抗苗勒氏管激素对人黄素化颗粒细胞激素分泌的影响

目的：探讨抗苗勒氏管激素（AMH）对人颗粒细胞激素产生分时段的影响。方法：采用人黄素化颗粒细胞原代培养，分组加入不同浓度的AMH，分时段测定细胞培养液中的雌二醇（E2）和孕酮（P）浓度。结果：细胞培养液中E2、P浓度均随培养时间延长而升高，升高幅度渐下降。随着AMH浓度的增加，颗粒细胞的E2和P分泌明显降低， AMH 5μg/L组到20 μg/L组间有剂量依赖性，AMH 50 μg/L组与20 μg/L组比较无显著差别。结论：AMH可以降低体外培养人黄素化颗粒细胞的雌、孕激素分泌，并有一定的剂量依赖性，提示AMH可以影响颗粒细胞的激素合成过程。     

血管活性肠肽对肺泡巨噬细胞活化和p38MAPK信号通路影响的实验研究

目的 研究血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）对肺泡巨噬细胞活化的影响。方法 原代小鼠肺泡巨噬细胞分为Normal组（正常对照）、LPS组（脂多糖刺激巨噬细胞活化）、LPS+VIP组(脂多糖刺激巨噬细胞活化后,10^-6mol/L VIP干预)。3 C57BL/6小鼠随机分为Normal组（正常对照）,ALI组（急性肺损伤）,ALI+VIP组(急性肺损伤后,10^-8mol/L VIP气管滴入)。免疫荧光法检测肺泡巨噬细胞标记物CD86和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表达;ELISA法检测细胞培养上清和血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6的含量;RT-PCR法检测巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）mRNA的表达水平;Western blot法检测各组巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38MAPK、p-p...     

血管活性肠肽对肺泡巨噬细胞活化和p38MAPK信号通路影响的实验研究

目的 研究血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）对肺泡巨噬细胞活化的影响。方法 原代小鼠肺泡巨噬细胞分为Normal组（正常对照）、LPS组（脂多糖刺激巨噬细胞活化）、LPS+VIP组(脂多糖刺激巨噬细胞活化后,10^-6mol/L VIP干预)。3 C57BL/6小鼠随机分为Normal组（正常对照）,ALI组（急性肺损伤）,ALI+VIP组(急性肺损伤后,10^-8mol/L VIP气管滴入)。免疫荧光法检测肺泡巨噬细胞标记物CD86和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表达;ELISA法检测细胞培养上清和血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6的含量;RT-PCR法检测巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）mRNA的表达水平;Western blot法检测各组巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38MAPK、p-p...     

Akt激酶抑制剂MK-2206诱导U2OS人骨肉瘤细胞凋亡与自噬

 目的：研究Akt抑制剂MK-2206对U2OS细胞凋亡和自噬的影响。方法：采用MTT法检测MK-2206对U2OS细胞活力的影响,DNA片段末端标记试剂盒检测细胞凋亡的变化,免疫印迹法检测细胞内蛋白的表达,用LC3-II的表达量用来确定细胞的自噬水平。结果：MK-2206剂量依赖性地降低了U2OS细胞的活力;MK-2206能够促进caspase-9、caspase-3和PARP的活化切割而诱导U2OS细胞发生凋亡;MK-2206给药后可促进细胞内LC3-II的表达,氯喹阻断自噬后明显增强了MK-2206对U2OS细胞活力的抑制作用。结论：Akt 抑制剂MK-2206能够诱导U2OS细胞发生凋亡和自噬;抑制自噬可促进MK-2206对U2OS细胞的毒性。     

抑制自噬促进MK-2206诱导SGC-7901胃癌细胞发生DNA损伤

目的:探讨蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)抑制剂MK-2206对胃癌细胞SGC-7901DNA损伤的影响。方法:不同浓度的MK-2206作用于SGC-7901细胞后,免疫荧光检测细胞内DNA损伤标记分子磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)焦点的生成,Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平,同时观察MK-2206对自噬标志蛋白LC3-II表达量的影响,用以确定MK-2206是否促进细胞发生自噬。结果:MK-2206能够诱导SGC-7901细胞发生DNA损伤,促进细胞内γ-H2AX焦点生成,并且激活DNA损伤相关蛋白的表达;MK-2206作用细胞后,LC3-II的生成增加;抑制细胞的自噬显著增强了MK-2206诱导的H2AX磷酸化水平。结论:Akt抑制剂MK-2206能够诱导细胞发生DNA损伤和自噬,抑制自噬促进了MK-2206诱导的DNA损伤。     

