人子宫内膜癌细胞系的建立及其生物学特性研究

目的：建立人子宫内膜癌细胞系，为子宫内膜癌体外实验提供研究材料。 方法： 将人子宫内膜癌手术标本移植于BALB/C（nu/nu）裸鼠皮下，成瘤后对移植瘤原代培养，进行传代。 结果： 建立子宫内膜癌细胞系，取名EAC，成功传代至51代.该细胞系生长快，稳定传代，形态学特征符合腺上皮恶性肿瘤细胞特征。染色体检查为超二倍体。雌孕激素受体检查阴性。P53、MDM2表达阴性。致瘤率100%，移植瘤病理学特征与原细胞系相似。 结论： 成功建立人子宫内膜癌细胞系，为开展人类子宫内膜癌基础和临床研究提供了理想实用的模型。     

人食管癌细胞系的建立及其转移相关基因PCNA的表达

目的:建立人食管癌细胞系,并对其肿瘤标志物(caycinoembryanic antigen,CEA)和转移相关基因增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达进行研究。方法:将人食管癌手术标本移植至裸鼠皮下,成瘤后取组织块体外原代培养,光镜和电镜观察细胞形态,测定细胞周期和染色体众数。取部分裸鼠皮下移植瘤接种至裸鼠食管,观察裸鼠体内肿瘤转移特征,采用免疫组化法测定肝转移灶PCNA基因的表达。结果:裸鼠皮下移植瘤组织16d,可形成明显的瘤结节,体外培养获得大量的肿瘤细胞,命名为YXA-1,其形态和超微结构符合鳞状细胞癌的形态学特征,染色体保持人类肿瘤染色体的特点,众数为70～76,细胞中肿瘤标志物CEA。食管癌标本原位移植裸鼠21d时,发生了广泛的肝内侵袭和转移,转移灶中PCNA表达为阳性。结论:人食管癌细胞系YXA-1维持了原发肿瘤的特征,而裸鼠其原位移植模型体现了肿瘤的转移特性,可用于肿瘤的转移研究。     

食管癌耐药皮下移植瘤裸鼠模型建立

 [摘要] 目的 建立食管癌耐药裸鼠模型及探讨食管癌耐药机制。方法 4周龄的BALB/c nu/nu裸小鼠36只随机分组分为6组,每组6只,左前肢肩胛下皮下分别接种食管癌细胞Eca109及食管癌耐药细胞Eca109/ABCG2,建立裸鼠皮下移植瘤模型。成瘤后腹腔注射阿霉素（Adriamycin, ADM）,1、4mg/kg,1次/3d 共注射7次,空白对照组使用生理盐水(normal saline, NS)代替ADM。RT-PCR方法检测移植瘤细胞中三磷酸腺苷结合转运蛋白G2（ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2）mRNA 表达情况,流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测移植瘤细胞中ABCG2蛋白、凋亡及细胞中ADM含量。结果 成功建立裸鼠食管癌耐药细胞移植瘤模型,皮下接种细胞一周后成瘤,成瘤率100%。实验结束后,注射ADM药物的裸鼠,接种Eca109/ABCG2细胞的皮下移植瘤体积、重量和ABCG2 mRNA、蛋白表达量显著高于接种Eca109细胞移植瘤（P<0.05）,但细胞凋亡率及细胞内ADM含量显著降低（P<0.05）。结论 接种Eca109/ABCG2细胞的裸鼠皮下移植瘤模型是较好的食管癌耐药动物模型,具有ABCG2耐药表型,为研究ABCG2与食管癌耐药关系提供了较理想的动物模型。     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤淋巴转移模型的构建与筛选

目的构建人肺腺癌的裸鼠皮下移植瘤模型,探讨不同注射部位对肿瘤生长和淋巴转移的影响。方法 20只BALB/c裸鼠随机分为4组,每组5只。分别于左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下注射A549细胞株,建立人肺腺癌移植瘤模型,考察各组裸鼠肿瘤生长和淋巴结转移情况。结果各组裸鼠成瘤明显,模型构建成功。背部近腋窝种植2组裸鼠肿瘤比后肢和爪垫种植的肿瘤出现时间早,生长速度快(P<0.05)。左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下移植瘤的淋巴结转移率分别为41.7%、42.9%、23.1%和21.4%。其中左侧背部近腋窝注射最为方便。结论裸鼠左侧背部近腋窝皮下注射A549细胞操作方便,肿瘤易生长,淋巴转移率高,是构建人肺腺癌皮下移植瘤淋巴转移模型的优选方案。     

