LncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达及对MG-63细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA母系印记基因3(lncRNA MEG3)在骨肉瘤组织中的表达及对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡与侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测5例骨肉瘤组织及癌旁对应正常组织中lncRNA MEG3的表达水平。构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒,MEG3过表达后,MTT方法检测MG63细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测MG63细胞的凋亡率;Transwell实验检测MG63细胞侵袭能力的变化;Western blot方法检测MG63细胞增殖细胞核抗原(PCNA)与Racl蛋白的表达变化。结果 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P0.01)。lncRNA MEG3过表达后,MG63细胞的增殖与侵袭能力显著降低,凋亡率显著上升,PCNA与Racl蛋白的表达显著降低(P0.01)。结论 lncRNA MEG3在骨肉瘤组织中低表达,过表达lncRNA MEG3能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖与侵袭,并促进凋亡。     

沉默Cat D对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及相关信号通路

研究组织蛋白酶D(cathepsin D,Cat D)在骨肉瘤细胞中的表达，并通过shRNA技术沉默Cat D,探讨该分子对骨肉瘤细胞MG63和U2OS增殖、凋亡及侵袭的作用和机制。构建sh-Cat D质粒及阴性对照质粒sh-NC并转染至骨肉瘤细胞MG63和U2OS中，RT-PCR和Western blotting检测Cat D在骨肉瘤细胞中的表达；CCK-8法、克隆形成实验和EdU荧光染色实验检测骨肉瘤细胞的增殖活性；Transwell实验检测肿瘤细胞的侵袭能力；FACS检测肿瘤细胞的凋亡情况；Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达及Akt/mTOR信号通路相关蛋白(Akt和mTOR)的磷酸化水平。结果显示，相较健康人成骨细胞hFOB,Cat D在骨肉瘤细胞中的表达显著升高，尤其是MG63和U2OS细胞中Cat D的高表达均显著(均P<0.001)。与sh-NC组相比，Cat D沉默显著抑制MG63和U2OS细胞的增殖和侵袭(均P<0.001)。与sh-NC组相比，Cat D沉默通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达促进肿瘤细胞的...     

miR-21靶向FasL对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的探讨miR-21是否能够通过靶向抑制FasL基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖。方法利用荧光素酶报告基因实验验证FasL基因是否为miR-21的靶基因,应用阳离子脂质体Lipofectamine~(TM)2000将miR-21 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞FasL m RNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化。结果荧光素酶报告基因实验证实FasL基因为miR-21的靶基因。与对照组相比,转染miR-21 mimics后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显升高(P0.01);与对照组相比,转染miR-21 inhibitor后,MG-63细胞FasL mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显降低,P0.01。结论 miR-21可能通过靶向FasL基因促进人骨肉瘤MG-63细胞增殖。     

WT1基因对骨肉瘤细胞增殖凋亡和侵袭作用的实验研究

目的 探讨WT1基因在骨肉瘤中的表达及其对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 体外培养人成骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞MG-63细胞, Western blot法观察WT1蛋白的表达情况。体外培养MG-63细胞,分为siRNA-1组、siRNA-2组、阴性对照组(NC)组、空白对照组,分别转染WT1 siRNA-1、WTI siRNA-2及NC链,空白对照只加入转染试剂。转染后采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测siRNA-1组、siRNA-2组、NC组、空白对照组MG-63细胞WT1基因 mRNA的表达情况,选择抑制效果好的siRNA-2组用于后续实验。将转染后的MG-63细胞分为siRNA-2组、NC组,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率,比色法检测Caspase-3活性,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测WT1、Bcl-2、MMP-2蛋白的表达水平。结果 Western blot法检测结果显示,骨肉瘤MG-63细胞中WT1蛋白的相对表达量1.29±0.14,明显高于成骨细胞hFOB1.19的0.23±0.07,差异有统计学意义(t=6.603, P＜0.01)。qPCR检测结果显示,骨肉瘤MG-63细胞转染后,siRNA-1组、siRNA-2组WT1 mRNA相对表达量均低于NC组和空白对照组,其中siRNA-2的抑制效果更显著,差异有统计学意义(F=12.470, P＜0.05)。根据此结果选择siRNA-2进行后续实验。转染siRNA-2后,CCK-8法检测结果显示, siRNA-2组光密度(OD)值为0.63±0.10,明显低于NC组的1.04±0.09,差异有统计学意义(t=3.088, P＜0.05);流式细胞技术检测结果显示,siRNA-2组MG-63细胞凋亡率为5.10%±0.41%,明显高于NC组的2.57%±0.10%,差异有统计学意义(t=4.014, P＜0.05);比色法检测结果显示,siRNA-2组细胞Caspase-3的相对活性为2.74±0.29,明显高于NC组的1.07±0.13,差异有统计学意义(t=5.177, P＜0.05);Transwell小室法检测结果显示,siRNA-2组侵袭细胞为(75.0±9.5)个,明显少于NC组的(118.0±8.6)个,差异有统计学意义(t=3.340, P＜0.05);Western blot检测结果显示,siRNA-2组WT1、Bcl-2、MMP-2蛋白相对表达量均明显低于NC组,差异均有统计学意义(t=6.063、3.979、4.232, P值均＜0.05)。结论 WT1在骨肉瘤细胞中高表达,靶向下调其表达水平可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,这可能与Bcl-2和MMP-2表达下调有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导caspase-8依赖的骨肉瘤细胞凋亡机制研究

