MicroRNA-21促进大鼠雪旺细胞增殖的实验研究

目的:探讨神经损伤后microRNA-21(miR-21)促进雪旺细胞增殖的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测miR-21的表达。通过脂质体介导将人工合成的miR-21模拟物(mimic)及其阴性对照转染大鼠雪旺细胞,CCK-8法检测转染miR-21的雪旺细胞的增殖。流式细胞术分析miR-21对雪旺细胞细胞周期的影响。使用Western blotting实验分析转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)和cyclin D1的表达水平。结果:miR-21在损伤模型组中的表达分别为假手术组和正常神经组织的(7.87±0.75)和(7.75±0.80)倍(P0.01)。miR-21 mimic组miR-21的表达分别为对照组和空白组的(2.21±0.14)和(2.29±0.21)倍(P0.05)。转染48 h后miR-21 mimic组CCK-8实验的A450值较阴性对照组和空白对照组增高(P0.05)。实验组细胞增殖指数高于阴性对照组和空白对照组(P0.01)。同时与对照组相比,转染miR-21后48 h实验组细胞TGFBI明显降低,cyclin D1表达增多(P0.05)。结论:miR-21可促进雪旺细胞增殖,其机制可能与其下调TGFBI的表达有关。     

miR-7通过调节AEG-1途径对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的分析miR-7对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法取对数生长期的HepG-2细胞分为对照组、miR-7模拟物组、转染miR阴性组并选择非肿瘤细胞系HL7702作为HL7702组,依照分组转染miR-7及阴性miR;后使用RT-PCR法检测其中miR-7水平,并检测各组细胞增殖活性、细胞侵袭活性、细胞迁移活性及AEG-1蛋白表达情况。结果 miR-7模拟物组miR-7水平明显高于HepG-2对照组及转染miR阴性组(P0.01);24 h或48 h时miR-7模拟物组细胞增殖活力明显高于HepG-2对照组及转染miR阴性组(P0.01);miR-7模拟物组侵袭细胞数、细胞迁移率及AEG-1蛋白明显低于HepG-2对照组及转染miR阴性组(P0.01)。结论在肝癌细胞中miR-7可通过调控AEG-1途径而有效抑制增殖、侵袭和迁移。     

miR-7靶向调节EGFR基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miRNA-7(miR-7)对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-7抑制剂组、miR-7模拟物组和对照组,分别将miR-7抑制剂或miR-7模拟物转染至miR-7抑制剂组或miR-7模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-7表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞EGFR mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞miR-7表达水平显著降低,miR-7模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,EGFR mRNA及蛋白表达水平显著升高,miR-7模拟物组则均显著降低(P0.01)。结论 miR-7抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调EGFR的表达相关。     

过表达miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的影响及可能机制

目的探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-101模拟物组、miR-101阴性对照组及空白对照组,将miR-101模拟物转染至miR-101模拟物组细胞,阴性对照组细胞转染无关序列,空白对照组细胞不作任何处理,采用Real time PCR方法验证其转染效率,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与迁移能力变化。采用双荧光素酶报告基因验证Girdin是否为miR-101的靶基因,Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞Girdin mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-101模拟物组SKOV3细胞miR-101表达水平显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-101模拟物组SKOV3细胞增殖、迁移能力显著降低(P0.01)。双荧光素酶报告基因分析结果显示,Girdin为miR-101的靶基因;过表达miR-101后,Girdin mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-101可能通过下调Girdin的表达抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移。     

miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及可能机制

目的探讨miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法采用miR-137模拟物转染喉癌Hep-2细胞,实验分为空白对照组组(未进行转染)、miR-137阴性对照组(转染无关序列)、miR-137模拟物转染组(进行miR-137模拟物转染)。real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测转染后Hep-2细胞的侵袭能力变化,采用流式细胞术检测miR-137对Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot检测转染后Hep-2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3以及侵袭相关蛋白T细胞因子-4(TCF-4)蛋白表达的变化。结果与空白对照组或阴性对照组相比,miR-137模拟物转染组Hep-2细胞miR-137的表达水平显著高于对照组(P0.01),喉癌Hep-2细胞的增殖与侵袭能力显著降低,细胞凋亡率明显升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平降低,而Bax与caspase-3蛋白表达升高,侵袭相关蛋白TCF-4表达降低。结论过表达miR-137抑制Hep-2细胞增殖与侵袭、诱导细胞凋亡,与上调Bax、caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2、TCF-4表达相关。     