高转移人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性

用人卵巢癌细胞系HO－8910移植探鼠，建立高转移人卵巢癌探鼠皮下移植瘤模型命名为（NSMO），已传代23次，仍保持高转移的特性。共接种BALB/c棵小鼠57只，皮下成瘤率为100％，平均带瘤存活时间为159．9天。在解剖47只裸鼠中有转移瘤鼠42只（89．4％）。最早出现转移的时间为56天。移植瘤组织学和超微结构保持原来人卵巢分化差的浆液性乳头状囊腺癌的形态特征和分泌功能。流式细胞术分析显示DNA指数为1．4，染色体分析显示众数为54（属于超二倍体），显示人类癌症的特征。移植瘤相关标记物检测显示大多数癌细胞雌激素受体和孕激素受体阳性。该模型为转移机制的研究和寻找抗转移药物提供了理想的工具。     

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的观察昆明山海棠总生物碱(total alkaloids oftripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法18只Balb/c裸鼠建立人结肠癌HCT116细胞皮下移植瘤模型,瘤体积增至约100mm3时,随机分为对照组、THHta-1(100mg/kg)和THHta-2(200mg/kg)组,实验期间观测皮下移植瘤生长情况及裸鼠体重的变化,计算肿瘤相对增殖率及瘤重抑制率;取肿瘤组织及肝、脾、肾等行病理组织学检查;免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)在肿瘤组织中的表达。结果THHta-1组和THHta-2组裸鼠肿瘤体积和重量显著降低,平均抑瘤率为60.4%和80.2%,治疗第21天两组相对肿瘤增殖率均<40%;THHta-1组和THHta-2组肿瘤组织中PCNA阳性细胞率显著低于对照组(P<0.01)。THHta致裸鼠体重减轻但裸鼠肝、脾、肾等组织未见明显病理学改变。结论THHta抑制人结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长,具有体内抗结肠癌活性,其作用...     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。方法BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×106个.0.2m l-1.只-1,观察肿瘤生长情况,45d处死。瘤组织作病理及电镜检查;取裸鼠周围血作甲胎蛋白(AFP)的检测;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。     

人恶性胶质瘤细胞裸鼠脑原位移植瘤FPR表达与VEGF关系

目的观测甲酰肽受体(formylpeptide receptor,FPR)在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞裸鼠脑原位移植瘤组织中的表达,以及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,探讨FPR在恶性胶质瘤血管生成过程中的作用。方法培养U87细胞,以立体定向注射技术制作U87裸鼠脑原位移植瘤模型;采用间接免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下分别观测FPR在U87细胞和移植瘤组织的表达;免疫组化方法检测VEGF在U87细胞裸鼠脑移植瘤上的表达。结果培养的U87细胞及其原位移植瘤组织均可见FPR表达,定位于瘤细胞胞膜,VEGF阳性着色主要位于胞质,两者阳性表达程度呈正相关性。结论人恶性胶质瘤细胞系U87细胞裸鼠脑原位移植瘤组织存在FPR表达,与VEGF的产生密切相关,在胶质瘤血管生成过程中可能起重要作用。     

长必安协同顺铂抑制裸鼠移植瘤生长和转移的研究

中药长必安冲剂是一个新研制的抗肿瘤转移中药 ,为证实其在高转移人卵巢癌裸鼠移植瘤模型中具有抗肿瘤和抗转移疗效 ,我们进行裸鼠体内实验性治疗 ,为临床肿瘤病人应用中药长必安提供实验依据。一、材料和方法1 中药长必安冲剂 :浙江省中医药研究院研制。方剂由黄芪、龟板、白术、鳖甲、川芎、益母草、山楂组成。2 裸鼠与肿瘤接种 :42只 5～ 6周龄雄性ＢＡＬＢ/Ｃ ,ｎｕ/ｎｕ裸小鼠 ,体重 2 0～ 2 7ｇ(购自中国医学科学院上海药物研究所 ) ,在每只鼠右肋部皮下用 1ｍｌ针管接种高转移人卵巢癌裸鼠皮下移植癌模型[1] 第 2 1代移植瘤组织匀浆…     

