β淀粉样前体蛋白裂解酶1在大鼠颈上神经节组织中的表达

目的 观察β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)在大鼠颈上神经节的表达和定位,及慢性间歇性低氧(CIH)对BACE1表达水平的影响。方法 采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测颈上神经节BACE1的表达及分布。16只雄性SD大鼠随机分为对照(control)组和CIH组,每组8只,模型制作2周,RT-PCR检测CIH对BACE1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)mRNA水平的影响。结果 BACE1表达于大鼠颈上神经节,主要分布于卫星胶质细胞和神经纤维,而在血管、神经元和小强荧光(SIF)细胞不表达。CIH下调BACE1 mRNA水平,上调PGC-1αmRNA水平(P<0.01)。结论 BACE1定位于大鼠颈上神经节卫星胶质细胞和神经纤维;BACE1水平降低可能参与调节CIH诱导的颈上神经节突触的可塑性。     

淀粉样前体蛋白β位分解酶1与β-淀粉样蛋白在糖尿病大鼠脑组织中的表达及行为学相关性

目的观察糖尿病大鼠脑组织淀粉样前体蛋白β位分解酶1(BACE1)、β-淀粉样蛋白(Aβ)的表达,探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病中的作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分为正常组(N组)、假手术组(S组)、4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组)。穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测大鼠认知行为学改变,免疫组织化学法、免疫印迹法、RT-PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测BACE1;ELISA法检测Aβ在糖尿病大鼠脑组织中的表达,用图像分析仪测定吸光度值。结果M组大鼠的电击次数、学习和记忆潜伏期时间显著延长(P0.01),主动逃避次数显著降低(P0.01);ELISA法检测Aβ1-40和Aβ1-42显示糖尿病模型鼠脑组织内Aβ1-40水平明显增高,从正常组的(64.13±6.76)pg/mg升至模型组的(86.43±7.03)pg/mg(P0.001);Aβ1-42也明显升高,从正常组的(67.43±5.12)pg/mg升至(89.45±5.28)pg/mg(P0.001);糖尿病模型鼠脑组织内BACE1水平显著增高,ELISA法从正常组的(116.46±8.10)pg/mg升至模型组的(158.73±6.24)pg/mg(P0.001)。免疫印迹法吸光度值从正常组的0.61±0.11升至模型组的1.52±0.16(P0.001),RT-PCR法吸光度值从正常组的1.62±0.26升至模型组的3.61±0.32(P0.001),免疫组织化学法吸光度值从正常组的0.81±0.21升至模型组的2.01±0.36(P0.001)。BACE1和Aβ表达水平与学习和记忆负相关。结论BACE1和Aβ在糖尿病大鼠脑组织表达增高,糖尿病糖代谢异常增强BACE1和Aβ表达,参与了阿尔茨海默病的发病机制。     

内皮素-1介导循环间歇性低氧影响大鼠颈动脉体可塑性的机制

目的 探讨内皮素-1（ET-1）介导循环间歇性低氧（CIH）影响颈动脉体可塑性的潜在分子机制。 方法（1）动物实验：将32只雄性SD大鼠随机分为2组,常氧对照组（Con）和循环间歇性低氧模型组（CIH）,每组16只。模型制作21d后,将每组（Con和CIH）16只大鼠再分为2组,分别予尾静脉注射ET-1（1×10^-6 mol/kg体重）或按照上述剂量计算的等体积生理盐水。30 min后,收集颈动脉体,采用Western blotting检测相关信号通路分子蛋白水平的变化。（2）器官培养：离体培养颈动脉体组织,ET-1（1×10^-4 mol /L）处理不同时间（0 min、10 min、60 min）,通过Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）磷酸化水平。 结果 （1）CIH上调颈动脉体内皮素受体A（ET-A）和ET-B蛋白的表达;（2）与其他各组相比,ET-1可显著上调CIH大鼠颈动脉体磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）、p-p38 MAPK、磷酸化的钙调蛋白激酶Ⅱ（p-CaMKⅡ）、磷酸化的环磷腺苷效应元件结合蛋白 （p-CREB）磷酸化水平和RhoA蛋白表达水平;（3）ET-1上调离体器官培养的颈动脉体p-p38 MAPK磷酸化水平,10 min较60 min明显。 结论 ET-1可能通过PKA/p38 MAPK/CaMKⅡ/CREB和RhoA信号通路调控CIH诱导的颈动脉体可塑性。     

