亚慢性砷染毒对大鼠睾丸中水通道蛋白9及睾酮表达的影响

目的：研究亚慢性砷染毒对大鼠睾丸中水通道蛋白9（ AQP9）及睾酮表达的影响，为砷中毒导致的男性不 育提供理论依据。方法：雄性SD大鼠随机分为高、中、低剂量砷染毒组和对照（ 蒸馏水）组，采用经口自由饮用 方式进行染毒，连续染毒14 周。染毒结束后，取血和双侧睾丸，采用电感耦合等离子体发射光谱仪测定血浆及睾 丸中砷浓度，采用免疫组织化学法检测AQP9的表达变化， ELISA 检测血清中睾酮的浓度， H-E 染色观察睾丸组织 形态学改变。结果：与对照组比较，染砷组血浆和睾丸中有明显的砷积累。AQP9蛋白在睾丸组织中间质细胞表达 增强，中、高剂量组与对照组比较，差异有统计学意义。与对照组比较，低剂量组睾酮浓度下降，差异无统计学意义， 中、高剂量组与对照组比较，差异有统计学意义。染毒组大鼠生精上皮出现不同程度损害，睾丸间质充血、渗出等， 尤以中、高剂量组变化明显。结论：亚慢性砷中毒可以引起血浆及睾丸砷浓度增加，影响AQP9的表达，导致大鼠 睾丸组织病理学改变和睾酮分泌紊乱，对大鼠的睾丸组织和生殖功能造成损伤。     

砷对大鼠附睾中肝细胞生长因子及其受体c-met表达与透明质酸酶活性的影响

目的:研究砷对大鼠附睾中肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-met与透明质酸酶(HYD)活性的影响。方法:SD大鼠随机分为4组,对照组饮用蒸馏水,低、中、高剂量组分别饮用含2.4、12.0、60.0mg/L亚砷酸钠的蒸馏水。采用免疫印迹法检测HGF、c-met蛋白在大鼠附睾中的表达,改良HYD一明胶底物膜法测精子顶体内HYD活性(HYD阳性反应率、HYD活性强度),扫描电镜观察大鼠精子超微结构的改变。结果:与对照组比较,砷中毒各组HGF、c-met蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义;砷染毒中、高剂量组的HYD活性与对照组比较均显著下降。扫描电镜结果显示,与对照组比较,砷染毒低、中、高剂量组大鼠精子顶体完整率均较低,而精子畸形率均较高,差异均有统计学意义。结论:慢性砷中毒能够影响HGF及其受体c-met的表达,使HYD活性减弱,精子顶体完整率下降,精子畸形率升高。     

血管内皮生长因子及其受体在子宫内膜异位症中的表达和意义

目的:研究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(Vascular endothelial growth factor receptor1,VEGFR1)在子宫内膜异位症(内异症)患者子宫在位内膜、异位内膜及正常对照组内膜组织中的表达,探讨其在子宫内膜异位症中的作用机制.方法:采用免疫组织化学及Western blot方法检测34例异位症患者在位内膜、异位内膜(内异症组)及34例正常内膜(对照组)组织中VEGF及其受体VEGFR1蛋白的定位及表达.结果:异症组在位及异位子宫内膜组织腺上皮细胞及间质细胞中均有VEGF及VEGFR1蛋白表达,且均高于同期对照组内膜,差异有统计学意义;对照组分泌期内膜VEGF及VEGFR1蛋白表达高于增生期,呈现周期性变化,而内异症组在位及异位内膜VEGF及VEGFR1蛋白表达失去周期性变化,分泌期与增生期均高表达,差异无统计学意义.Western blot检测结果与免疫组化结果一致.结论:内异症患者在位及异位内膜组织中VEGF、VEGFR1蛋白高表达可能与内异症的发生发展有关.     