大鼠肝癌细胞系N1不同途径造模及比较

目的观察大鼠肝癌细胞系N1经肝、脾原位接种后肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生与转移等情况,比较及筛选适宜的HCC N1发生及肺转移动物模型。方法 N1细胞进行体外培养。24只8周龄雌性BALB/c A裸鼠随机分为2组(12只/组)并分别进行N1的肝、脾原位接种,观察并比较两组间小鼠的存活率,肝、脾成瘤及肝、肺转移率等肿瘤生物及病理学特征。结果 N1细胞肝原位接种组肝成瘤率为100%,肿瘤呈结节状生长,与腹壁及周围组织有不同程度的粘连侵袭,肺及肺门淋巴结转移率分别为44%和22%,未见脾转移。N1细胞脾原位接种组脾成瘤率为64%,肝转移率为91%,肿瘤呈结节状生长,与腹壁及周围组织亦有不同程度的侵袭粘连,肺及肺门淋巴结转移率均为18%。结论 N1细胞肝、脾原位接种均易成瘤,是良好的HCC发生、发展及相关干预的动物模型,其中,肝原位接种鼠可能更适合于HCC发生与肺转移机制及药物干预等研究。     

Importance of orthotopic implantation for human tumors as model systems: relevance to metastasis and invasion

Transplantation of human tumors into immunodeficient athymic nude mice has become an important experimental approach to study the biology and the treatment of human cancer. Most human tumor xenograft experiments have employed subcutaneous injection procedures, but the main limit of this technique is the lack of metastasis from the subcutaneous site. The possibility of producing experimental metastasis by intravenous injection of cells in the animals has been known for a long time, and it has been recently reported that tumorigenic properties and metastatic ability of human cancer can be altered by transplantation of the tumor into its organ or tissue of origin in the recipient animals (orthotopic transplantation). In this paper we review (1) the principal techniques of orthotopic injection of most solid tumors, (2) the most recent techniques to achieve experimental metastases, and (3) the methods for preparing tumor cell suspensions from human surgical specimens suitable for transplantation into animals. These animal models should be used for a more appropriate evaluation of new antitumor treatments including the ones targeted to inhibit metastatic spread.     

人鼻咽癌CNE－2Z细胞的不同转移潜能克隆株在严重联合免疫缺陷小鼠体内的检验和比较研究

将人类鼻咽癌不同克隆株的细胞悬液移植在严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠的颈背侧皮下，５６ｄ后处死全部动物进行观察。结果发现，在ＳＣＩＤ小鼠体内移植后ＣＮＥ２Ｌ２为高转移克隆株，其淋巴结转移率为１００％，肺转移率为７１％；而ＣＮＥ２Ｌ４为低转移克隆株，其肺转移率为１３％，淋巴结未见癌转移。这是从１个细胞母系中新筛选出的１个高转移和１个低转移的癌细胞克隆株。实验结果还显示，同ＢＡＬＢ／ｃ（ｕｎ／ｕｎ）裸小鼠相比，ＳＣＩＤ小鼠的恶性表型的表达能力高。另外，皮下移植时肿瘤细胞的数量可能与转移表型的表达有相关性，移植的瘤细胞数越多，转移率越高，反之亦然。     

A novel spontaneous metastasis model of human osteosarcoma developed using orthotopic transplantation of intact tumor tissue into tibia of nude mice

Evaluation of potential new treatment strategies requires adequate experimental tumor models which resemble the clinical situation as closely as possible. The purpose of the present study was to establish a new human osteosarcoma spontaneous metastasis model using orthotopic transplantation of histologically intact tumor tissue into the tibia of nude mice. Intact tumor pieces, obtained from the 32nd serial passage of subcutaneously growing human osteosarcoma xenografts, were implanted into the proximal tibia in 31 nude mice. Animals were sacrificed and autopsied 2, 4, 6, and 8 weeks after transplantation and examined macroscopically and microscopically for local tumor growth and metastases. All mice developed local intratibial bone tumors that were radiographically and histologically similar to primary human osteosarcoma. Lung metastases were observed in all mice, local and distant lymph node metastases in 15 (48%), and liver metastases in 6 (19%) mice. The microscopic appearance of the metastases was similar to that observed in the donor patientÕs tumor, corresponding subcutaneous xenografts and orthotopically transplanted intratibial tumors. This spontaneous metastasis model of human osteosarcoma in nude mice may resemble a clinical situation and could thus be useful for studies on local tumor growth, metastasis formation and therapy.     