大鼠原发性脑于损伤延脑淀粉样β蛋白及其蛋白前体的表达

目的 探讨早期诊断原发性脑干损伤(PBSI)中弥散性轴索损伤(DAI)的敏感标记.方法 应用免疫组织化学SP法及RT-PCR技术研究在大鼠原发性脑干损伤模型中,延脑DAI与淀粉样β蛋白(Aβ蛋白)的表达及淀粉样β前体蛋白(β-APP)mRNA的半定量分析,以此来评估进行DAI早期诊断的有效性.结果 免疫组化Aβ染色神经轴突测量3～24 h损伤组,轴突明显增粗,并且稳步增加,与对照组相比差异均有统计学意义,并且与时间呈正相关,β-APPmRNA表达增加最早从1 h损伤组开始,并于3 h达到高峰.结论 β-APP是DAI的敏感性和特异性标记,RT-PCR技术是一种快速的和敏感的方法,再结合免疫组化技术检测Aβ蛋白,可能对早期诊断DAI是非常有效的.     

β-淀粉样前体蛋白分子生物学研究进展

β-淀粉样前体蛋白基因定位于21号染色体长臂,具“管家基因”结构特点。在组织中广泛表达但有一定的特异性。其近侧启动子区(-96～+101)为转录活性所必需,研究发现β-淀粉样前体蛋白基因表达调控由多种顺式元件和反式因子的相互作用所决定。β-淀粉样前体蛋白呈细胞表面受体构象,具有多种生物学功能。业已证明其分子生物学功能的改变与Alzheimer's病的发生、发展有着十分密切的关系。     

低氧对SH-SY5Y细胞miR-124及BACE1蛋白表达的影响

目的研究低氧对培养细胞miR-124及β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)蛋白表达的影响。方法培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),分为对照组、氧-糖剥夺组、Aβ1-42处理组、过表达或抑制miR-124组,用实时定量PCR方法检测miR-124表达,Western blot法检测BACE1蛋白表达。结果氧-糖剥夺处理48 h,细胞内miR-124表达水平明显下降,仅为对照组的46.9%(P0.05),BAE1蛋白表达水平与较对照组增高36%(P0.01);转染miR-124过表达组组细胞内miR-124表达水平较对照组增高245倍(P0.01),为miR-124过表达对照组的219倍(P0.01),BACE1蛋白表达水平较对照组下降了29%(P0.05),较miR-124过表达对照组下降25%(P0.05)。转染miR-124抑制剂组miR-124表达水平下降至对照组的45.4%(P0.05),至miR-124抑制对照组的48%(P0.05),BACE1表达水平较对照组升高21%(P0.05),较miR-124抑制对照组升高40.3%(P0.01);细胞经Aβ1-42处理24 h,miR-124表达水平较对照组下降52%(P0.05),BACE1蛋白表达水平较对照组增高51%(P0.05)。结论低氧通过降低SH-SY5Y细胞miR-124表达进而升高BAEC1蛋白表达,且可能在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)早期发病中发挥作用。     

淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响

背景:淀粉样蛋白β在人体组织中广泛存在,它的异常表达与阿尔茨海默症、骨质疏松等多种慢性炎症性疾病密切相关.研究表明淀粉样蛋白β在人椎骨和股骨中沉积并引起骨质破坏,但关于淀粉样蛋白β低表达对骨代谢的影响尚不清楚.目的:探讨淀粉样蛋白过表达及低表达对小鼠骨代谢的影响.方法:纳入12月龄淀粉样蛋白β过表达的APPswe+/+...     