过氧化物酶6在慢性砷中毒大鼠附睾的表达及意义

目的:研究过氧化物酶6(Prdx6)在慢性砷中毒大鼠附睾中的表达及意义,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据。方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高(60 mg/L)、中(12 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方式进行染毒,连续染毒6个月。采用免疫印迹及实时荧光定量PCR法检测Prdx6的表达变化及意义,透射电镜观察精子超微结构变化。结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,各染毒组Prdx6的蛋白及mRNA表达水平均显著较低。透射电镜结果显示对照组精子结构正常,砷染毒各组精子尾部中段线粒体均出现了病理损害。结论:慢性砷中毒对大鼠附睾中Prdx6的表达有影响,引起精子超微结构改变,说明其与男性不育有一定的关系。     

灯盏花素对人视网膜色素上皮细胞和糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的:观察灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19中VEGF、VEGFR2和pERK蛋白的表达及对2型糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响。方法:培养ARPE-19细胞,分为对照组、灯盏花素组、高糖组和高糖+灯盏花素组,ELISA检测VEGF的分泌水平,Western blot检测细胞VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白水平;取正常大鼠,随机分为正常对照组、灯盏花素组、糖尿病模型组和糖尿病灯盏花素治疗组,16周后取各组大鼠眼球,观察大鼠视网膜的病理变化并评分,免疫组化观察VEGF的表达情况。结果:(1)细胞实验结果显示,灯盏花素组VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白水平与正常对照组比较均减低(P0.05);高糖组细胞上述蛋白水平与正常对照组比较均增加(P0.05);高糖+灯盏花素组上述蛋白水平与高糖组比较表达均减少(P0.05);(2)大鼠视网膜病理学评分显示糖尿病组与正常对照组、糖尿病灯盏花素治疗组相比差异显著,灯盏花素组与正常对照组相比差异无统计学意义。糖尿病大鼠与正常对照组、灯盏花素组相比,视网膜VEGF的表达增加;糖尿病灯盏花素治疗组中VEGF的表达较糖尿病组有所降低(P0.05)。结论:灯盏花素可以降低ARPE-19细胞VEGF、VEGFR2和p-ERK的蛋白表达水平,抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达,提示灯盏花素可能通过降低糖尿病大鼠视网膜细胞和组织中VEGF的表达,缓解其糖尿病视网膜病变进程。     

不同间期慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠血管内皮生长因子的变化

目的：观察不同间期低O2高CO2大鼠肺循环中血管内皮生长因子（VEGF）水平的变化。方法： 采用ELISA法、透射电镜、免疫组化和原位杂交等方法，观察低O2高CO22周组（T组）、低O2高CO24周组（F组）、低O2高CO28周组（E组）大鼠肺动脉平均压（mPAP）、右心室重量比（RV/LV+S）、血清和肺组织VEGF的含量、肺细小动脉的超微结构、肺组织VEGF及VEGF mRNA表达的变化。结果： T、F、E组大鼠的mPAP、RV/LV+S、血清和肺组织VEGF的含量以及VEGF及其mRNA的表达明显高于正常对照组。随低O2高CO2间期的延长，各组大鼠内皮细胞逐渐向管腔凸起，基底变窄，中膜平滑肌细胞、胶原纤维明显增多。结论：低O2高CO2刺激肺细小动脉壁VEGF mRNA表达增加，导致VEGF的合成和分泌增多，后者可能参与慢性低氧性肺动脉高压的形成和肺细小动脉壁的重建。     

血管内皮生长因子对OX-LDL诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机理

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）对氧化型低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导的血管内皮细胞凋亡的拮抗作用及其机理，以探讨VEGF预防血管成形术后再狭窄的机制。方法将对数生长期的人脐静脉内皮细胞分成对照组、OX—LDL处理组和OX—LDL＋VEGF处理组，12h后采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况，并通过逆转录聚合酶链反应研究各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与Fas mRNA的表达情况。结果OX—LDL处理组凋亡细胞和Fas mRNA表达明显多于对照组和OX-LDL＋VEGF处理组，而Bcl-2 mRNA表达情况相反。结论VEGF能部分拮抗OX—LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能与其上调Bcl-2 mRNA表达及下调Fas mRNA表达有关，为VEGF预防血管成形术后再狭窄进一步提供了理论依据。     