目的：探讨蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO(MG132)对人骨肉瘤细胞MG-63的作用以及可能作用机制。方法:将不同浓度的MG132作用于骨肉瘤细胞MG-63，采用显微镜观察形态改变、电镜观察细胞超微结构、MTT检测细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及细胞周期改变、RT-PCR检测基因转录、Western blotting检测蛋白表达水平。 结果:MG132能有效诱导人骨肉瘤细胞系MG-63细胞周期在G₂-M期的停滞，并引起MG-63的凋亡，出现凋亡的典型形态学改变，同时出现p27kip1蛋白的积累，caspase-8活化蛋白表达增加，Bax∶Bcl-2蛋白含量比例的增高，而对正常的人二倍体成纤维细胞，MG132并未表现诱导其凋亡的活性。结论:MG132引起的人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡也许是与caspase-8、p27kip1和Bcl-2蛋白相关的。     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究

目的：通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达，并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。 方法： 以腺病毒为载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞，降低MG-63细胞c-myc的表达，与不同浓度的顺铂作用后，采用MTT、蛋白免疫印迹（Western blot）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。 结果： 构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48 h后，可明显降低c-Myc蛋白表达，并与浓度为2.0 mg/L的顺铂作用2 h后 ，对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%；转染的细胞Bcl-2表达降低，Bax表达增加，而E2F-1的表达无变化；FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。 结论： 降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。     

敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶靶向能量代谢逆转骨肉瘤恶性生物学的行为

目的 探讨敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH) 靶向能量代谢对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响。 方法 Real-time PCR及Western blotting检测PHGDH在成骨细胞hFOB1.19和不同恶性程度骨肉瘤细胞TE85、MG63、143B中的表达。采用脂质体转染法将短发夹RNA（shRNA）-PHGDH重组质粒转染至143B细胞中, Real-time PCR和Western blotting检测PHGDH的表达变化；结晶紫染色法、细胞计数法、CCK-8实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞平行迁移能力，Transwell实验检测细胞垂直迁移及侵袭能力；Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法检测细胞凋亡；碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S染色检测成骨分化作用,Western blotting检测成骨分化指标Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OC)的表达情况；Real-time PCR检测能量代谢相关基因葡萄糖转运蛋白1（(GLUT1）、6-磷酸果糖激酶1（PFK1）、M2型丙酮酸激酶（PKM2）、乳酸脱氢酶A（LDHA)的表达，乳酸检测试剂盒测定乳酸分泌量，三磷酸腺苷（ATP）检测试剂盒检测ATP产生量。 结果 PHGDH在143B细胞中的表达明显高于在hFOB1.19、MG63和TE85细胞中(P<0.01)；转染shRNA-PHGDH重组质粒使143B细胞中的PHGDH表达量降低(P<0.01)、增殖能力降低(P<0.01)、细胞迁移及侵袭能力减低(P<0.01)、凋亡率增高(P<0.01)、ALP染色阳性率增加(P<0.01)、茜素红染色阳性率增加(P＜0.05)、Runx2(P<0.05)和OC的表达增高(P<0.01)、能量代谢相关基因(GLUT1、PFK1、PKM2、LDHA)的表达下调(P<0.01)、乳酸减少(P<0.01)、ATP增多(P<0.05)。 结论 敲低PHGDH可通过能量代谢抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭, 促进其凋亡, 并促进其成骨分化。     