越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagen I表达的影响

 目的：探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞（HFSF）基质金属蛋白酶2（MMP2）和I型胶原蛋白（collagen I）表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法：取不同浓度（0、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1和1 g/L）越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间（6 h、8 h、12 h、24 h和48 h）对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时（10^-1 g/L越橘花青素作用12 h）的细胞周期和凋亡情况;RT-qPCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果：MTT法结果显示HFSF在10^-1 g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10^-1 g/L越橘花青素组S和G₂期的细胞比例增加（P<0.05）,凋亡率差异无统计学意义;RT-qPCR显示MMP2的mRNA表达量下降（P<0.05）,COL1A1的mRNA表达量增加（P<0.05）,COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降（P<0.05）,collagen I蛋白表达增加（P<0.05）。结论：越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen I表达的作用。     

多囊卵巢综合征卵泡颗粒细胞提前对黄体生成素反应

目的： 探讨多囊卵巢综合征（PCOS）卵泡液中激素和颗粒细胞黄体生成素（LH）受体mRNA表达的关系。方法: 对PCOS组12例和对照组15例患者于月经周期的第7-10 d手术获取卵泡和卵泡液，采用微粒子化学发光法检测卵泡液中卵泡刺激素（FSH）、LH、孕酮（P）、雌二醇（E2）和胰岛素（insulin）的水平，采用ELISA检测卵泡液中雄烯二酮（A）的水平，对颗粒细胞和卵泡膜细胞LH受体mRNA进行RT-PCR半定量检测。结果: PCOS组卵泡液中LH［（3.8±2.1 vs 1.7±0.8)U/L, P<0.01］、A［(600.0±373.4 vs 212.4±205.4)μg/L, P<0.05］和颗粒细胞LH受体mRNA的表达(0.29±0.16 vs 0.12±0.13, P<0.01)显著高于对照组， PCOS组卵泡的颗粒细胞提前表达LH受体mRNA; 对照组卵泡直径小于 7 mm 时，RT-PCR检测不到颗粒细胞LH受体mRNA表达，而PCOS组卵泡直径达到 4 mm 时，发现颗粒细胞LH受体mRNA已提前表达。颗粒细胞LH受体mRNA的表达与卵泡液中LH(r=0.67,P<0.01)、胰岛素(r=0.51,P<0.05)及卵泡膜细胞LH受体mRNA表达的水平(r=0.6,P<0.01)呈正相关。结论: PCOS的卵泡液中存在高水平的LH，PCOS卵泡颗粒细胞提前对LH反应，颗粒细胞和卵泡膜细胞合成A和P增强，这可能是PCOS卵泡发育停滞的原因之一。     

虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响

背景：虎杖多年来一直是烧伤、创伤创面愈合治疗方剂中的一味主药,因成分复杂,具体药理作用难以进一步研究,对于虎杖苷促愈合作用目前未见文献报道。 目的：分析不同浓度虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响。 方法：取烧伤后行瘢痕切除植皮4例患者剩余小中厚皮片,原代培养人成纤维细胞。用含有10^-6,10^-5,10^-4,10^-3,10^-2 mol/L不同浓度虎杖苷培养液作用第2代人成纤维细胞,未加虎杖苷的培养液作为对照。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;ELISA法检测上清中纤维结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况。 结果与结论：10^-5、10^-4 mol/L组促进成纤维细胞增殖最明显,10^-2 mol/L组吸光度值显著下降,细胞生长受抑制。10^-3 mol/L组G1期细胞大幅度下降,细胞有S期阻滞现象。10^-2 mol/L组有明确的促凋亡作用。10^-2 mol/L组上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较其他各组显著增高(P < 0.05);纤维结合蛋白较对照组显著增高(P < 0.05),较其他各组有所下降(P < 0.05)。说明低浓度虎杖苷有促进成纤维细胞增殖、保护细胞免于凋亡及促进纤维结合蛋白的表达与合成分泌的作用,促进成纤维细胞增殖的最适浓度应为10^-5~10^-4 mol/L。     