miR-124靶向调节STAT3基因对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在骨肉瘤组织中的表达,以及miR-124对骨肉瘤MG-63细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测67例患者骨肉瘤组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,免疫组织化学方法检测STAT3蛋白的表达。使用脂质体将miR-124抑制剂及miR-124模拟物转染至骨肉瘤MG-63细胞株,以无关序列作为阴性对照。Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,采用MTT方法与Transwell实验检测转染后MG-63细胞的增殖侵袭能力变化。结果 miR-124在骨肉瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.01);STAT3蛋白在骨肉瘤组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01);转染miR-124抑制剂的MG-63细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高;转染miR-124模拟物后则得到相反的结果(P0.01)。结论 miR-124抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其对ACC-M细胞增殖、迁移的影响

目的探讨miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其对腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖以及迁移能力的影响。方法通过实时PCR检测5例涎腺腺样囊性涎组织及癌旁正常组织miR-98的表达水平;将miR-98模拟物瞬时转入高转移腺样囊性癌细胞系(ACC-M)使miR-98过表达,并通过实时PCR方法验证;流式细胞仪分析转染后ACC-M细胞周期的改变,甲基噻唑基四唑比色法检测转染后ACC-M细胞的增殖,划痕实验检测转染后ACC-M细胞的迁移能力,免疫印迹法检测转染后ACC-M细胞细胞周期蛋白CyclinB与CDC2的表达变化。结果 miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织,P0.01。转染miR-98模拟物能够显著上调ACC-M细胞miR-98的表达水平,ACC-M细胞的S期比例明显下降,而G 0/G 1期的细胞明显增多,增殖受到明显抑制,迁移能力下降,显著降低ACC-M细胞CyclinB与CDC2的蛋白表达水平。结论过表达miR-98能够抑制涎腺腺样囊性癌细胞的增殖与迁移能力。     

miR-7靶向缺氧诱导因子1α对肝癌细胞的影响

目的：探究微小RNA-7(miR-7)靶向缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝癌细胞迁移、凋亡及干细胞特性的影响。方法 ：采用慢病毒转染肝癌细胞MGCC97H,分为对照组、miR-7模拟物组、miR-7干扰组（转染miR-7模拟物组+干扰物）、HIF-1α过表达组（转染pc-HIF1α）和共转染组（转染miR-7模拟物+pc-HIF1α）,RT-PCR检测各组细胞miR-7、HIF-1α mRNA表达量,免疫印迹检测各组HIF-1α蛋白的表达量,Transwell实验检测细胞迁移能力,流式细胞法检测细胞凋亡情况,软琼脂克隆形成实验分析其干细胞特性,荧光素酶实验验证miR-7与HIF-1α靶向关系。结果 ：miR-7模拟物组细胞HIF-1α蛋白表达、迁移率、克隆形成率低于对照组,凋亡率高于对照组;HIF-1α过表达组细胞迁移率、克隆形成率高于对照组,凋亡率低于对照组;共转染组HIF-1α蛋白表达、细胞迁移率、克隆形成率低于HIF-1α过表达组,凋亡率高于HIF-1α过表达组。结论 ：miR-7靶向HIF-1α可降低肝癌细胞迁移能力及干细胞特性,促进细胞凋亡,miR-7及HIF-1α可能是...     