人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的 建立人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型.方法 采用人前列腺癌细胞株PC-3细胞接种于裸鼠的颈背部皮下,计算成瘤潜伏期、成瘤百分率,观察移植瘤大体生长情况,绘制生长曲线,并对移植瘤进行病理鉴定.结果 采用人前列腺癌细胞株PC-3细胞皮下接种方式建立移植瘤的平均成瘤潜伏期为24天,成瘤百分率为100％,瘤体积倍增时间为10天左右,移植瘤的形态和功能特性与原发肿瘤基本相似.结论 本动物模型的建立可为前列腺癌的放射免疫显像以及放射免疫治疗提供一个有价值的实验平台.     

脐带间充质干细胞对乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠移植瘤生长的影响

背景：已有临床前和临床研究资料表明,间充质干细胞预防和治疗异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病、自身免疫性疾病以及糖尿病等具有显著疗效。但间充质干细胞植入后是否会促进体内肿瘤生长是其临床应用安全性的一个重要体现,目前这部分内容研究尚少。 目的：观察脐带间充质干细胞对人乳腺癌细胞MCF-7荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响。 方法：随机抽取BALB/c裸鼠8只作为正常对照组,随机抽取乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠分为4组,每组8只,分别为模型对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。3个剂量组尾静脉注射脐带来源的间充质干细胞,分别为4×104、2×105和1×106个,共给予2次,间隔2周;正常对照组和模型对照组注射生理盐水。实验观察周期为6周。 结果与结论：模型对照组肿瘤体积呈持续增长趋势,观察结束后各剂量组与同期模型对照组动物相比,脐带间充质干细胞有抑制肿瘤体积及质量的趋势,但差异无显著性意义,病理组织学结果显示中高剂量组各有1只动物肺脏可见转移瘤。结果表明脐带间充质干细胞不促进MCF-7裸鼠肿瘤的生长,但可促进MCF-7裸鼠转移瘤的形成。     

胃肠道间质瘤细胞组织在不同周龄裸小鼠不同部位的成瘤情况

背景：建立合适的人胃肠道间质瘤裸鼠动物模型,可为以后在活体状态下研究胃肠道间质瘤细胞提供一个必不可少的工具。 目的：观察胃肠道间质瘤细胞组织块接种于不同周龄裸小鼠腋下和臀部的成瘤情况。 方法：将胃肠道间质瘤细胞组织块分别接种于4,8周龄BALB/c(nu/nu)裸鼠的腋下和臀部,观察在一定时间内,不同周龄裸鼠不同部位的瘤体成瘤率,生长速度,破溃率和转移率。 结果与结论：4周龄裸鼠的成瘤率及生长速度明显高于8周龄裸鼠(P < 0.05),且接种于腋下的成瘤率较臀部高;4周龄与8周龄裸鼠的肿瘤破溃率差异无显著性意义(P > 0.05),但接种于臀部的肿瘤破溃率大于腋下(P < 0.05);在肿瘤软化消失率方面,8周龄裸鼠明显高于4周龄裸鼠(P < 0.05),同龄裸鼠中,臀部高于腋下。说明不论接种部位如何,周龄越小的裸鼠,移植瘤成瘤率越高、生长速度越快;但对于相同周龄的裸鼠,不论接种部位如何,肿瘤生长速度无明显差异。     

右旋柠烯乳剂对人胃癌移植瘤生长和转移的抑制作用

目的　研究并探讨右旋柠烯乳剂 (D limonene)对人胃癌生长和转移的抑制作用及其机制。　方法　采用人胃癌BGC 82 3细胞株经反复传代成实体瘤的完整组织块 ,建立人胃癌裸小鼠原位移植瘤模型。将 4 0只荷瘤裸小鼠随机分成 4组 ,移植后第 5d开始分别用生理盐水灌胃、5 氟尿嘧啶 (5 FU)腹腔注射、D limonene灌胃、D limonene灌胃 +5 FU腹腔注射共 7周。第 8周处死动物 ,测量原位肿瘤瘤重并计算抑瘤率 ,检测肿瘤细胞凋亡指数 (AI)、肿瘤微血管密度 (MVD)及免疫组织化学测定肿瘤组织血管内皮生长因子 (VEGF)的表达变化 ,光镜与电镜观察组织细胞超微结构变化 ;观察荷瘤鼠腹膜、肝、其他脏器肿瘤转移及腹水情况。　结果　D limonene组、联用组分别与对照组相比 ,胃癌的原位肿瘤瘤重与抑瘤率、AI、MVD、VEGF下调 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。腹膜、肝转移受到明显抑制 (P <0 0 5 )。　结论　D limonene通过抑制肿瘤微血管形成 ,诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制了体内胃癌的生长和转移。     