长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响

目的:观察长链非编码RNA TTTY15在骨肉瘤组织及细胞株中的表达,并探讨其对骨肉瘤细胞活力和侵袭的影响。方法:应用qPCR法检测11例骨肉瘤组织及其瘤旁组织中TTTY15的水平,同时检测TTTY15在骨肉瘤细胞株(143B、Saos2、MG-63、U2OS和HOS)和人成骨细胞株hFOB1.19中的表达。在表达量最高的细胞株(MG-63)中通过转染小干扰RNA敲减TTTY15的表达,CCK-8法检测TTTY15低表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,Transwell检测其对细胞侵袭能力的影响,qPCR检测miR-216b-5p和FOXM1 mRNA的表达,Western blot法检测相关蛋白的变化。结果 :与瘤旁正常组织相比,TTTY15在骨肉瘤组织中表达升高(P0.01);与人成骨细胞相比,TTTY15在骨肉瘤细胞株中表达升高(P0.05),其中在MG-63细胞中表达水平最高(P0.01)。敲减TTTY15在MG-63细胞的表达后,细胞活力降低(P0.05),细胞周期被抑制在G_0/G_1期(P0.01),细胞的侵袭能力降低(P0.01),miR-216b-5p mRNA表达水平升高(P0.01),FOXM1的mRNA表达降低(P0.01),同时FOXM1、CDK4、cyclin D1、MMP-2和N-cadherin的蛋白表达降低,而E-cadherin的蛋白表达升高(P0.05)。结论:TTTY15在骨肉瘤组织和细胞株中表达增高,敲减TTTY15的表达可抑制骨肉瘤细胞的活力和侵袭能力,其机制可能与TTTY15低表达导致miR-216b-5p的表达升高,引起FOXM1基因表达下调有关。     

miRNA-10b靶向调控Twist促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的研究

目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA (Twist siRNA)分别通过脂质体转染法转染入骨肉瘤细胞系MG-63,应用RT-PCR检测细胞中miR-10b和Twist mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Twist及内参β-actin蛋白表达水平,采用MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。结果与正常癌旁骨组织相比,miR-10b在骨肉瘤组织中呈现明显高表达,差异具有极显著性统计学意义(P0.01); miR-10b mimic可使Twist mRNA和蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),同时可显著增强MG-63细胞的增殖与侵袭能力(P0.05),而转染miR-10b mimic和Twist siRNA的MG-63细胞的增殖与侵袭能力较仅转染miR-10b mimic的MG-63细胞显著减弱(P0.05)。结论人骨肉瘤细胞系MG-63中miR-10b的表达上调,可能通过靶向激活Twist信号通路促进骨肉瘤细胞的异常增殖与远处侵袭。     

辣椒素诱导人骨肉瘤细胞MG-63发生免疫原性细胞死亡

目的探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖并诱导其免疫原性死亡(ICD)。方法 MTT检测细胞的增殖;线粒体膜电位分析细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞膜上钙网蛋白(CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放;ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。结果辣椒素及顺铂作用均能抑制细胞MG-63增殖(P0.01),且呈剂量依赖性;辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡(P0.01),但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面,且促进ATP及HMGB1的释放(P0.01)。结论辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。     

LncRNA CCAT1通过调控MYC蛋白的表达激活MAPK信号通路影响胃癌细胞的生物学行为

目的：探讨lncRNA CCAT1通过调控瘤细胞病毒癌基因（MYC）蛋白的表达激活MAPK信号通路影响胃癌细胞的生物学行为及机制。方法：qPCR检测lncRNA CCAT1在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达情况;qPCR检测MYC在胃癌组织中的表达和lncRNA CCAT1的关系,双荧光素酶报告基因检测lncRNA CCAT1和MYC之间的相互作用;流式细胞术实验检测lncRNA CCAT1对胃癌细胞的凋亡行为和细胞周期的影响;划痕愈合试验和Transwell侵袭实验检测lncRNA CCAT1对胃癌细胞的迁移和侵袭行为的变化情况;Western blot实验检测lncRNA CCAT1对MAPK通路相关蛋白表达情况的影响。结果：与正常胃组织相比,胃癌组织中lncRNA CCAT1的表达水平相对上调,与其他细胞株相比,HCG-27细胞中lncRNA CCAT1表达最高;MYC表达与相对lncRNA CCAT1的表达呈负相关关系;双荧光素酶实验证实lncRNA CCAT1能与MYC的3′UTR特异性结合,可以调控MYC的表达与活性;抑制lncRNA CCAT1的表达可以诱导G0/G1期的细胞周期停滞并促进细胞凋亡;抑制lncRNA CCAT1的表达后可以抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制lncRNA CCAT1后下游MAPK通路蛋白表达水平相应下调。结论：LncRNA CCAT1通过调控MYC蛋白表达激活MAPK信号通路影响胃癌细胞的生物学行为。     

miRNA-363通过调控SOX4影响骨肉瘤细胞生长及凋亡

目的:探讨骨肉瘤组织中miRNA-363及SOX4的表达水平,以及miRNA-363对骨肉瘤细胞活力、细胞周期以及凋亡的影响及机制。方法:用real-time PCR法检测63例骨肉瘤患者肿瘤组织与癌旁组织中miRNA-363及SOX4的表达水平及相关性。用脂质体法将miRNA-363 mimics瞬时转染入MG-63人骨肉瘤细胞,检测细胞中miRNA-363及SOX4的表达水平;CCK-8实验检测各组细胞的活力;流式细胞术检测各组细胞的周期及凋亡率;检测转染SOX4 siRNA或质粒后miRNA-363的表达水平。结果:骨肉瘤组织miRNA-363表达明显低于瘤旁组织,SOX4的mRNA表达明显高于瘤旁组织,miRNA-363与SOX4的表达水平呈明显负相关。转染miRNA-363 mimics后MG-63细胞miRNA-363的表达水平明显上调,SOX4 mRNA及蛋白的表达水平明显下降;同时,细胞活力明显下降细胞周期阻滞在G_0/G_1期,凋亡率增高。改变SOX4表达后,miRNA-363的表达无明显变化,升高SOX4表达能够恢复miRNA-363抑制的细胞活力。结论:miRNA-363在骨肉瘤中呈低表达水平,过表达miRNA-363可能通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞的生长,并促进细胞凋亡。     