miR-101靶向调节c-Fos基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-101抑制剂组、miR-101模拟物组和对照组,分别将miR-101抑制剂或miR-101模拟物转染至miR-101抑制剂组或miR-101模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-101表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达水平。结果转染miR-101模拟物后,SKOV3细胞miR-101的表达水平显著升高,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著降低,c-Fos mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P0.01);转染miR-101抑制剂后,SKOV3细胞miR-101的表达水平显著降低,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著升高,c-Fos mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。结论 miR-101抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调c-Fos的表达相关。     

Mi R-31在胃癌组织中低表达并抑制HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭

目的研究miR-31在胃癌患者中的表达,探讨miR-31对胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法收集胃癌患者标本39例,同时收取相应的癌旁组织20例。通过荧光定量PCR方法检测各组织中miR-31的表达水平。以脂质体为载体将miR-31模拟物转染至HGC-27细胞,CCK-8方法检测细胞增殖能力变化,Transwell实验检测HGC-27细胞侵袭和迁移能力变化。结果 miR-31在胃癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织,P0.01。过表达miR-31能够显著抑制HGC-27细胞的增殖,显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移能力(P0.01)。结论 MiR-31在胃癌中低表达,并抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭。     

miR-129靶向RUNX1对结肠腺癌SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-129对结肠腺癌SW480细胞增殖的影响及可能的机制。方法采用miR-129模拟物转染结肠腺癌SW480细胞,分为空白对照组(未进行转染)、miR-129阴性对照组(转染无关序列)、miR-129模拟物转染组(转染miR-129模拟物),通过实时定量PCR进行验证,Western blot检测miR-129过表达后SW480细胞RUNX1蛋白的表达。采用CCK-8法检测miR-129对SW480细胞增殖的影响,采用生物信息学网站预测RUNX1是否为miR-129潜在的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-129过表达,SW480细胞中RUNX1mRNA和蛋白表达下调,抑制SW480细胞体外增殖,生物信息学分析结果显示RUNX1是miR-129的靶基因之一,双荧光素酶实验证实RUNX1为miR-129的下游靶基因。结论 miR-129通过靶向调控RUNX1抑制结肠腺癌SW480细胞增殖。     

miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用miR-137模拟物转染至肾癌GRC-1细胞,实验分为未转染组(未进行miR-137模拟物转染)、miR-137对照组(转染随机序列)、miR-137转染组(进行miR-137模拟物转染).荧光定量PCR检测各组转染后48h细胞中miR-137表达水平,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞检测技术与免疫荧光评价miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响.结果 转染miR-137模拟物48h后,荧光定量PCR检测发现未转染组、miR-137对照组及miR-137转染组GRC-1细胞中miR-137的相对表达量依次为(24.43±2.03)％、(26.57±2.55)％、和(73.30±3.29)％,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT细胞增殖实验与流式细胞仪检测结果显示,与未转染组、miR-137对照组相比,miR-137转染组转染48h后肾癌GRC-1细胞的增殖率显著降低,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而未转染组、miR-137对照组肾癌GRC-1细胞的增殖率、凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.02).结论 miR-137可明显抑制肾癌GRC-1细胞增殖和促进其凋亡,故有望成为肾癌基因治疗的新靶点.     

移植NRG1转染的雪旺细胞对脊髓损伤大鼠mTOR信号通路的影响

目的探讨移植NRG1转染的雪旺细胞对脊髓损伤大鼠mTOR信号通路的影响。方法体外分离培养雪旺细胞,免疫荧光鉴定;将pcDNA3.1-NRG1重组质粒通过Fugen6转染雪旺细胞,用免疫荧光法检测细胞转染率。参照Nystrom's压迫方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型,于伤后第7天移植转基因雪旺细胞,细胞移植7周后结束实验,每周对实验动物进行BBB评分。实验分为假手术组、脊髓损伤组与转基因雪旺细胞移植组。Western blot方法检测各组大鼠脊髓损伤部位p-mTOR蛋白的表达。结果成功实现激活态雪旺细胞体外分离、培养和鉴定,并成功转染雪旺细胞,细胞转染率为62.25%。与脊髓损伤组相比,在细胞移植后的第3周开始,转基因雪旺细胞移植组大鼠的BBB评分显著升高(P0.05)。与假手术组比较,脊髓损伤组与转基因雪旺细胞移植组大鼠脊髓损伤部位p-mTOR的蛋白表达水平显著降低(P0.05),但转基因雪旺细胞移植组比脊髓损伤组显著升高(P0.05)。结论移植NRG1转染的雪旺细胞能够有效促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,其机制可能与激活mTOR信号通路有关。     