转化生长因子-β和Smad4在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的 探讨转化生长因子-β（TGF-β）、Smad4 在绝经过渡期大鼠卵巢颗粒细胞中的表达,分析其与卵巢功能衰退的关系。 方法 雌性SD大鼠分为对照组（C组,6月龄,阴道涂片筛选,n=9）、绝经过渡期组（MT组,12~14月龄,阴道涂片筛选,n=8）,大鼠麻醉处死后迅速取出卵巢,采用机械分离方法释放卵泡颗粒细胞,于CO₂培养箱中培养,利用免疫细胞化学法检测促卵泡刺激素受体（FSHR）蛋白的表达,鉴定卵巢颗粒细胞;免疫细胞化学法检测TGF-β、Smad4蛋白在两组卵巢颗粒细胞的表达;采用Real-time PCR的方法检测各组颗粒细胞中TGF-β、Smad4 mRNA的表达。 结果 免疫细胞化学显示分离培养的颗粒细胞纯度＞95%,MT组TGF-β、Smad4蛋白表达水平低于对照组（P<0.05）;Real-time PCR结果显示,两组均有TGF-β、Smad4 mRNA的表达,MT组TGF-β、Smad4 mRNA表达水平显著低于对照组（P<0.05）。 结论 TGF-β、Smad4参与绝经过渡期大鼠卵巢功能的衰退过程,绝经过渡期大鼠功能衰退的部分原因可能与卵巢颗粒细胞中TGF-β、Smad4 的表达降低有关。     

唑来膦酸对大鼠成骨细胞护骨素及肿瘤坏死因子α mRNA表达的影响

背景：唑来膦酸属于第3代双瞵酸盐类药物,在临床上被广泛应用于治疗骨吸收增加类疾病,其对破骨细胞的作用及影响已取得了共识,而对于成骨细胞的影响尚有争议。 目的：观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素及肿瘤坏死因子α mRNA表达的影响。 方法：体外培养新生24 h内SD大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,用10^-5~10^-9 mol/L唑来膦酸进行干预,分别于干预后第3,5,7天采用MTT法来测吸光度值,以检测唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖的影响;硝基苯基质动力学法和RT-PCR在干预后72 h,测量细胞碱性磷酸酶活性和护骨素及肿瘤坏死因子α mRNA的表达。 结果与结论：较高浓度(10^-5 mol/L)的唑来膦酸明显抑制成骨细胞增殖, 10^-7~10^-9 mol/L唑来膦酸不影响成骨细胞的分化。10^-5~10^-9 mol/L唑来膦酸能使成骨细胞护骨素mRNA表达增加,肿瘤坏死因子α mRNA表达下降。说明唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞的增殖及分化,其可通过调节成骨细胞护骨素、肿瘤坏死因子α mRNA的表达,来发挥其抗骨吸收的作用。     

乙烯雌酚可诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化

背景：关于雌激素对骨髓基质干细胞作用的报道尚不多。 目的：观察乙烯雌酚对兔骨髓基质干细胞成骨分化的影响。 方法：体外培养骨髓基质干细胞,用0,10^-7,10^-6,10^-5 mol/L浓度乙烯雌酚干预,并设地塞米松10^-8 mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L为阳性对照。 结果与结论：乙烯雌酚干预培养24,48,72 h,10^-6 mol/L组显著促进了骨髓基质干细胞增殖(P < 0.01)。干预48 h 10^-5 mol/L组显著抑制细胞增殖,干预72 h 10^-7 mol/L组显著抑制细胞增殖(P < 0.01)。10^-7 mol/L组乙烯雌酚干预25 d后开始出现钙化结节;10^-7,10^-6 mol/L组干预14,21 d碱性磷酸酶活性显著增加。证实乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化。     

白藜芦醇拮抗卵泡颗粒细胞氧化应激的损伤

目的 探讨白藜芦醇是否可以拮抗过氧化氢诱导的卵泡颗粒细胞氧化应激损伤。方法 收集体外受精/单精子卵泡浆内注射（IVF/ICSI）患者捡卵后卵泡液中的颗粒细胞并进行培养。将培养后的颗粒细胞分为4组：对照组,损伤模型组,10 μmol/L白藜芦醇组和50 μmol/L白藜芦醇组。采用CCK-8法测定细胞活性,硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量,水溶性四氮唑-1（WST-1）法测定超氧化物歧化酶（SOD）水平,竞争ELISA 法测定孕酮分泌量,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blotting测定Bcl-2、Caspase-3和沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）蛋白表达。结果 与对照组比较,损伤模型组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2蛋白表达均明显降低,而MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显增加（P<0.05）。与损伤模型组比较,10 μmol/L白藜芦醇组各项指标未显示出统计学差异;而50 μmol/L白藜芦醇组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2及SIRT1蛋白表达均明显升高,MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 50 μmol/L白藜芦醇可以通过增加SIRT1的活性,增强颗粒细胞的抗氧化及抗凋亡能力,改善颗粒细胞的功能。     