砷染毒对大鼠睾丸凋亡诱导因子表达及生精细胞凋亡的影响

目的:探讨砷染毒对大鼠睾丸凋亡诱导因子(AIF)表达及生精细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠被随机分为对照组和染砷组。采用自由饮用方式进行连续染毒6个月。采用免疫印迹及实时荧光定量PCR检测AIF表达水平;采用TUNEL法观察生精细胞凋亡的情况。结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,染砷组大鼠睾丸内AIF蛋白及mRNA表达水平均显著增高。TUNEL法检测结果显示与对照组比较,染砷组生精上皮凋亡细胞平均灰度值显著增高。结论:砷染毒时AIF介导的非caspase依赖性凋亡途径可能参与了大鼠生精细胞凋亡。     

糖脉通对糖尿病模型大鼠血管组织VEGF mRNA表达的影响

观察以补气活血解毒通络为治法组方的中药糖脉通对糖尿病模型大鼠血管组织VEGF mRNA表达的影响并探讨其机制。用链脲佐菌素联合高脂饮食复制糖尿病高血脂大鼠模型,并分为4组（n＝10）：模型对照组、西药对照组、糖脉通小、大剂量组,另加空白对照组,分别灌胃。药物干预12周后,采用RT-PCR方法检测各组糖脉通对糖尿病高血脂大鼠血管组织VEGF mRNA的表达。糖尿病模型大鼠血管组织VEGF mRNA表达水平明显升高,糖脉通可显著的降低糖尿病模型大鼠血管VEGF mRNA表达水平,而且随着剂量的加大,疗效更加显著,明显优于对照组。V E GF的异常表达是糖尿病大血管病变的发病机制之一,通过补气活血解毒通络法对糖尿病大血管病进行早期干预效果明显,糖脉通可能通过降低VEGF mRNA在模型大鼠血管组织中的异常表达对血管功能起到保护作用,值得进一步深入研究。     

KDR反义寡核苷酸对人血管内皮细胞的作用

VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中起重要作用。我们用KDR特异性反义寡核苷酸作用于人血管内皮细胞，以阻断VEGF的自分泌作用通路，观察对细胞增殖的影响、细胞超微结构的变化及检测细胞DNA含量，测定细胞分泌VEGF的能力，并检测作用后KDR mRNA和KDR蛋白的水平。结果发现未经处理的人血管内皮细胞能分泌一定量的VEGF，KDR ASODN能抑制人血管内皮细胞内KDR基因的表达，并显著抑制细胞的增殖，在一定剂量下还可诱导凋亡。结果说明KDR ASODN能显著抑制血管内皮细胞的增殖，VEGF受体KDR在人血管内皮细胞的增殖和凋亡的凋控中起重要作用。     

血管内皮细胞生长因子在肥胖乳腺癌患者乳腺癌组织中的表达及临床意义

 摘要：　目的 探讨肥胖乳腺癌患者乳腺癌组织中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达及临床意义。方法 采集45例肥胖乳腺癌患者,37例正常体重乳腺癌患者,用RT-PCR和免疫组织化学检测肥胖组和正常体重组乳腺癌组织VEGF的mRNA和蛋白表达。结果 肥胖组乳腺癌组织VEGF的mRNA和蛋白表达均高于正常体重组 (P<0.05),并且VEGF mRNA和蛋白表达之间呈正相关(r=0.785,P<0.05);VEGF在肥胖乳腺癌组织中的表达与组织学分级、5年复发转移有关,与患者年龄无关。结论 VEGF在肥胖乳腺癌患者中具有高表达趋势,提示VEGF可能在肥胖相关性乳腺癌的发生、演变及预后中起重要作用。     

Expression of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptors 1 and 2 in invasive breast carcinoma: prognostic significance and relationship with markers for aggressiveness

