小鼠脑缺血时自噬相关基因5的抗损伤作用

 目的: 观察自噬相关基因5(Atg5)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的抗损伤作用。方法: 将雄性BALB/c小鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、Atg5 siRNA组和control siRNA组。I/R组采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24 h。Atg5 siRNA组和control siRNA组将5 μL Atg5 siRNA或scrambled siRNA在MCAO前24 h侧脑室注射。实时荧光定量PCR和Western blot检测Atg5的表达;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测抑制Atg5对缺血再灌注损伤后脑梗死面积和水肿率的影响;神经行为学评分法检测抑制Atg5对缺血再灌注损伤后神经症状的影响。结果: MCAO后再灌24 h,缺血半影区Atg5 mRNA和蛋白水平显著增高(P<0.05);Atg5 siRNA明显降低缺血再灌后Atg5 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);侧脑室给予Atg5 siRNA能显著增加脑梗死面积和水肿率,并加重神经行为学损伤(P<0.05)。结论: 沉默Atg5加重小鼠脑缺血再灌损伤,提示MCAO后诱导的 Atg5 可减轻小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。     

比较热休克蛋白A5和3-甲基腺嘌呤和介导小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:比较研究热休克蛋白A5(HSPA5)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)介导小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤性自噬的保护作用。方法:成年雄性BALB/c小鼠30只,分为6组:sham组、缺血再灌注组(I/R组)、vehicle+I/R组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+I/R组、scramble siRNA+I/R组和HSPA5 siRNA+I/R组,每组5只。采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24 h制作小鼠I/R模型。Vehicle+I/R组和3-MA+I/R将5μl 0.9%Na Cl或3-MA(30 mg/ml)在MCAO前30 min侧脑室注射;scramble siRNA+I/R group组和HSPA5 siRNA+I/R组将5μl scramble siRNA或HSPA5 siRNA(2μg/μl)在MCAO前24 h侧脑室注射。通过小鼠I/R后神经功能评分确定运动功能障碍程度。小鼠神经细胞内自噬体形成用透射电子显微镜测定,再灌注24 h缺血大脑皮层(LC3)-II/LC3-I表达用Western Blot方法检测。小鼠I/R后缺血大脑神经细胞损伤用Nissl染色进行观察。结果:HSPA5和3-MA可以影响I/R小鼠行为学改变并使脑缺血性损伤和神经症状加重(P0.05)。透射电子显微镜检测可见,sham组小鼠大脑皮层神经细胞形态正常,I/R组小鼠缺血大脑皮层神经元胞质中细胞器减少,形成自噬体。与sham组小鼠比较,I/R组小鼠缺血大脑皮层LC3-II蛋白表达水平显著增高(P0.05);3-MA+I/R或HSPA5 siRNA+I/R小鼠缺血大脑皮层LC3-II蛋白表达水平明显低于I/R小鼠(P0.05)。结论:HSPA5和3-MA在介导小鼠脑缺血再灌注损伤导致的自噬可发挥相同的保护作用,并且促进神经细胞凋亡。     

