丰富环境对脓毒症相关性小鼠认知功能障碍的影响

目的:探讨幼年期丰富环境(EE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠认知功能障碍及海马区小胶质细胞活化的影响。方法:36只幼年雌性昆明小鼠随机分为对照组(Control)、脂多糖(LPS)组、丰富环境+脂多糖组(EE+LPS)。给予小鼠单次腹腔注射LPS(O.83 mg/kg)构建脓毒症小鼠模型.EE+LPS组小鼠在注射LPS前给予8周的丰富环境干预。新旧事物识别实验检测小鼠认识功能,免疫组织化学法检测小鼠海马区lba-1的表达,Western Blot检测CD68和IL-1β的表达。结果:与Control组相比,LPS组小鼠新事物辨别指数明显下降;与LPS组相比,EE+LPS组小鼠新事物辨别指数明显增加。LPS可诱导小鼠海马区小胶质细胞活化,表现为Iba-1阳性细胞数目增加,CD68和IL-1β的上调;而丰富环境干预可明显抑制小胶质细胞活化,表现为lba-1阳性细胞数目减少,CD68和IL-1β表达下调。结论:丰富环境可能通过抑制海马区小胶质细胞的激活从而改善LPS诱导的小鼠认知功能障碍。     

三七总皂苷对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞活化的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为溶媒对照(NS)组、LPS组、三七总皂苷预处理(PNS+LPS)组,采用新奇环境抑制摄食实验、糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验观察小鼠的抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测海马、杏仁核小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)的表达变化。结果 LPS导致小鼠出现抑郁样行为,包括新奇环境摄食潜伏期延长(P<0.05),糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾不动时间延长(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),PNS干预可逆转上述抑郁行为表现(P<0.05);LPS导致小鼠海马和杏仁核IBA-1阳性细胞数目显著增多(P<0.0001),PNS预处理能明显减少IBA-1的阳性细胞数(P<0.05)。结论三七总皂苷能有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁行为,其机制可能与抑制脑内小胶质细胞活化有关。     

三七总皂苷抑制星形胶质细胞活化改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为

目的 :观察三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为以及海马星形胶质细胞(AST)活化的影响。方法 :将小鼠随机分为生理盐水(NS)组、LPS组、PNS+LPS组。利用喷糖实验、糖水偏好实验及强迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为,免疫组织化学显色观察胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化,免疫印迹检测海马GFAP、乙醛脱氢酶1蛋白家族L1(ALDH1L1)的表达变化,荧光定量PCR检测海马GFAP和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达。结果 :与NS组相比,LPS组舔糖潜伏期延长、糖水偏好百分比下降、强迫游泳不动时间增加,PNS预处理可逆转上述抑郁样行为;与NS组相比,LPS组海马GFAP阳性细胞数目增加,GFAP及ALDH1L1蛋白表达上调,GFAP及TNF-αmRNA表达上调,PNS预处理均可减少GFAP、ALDH1L1及TNF-α的表达;结论 :三七总皂苷可能通过抑制星形胶质细胞活化,改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为。     

尼古丁抑制脂多糖诱导的小鼠脑小胶质细胞的激活

目的探讨尼古丁(NIC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠脑小胶质细胞激活的影响。方法将32只小鼠随机分为正常对照(CON)组、NIC组、LPS组、NIC+LPS组,每组各8只。NIC+LPS组首先腹腔注射尼古丁建立慢性暴露尼古丁的动物模型,后腹腔注射脂多糖诱导小鼠脑小胶质细胞激活;LPS组同时间只腹腔注射等量脂多糖;NIC组仅腹腔注射尼古丁;CON组腹腔注射等量生理盐水。免疫组织化学方法检测大脑皮质、海马、黑质CD11b阳性小胶质细胞表达情况。结果CD11b阳性小胶质细胞表达NIC组与CON组无差异,LPS组和NIC+LPS组均高于CON组(P<0.01),并且NIC+LPS组明显低于LPS组(P<0.01)。结论慢性NIC处理可以抑制LPS诱导的小鼠脑小胶质细胞激活,提示尼古丁可能对LPS引起的炎症反应具有保护作用。     

慢性束缚应激对小鼠海马星形胶质细胞表型转换及抑郁样行为的影响

目的 探讨慢性束缚应激(CRS)对小鼠海马星形胶质细胞表型转换及抑郁样行为的影响。方法 48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(control)、模型组(CRS)、氟西汀(FLX)药物干预组(CRS+FLX),每组各16只。慢性束缚应激3周建立抑郁小鼠模型，应激的第8天至第21天，CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射FLX(10 mg/kg),control组及CRS组注射等体积生理盐水。采用旷场实验以及糖水偏好实验检测各组小鼠行为变化；采用免疫组织化学法和Western blotting检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达；Real-time PCR检测海马A1和A2型星形胶质细胞标记物的表达。结果 与control组相比，CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为，包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.0001),体重明显较低(P<0.05),旷场实验在中央区域活动的距离明显降低(P<0.0001),FLX干预可逆转CRS所诱导的抑郁样行为表现(P<0.05);与control组相比，CRS组小鼠海马星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(...     