Akt在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌细胞特异分化过程中的作用

目的研究Akt在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌细胞特异分化过程的作用以及机制。方法构建过表达Islet-1细胞模型;流式细胞计量术检测转染效率;CCK-8检测细胞增殖;Western blot检测Islet-1、c Tn T和p-Akt/T-Akt蛋白表达;RT-q PCR检测心肌早期特异转录因子GATA4、Nkx2.5和Mef2c mRNA表达。结果随着MK-2206(Akt抑制剂)浓度的增加,细胞增殖抑制率升高(P<0.05),对Akt活性的最佳抑制浓度为8 nmol/L;随着Islet-1诱导分化时间的延长,感染细胞的p-Akt/T-Akt蛋白表达降低(P<0.05),心肌特异转录因子GATA4、Nkx2.5和Mef2c基因的表达升高(P<0.05);而经MK-2206处理的感染细胞,GATA4、Nkx2.5和Mef2c的复制在第1周时出现明显升高后又逐渐降低(P<0.05)。结论 Akt在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌细胞特异分化过程中于不同分化阶段发挥着不同的调节作用。     

干细胞相关因子在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

背景：现有研究表明,人与大鼠卵巢优势卵泡中的颗粒细胞具有表达干细胞特性的现象。 目的：探讨干细胞相关因子在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。 方法：将大鼠卵巢组织制作石蜡切片后,使用免疫组化法检测CD34,CD133,ABCG2/Bcrp1,Pou5f1/Oct-4的表达。卵泡穿刺法获取颗粒细胞,并使用免疫组化法检测FSHR受体的表达以鉴定颗粒细胞的纯度。免疫组化法检测颗粒细胞CD44,C-Kit的表达情况,RT-PCR检测卵巢组织与颗粒细胞ABCG2/Bcrp1、Pou5f1/Oct-4、Nanog基因的表达情况。 结果与结论：免疫组化法石蜡切片显示部分卵巢颗粒细胞CD34,CD133,ABCG2/Bcrp1,Pou5f1/Oct-4阳性表达,而Pou5f1/Oct-4蛋白的表达在卵泡发育的周期中逐步增多,并在黄体化的时候显著增强,形成白体后则消失,因而具有周期性表达的特点。卵泡穿刺法提取的原代颗粒细胞FSHR受体鉴定阳性率在95%以上。体外培养的颗粒细胞以长梭形或菱形为主,部分细胞有聚集生长现象,且CD44,C-Kit阳性表达。RT-PCR检测结果显示,卵巢组织与体外培养的颗粒细胞均不表达Nanog,卵巢低表达Pou5f1/Oct-4,强烈表达ABCG2/Bcrp1,颗粒细胞微弱表达Pou5f1/Oct-4,而ABCG2/Bcrp1表达较强。以上结果显示大鼠卵巢中的部分颗粒细胞具有干细胞的特性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

葛根素预处理上调内皮型一氧化氮合酶的表达减轻人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤

 目的:探讨葛根素(puerarin,PUE)预处理对缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:HUVECs随机分为正常对照(control)组、H/R组、单纯PUE组和PUE+H/R组(1.0×10^-3 mol/L PUE预处理24 h后进行H/R)。采用Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,化学比色法检测组成型一氧化氮合酶(cNOS)的活性,TUNEL法检测细胞凋亡。此外,在PUE预处理前使用ERK蛋白激酶抑制剂U0126(1.0×10^-5 mol/L)或PI3K/Akt蛋白激酶抑制剂LY294002(5.0×10^-5mol/L)处理细胞1 h,再进行H/R。结果:与control组相比,H/R组的eNOS蛋白表达水平降低(P<0.05),PUE预处理上调eNOS蛋白的表达水平(P<0.05),该上调作用均可被U0126及LY294002抑制(P<0.05);与control组相比,H/R组的cNOS活力下降(P<0.05),PUE预处理组的cNOS活力增加(P<0.05);与control组相比,H/R组细胞凋亡指数显著增大(P<0.01),PUE预处理组的细胞凋亡指数减小(P<0.01)。结论:H/R可使HUVECs受损伤,eNOS蛋白表达及活性降低,细胞凋亡增加。PUE预处理可通过ERK1/2信号通路和PI3K/Akt信号通路上调HUVECs的eNOS蛋白表达,增强eNOS活性,减少细胞凋亡,发挥内皮细胞保护作用。     