小鼠背根神经节慢性压迫引起的痛敏化机制

目的 探讨背根神经节慢性压迫（CCD）引起的低剂量辣椒素诱发痛敏化机制。 方法 将光滑L型钢柱插入小鼠的L4椎间孔，对背根神经节（DRG）造成持续压迫，建立小鼠CCD模型。于CCD术前1 d及术后第1、3、5、7 d向小鼠胫骨前区皮下注射不同浓度的辣椒素（0.01、0.1、1 g/L）10 μl后采用行为学检测动物的痛行为学表现并录像，以寻找CCD术后辣椒素诱发痛行为差异最显著的浓度。利用Pirt-GCaMP3转基因小鼠，胫骨前区皮下注射最佳浓度辣椒素，利用激光扫描共焦显微镜在体记录DRG神经元对外周体表感受野辣椒素刺激的反应。利用免疫荧光染色技术观察正常及CCD模型压迫5 d后DRG内辣椒素受体（TRPV1）的表达变化。 结果 行为学检测结果显示，与正常小鼠相比，低浓度（0.1 g/L）辣椒素在CCD模型小鼠上引起的诱发痛显著提升（n=8; 术后1 d，P<0.01；术后5 d，P<0.05；术后7 d，P<0.05；术后3 d，P> 0.05）。在体激光扫描共焦成像结果表明，在记录的398（n=4）个正常小鼠L4 DRG神经元中，对皮下注射0.1 g/L辣椒素有反应的神经元为75个，在382（n=6）个CCD术后5 d的小鼠L4 DRG神经元中，对皮下注射0.1 g/L辣椒素有反应的神经元为169个，差异有显著性（P<0.01）。免疫荧光染色结果显示，在653（n=10）个正常神经元中，TRPV1阳性的细胞数为148，在611（n=6）个CCD神经元中，TRPV1阳性的细胞数为237，差异有显著性（P<0.01）。 结论 在小鼠CCD模型中，受到压迫DRG神经元TRPV1表达上调，导致相应的体表感受区域对辣椒素诱发痛敏化。     

小胶质细胞介导的TRPV1在小鼠缺血性脑卒中后抑郁样行为中的作用和机制北大核心CSCD

目的:探讨TRPV1对缺血性脑卒中后抑郁样行为的作用和机制。方法:45只雄性小鼠随机分为3组:假手术组(sham),脑缺血再灌注组(I/R),脑缺血再灌注+TRPV1抑制剂Capsazepine组(I/R+CPZ)。建立小鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO),HE染色观察病理性损伤;免疫荧光染色观察小胶质细胞的激活;免疫印迹检测IL-1β的表达;7 d后进行强迫游泳和悬尾实验。结果:行为学检测显示与I/R组相比,TRPV1抑制剂可显著改善小鼠的抑郁样行为(P<0.001)。HE染色结果表明,I/R+CPZ组杏仁核区病理损伤明显减轻。免疫荧光染色观察结果显示,杏仁核小胶质细胞有TRPV1的表达,且I/R+CPZ组与I/R组相比,小胶质细胞的激活明显减少(P<0.001)。免疫印迹检测结果显示,给药后IL-1β的表达量明显少于IR组(P<0.05)。结论:抑制TRPV1可减轻炎症反应,改善缺血性脑卒中后小鼠的抑郁样行为。     

柠檬酸钠对肾缺血再灌注损伤模型小鼠肾损伤指标及炎症细胞因子的影响

目的:揭示柠檬酸钠对肾缺血再灌注损伤模型小鼠肾损伤指标及炎症细胞因子的影响.方法:将40只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、低剂量组(n=10)和高剂量组(n=10).建立缺血再灌注损伤模型前7 d,低剂量组和高剂量组分别以200 mg/kg和600 mg/kg的柠檬酸钠对小鼠进行灌胃...     