miR-1246增强宫颈癌细胞辐射敏感性的分子机制研究

目的:探讨微小RNA-1246(miR-1246)过表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-1246模拟物(miR-1246 mimic)转染4种宫颈癌细胞系He La、Ca Ski、C33A和Si Ha,以阴性对照模拟物(NC-mimic)为阴性对照。Real-time PCR检测宫颈癌组织、正常组织、子宫内膜上皮细胞系ESC和4株宫颈癌细胞中miR-1246的表达水平;转染的细胞经电离辐射照射后运用MTT法和Transwell法分别测定细胞活力和细胞迁移能力;运用免疫荧光法检测γH2AX表达水平;Western blot检测细胞中γH2AX、ATM、p-ATM和p-p53的蛋白水平。结果:miR-1246在正常组织和ESC细胞中高表达,而在4株宫颈癌细胞和宫颈癌组织中低表达;转染miR-1246 mimic后miR-1246表达水平显著高于NC-mimic组细胞(P 0. 05)。相同条件下,辐照后miR-1246过表达组宫颈癌细胞活力显著低于NC-mimic组,细胞迁移率明显降低(P 0. 05)。免疫荧光结果显示,miR-1246过表达显著增强电离辐射诱导的γH2AX激活(P 0. 05);Western blot结果显示,与NC-mimic组比较,miR-1246过表达显著促进电离辐射诱导γH2AX蛋白的表达,减低p-ATM和p-p53的蛋白水平(P 0. 05)。结论:miR-1246在正常组织和子宫内膜上皮细胞中高表达,而在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中低表达;miR-1246过表达抑制宫颈癌细胞活力和迁移能力,并可能通过阻断ATM通路、抑制DNA损伤修复而增强宫颈癌细胞的辐射敏感性。     

miR-18a通过靶向调节SEMA5A影响喉癌Hep-2细胞的增殖与迁移

目的探讨miR-18a对喉癌HEP-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法 Real-time PCR法检测喉癌组织与癌旁组织miR-124的表达,免疫组织化学方法检测SEMA5A蛋白的表达。Lipofectamine2000将miR-18a抑制剂与miR-18a模拟物分别转染喉癌HEP-2细胞,real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-18a对喉癌HEP-2细胞增殖的影响,采用Transwell迁移实验检测转染后HEP-2细胞的迁移能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测转染后SEMA5A mRNA和蛋白表达的变化。结果 miR-18a在喉癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.01),但SEMA5A蛋白在喉癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P0.01)。miR-18a抑制剂或miR-18a模拟物转染后,喉癌HEP-2细胞miR-18a的表达显著降低或升高,转染成功。转染miR-18a抑制剂能够显著降低喉癌HEP-2细胞增殖及迁移能力,并上调喉癌HEP-2细胞SEMA5A蛋白的表达;转染miR-18a模拟物后,作用则相反。结论 miR-18a在喉癌组织中表达上调,靶向调节SEMA5A的表达可能是其促进喉癌HEP-2细胞增殖和迁移的机制之一。     

miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2增殖

目的检测miR-129对鼻咽癌细胞系CNE2细胞生物学功能的影响。方法人工合成miR-129模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),转染至鼻咽癌CNE2细胞中,RT-qPCR检测细胞miR-129表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果与对照组相比,转染miR-129 mimics组的miR-129表达水平明显升高(P0.05);转染miR-129 inhibitor组的miR-129表达水平均明显降低(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 mimics组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著下降(P0.05),凋亡显著增多(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 inhibitor组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著升高(P0.05),凋亡显著下降(P0.05)。结论 miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。     

miR-124靶向调节STAT3基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT3蛋白的表达。将miR-124 inhibitors及miR-124 mimics转染至甲状腺乳头状癌Kl细胞株,Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,CCK-8方法和克隆形成实验检测转染后Kl细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01)。转染miR-124 inhibitors的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高(P0.01);转染miR-124 mimics的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内STAT3蛋白表达亦明显降低(P0.01)。结论 miR-124抑制甲状腺乳头状癌Kl细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