白藜芦醇治疗POI大鼠药物浓度筛选

目的　通过观察不同浓度白藜芦醇治疗早发性卵巢功能不全（POI）成模大鼠的疗效，确定其治疗早发性卵巢功能不全大鼠的最佳药物浓度。 方法　将90只5周龄SPF级SD健康雌性大鼠按随机数字表分为低剂量白藜芦醇灌胃治疗组(a组18只)、中剂量白藜芦醇灌胃治疗组(b组18只)、高剂量白藜芦醇灌胃治疗组(c组18只)、模型对照组(d组18只)、空白对照组(e组18只)。e组从造模前的动物中随机抽取；a、b、c、d组从成功造模（72只给予雷公藤多苷片50 mg·kg-1·d-1 灌胃14 d，根据观测指标确定早发性卵巢功能不全成模）的动物中随机分组获得。a、b、c组分别采用每日20、50、80 mg/kg 灌胃剂量，模型对照组采用0.5％羧甲基纤维素钠溶液灌胃。42 d后采用ELISA法检测大鼠血清性激素：抗苗勒管激素（AMH）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）水平，HE染色镜检大鼠单位卵巢面积内成熟卵泡、闭锁卵泡和黄体数，评价其疗效。 结果　不同浓度白藜芦醇灌胃治疗组POI大鼠较0.5％羧甲基纤维素溶液灌胃组POI大鼠血清中AMH、E2水平高（P<0.05），LH、FSH水平低（P<0.05）。不同浓度白藜芦醇灌胃治疗组POI大鼠较空白对照组大鼠血清中AMH、E2水平低（P<0.05），LH、FSH水平高（P<0.05）。与a、b、c、e组比较，d组卵巢内颗粒细胞层数，成熟卵泡数以及黄体数量少（P<0.05），闭锁卵泡数明显增加（P<0.05）。 结论　不同浓度白藜芦醇灌胃治疗POI大鼠均有一定的疗效，50 mg/kg浓度效果最好，是最佳药物浓度。     

白杨素对大鼠主动脉舒张作用的影响

 目的: 研究白杨素(chrysin)对离体大鼠主动脉肌源性反应的影响,并探讨其作用机制。方法: 分离SD大鼠主动脉,采用离体血管环灌流装置观察chrysin对血管环的基础张力及对60 mmol/L KCl预收缩血管的舒张作用,并结合不同抑制剂处理,探讨其作用于血管环的可能机制。结果: Chrysin(10^-6 mol/L、3×10^-6 mol/L、10^-5 mol/L、3×10^-5 mol/L和10^-4 mol/L)对基础状态血管无明显影响,但对60 mmol/L KCl预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用,并且去内皮组舒张作用弱于内皮完整组(P<0.05)。NOS抑制剂L-NAME(10^-4 mol/L)处理血管后,chrysin的舒张血管作用部分被抑制(P<0.05),COX抑制剂吲哚美辛(10^-5 mol/L)处理血管后无明显抑制作用。钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(10^-3 mol/L)、氯化钡(10^-4 mol/L)、格列苯脲(10^-5 mol/L)和四乙胺(10^-3 mol/L)预孵后,chrysin舒张血管作用均被部分抑制(P<0.05)。Chrysin(10^-6 mol/L、10^-5 mol/L和10^-4 mol/L)可浓度依赖性抑制2.5 mmol/L CaCl₂引起的主动脉收缩。结论: Chrysin能够浓度依赖性舒张大鼠主动脉,其作用机制可能与促进一氧化氮释放、激活4种K⁺通道及减少细胞内钙离子浓度有关。     