Treg细胞及TGFβ-1免疫调节功能紊乱加重小鼠缺血性脑损伤

目的:通过检测小鼠短暂性脑缺血(tMCAO)后不同时间点CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例及血清TGF-β1浓度变化,探讨其免疫调节功能在缺血性脑卒中炎性损伤中作用。方法:60只昆明小鼠随机分为6组,假手术组(sham组,24 h)10只,缺血再灌注后12 h、24 h、48 h、72 h及5 d五个tMCAO组(n=10/组)。采用腔内线栓法建立小鼠tM-CAO模型;tMCAO组在再灌注后各时间点进行神经功能缺陷评分(NDS),其后处死小鼠行氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死容积变化;同期免疫荧光染色观察脾脏中Foxp3表达;提取脾脏单个核细胞,流式细胞术(FCM)测定Treg在单个核细胞中比例;分离血清,ELISA检测血清中TGF-β1浓度。结果:缺血再灌注12 h脑部炎性损伤明显,且逐渐加重,TTC染色示炎症反应中心脑梗死面积同期增大,缺血再灌注48 h达高峰,此后前述表现逐渐减小;随再灌注时间延长,神经功能也逐渐改善。Foxp3在各组小鼠脾脏中均有阳性表达,但存在明显差异;FCM分析发现,缺血再灌注24 h时Treg比例较sham组明显减少(P<0.05),但在72 h时Treg基本恢复正常,5 d时则明显高于sham组(P<0.05)。血清中TGF-β1浓度与Treg有相似表现,再灌注24 h时降低明显,48 h则恢复至sham组水平,而在5 d时高出sham组(P<0.05)。并且Treg与TGF-β1呈正相关。结论:在缺血性脑损伤急性期Treg与TGF-β1明显减少,而在恢复期二者大量增加,且与脑梗死容积变化紧密相关,说明缺血性脑损伤后Treg与TGF-β1功能失衡在急性缺血性脑卒中炎性损伤中发挥着重要作用。     

异丙酚通过抑制JAK/STAT通路减轻肝冷缺血再灌注大鼠肾损伤

目的:探讨JAK/STAT信号通路在异丙酚减轻大鼠肝冷缺血再灌注后肾损伤中的作用。方法:SD大鼠随机分为4组(n=8):假手术组(sham组);肝冷缺血再灌注模型组(I/R组);异丙酚组(Pro组),于再灌注前5 min经右侧股静脉给予异丙酚20 mg·kg~(-1)·h~(-1)持续泵注30 min;JAK2抑制剂AG490组(AG490组),于建立模型前30 min腹腔注射AG490 10 mg/kg。再灌注6 h后处死大鼠,采集血样和肾组织标本,检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;观察肾组织的病理学改变,并进行肾小管损伤评分;检测肾组织细胞凋亡并计算凋亡指数(AI);检测p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3的蛋白水平。结果:与sham组比较,I/R组血清的Cr和BUN浓度、肾组织的MDA含量、肾小管损伤评分及AI均明显升高,SOD活性降低,p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3的蛋白水平显著上调(P0.05)。与I/R组相比,Pro组和AG490组的血清BUN和Cr浓度、肾组织的MDA含量、AI和肾小管损伤评分降低,SOD活性升高,p-JAK2、p-STAT_1和p-STAT_3蛋白水平显著下调(P0.05)。结论:异丙酚可减轻肝冷缺血再灌注后肾损伤,其机制可能与抑制JAK/STAT信号通路激活有关。     

丙泊酚对小鼠少突神经胶质细胞缺血缺氧再灌注损伤的保护

目的 探讨丙泊酚对小鼠少突神经胶质细胞缺血缺氧/再灌注损伤中的保护作用及可能机制.方法 将处于对数生长期的小鼠少突神经胶质细胞,体外构建缺血缺氧/再灌注损伤细胞模型.随机将细胞分为为4组(每组10个样本)、常规培养组(N组)、丙泊酚常规组(P组)、缺血缺氧再灌注组(H组)和缺血缺氧再灌注+丙泊酚组(HP组).P组和HP...     

肺缺血/再灌注损伤时肺组织及血浆中细胞因子的变化特点

目的： 探讨肺外科中肺缺血/再灌注损伤时细胞因子的变化特点。方法: 66只健康新西兰兔,随机分成2组：Ⅰ组为对照组（n=36）;Ⅱ组为单侧肺循环阻断组(n=30)。术中监测动物平均动脉压和心率;分别于开胸时(Ⅰ组)、缺血1h和再灌注1、2、4、6 h(Ⅰ、Ⅱ组)检测肺组织及血浆中TNF-α、IL-8和IL-10含量。结果: 各组动物术中血流动力学指标平稳。肺组织中TNF-α于再灌注后2-4 h左右出现峰值,IL-8于再灌注后4 h明显升高(P<0.05),IL-10则于再灌注后6 h明显升高(P<0.05);血浆中TNF-α于再灌注后6 h明显升高(P<0.05),IL-8和IL-10虽然有升高的趋势,但并无明显差异。结论: 肺外科中肺缺血/再灌注损伤时TNF-α的峰值较肺移植模型延迟;再灌注后肺组织中TNF-α、IL-8和IL-10均有较明显升高,且血浆中的升高滞后于肺组织中。     