Dhakal H P, Naume B, Synnestvedt M, Borgen E, Kaaresen R, Schlichting E, Wiedswang G, Bassarova A, Holm R, Giercksky K‐E & Nesland J M
(2012) Histopathology  61, 350–364 Expression of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptors 1 and 2 in invasive breast carcinoma: prognostic significance and relationship with markers for aggressiveness Aims: Vascular endothelial growth factor (VEGF), VEGF receptor 1 (VEGFR‐1) and VEGF receptor 2 (VEGFR‐2) play a role in breast cancer growth and angiogenesis. We examined the expression and relationship with clinical outcome and other prognostic factors. Methods and results: Tumour sections from 468 breast cancer patients were immunostained for VEGF, VEGFR‐1, and VEGFR‐2, and their relationships with tumour vascularity, disseminated tumour cells (DTCs) in bone marrow and other clinicopathological parameters were evaluated. VEGF, VEGFR‐1 and VEGFR‐2 immunoreactivities were observed in invasive breast carcinoma cells. VEGF expression was significantly associated with VEGFR‐1 and VEGFR‐2 expression (P < 0.001). High‐level cytoplasmic expression of VEGFR‐1 was associated with significantly reduced distant disease‐free survival (DDFS) (P = 0.017, log‐rank) and breast cancer‐specific survival (BCSS) (P = 0.005, log‐rank) for all patients, and for node‐negative patients without systemic treatment (DDFS, P = 0.03, log‐rank; BCSS, P = 0.009, log‐rank). VEGFR‐1 expression was significantly associated with histopathological markers of aggressiveness (P < 0.05). Significantly reduced survival was observed in DTC‐positive patients as compared with DTC‐negative patients in the combined moderate/high VEGFR‐1 group (P < 0.001 for DDFS and BCSS), and the same was true for DDFS in the moderate VEGFR‐2 group (P = 0.006). Conclusions: High‐level expression of VEGFR‐1 indicates reduced survival. Higher‐level expression of VEGFR‐1 or VEGFR‐2 in primary breast carcinomas combined with the presence of DTC selects a prognostically unfavourable patient group.     

VEGF/VEGFR2 and PDGF-B/PDGFR-β expression in non-metastatic renal cell carcinoma: a retrospective study in 1,091 consecutive patients

Purpose: We aimed to investigate the correlations between the expression of VEGF, PDGF-B, and their receptors (VEGFR2 and PDGFR-β) with pathologic stage or cell type in non-metastatic renal cell carcinoma. Materials and methods: VEGF, VEGFR2, PDGF-B, and PDGFR-β protein expression were evaluated immunohistochemically in prospectively collected 1,423 tumour samples obtained during radical or partial nephrectomy at a tertiary referral center. Intensity of expression was quantified on a scale of 0 to 3, and was compared among renal cell carcinoma cell types. Results: The study cohort consisted of 1,091 patients, of mean age 54 years, including 968 (88.7%) with clear cell, 82 (7.5%) with papillary, 31 (2.8%) with chromophobe, 4 (0.4%) with unclassified, and 6 (0.5%) with other types of renal cell carcinoma. VEGF expression increased with higher T and N stage and Fuhrman nuclear grade. PDGFR-β expression was highest in clear cell renal cell carcinoma, whereas VEGF and PDGF-B expression were highest in papillary renal cell carcinoma. After adjusting for T stage and Fuhrman nuclear grade using multivariate logistic regression analysis, VEGF (OR = 3.57, P < 0.001), VEGFR2 (OR = 1.82, P = 0.017), and PDGF-B (OR = 2.46, P = 0.019) expression were significantly greater in papillary than in clear cell type. Conclusions: Our results indicate that the cytoplasmic expression of VEGF, VEGFR2, PDGF-B, and PDGFR-β in RCC tumour cells is different in various pathologic stage and cell type. Notably, VEGF and PDGF-B expression are higher in papillary than in clear cell renal cell carcinoma. Further studies using quantitative measurement of proangiogenic factors in tumour cell are needed.     