组胺对星形胶质细胞Egr-1表达的调节作用

 目的: 探讨组胺对星形胶质细胞早期反应生长因子-1(Egr-1)表达是否具有调节作用。方法: 将野生型(WT)和组氨酸脱羧酶敲除(HDC-KO)小鼠及组胺处理的HDC-KO小鼠取脑,并提取皮层组织总RNA。将原代培养的大鼠皮层星形胶质细胞分别给予不同浓度的组胺(10^-8、10^-7、10^-6、10^-5或10^-4 mol/L)处理15、30、60、120或240 min。组胺H₁、H₂受体拮抗剂分别于组胺给药前15 min加入。组胺处理完毕后,提取细胞总RNA或蛋白。利用real-time PCR和Western blot测定Egr-1的表达。结果: 与WT小鼠相比,HDC-KO小鼠大脑皮层Egr-1的mRNA表达量显著降低,而外源性给予组胺则能促进其Egr-1的mRNA表达。在培养的星形胶质细胞上,组胺可促进Egr-1的mRNA表达,其中10^-5 mol/L的组胺作用最强,而组胺(10^-5 mol/L)处理30 min时Egr-1的mRNA表达量达到峰值,相应的Egr-1蛋白表达于60 min时显著增高,该作用可被组胺H₁受体拮抗剂而非H₂受体拮抗剂显著抑制。结论: 组胺对大脑皮层组织及培养的星形胶质细胞Egr-1表达具有上调作用,该作用与激动组胺H₁受体有关。     

Smad2/3与Smad7在大鼠化疗性卵巢早衰卵泡中的表达和意义

目的 探讨顺铂对大鼠卵巢结构和功能损伤的影响及其可能的分子机制。方法 3月龄SD 雌性大鼠随机分为对照组（C组,5只）和化疗组（H组,5只）。H组给予每只大鼠腹腔注射顺铂2 mg/（kg.d）,C组给予腹腔注射等体积生理盐水,连续注射7 d后检测大鼠卵巢指数（卵巢湿重/体重）;酶联免疫吸附法检测血清雌二醇（E₂）和促卵泡刺激素（FSH）水平;苏木素-伊红染色观察卵泡发育并计数各级卵泡;免疫组织化学和Real-time PCR法检测各组Smad2、磷酸化Smad2（p-Smad2）、Smad3、磷酸化Smad3（p-Smad3）、Smad4和Smad7的蛋白和mRNA表达。结果 与C组相比,H组大鼠卵巢体积减小,生长卵泡数明显减少（P<0.05）,大鼠卵巢指数下降（P<0.05）,血清中E2水平降低和FSH水平上升（P<0.05）。免疫组织化学和Real-time PCR结果显示,Smad2（p-Smad2）、Smad3（p-Smad3）、Smad4和Smad7蛋白在卵巢各级卵泡均有表达,H组Smad2蛋白和mRNA表达增加（P<0.05）,Smad2磷酸化水平（p-Smad2）表达增高（P<0.05）;Smad3、Smad4和Smad7蛋白和mRNA表达减少（P<0.05）,p-Smad3 表达降低（P<0.05）。结论 顺铂诱导大鼠卵泡损伤并促进卵巢早衰,引起卵泡细胞内Smad2表达增加,Smad3、Smad7表达降低,Smad细胞内信号通路参与了化疗性卵巢损伤的过程。     

Akt/GSK-3β介导高糖上调肾小管上皮细胞Snail1的表达

 目的：观察高糖对原代肾小管上皮细胞Snail1和蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β（Akt/GSK-3β）信号通路的影响,探讨糖尿病肾病时Snail1表达的调节机制。方法：原代培养大鼠肾小管上皮细胞（RTECs）,随机分为正常糖对照组、高渗组和高糖组。Western blotting检测不同处理组 RTECs不同培养时点（30 min、2 h、12 h、24 h、48 h和72 h）Snail1、Akt1、GSK-3β、磷酸化Akt（p-Akt,Ser473）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β,Ser9）蛋白的水平。RT-PCR检测Snail1、Akt1和GSK3β mRNA的表达。RTECs以磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002（25 μmol/L）预处理50 min,再与高糖共同培养24 h,Western blotting检测上述指标蛋白的表达。结果：与正常糖对照组比较,高糖组RTECs Snail1和Akt1蛋白和mRNA的表达上调,p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达增加,但总GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化。以LY294002处理后,高糖组RTECs Snail1、p-Akt及p-GSK-3β蛋白表达水平较未处理高糖组明显下降,但LY294002不影响总Akt1和GSK-3β蛋白表达。结论：Akt/GSK-3β可能介导了高糖诱导的RTECs锌指转录因子Snail1的表达上调。