预适应和后适应对缺血/再灌注损伤大鼠心肌组织炎症因子的影响

目的:观察缺血预适应(IPC)、缺血后适应(IPOC)对大鼠心肌组织缺血/再灌注(I/R)损伤后Toll样受体(TLR)及下游炎症因子的影响。方法:SD大鼠60只,通过SPSS软件随机分为假手术组(冠状动脉前降支下置线不结扎,n=15);I/R组(冠状动脉前降支结扎30min,再灌注60min,n=15);IPC组(冠状动脉前降支3次3min/5min的缺血/再灌注循环,然后结扎30min后,再持续灌注60min,n=15);IPOC组(冠状动脉前降支结扎30min,3次10s的缺血/再灌注循环,再持续灌注60min,n=15)。实验结束后测定大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白T(cTNT)水平;氯化硝基四氮唑兰(NBT)染色测定大鼠左室心肌梗死面积;免疫组织化学法测定心肌组织TLR-2、4的表达;酶联免疫吸附法测定心肌组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:与I/R组比较,IPC组、IPOC组大鼠血清CK-MB和cTNT水平显著降低(P<0.01),心肌梗死面积显著减小(P<0.01),心肌组织TLR-2、4表达和炎症因子IL-6、IL-1β、MCP-1、TNF-α含量显著下降(P<0.05,P<0.01);与IPC组比较,IPOC组减小I/R大鼠心肌梗死面积,降低血清CK-MB及心肌组织IL-6等作用和IPC组无显著差异(P>0.05)。结论:IPOC与IPC同样具有减轻心肌I/R损伤程度和缩小心肌梗死范围等作用,抑制TLR-2、4的表达可能是其保护I/R心肌的一个重要途径。     

肝细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响。方法:Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,即假手术组(Sham组),脑缺血/再灌注组(I/R组),HGF处理组(HGF +I/R组)。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。再灌注24h后,进行神经功能评分,测定脑梗死灶体积,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:I/R组大鼠出现不同程度的神经功能障碍,缺血侧脑组织见较大的梗死灶(231.15±22.79 mm3),脑组织SOD活性(83.10±17.16 U/mgPro)明显降低、MDA含量(11.86±2.91μmol/gPro)显著增高(与Sham组比较,P0.01)。与I/R组比较,HGF+I/R组神经功能障碍明显改善、梗死灶体积(196.64±25.28 mm3)明显减小(P0.05),SOD活性(109.91±23.93U/mgPro)显著升高(P0.05)、MDA含量(7.49±2.27μmol/gPro)明显降低(P0.01)。结论:HGF对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与增强自由基清除能力,抑制脂质过氧化反应有关。     