血管内皮生长因子及其可溶性血管内皮生长因子受体-1水平与胎儿出生体重

目的本研究通过对比血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)水平差异与新生儿出生体重的关系,以探讨其在胎儿出生体重发生中的作用。方法采用免疫组织化学法检测40例分娩正常出生体重儿组(AGA组)、30例高出生体重儿组(LGA组)及30例低出生体重儿组(SGA组)胎盘组织中VEGF、sFlt-1的表达水平。结果①LGA组胎盘组织中VEGF的表达高于AGA组,sFlt-1的表达水平低于AGA组,差异有统计学意义(χ2=21.17,P<0.01)。SGA组胎盘组织中VEGF的表达低于AGA组,sFlt-1的表达水平高于AGA组,差异有统计学意义(χ2=8.44,P=0.04)。②胎盘组织中VEGF的表达水平与胎儿出生体重呈正相关(r=0.427,P<0.01),胎盘组织中sFlt-1的表达水平与胎儿出生体重呈负相关(r=-0.569,P<0.01)。结论孕妇胎盘组织中VEGF及sFlt-1表达水平的变化可能与胎儿出生体重有关。     

miR-150在胎盘表达与复发性流产的关系研究

目的探讨miR-150通过靶向血管内皮生长因子(VEGF)表达调控胎盘血管生成参与复发性流产的关系。方法选择华中科技大学同济医学院附属梨园医院妇产科单胎晚期妊娠分娩的产妇40例为对照组(年龄23~29岁,平均年龄26.72岁),同期选择于该院妇产科3次或更多次自然流产的妇女40例为病例组(年龄23~29岁,平均年龄26.18岁)。测定两组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。设立HTR-8/SVNEO细胞组、miR-150mimics组、miR-150 inhibitor组,测定3组细胞活力、凋亡水平、血管形成水平、miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。建立正常小鼠组、miR-150 mimics小鼠组、miR-150 inhibitor小鼠组模型,测定3组小鼠平均流产数、胎鼠质量、胎盘质量、胎盘毛细血管数目、miR-150 mRNA及VEGF表达水平。结果病例组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平高于对照组胎盘组织,VEGF表达水平低于对照组胎盘组织(P <0.05)。miR-150 mimics组光密度(OD)值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05);miR-150 inhibitor组OD值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05),miR-150 inhibitor组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平高于正常小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量低于正常小鼠组(P <0.05)。miR-150inhibitor小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平低于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均胎盘毛细血管数目水平、VEGF表达水平低于正常小鼠组(P <0.05),miR-150 inhibitor小鼠组平均胎盘毛细血管数目、VEGF表达水平高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。结论复发性流产患者胎盘组织中miR-150表达水平升高,VEGF表达水平降低;miR-150靶向抑制胎盘中VEGF表达水平进而抑制胎盘中血管的生成可能是复发性流产的发病机制之一。     

VEGF和HIF-1在糖尿病大鼠坐骨神经的表达及NGF的调节作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1(H IF-1)在糖尿病周围神经病变中的表达及神经生长因子的调节作用。方法大鼠糖尿病造模后分成糖尿病(DM)组及神经生长因子(NGF)治疗组,治疗2周后采用蛋白印迹及免疫组化法观察坐骨神经VEGF及H IF-1动态变化。结果蛋白印迹显示正常组坐骨神经纤维无VEGF和H IF-1表达,DM组VEGF及H IF-1表达呈阳性,NGF治疗组无表达。免疫组织化学结果显示,坐骨神经VEGF阳性产物位于轴突及雪旺氏细胞中,DM组积分光密度明显高于正常组及NGF组(P<0.01)。结论局部应用外源性NGF减少糖尿病大鼠坐骨神经VEGF和H IF-1的表达。     

Altered cellular kinetics in the growth plate of the femoral head of spontaneously hypertensive rats

Purpose

Pathologic changes in the growth plate remain unknown in Legg-Calvé-Perthes (LCP) disease. Spontaneously hypertensive rats have proven to be a good model for studying LCP disease. This study investigated the histopathologic changes and the expression of vascular endothelial growth factor in the growth plate of spontaneously hypertensive rats (SHR).

