人参皂苷Re对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：探讨人参皂苷Re 对人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞缺氧复氧损伤的保护作用。 方法：采用缺氧复 氧法制备SH-SY5Y 细胞损伤模型,分为对照组、模型组、Re 6.25 μg/mL 组和Re 12.50 μg/mL 组。采用MTT 法测定细胞存活率,四甲基罗丹明甲酯（TMRM）染色评估细胞线粒体膜电位变化,DAPI 染色观察细胞凋亡 率,并进一步采用免疫印迹检测各组细胞核因子NF-E2 相关因子2（Nrf-2）、Bax 和p53 的蛋白表达。 结果：人 参皂苷Re 对SH-SY5Y 细胞活力无显著影响;缺氧复氧条件下,细胞存活率显著降低,而人参皂苷Re 在6.25、 12.50 μg/mL 浓度下预保护可显著提高细胞存活率。缺氧复氧损伤后,人参皂苷Re 6.25、12.50 μg/mL 能显著提 高SH-SY5Y 细胞的线粒体膜电位水平和抑制SH-SY5Y 细胞的凋亡率。人参皂苷Re 能够提高Nrf-2 的蛋白表达, 抑制Bax 和p53 蛋白的表达。结论：人参皂苷Re 可以抑制缺氧复氧损伤细胞的凋亡和氧化损伤,对缺氧复氧诱导 的神经细胞具有显著的保护作用。     

13-MTD对氧反常诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的影响

目的:研究13-甲基十四烷酸(13-methyltetradecanoic acid,13-MTD)对SH-SY5Y神经细胞氧反常的保护作用。方法:采用体外细胞培养建立SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/再复氧糖(OGD/R)模型,光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法观察细胞凋亡,MTT法检测线粒体活性,Rhodamine-123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果:与正常对照组细胞相比,OGD/R模型组SH-SY5Y细胞出现明显病理损伤,细胞凋亡率显著增加(P0.01),线粒体活性、细胞存活率、线粒体膜电位均显著下降(P0.01);不同剂量的13-MTD可显著改善以上变化(P0.01),且存在剂量依赖关系。结论:13-MTD对OGD/R诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤有保护作用,其可能对脑缺血再灌注损伤具有治疗作用。     

缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤的动态观察

目的 探讨缺氧缺糖/复氧复糖不同时间点小鼠海马神经元细胞系HT22细胞损伤情况。 方法 取对数生长期的HT22细胞,随机分为6组：正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖（OGD/R）0 h组（OGD/R 0 h）、缺氧缺糖/复氧复糖12 h组（OGD/R 12 h）、缺氧缺糖/复氧复糖24 h组（OGD/R 24 h）、缺氧缺糖/复氧复糖48 h组（OGD/R 48 h）、缺氧缺糖/复氧复糖72 h组（OGD/R 72 h）。除正常对照组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤情况,Bax、Bcl-2免疫荧光染色检测细胞凋亡情况。 结果 正常组HT22细胞呈两极或多极,突起明显,突起之间相互交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性强,OGD/R各组细胞胞体轴突减少,细胞皱缩,胞质凝聚。与正常组比较,OGD/R各组细胞存活率均显著降低（P<0.05）,OGD/R 12 h至OGD/R 24 h达到最低（P<0.05）;OGD/R 12 h及OGD/R 24 h 组LDH显著升高（P<0.05）,OGD/R 0 h、48 h、72 h组均有升高趋势。除OGD/R 0 h组和OGD/R 72 h组外,OGD/R 各组Bax/Bcl-2比值均较正常组显著升高（P<0.05）,峰值出现于OGD/R 24 h。 结论 缺氧缺糖/复氧复糖细胞损伤是一个复杂的动态过程,随着复氧复糖时间的延长,细胞损伤不断加重,24 h达到顶峰,随后细胞损伤情况逐渐缓解。     

SH-SY5Y细胞凋亡过程中Cpne5蛋白表达的变化

目的探讨Cpne5蛋白在SH-SY5Y细胞凋亡中表达量的变化。方法显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测凋亡率,鉴定A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡及血清剥夺诱导凋亡的模型;免疫印迹法检测两种凋亡过程中Cpne5蛋白表达量的变化。结果 10μmol/L A23187诱导SH-SY5Y细胞24h,细胞出现皱缩、凋亡率增加。A23187诱导0.5h,Cpne5蛋白表达量即出现明显的上升,持续至12h;在24h时Cpne5蛋白表达量回落至诱导前水平。血清剥夺72h的SH-SY5Y细胞24份,凋亡率为23.2±2.1%,与对照组1.1±0.1%比,差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫印迹结果表明,SH-SY5Y细胞分别经血清剥夺1h、6h、12h、24h、72h对Cpne5蛋白表达量无明显变化。结论 A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡早期Cpne5蛋白表达量有显著变化;提示Cpne5基因可能参与凋亡调控的钙信号通路。     

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的： 观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法： 原代培养大鼠皮层神经元，建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放漏出率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果： 缺氧3 h复氧12 h可诱导出皮层神经元凋亡，引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组（P<0.01）。蒺藜皂苷(0.025 g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡，并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异（P<0.01）。结论： 蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡，减轻细胞损伤，这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。     