寒冷应激对大鼠肾上腺髓质亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在大鼠肾上腺髓质的超微结构定位,以及寒冷应激对大鼠肾上腺髓质HAP1表达的影响. 方法 成年雄性Wistar大鼠14只,2只用于免疫电镜研究,12只用于寒冷实验研究.寒冷实验中,将动物随机分为对照组和寒冷组,每组6只,寒冷组动物放置4℃环境下,12h后用免疫组织化学和Western blotting方法 检测大鼠肾上腺髓质HAP1表达的变化. 结果 免疫电镜结果 显示,HAP1免疫反应产物分布在肾上腺髓质细胞分泌颗粒外膜及分泌颗粒间的膜性细胞器上.寒冷组大鼠肾上腺髓质HAP1的表达明显减少,和对照组比较有显著性差异( P <0.01). 结论 HAP1可能与肾上腺髓质细胞内分泌颗粒及位于分泌颗粒内的肾上腺素/去甲肾上腺素的运输和释放有关.     

β-位点淀粉样前体蛋白剪切酶-1 与阿尔茨海默病

作为老年型痴呆的最主要类型,阿尔茨海默病 (Alzheimer disease,AD)的病理学特征主要为大腩局部尤其是海马和皮质(颞叶和额叶)神经元退行性病变,包括细胞外淀粉样斑或称为老年斑;神经纤维缠结;神经元与神经突触异常丢失.     

慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽的影响

目的 研究慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽(Aβ)及淀粉样前体蛋白(APP)表达和分布的影响. 方法双侧颈总动脉结扎大鼠制作慢性脑血流低灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40、Aβ1-42的表达与分布;刚果红染色检测血管的淀粉样变;放射免疫分析法检测手术后10d、30d、90d和180d大鼠脑皮质及海马的Aβ含量;免疫印迹法检测大脑皮质和海马的APP含量. 结果 免疫组织化学染色显示低灌注90d模型组海马CA1区APP、Aβ1-40的表达较对照组明显增加(两者均P<0.05),低灌注180d模型组皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40和Aβ1-42的表达均增加(除皮质Aβ1-40P<0.01外,其余均P<0.05);Aβ1-40阳性反应产物均匀分布于胞质内,Aβ1-42阳性反应产物在神经元胞质内呈颗粒状聚集.刚果红染色显示,术后180d脑实质内小血管发生淀粉样改变.放射免疫分析法和免疫印迹法结果显示,大鼠术后90d海马Aβ和APP含量开始增高(两者均P<0.05),180d皮质Aβ和APP的含量增高(Aβ P<0.05,APP P<0.01). 结论 慢性脑血流低灌注可引发大鼠脑内Aβ含量的升高,可能在阿尔茨海默病(AD)早期发病过程中有重要意义.     

搭建基于ROCKS的计算机集群系统虚拟筛选β位淀粉样前体蛋白分泌酶1抑制剂

目的 搭建价格便宜的计算机集群用于大规模药物虚拟筛选β位淀粉样前体蛋白分泌酶1(BACE-1)抑制剂.方法 对32台普通个人计算机(PC)进行安装部署Rocks4.3集群操作系统,使用系统自带的默认资源管理软件Sun Grid Engine(SGE),利用AutoDock 4.0在PC集群上进行大规模的虚拟筛选BACE-1抑制剂.结果 针对老年性痴呆发病的关键酶BACE-1成功地虚拟筛选了Sigma公司100000个小分子化合物数据库,发现了2个具有开发潜力的苗头化合物.其解离常数分别为303.36和1.79 nmol/L,半数抑制浓度为(91.0±3.5)和(73.0±4.8)μmol/L.结论 利用普通计算机集群系统可以象高性能计算机一样完成药物虚拟筛选工作.     