Materials and Methods

Sixty SHR rats were divided into two groups: those showing osteonecrosis (SHR+n group: 32), and those showing normal ossification (SHR-n group: 28). Thirty Wister Kyoto rats served as a control. For histomorphological measurement, the length of each zone of the growth plate was measured. Cell kinetics was measured by 5-bromo-2''-deoxyuridin (BrdU) immunohistochemistry and transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling (TUNEL) assays. Vascular endothelial growth factor (VEGF) immunohistochemistry was used to identify of expression of VEGF.

Results

The lengths of growth plates of the SHR+n group were significantly shorter in the initial growth period than those of the other groups. The lowest proliferative rate and the highest apoptosis rate were observed in the SHR+n group at the initial growth period. The expression of VEGF in the growth plate of the SHR group was lower than the control group, and it was lower in the SHR+n group than in the SHR-n group.

Conclusion

The growth plate of the SHR+n group was found to be affected by disease process of ischemic necrosis of the femoral head, and this might explain the relative overgrowth of the greater trochanter in the later stages of LCP disease.     

外源性拟载脂蛋白E肽对脑血管痉挛后血管内皮生长因子介导的脑动脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性拟载脂蛋白E(apoE)肽对脑动脉痉挛后内皮细胞凋亡的调节作用及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:采用非开颅血管内穿线法制备小鼠蛛网膜下腔出血模型并给予apoE-1410肽,术后行神经功能评分并检测大脑中动脉直径变化,应用原位杂交法、免疫印迹法检测各组右侧大脑动脉VEGF表达,TUNEL法检测大脑中动脉内皮细胞凋亡.结果:出血组小鼠神经功能评分均降低,大脑中动脉直径减小,VEGF mRNA及VEGF蛋白显著升高,TUNEL显色阳性.治疗组小鼠神经功能评分及大脑中动脉管径增加,VEGF表达降低,内皮细胞凋亡数目减少.VEGF mRNA表达与TUNEL呈正相关.结论:蛛网膜下腔出血后痉挛脑动脉内皮细胞凋亡与VEGF高表达有关;拟apoE-1410肽对脑血管痉挛具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过抑制VEGF活化,减少大脑中动脉内皮细胞凋亡.     

附睾血管内皮生长因子基因慢病毒干扰载体的构建

目的：以血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA 为靶点,设计、构建VEGF 的RNA干扰慢病毒载体,并 对其在大鼠附睾的沉默效果进行验证。 方法：构建3 种附睾VEGF-shRNA 慢病毒表达载体VEGF-shRNA-1、 VEGF-shRNA-2、VEGF-shRNA-3, 提取3 种阳性克隆质粒测序, 转染HEK293-T 细胞后产生慢病毒质粒。大鼠随 机分为空白对照组、NC-shRNA 阴性感染组、VEGF-shRNA-1 感染组、VEGF-shRNA-2 感染组、VEGF-shRNA-3 感染组,将病毒液分别注射到各组大鼠双侧附睾;实时荧光定量 PCR及蛋白免疫印迹检测各组大鼠附睾VEGF 的mRNA 及蛋白沉默效果。结果： 测序结果证明3 种慢病毒载体被包装成功。感染大鼠附睾后,VEGF 感染组 mRNA 及蛋白表达量均较阴性感染组和空白对照组明显降低,其中以VEGF-shRNA-3 感染组干扰效果更为有效。 结论：成功设计了VEGF 基因的RNA干扰靶点和制备了VEGF 基因的慢病毒载体,VEGF-shRNA-3 能有效抑制 附睾VEGF 的表达。