葛根素对LPS诱导急性脑损伤小鼠的保护作用

目的:研究葛根素(Pur)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性感染性脑损伤的保护作用及机制。方法:36只清洁级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组(NS)、LPS感染组(LPS)和葛根素组(Pur+LPS)。LPS腹腔注射建立急性脑损伤模型,立即腹腔注射给予葛根素注射液治疗,6和24h后旷场。暗场实验检测各组小鼠的自发活动,WesternBlot检测脑组织白细胞分化抗原14(CD14)和环氧化酶2(C0X-2)蛋白表达量,Nisl染色观察神经元存活情况。结果:与NS组相比,LPS组6和24 h旷场实验自主活动距离和穿格次数显著减少,海马神经元的存活数目显著减少,脑组织CD14和C0X-2蛋白表达量显著升高(P<0.05);与LPS组比较,Pur+LPS组6和24 h时海马神经元的存活率明显提高,且CD14和C0X-2蛋白表达量明显下降(P<0.05)。结论:葛根素注射液对LPS所致小鼠急性感染性脑损伤具有一定保护作用,其作用机制可能与抑制脑组织CD14和C0X-2表达有关。     

帕瑞昔布钠预给药可减轻脂多糖诱导的小鼠认知功能损伤及神经炎症反应

目的:探讨帕瑞昔布钠(PA)预给药对脂多糖(LPS)诱导的小鼠疾病行为模型认知功能改变及神经炎症的影响。方法:雌性C57BL/6J小鼠80只,10～12月龄,随机分为4组(n=20):空白对照组(CON组)、PA组、LPS组和PA预处理组(P+L组)。LPS腹腔注射制备疾病行为模型,PA组和P+L组在注射LPS前1 h按10 mg/kg剂量腹腔注射PA。采用Morris水迷宫实验评价认知功能;ELISA检测血液及海马区IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE_2的表达;HE染色观察肺组织和海马组织的病理形态改变;免疫荧光法观察海马区小胶质细胞和星形胶质细胞的数目;Western blot法检测海马区COX-2、iNOS、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白的表达。结果:与CON组相比,LPS组小鼠Morris水迷宫的逃避潜伏期显著延长,目标象限停留时间及穿越平台次数显著减少(P0.01),IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α和PGE_2的含量显著增多(P0.01),海马CA1区神经元细胞深染,坏死损伤明显,小胶质细胞和星形胶质细胞的数目显著增加(P0.05),COX-2、iNOS、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白表达量显著增加(P0.01)。而与LPS组相比,PA明显降低小鼠的神经炎症水平,提高小鼠的记忆能力。结论:帕瑞昔布钠预给药对LPS诱发的认知功能障碍和神经炎症具有一定的预防和改善作用,其作用机制可能与特异性拮抗COX-2,抑制中枢小胶质细胞和星形胶质细胞的活化,减少NLPR3炎症小体的激活,从而降低炎症因子的水平有关。     

瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型抑制剂HC067047对脂多糖诱导的小鼠焦虑样行为的影响

目的 探讨瞬时感受器电位香草素受体亚家族Ⅳ型(TRPV4)抑制剂HC067047对脂多糖(LPS)模型小鼠焦虑样行为的影响。方法 48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(NS)、模型组(LPS)和药物干预组(HC+LPS)。腹腔注射0.83 mg/kg LPS建立焦虑样小鼠模型，HC+LPS组于LPS注射前30 min腹腔注射HC067047(10 mg/kg), NS组及LPS组注射等体积溶媒；旷场实验以及社会交往实验观察小鼠焦虑样行为；免疫组织化学及Western blotting检测海马TRPV4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。结果 免疫组织化学和Western blotting实验发现，与NS组相比，LPS组小鼠海马中TRPV4表达显著上调(P<0.0001);旷场实验中，与NS组比较，发现LPS组小鼠活动的总距离(P<0.0001)、在中央区域活动的距离(P<0.01)以及在中央区域活动的时间均明显减少(P<0.01),HC067047干预可增加LPS模型小鼠的活动总距离(...     

