抗体的病例主要发生在血液系统疾病和肿瘤及新生儿溶血病产妇，所含的抗体主要是Rh血型系统的抗体和自身抗体。1．0mmol／L mPEG-BTC修饰的红细胞后，不会与这些病例血清中的抗体发生反应，达到了临床配血输用的要求。结论：mPEG修饰红细胞可能是解决临床输血血型匹配困难的一种有效方法。     

异种输血--猕猴受输猪红细胞的初步研究

本研究的目的是改造猪红细胞（pRBC）表面抗原，使之与灵长类动物相容，以探讨异种输血的可能性。结合使用α半乳糖苷酶（AGL）酶解和甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰改造猪红细胞表面异种抗原，并输注给猕猴，观察pRBC在猕猴体内活存时间及安全性；使用免疫抑制剂（蛇毒因子CVF和地塞米松）延长pRBC在猕猴体内的存活时间；建立失血性贫血猕猴模型，观察输注pRBC治疗失血性贫血猕猴的可能性。结果表明：AGL酶解能够去除猪红细胞表面主要异种抗原（α—Gal抗原），减弱其与猕猴血清的凝集反应，酶解技术与mPEG修饰技术结合可以使猪红细胞与猕猴血清更为相容。异种输血试验表明，双修饰的pRBC在猕猴体内存活时间为12小时，使用免疫抑制剂后，可延长至40小时；pRBC在猕猴体内8小时的存活率为38％，在输注pRBC的8小时内，失血猕猴的血红蛋白和红细胞压积可维持在失血前的正常水平。结论：改造后的pRBC可安全地输注给猕猴，改善失血猕猴的贫血症状．提示用猪红细胞进行异种输血是可能的。     

Decreased immunorejection in unmatched blood transfusions by attachment of methoxypolyethylene glycol on human red blood cells and the effect on D antigen

BACKGROUND: Pegylation of red blood cells (RBCs) has been the primary focus of research on the immunocamouflage of cell. The aim of this study was to demonstrate pegylation homogeneity, its shielding effect on D antigens, and its storage stability. In addition, methoxypolyethylene glycol (mPEG)-modified RBCs (mPEG-RBCs) were tested serologically against a panel of serum samples that was difficult to match to find a solution to the difficulty in matching. STUDY DESIGN AND METHODS: In this study, fluorescein-PEG and a confocal laser scanning microscope were used to monitor PEG attachment on RBC population and observe reaction homogeneity, the stability of mPEG combined with RBCs in vitro was evaluated by the RBC ghost agglutination test, the pegylation sites on membrane were determined by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis with two dye methods, and the effect of pegylation on D antigen was detected by immunoblotting techniques. Compatibility tests were carried out between 66 cases of serum with difficulty in blood matching and mPEG-camouflaged RBCs by use of four blood matching methods including direct agglutination, indirect antiglobulin test (IAT), microtyping gel cards (MTS), and the manual polybrene technique (MPT). RESULTS: The results indicated the homogeneity of pegylation, the absence of RhD protein in mPEG-modified D+ RBCs by Western blotting, and attachment of PEG to RBCs after 30 days of storage, while RBCs still remained antigenically silent. All pegylation RBCs showed a negative reaction with ABO-matched patients' serum samples by direct agglutination, IAT, and MTS, which indicated that pegylation RBCs and patients' serum samples were compatible. MPT was not suitable for detecting blood matching of mPEG-RBCs, because modification changed the RBCs' biophysical properties. CONCLUSION: In conclusion, mPEG-RBCs have acceptable in vitro properties and provide a useful solution to problems with clinical blood matching, although such masking leaves much to be desired.     

聚乙二醇衍生物修饰红细胞的保存性能研究

目的 评估经甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)修饰后红细胞(RBC)的保存性能.方法 以mPEG-SPA体外修饰健康人RBC;观察修饰前后RBC的变形性、渗透脆性、自身溶血率、磷脂酰丝氨酸和CD59,评估修饰对RBC保存性能的影响.结果 mPEG-SPA修饰后RBC的变形性略有下降、渗透脆性和自身溶血率有所增加;修饰后红细胞磷脂酰丝氨酸表达明显增加;红细胞CD59的表达严重下降,其表达率几近于零.结论 mPEG-SPA修饰后红细胞的保存性能下降,可能影响修饰后红细胞的寿命和输入体内的存活率.     

受血者与供血者Rh(D、C、c、E、e)抗原相容情况的回顾性分析

目的 了解我院受血者及其供血者Rh(D、C、c、E、e)抗原和表型分布,分析受、供者Rh抗原相容情况及其临床意义.方法 收集交叉配血相合的受血者血样418例和供血者血样710例,进行Rh(D、C、c、E、e)抗原检测,比较分析受、供者抗原和表型分布差异及抗原相容性.结果 受、供者Rh(D、C、c、E、e)抗原分布无显著...     

DePEGylation studies: PEG-RBC stability in conditions consistent with massive transfusion

Each year the United States population receives an estimated 12 to 14 million units of packed red blood cells (RBCs) and whole blood. It is estimated that 33% of transfusions associated with trauma are with unmatched type O RBCs (UORBC). UORBCs have been proven effective and relatively safe however, by masking RBC surface antigens the risk of transfusion reaction may be further decreased. It is, therefore, important to evaluate and validate the stability of antigen masked RBCs, which may play a part in avoiding transfusion reactions. These antigen-masked RBCs would be regularly subjected to abnormal in vivo conditions commonly associated with massive transfusion such as lactic acidosis, bacteremia, and in vitro irradiation, which is frequently used to sterilize and decrease T Lymphocyte counts in RBC units before transfusion. This study compared two methods of masking RBC antigens by PEGylation: maleimide-PEGylation and cyanuric chloride-PEGylation. RBC PEGylation effectively masks the Rh(D) antigen and PEG-RBC bond stability was evaluated by comparison of pre and post exposure agglutination with anti-D sera. While the stability of maleimide-PEG-RBCs remained unaffected, the cyanuric chloride-PEG-RBCs remained stable in the bacteremia and irradiation studies, but critical concentrations of lactic acid caused dePEGylation. Further studies are warranted to ensure in vivo stability.     

电子配血技术对减少输血患者Rh血型系统同种抗体产生的意义

目的 探讨电子配血技术应用对减少受血者Rh血型同种抗体产生的意义.方法 将本院2018年1月1日-2020年3月31日期间住院且仅输注去白悬浮红细胞的Rh(D)阳性的患者(22 528人,将电子配血符合优先级Ⅰ级、Ⅱ级的患者21 334人设为对照组,将符合优先Ⅲ级的患者共1 194人设为试验组,对用血者和献血者进行AB...