miR-654-3p靶向GMFB抑制骨肉瘤细胞增殖的作用及机制研究

目的 探究miR-654-3p对骨肉瘤细胞增殖的影响，预测其靶基因并评估靶基因对骨肉瘤患者生存预后的干预情况。方法 选择GEO数据库中GSE70367数据集进行差异分析，筛选骨肉瘤细胞中异常表达的miRNA，通过RT-qPCR检测miR-654-3p在骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2和HOS中的表达情况。通过TargetScan和miRmap数据库预测miR-654-3p的靶基因，采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-654-3p与GMFB基因的结合。用CCK8实验和CFU实验分析miR-654-3p和GMFB对骨肉瘤细胞MG-63和HOS增殖的影响。下载TCGA数据库中肉瘤患者的GMFB表达数据和临床信息，通过R软件包绘制GMFB对生存预后影响的KM曲线以及预测肉瘤患者1年、3年和5年生存率的列线图。结果 与人正常成骨细胞hFOB1.19相比，骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2和HOS中miR-654-3p的表达均明显降低（P＜0.05）。miR-654-3p与GMFB基因结合，并负调控GMFB的表达。miR-654-3p模拟物在体外明显抑制骨肉瘤细胞的增殖，而GMFB转染能够逆转抑制作用（P＜0.05）。GMFB高表达的骨肉瘤患者的总体生存率明显低于低表达患者（P＜0.05），且通过列线图能够预测患者的1年、3年和5年生存率。结论 miR-654-3p通过靶向负调控GMFB基因表达，抑制骨肉瘤细胞的增殖，且GMFB高表达与骨肉瘤患者的预后呈负相关。     

分化抑制因子Idl对骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨分化抑制因子Idl对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测Idl表达调节后MG．63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Idl下调表达后,MG．63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Westemblotting技术检测Idl下调表达后对p-AKT水平的影响。结果本实验利用RNA干扰技术下调骨肉瘤细胞系Idl表达后,可以明显抑制MG．63细胞的增殖,p-AKT的水平也显示下降,流式细胞术证明下调后Idl的水平可以一定程度地调节细胞凋亡水平,而对细胞周期无明显影响,另外进一步构建了Idl的真核表达质粒,转染Idl过表达质粒后。并未见骨肉瘤细胞明显地增殖加速。结论分化抑制因子Idl可能通过影响AKT信号通路进而影响了骨肉瘤细胞的增殖。     

人骨肉瘤细胞MG-63抗失巢凋亡的机制研究

目的: 观察人骨肉瘤细胞(MG-63)是否存在抗失巢凋亡(anoikis)的特性,并进一步研究其分子机制。方法: 将MG-63细胞分别在普通6孔板和事先用聚甲基丙烯酸2-羧乙基酯(poly-HEMA)处理过的6孔板中培育24 h、48 h、72 h和7 d,人正常成骨细胞hFOB 1.19和人正常肾上皮细胞293T作对照,在光镜、电镜下观察细胞的形态以及细胞间连接,用流式细胞术检测细胞的凋亡率。通过RT-PCR方法检测不同时期、不同生长状态下,细胞中β-catenin和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)的转录水平,并用Western blotting方法检测细胞内β-catenin、PI3K、Bcl-2和caspase-3、8、9的蛋白表达。结果: MG-63细胞在悬浮状态下培养,细胞相互之间聚集成比较致密的团块,没有发生明显的细胞凋亡(凋亡比例最高为30.29%)。在贴壁生长和悬浮生长情况下,caspase-3和caspase-9的活化水平均无显著差异,而在悬浮状态下caspase-8在48 h时活化最多,然后活性减低,β-catenin和磷脂酰肌醇激酶的转录水平比对照组高,但蛋白表达水平对照组与实验组无显著差异。在悬浮状态下,Bcl-2的蛋白表达水平呈时间依赖性增长,在72 h达到最高。 结论: MG-63细胞具有抗失巢凋亡的特性。细胞从细胞外基质中脱离后,早期可能激活caspase-8,从而启动并执行anoikis;Bcl-2的活化可能在后期抑制anoikis的发生。