肢体缺血后适应对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及机制

目的:建立小鼠脑缺血后进行短暂肢体缺血提高脑缺血耐受模型,确定肢体缺血后适应对脑缺血时程的影响及热休克蛋白70(HSP70)的作用,探讨肢体缺血后适应(LIPostC)对脑缺血/再灌注损伤抑制作用和机制。方法:复制小鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),第1批实验将小鼠分为9组:假手术组、脑缺血/再灌注组(缺血时间分别0.5 h、1 h、1.5 h、2 h组),脑缺血/再灌注+短暂肢体缺血(LIPostC)组(0.5 h+LIPostC、1 h+LIPostC、1.5 h+LIPostC、2 h+LIPostC组)。分别观察小鼠运动行为变化;TTC染色测量脑梗死体积;HE染色观察脑组织损伤程度;TUNEL法检测神经元凋亡程度。第2批实验将小鼠随机分为4组:假手术组、脑缺血/再灌注组、MCAO+LIPostC组和MCAO+LIPostC+quercetin组(缺血时间为2 h)。术后24 h用Western blotting法检测脑皮质中HSP70蛋白表达和神经功能评分。结果:脑缺血时程影响小鼠运动行为和脑损伤程度,随脑缺血时间延长,小鼠的脑再灌注损伤程度加重,其行为缺陷和脑病理变化明显;缺血2 h组脑损伤程度比缺血1.5 h组和缺血1 h组严重(P0.05)。脑缺血后不同时间施加LIPostC显示不同程度的神经保护作用。LIPostC各组与相对应的I/R组比较,其脑再灌注损伤程度呈现不同程度减轻,行为学评分降低、脑梗死体积减小,脑皮质损伤减轻,TUNEL阳性凋亡细胞数目减少。脑缺血2 h再灌注损伤较重,但LIPostC仍具有明显的脑保护作用。以2 h脑缺血小鼠为模型进行机制研究,结果表明,LIPostC可提高缺血脑组织HSP70蛋白表达,改善神经功能,HSP70抑制剂quercetin可削弱LIPostC的这种脑保护作用。结论:LIPostC可抑制MCAO小鼠的脑缺血再灌注损伤,促进缺血脑区HSP70表达和改善神经功能。HSP70在LIPostC提高MCAO小鼠的脑缺血耐受机制中发挥重要作用。     

Early T1- and T2-weighted MRI signatures of transient and permanent middle cerebral artery occlusion in a murine stroke model studied at 9.4T

Early reperfusion following stroke results in reduced tissue injury. Paradoxically, restoration of blood flow under certain conditions may also cause delayed neuronal damage (reperfusion injury). The interrelationship of changes in T1, T2 and diffusion weighted images of tissue water were studied in mouse models of permanent and transient focal cerebral ischemia. A sham surgery or either permanent or transient (30 min) middle cerebral artery occlusion (MCAO) were induced in 14 mice. Magnetic resonance (MR) images of the brain were acquired including: T2 maps, T1 maps and diffusion weighted spin-echo images to produce apparent diffusion coefficient of water apparent diffusion coefficient (ADC) maps. Images were collected on average 90 min after MCAO in both the transient and permanent ischemia groups. Scans were repeated at 24h post-occlusion in mice with transient ischemia. Permanent MCAO resulted in decreases in ADC and no significant change in T2 acutely following MCAO. There were increases in T1 compared to sham controls within the ischemic region in mice following either transient or permanent MCAO (P<0.001). In contrast to permanent MCAO, there were increases in T2 (P<0.001) in the infarct area present in the reperfusion phase within 90 min of transient MCAO. There was considerable infarct growth at 24h (P<0.001). This study demonstrates that following either type of occlusion there are early increases in T1 suggesting an elevated water content in the stroke lesion, while only following transient MCAO are there early increases in T2, indicative of early vasogenic oedema with breakdown of the blood-brain barrier.     

地奥司明对肾缺血/再灌注大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平的影响

目的:观察地奥司明(DOSM)对肾缺血/再灌注(I/R)大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平的影响,并探讨其对肾脏的保护机制。方法:180只SD大鼠随机分成3组:假手术组(sham)、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。采用ELISA方法测定血清和肾脏组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10的水平,同时检测血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平。结果:在1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h不同时点的血清和肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10水平在I/R和DOSM+I/R组均显著高于sham组(P<0.01或P<0.05),且在I/R和DOSM+I/R组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8随病程进展而升高,在I/R组IL-10水平随病程进展降低,而在DOSM+I/R组IL-10水平随病程进展而升高,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平在I/R组显著高于DOSM+I/R组(P<0.05或P<0.01,除血清TNF-α1 h组外),而IL-10水平在DOMS+I/R组显著高于I/R组(P<0.01或P<0.05)。血Cr和BUN水平在DOSM+I/R组显著低于I/R组(P<0.05或P<0.01)。结论:DOSM可减少肾I/R病理过程中促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的产生,促进抗炎细胞因子IL-10的产生,有助于减轻I/R时炎性细胞因子瀑布样级联反应,发挥抗炎作用,从而减轻缺血再灌注损伤,保护肾功能。     