β淀粉样前体蛋白在难治性癫痫患者脑组织中的表达及其临床意义

目的研究β淀粉样前体蛋白(βAPP)在难治性癫痫(RE)患者脑组织中的表达及其临床意义。方法免疫组织化学染色法检测43例RE患者与5例非癫痫患者脑组织中βAPP的表达水平及其与临床特征的关系。结果βAPP在RE患者脑组织中的表达明显高于非癫痫患者(P0.05),表达水平与病理类型、手术预后有关(P0.05),βAPP水平高者术后再发作的可能性更高,而与性别、年龄、病程、发作频率和类型、病变部位无关(P0.05)。结论βAPP参与难治性癫痫的发生发展,可作为手术预后的判断指标。     

淀粉样前体蛋白基因的分子遗传学和分子生物学

淀粉样前体蛋白 (amyloid precusor protein,APP)是 Aβ(β- am yloid peptide,Aβ)的前体蛋白。后者是阿尔茨海默疾病 (Alzheimer's disease,AD)最主要的病理标志。 APP突变后增加神经毒性蛋白 Aβ42 / 43的表达量 ,从而导致家族性 AD(FAD)的发生。本文综述了 APP的基因结构、功能、突变体的类型及基因突变的病理学后果 ,同时追踪了如下两方面的研究进展 :1Aβ产生的途径 ;2 APP代谢的调控机制     

淀粉样前体蛋白在痴呆模型大鼠背海马结构内的表达

研究用ＡｌＣｌ３灌胃，建立鼠老年性痴呆模型。用免疫细胞化学ＡＢＣ法，观察了淀粉样前体蛋白在背海马结构的表达。结果显示在痴呆模型鼠背海马结构双侧各部均可见较强的淀粉样前体蛋白表达，且与对照组间有显著性差异。光镜结果，阳性反应产物主要位于神经元核周质和突起及其分支。细胞大小不等，多数淀粉样前体蛋白样免疫反应阳性神经元胞体为梭形和锥形。背海马结构内淀粉样前体蛋白样免疫反应神经元主要分布在ＣＡＩ、ＣＡ２、     

嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内降低β淀粉样蛋白沉积

目的 观察嗅鞘细胞移植入淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠脑内后的存活和迁移状况及其对模型β淀粉样蛋白沉积的作用,以进一步探索嗅鞘细胞移植对阿尔茨海默病的治疗效果.方法 取自发绿色荧光蛋白的新生3d龄增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠,体外分离培养嗅球嗅鞘细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照AP小鼠脑立体定位图谱,将收集的嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内.移植1个月后,取脑组织冷冻切片,在双光子共焦显微镜下观察细胞存活和迁移状况并采集图像.移植1个月后,行荧光免疫组织化学和免疫印迹法检测淀粉样蛋白沉积,每组4只.结果 嗅鞘细胞移植入APP转基因小鼠脑内存活良好,并以移植点为中心向外迁移,部分绿色荧光细胞呈现成血管现象,移植之后APP转基因小鼠脑内的β淀粉样蛋白沉积减少,APP表达明显减少(P<0.05).结论 嗅鞘细胞对减少APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白沉积有一定帮助.     

不同浓度十二烷基磺酸钠在提取甲醛固定石蜡包埋组织β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1 中的作用

目的:探索从甲醛固定、石蜡包埋(formaldehyde-fixed,paraffin-embedded,FFPE)的脑组织中提取β-淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)的有效方法.方法:将大鼠 FFPE 脑组织分别加入不同浓度十二烷基磺酸钠(SDS,0%,0.5%,1%,2%和4%)提取 BACE-1,新鲜大鼠腩组织作为对照组.提取的 BACE-1 蛋白量采用 Western blot 进行检测.结果:未用SDS 处理的同定组织提取不到 BACE-1,随着 SDS 浓度的逐渐升高,同定组织中提取的 BACE-1 蛋白也逐渐增加,4%SDS处理的 FFPE 组织与新鲜组织提取的 BACE-1 蛋白量没有明显差别.结论:SDS 处理是 FFPE 组织提取 BACE-1 的必需条件,高浓度(4%)SDS 处理是 FFPE 组织提取 BACE-1 的一种有效方法.     