裸小鼠原位移植筛选高转移性人骨肉瘤细胞系及其生物学特性分析

目的　在裸小鼠体内筛选人骨肉瘤高肺转移性细胞亚群 ,为实验研究提供模型。方法　利用原位移植方法 ,将人骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7皮下移植瘤接种于裸鼠胫骨骨髓腔。筛选到第 2代时 ,有 1例发生肺转移 ;以皮下扩增转移灶 ,再次原位移植 ,第 3代肺转移率达 83% ( 5 / 6 )。用组织块法培养收集 ,比较其与母系在形态结构、细胞核型 ,vimentin ,actin ,NSE抗原表达及体积倍增时间等方面的差别。结果　同母系相比较 ,该转移细胞保持了人骨肉瘤细胞的组织学特征 ,生物学特性也有较大差别。结论　该细胞亚群是一株新建立的人骨肉瘤细胞高转移性亚系     

Endoscopy-guided orthotopic implantation of colorectal cancer cells results in metastatic colorectal cancer in mice

Advanced stage colorectal cancer (CRC) is still associated with limited prognosis. For preclinical evaluation of novel therapeutic approaches, murine models with orthotopic tumor growth and distant metastases are required. However, these models usually require surgical procedures possibly influencing tumor immunogenicity and development. The aim of this study was to establish a minimal-invasive endoscopy-based murine orthotopic model of metastatic CRC. During colonoscopy of CD-1 nude and non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice, implantation of Caco-2 and HT-29 CRC cells was performed subcutaneously (s.c.) or orthotopic into the colonic submucosa. White light endoscopy (WLE) and fluorescence endoscopy (FE) were applied for tumor detection in vivo. Ex vivo, resected tumors were examined by fluorescence reflectance imaging (FRI), histology, gelatin zymography and immunohistochemistry. In CD-1 nude mice, marked tumor growth was observed within 14 days after subcutaneous implantation while submucosal implantation failed to induce CRC after 17 weeks. In contrast, in NOD/SCID mice submucosal injection of HT-29 cells resulted in pronounced tumor growth 12 days post injectionem. Subsequently, rapid tumor expansion occurred, occupying the entire colonic circumference. Importantly, post mortem histological analyses confirmed liver metastases in 28.6 % and peritoneal metastases in 14.3 % of all mice. FRI and gelatin zymography did not detect a significantly increased matrix metalloproteinases (MMPs) expression in s.c. implanted tumors while MMP-tracer uptake was significantly enhanced in orthotopic implanted tumors. Neither s.c. nor orthotopic Caco-2 cell implantation resulted in tumor development. We successfully established an endoscopy-based model of metastatic CRC in immunodeficient mice.     

A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer

Clinically relevant animal models of human cancer are important for studies of cancer biology, invasion and metastasis, and for investigating new forms of prognostic diagnosis and therapy. An ovarian tumor line (RMG-1: human clear cell carcinoma of the ovary) previously grown subcutaneously was implanted ortho-topically as intact tissue into the ovarian capsule of 22 nude mice. The tumors showed progressive growth at the orthotopic site in all animals. Tumor-associated serum galactosyltransferase (GAT) tended to be posi-tive in all nude -mice. The tumors invaded or metastasized to the contralateral ovary, retroperitoneum, mesentery and peritoneum, and omentum, and metastasized to the subcutaneous tissue, lymph nodes and distant organs including the liver, kidney, pancreas, and diaphragm. In striking contrast, subcutaneous trans-plantation of this tumor resulted in growth in only 2 of 5 animals with local lymph node and kidney involve-ment but no retroperitoneal or peritoneal involvement. These findings suggest that orthotopic implantation provides a suitable micro-environment in which ovarian cancer can express its intrinsic clinically-relevant properties. This approach is relevant to the clinical features of ovarian cancer and is thought to be a useful model for studies of therapy for this cancer.© Kluwer Academic Publishers 1998