X线照射增加大鼠心肌对缺血/再灌注损伤的敏感性*

 目的：观察胸部X线放射治疗大鼠对心肌缺血/再灌注损伤的敏感性。方法：用胸部单次照射X线20 Gy构建放射性心脏损伤模型,采用完全随机分组方法将Wistar大鼠分为假损伤组、损伤组、假损伤+假手术组、假损伤+缺血/再灌注组、损伤+假手术组和损伤+缺血/再灌注组,于创伤后2周行心肌缺血/再灌注。通过BL-410生物信号记录分析系统记录各组大鼠左心室发展压（LVDP）、左心室压力上升的最大速率（+dp/dtmax）和左心室压力下降的最大速率（-dp/dtmax）;采用ELISA方法检测大鼠血清心肌肌钙蛋白I（cTnI）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）;用BI2000图像分析软件测定心肌梗死面积占总面积的百分比。结果：损伤+缺血/再灌注组离体心功能明显低于假损伤+缺血/再灌注组（P＜0.01）,损伤+缺血/再灌注组血清cTnI和CK-MB水平显著高于假损伤+缺血/再灌注组（P＜0.01）,损伤+缺血/再灌注组心肌梗死面积显著大于假损伤+缺血/再灌注组（P＜0.01）。结论:X线照射增加大鼠心肌对缺血/再灌注损伤的敏感性。     

Ghrelin对脑缺血再灌注大鼠脑水肿和水通道蛋白4表达的影响

 目的： 探讨ghrelin对脑缺血再灌注大鼠脑水肿、血脑屏障通透性及水通道蛋白4（AQP4）表达的影响。方法： 成年SD雄性大鼠随机分为3组:sham组、大脑中动脉阻塞（MCAO）组和ghrelin处理组。采用线栓法复制MCAO模型（缺血2 h,再灌注22 h）。Ghrelin组大鼠于再灌开始时经股静脉注射ghrelin 10 nmol/kg。TTC染色观察脑梗死体积,神经功能评分判断脑功能障碍程度,分别以体积计算和干湿重法检测脑肿胀程度和脑含水量的变化,收集脑血管外伊文思蓝(EB)来评估血脑屏障的破坏程度,免疫组化和Western blotting检测AQP4的表达变化。结果： 与MCAO组比较,ghrelin处理组的脑梗死体积较小（P<0.01）,神经功能评分较低（P<0.01）,脑组织中的EB渗出量较少（P<0.01）。Ghrelin处理组大鼠的脑肿胀体积、脑含水量和AQP4表达明显低于MCAO组（P<0.05）。结论： Ghrelin减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤,减轻脑水肿和血脑屏障的破坏,抑制脑组织中AQP4的表达。AQP4在ghrelin的脑保护机制中可能发挥重要作用。     