β淀粉样蛋白1-42对大鼠海马神经元树突棘的影响

目的:研究β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对于原代培养的大鼠海马神经元树突棘形态和数量的影响.方法:将原代培养的新生大鼠海马神经元随机分为对照组(control)和Aβ1.42处理组(Aβ1-42),用浓度为500 nmol/L的Aβ1-42处理细胞,应用免疫荧光染色检测树突棘上大脑发育调节蛋白(drebrin)的...     

神经节苷脂GM1促进Alzheimer病长β-淀粉样蛋白(βA4_(42))分泌以及干扰β-淀粉样蛋白前体(APP)代谢

与短β┐淀粉样蛋白（βＡ４４０）比较，长β┐淀粉样蛋白（βＡ４４２）在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病老年斑生成中具有更重要的作用。本研究发现神经节苷脂ＧＭ１同时促进人类β┐淀粉样蛋白前体基因转染细胞βＡ４４０和βＡ４４２分泌，这种促进作用不具有突出的选择性。此外，本研究亦证明ＧＭ１干扰β┐淀粉样蛋白前体细胞内代谢并抑制其分泌片断的跨膜释放，β┐淀粉样蛋白前体的代谢异常也有利于βＡ４的生成。以上结果进一步提供了ＧＭ１有可能参与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病脑病理变化的实验证据。     

高表达人淀粉样前体蛋白降低SH-SY5Y细胞M胆碱受体结合

目的观察阿尔茨海默病致病相关基因淀粉样前体蛋白(APP)基因的高表达致高度生成,对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性及M和N胆碱受体功能的影响,探讨β-淀粉样肽(Aβ)生成增加对细胞胆碱功能的作用。方法采用Lipofectamine 2000试剂盒将携带野生型人APP基因的pCMV695质粒转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中。以ELISA方法测定Aβ生成量。取稳定高表达Aβ细胞的克隆,用放射免疫法测定ChAT的活性;放射配基结合测定M、N乙酰胆碱受体结合。结果与未转染APP的SH-SY5Y细胞相比,当Aβ生成量为对照的2~2.6倍时,SH-SY5Y-APP细胞中未观察到明确的细胞毒性形态学改变;ChAT活性无明显变化,但细胞M受体结合降低18.5%~21.8%(P<0.05);N受体结合未出现明显变化。结论单纯Aβ产生增加就可通过影响M受体结合功能而引起脑内胆碱能功能障碍。     

17α雌二醇对转基因细胞株(APP/PS1N2a)β-淀粉样蛋白生成的影响

目的 探讨17α雌二醇（ESUB>2/SUB>α）对稳定表达人β-淀粉样前体蛋白（APP）/早老因子-1（PS1）即APP /PS1基因的神经母细胞瘤细胞株（Neuro-2a）（APP/PS1 NSUB>2/SUB>a）β-淀粉样蛋白（Aβ）产生的影响及可能机制。方法 将APP/PS1 NSUB>2/SUB>a细胞用10×10SUP>-9/SUP> mol/L E2α预处理2d,更换培养液后,分别进行如下处理：1.加入不同浓度ESUB>2/SUB> a（25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L）和溶媒（对照组）,用免疫印迹法(Western blotting)检测APP/PS1 NSUB>2/SUB> a细胞内和细胞外的Aβ蛋白水平及细胞BACE1蛋白水平;2.加入 100nmol/L ESUB>2/SUB>α、20nmol/L葡萄糖和5mIU葡萄糖氧化酶（GOX）。24h后,进行二氢乙啶(DHE)染色观察APP/PS1 N2a细胞中活性氧（ROS）含量的变化。结果 不同浓度E2α（25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L）处理后,细胞外Aβ蛋白水