PI3K/Akt在线粒体ATP敏感性钾通道开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞FKN表达中的作用 

目的 观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道（mito-KATP）开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞（MMECs）fractalkine(FKN)表达中的作用。方法 培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组( EM>n /EM>=6)：正常对照组（N组）、缺氧/复氧组（H/R组）、二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（DZ组）、LY294002+二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（LY294002+DZ组）。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,LY294002+DZ组在加入 100μmol/L LY294002预处理2h后再加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2h、复氧2h。Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力,RT-PCR检测Akt和FKNmRNA水平, Western blotting检测Akt蛋白水平。结果 与N 组比较,H/R组细胞增殖率显著降低（EM>P /EM><0.01）、凋亡率显著升高（EM>P/EM> <0.01）, FKN mRNA和FKN蛋白表达显著增加（P <0.01）、Akt mRNA和Akt蛋白升高（ EM>P/EM> <0.05）。与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高（EM>P/EM> <0.01）、凋亡率显著降     

PPAR-γ激动剂减轻缺氧性大鼠神经细胞损伤的作用机制

目的：观察过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPAR-γ）在原代培养的大鼠皮质神经细胞缺氧再复氧损伤中的作用以及PPAR-γ与环加氧酶-2(COX-2)的关系。方法: 原代培养大鼠皮质神经细胞,随机分为对照组、缺氧再复氧组、PPAR-γ激动剂（ciglitazone）+缺氧再复氧组。用噻唑蓝(MTT)比色法测定神经细胞生存率,用Western印迹法检测COX-2蛋白表达情况。结果: 大鼠原代皮质神经细胞经ciglitazone预处理的缺氧再复氧组神经细胞生存率明显高于单独缺氧再复氧组(P<0.05);并且其COX-2蛋白表达水平也明显低于缺氧再复氧组(P< 0.05)。结论: PPAR-γ激动剂（ciglitazone）能够减轻缺氧再复氧后神经细胞的损伤。保护作用可能是通过降低COX-2蛋白表达水平而实现的。     

胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

 目的：观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法：培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）与对照组相比,不同浓度（3、6、9、12、15 mmol/L）的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间（1、2、3、6 h）ATP（6 mmol/L）也可使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。（2）ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多（P<005）,随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强（P<005）,形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。（3）与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰（P<005）,6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强（P<005）,6 h时达高峰。结论：胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。     

松弛素抑制氧化应激反应保护小鼠心肌微血管内皮细胞的缺氧/复氧损伤

背景：松弛素是人松弛素2的重组形式,作为机体内源性抗纤维化活性物质,松弛素治疗可能会缓解急性心力衰竭患者的症状并改善其预后,但尚未有研究松弛素在氧化应激方面对缺氧/复氧损伤小鼠心肌微血管内皮细胞(H5V)的作用。目的：探讨松弛素在小鼠H5V细胞缺氧/复氧损伤模型中的作用。方法：建立小鼠H5V细胞缺氧/复氧损伤模型,分别为缺氧3,6,12 h,复氧3 h,通过检测细胞活力和乳酸脱氢酶活性确定细胞缺氧/复氧的最佳时间。选用不同质量浓度的松弛素(0,60,100,140,180 ng/mL)作用于H5V细胞缺氧/复氧损伤模型,通过检测细胞活力和乳酸脱氢酶活性确定松弛素干预的最佳质量浓度。在此基础上,将H5V细胞分为3组：对照组、缺氧/复氧模型组、缺氧/复氧+180 ng/mL松弛素组,检测丙二醛、超氧化物歧化酶和活性氧水平。结果与结论：(1)与对照组比较,缺氧6 h/复氧3 h、缺氧12 h/复氧3 h的细胞活力均显著降低(P <0.05),细胞上清中乳酸脱氢酶活性均显著增加(P <0.05),选取缺氧6 h/复氧3 h进行后续实验;(2)与缺氧/复氧模型组比较,缺氧/复氧+松弛...     

冈田酸诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y损伤

目的 探索冈田酸(OA)诱导神经元微管蛋白相关蛋白(Tau)异常磷酸化对人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)损伤的影响。方法 将OA按照不同浓度(20和40 nmol/L)和/或时间(0、12、24、48和72 h)处理SH-SY5Y细胞;光学显微镜下观察细胞形态学;透射电子显微镜观察细胞超微结构;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测p-Tau和caspase3蛋白的表达;RT-qPCR检测细胞凋亡抑制家族蛋白(IAPs)的mRNA表达。结果 与对照组相比,OA显著增加SH-SY5Y细胞Tau蛋白磷酸化(P<0.001),促进细胞损伤凋亡(P<0.001),损伤线粒体结构,同时也可显著上调IAPs表达(P<0.05)。结论 OA诱导的SH-SY5Y细胞的Tau蛋白异常磷酸化可导致细胞损伤凋亡,抑制内源凋亡通路或上调IAPs可能作为阿尔茨海默病(AD)防治的重要靶标。