核黄素预处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤

目的: 探讨核黄素对肝缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法: 将24只SD大鼠随机分为3组,每组8只。假手术对照组(sham组)和缺血再灌注组(I/R组)大鼠喂以正常饲料,核黄素预处理组(R+I/R组)大鼠补充核黄素。喂养4周后,阻断大鼠肝门1 h,再灌注1 h建立I/R模型。术后采血并收集肝脏标本,分别检测血清及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;蛋白印迹法检测肝组织血红素加氧酶-1(HO-1) 表达情况;HE染色观察肝组织病理学改变。结果: 与sham组比较,I/R组大鼠血清AST、ALT活性及MDA水平均明显升高,SOD活性显著降低(P<0.01);肝组织中SOD活性亦明显下降(P<0.01),MDA水平及HO-1蛋白表达则显著增高(P<0.05)。而R+I/R组较I/R组大鼠血清AST、ALT活性及MDA水平均明显下降,SOD活性显著增强(P<0.01);肝组织中MDA水平亦明显降低,SOD及HO-1蛋白表达显著增高(P<0.01)。组织切片显示I/R组大鼠肝细胞肿胀,炎症细胞浸润,小叶结构紊乱;R+I/R组大鼠肝细胞仅轻度肿胀,几乎无气球样变,小叶结构清晰。结论: 核黄素预处理对缺血再灌注肝脏具有显著的保护作用,其作用机制可能与核黄素通过降低MDA水平、提高SOD活性及HO-1蛋白表达,增强肝脏的抗氧化能力,减轻脂质过氧化反应有关。     

Na+/H+ exchange inhibitor reduces vascular injury caused by ischemia-reperfusion in the rat hind limb

This study was designed to evaluate the effects of an Na+/H+ exchange inhibitor, SM-20550, on ischemia-reperfusion injury in the skeletal muscle. Male Sprague-Dawley rats were exposed to ischemia and reperfusion by clamping and releasing clamps both at the abdominal aorta and the bilateral femoral arteries. Rats were divided into three groups; the sham, the SM-20550 treated (SM), and the untreated control (Control) groups. In the SM and control groups, rats were exposed to 5-hr ischemia and 5-hr reperfusion. In the sham group, vessel isolation only was performed. SM-20550 (2.8 mg/kg/hr) in the SM group or vehicle in the sham and control group was continuously administered during ischemia and reperfusion periods. The wall thickness of the vessels were significantly (p<0.01) decreased in the control group than any other group. The internal diameter was significantly (p<0.01) higher in the control and SM group than in the sham group. The wall thickness/internal diameter ratio was significantly (p<0.05) lower in the control group than in the SM group. Thus, an Na+/H+ exchange inhibitor, SM-20550, ameliorated the morphological change due to ischemia reperfusion. These findings provide a clue into the mechanism of ischemia reperfusion injury.     

神经调节素治疗小鼠脑缺血再灌注损伤的机制(英)

目的：研究神经调节素-1β(NRG-1β)对小鼠脑缺血再灌注后神经行为功能、脑geng梗死体积、脑组织含水量、神经细胞凋亡以及胶质细胞水通道蛋白-4（AQP-4）表达的影响和神经保护作用机制。 方法:应用线栓法建立小鼠大脑中动脉闭塞再灌注（MCAO/R）模型,经颈内动脉微量注射NRG-1β(2 μg/kg) 干预治疗,Bederson法评价动物的神经行为功能,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察脑梗死体积,干湿重法测定脑组织含水量,免疫荧光染色检测神经细胞凋亡,免疫组织化学检测AQP-4的表达。结果:脑缺血再灌注损伤后,动物均表现神经行为功能障碍,缺血侧出现脑梗塞病灶,脑组织含水量、神经细胞凋亡数量和胶质细胞AQP-4表达均高于假手术对照组。与MCAO/R组相比较,MCAO/R+NRG-1β治疗组缺血24h动物神经行为功能损伤明显改善、凋亡神经细胞数明显减少、脑梗塞体积显著缩小,P<0.05;但脑组织含水量和AQP-4表达与MCAO/R组比较无显著差异,P>0.05。缺血再灌注22 h、46 h和70 h组,上述5项指标较相应的MCAO/R组均有显著差异,P<0.05。结论:NRG-1β可能通过下调脑缺血再灌注损伤诱导的胶质细胞AQP-4表达和抑制细胞凋亡,以减轻脑水肿和缩小梗死体积,从而改善动物的神经行为功能。