SMYD3过表达对人肝内胆管癌细胞miR-124表达及细胞增殖的影响

 目的：探讨肝内胆管癌细胞HCCC-9810中SET和MYND结构域含有蛋白3（SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3）过表达对miR-124表达及细胞增殖能力的影响。方法：瞬时转染 SMYD3 真核表达质粒后, Western blotting 检测细胞中SMYD3 蛋白水平的变化;qRT-PCR 检测细胞中SMYD3 mRNA 和miR-124 表达;甲基化特异性PCR检测miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化水平;CCK-8 和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果：以空白组为对照,肝内胆管癌细胞HCCC-9810在转染pEGFP-SMYD3质粒后,SMYD3蛋白及 mRNA 表达均显著上升（P＜0.05）,miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化显著增加（P＜0.05）,miR-124表达明显下降（P＜0.05）,细胞增殖能力显著提高（P＜0.05）。结论：过表达 SMYD3可引起miR-124基因启动子甲基化增加,导致胆管癌细胞中miR-124 的表达下降,同时过表达SMYD3可增强细胞增殖能力。     

miR-124-3p 靶向WISP1 对TNF-α诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-124-3p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法:分离培养大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞,用100 ng/ml的TNF-α处理作为TNF-α组,正常培养的细胞作为对照组(Con);将miR-NC、miR-124-3p、anti-miR-NC、anti-miR-124-3p转染至大鼠脑动脉血管平滑肌细胞中,分别记为miR-NC组、miR-124-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-124-3p组;将miR-NC、miR-124-3p、si-NC、si-WISP1转染至血管平滑肌细胞后再用100 ng/ml的TNF-α处理,记为TNF-α+miR-NC组、TNF-α+miR-124-3p组、TNF-α+si-NC组、TNF-α+si-WISP1组;将miR-124-3p分别与pcDNA、pcDNA-WISP1共转染至血管平滑肌细胞后再用100 ng/ml的TNF-α处理,记为TNF-α+miR-124-3p+pcDNA组、TNF-α+miR-124-3p+pcDNA-WISP1组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-124-3p和WISP1 mRNA表达水平;Western blot检测WNT1诱导信号通路蛋白1(WISP1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;荧光素酶报告实验检测miR-124-3p和WISP1的靶向关系。结果:与对照组相比,TNF-α处理的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞中miR-124-3p表达水平显著降低,WISP1表达水平显著升高,细胞活性显著升高,迁移、侵袭数显著升高,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,p21表达水平显著降低(P0.05)。miR-124-3p过表达和干扰WISP1表达可抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭。miR-124-3p靶向调控WISP1,WISP1过表达逆转了miR-124-3p过表达对TNF-α诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-124-3p可抑制TNF-α诱导的大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调WISP1有关。     

miR-200c对乳腺癌BT549细胞迁移及Slug表达的作用

目的:结合对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的研究,探讨转染miR-200c对Slug表达的作用。方法:设计miR-200c模拟物,转染具有高转移性的乳腺癌细胞系BT549,通过Transwell迁移试验、划痕实验,观察转染miR-200c后对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的影响;利用Real-time PCR检测Slug和E-钙黏连蛋白mRNA的表达水平;利用Western blot检测Slug蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR和Western blot结果显示,miR-200c转染组Slug表达水平被有效抑制(P0.05)。与对照组相比,miR-200c转染组的BT549细胞迁移能力明显下降(P0.05)。结论:在乳腺癌细胞系BT549中,miR-200c可以通过抑制Slug的表达进而抑制上皮间质转化,最终导致细胞迁移能力下降。