外源性硫化氢对肝细胞NLRP3炎症小体的影响

目的:研究外源性硫化氢(H_2S)对人肝细胞NLRP3炎症小体的影响。方法:采用不同浓度的脂多糖(LPS)诱导人肝细胞L02和SMMC-7721建立炎症模型,Western blot检测细胞中NLRP3炎症小体的表达并结合细胞毒性实验(MTT法)确定合适的LPS浓度。细胞分为4组:对照组用普通培养基培养18.5 h;LPS组用普通培养基培养0.5 h后,再用100μg/L LPS刺激18 h;LPS+H_2S组和H_2S组用200μmol/L硫氢化钠(Na HS)刺激0.5 h后,再分别用100μg/L LPS和普通培养基培养18 h。各组处理后分别收集细胞,Western blot检测细胞中NLRP3和caspase-1的蛋白表达量。结果:与对照组相比,LPS组细胞内NLRP3和caspase-1的表达增加(P0.05),H_2S组细胞内的NLRP3和caspase-1表达无明显变化;与LPS组相比,LPS+H_2S组细胞内的NLRP3和caspase-1表达减少(P0.05)。结论:外源性H_2S可抑制人肝细胞中NLRP3炎症小体的表达。     

皮质酮抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3表达及与XO的关系

目的:探讨皮质酮(CORT)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的抑制作用及与黄嘌呤氧化酶(XO)的关系。方法:用LPS构建小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎症模型。运用不同浓度(0~900μg/L)的CORT处理巨噬细胞后提取细胞总蛋白,Western blot法检测细胞NLRP3和caspase-1的蛋白水平;按处理因素分组为:对照组、LPS组、LPS+CORT组和LPS+别嘌呤醇(allopurinol)组,分别于0、0.5、1、1.5和2 h提取细胞成分,运用real-time PCR和Western blot法检测细胞NLRP3和XO的m RNA和蛋白水平。结果:高于700μg/L的CORT可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中NLRP3的表达及caspase-1的活化(P0.05);与LPS组相比,LPS+CORT在下调LPS诱导的巨噬细胞NLRP3表达的同时抑制XO的表达(P0.05),LPS+allopurinol组巨噬细胞NLRP3的表达减少(P0.05)。结论:较高浓度的CORT能抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3的表达,而CORT的抑制作用可能与其下调XO的表达水平有关。     

热量限制改善早期社会隔离诱导的小鼠认知功能障碍

目的 探讨热量限制（CR）对早期社会隔离（SI）诱导的认知功能障碍的改善作用及其可能机制。 方法 3周龄昆明雄小鼠36只随机分成正常群居组（GH, n=12）、早期社会隔离组（SI, n=12）、热量限制干预组（SI+CR, n=12）。在相同条件下饲养GH组（6只/笼）和SI组（1只/笼）,而 SI + CR 组（1只/笼）每隔1 d给予食物。采用旷场实验检测小鼠的活动度,新旧事物识别实验检测小鼠认知功能;免疫组织化学方法检测小鼠海马区小胶质细胞标记物离子钙结合接头分子1（IBA-1）的表达;Western blotting方法检测海马组织小胶质细胞激活标记物CD68及炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）的表达。 结果 在旷场实验中,3组小鼠的活动度无差异。 在新旧事物识别实验中,与GH组相比,SI组新事物分辨率明显下降（P<0.01）,海马中IL-1β的表达显著上调（P<0.01）,此外,SI组在海马中表现出过度活化的小胶质细胞,表现为IBA-1阳性细胞数量增加,CD68高表达（P<0.01）;与SI组相比,SI+CR组新事物分辨率显著增加（P<0.01）,海马IL-1β的表达下调（P<0.01）,IBA-1阳性细胞的数量和CD68的表达显著减少（P<0.01）。 结论 热量限制可缓解早期社会隔离诱导小鼠的认知功能损伤,其机制可能与抑制小胶质细胞的激活及炎症因子的释放有关。     

白桦脂醇对脂多糖诱导小胶质细胞炎症反应的抑制作用

目的 探讨白桦脂醇(betulin,Bet)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 取新生1d的C57BL/6J小鼠分离原代小胶质细胞进行培养,并分为对照组、LPS组和Bet+LPS组.LPS组给予1 μmol?L-1LPS处理24 h,Bet+LPS组给予20 ...     

MiR-24 inhibits inflammatory responses in LPS-induced acute lung injury of neonatal rats through targeting NLRP3

Inflammation plays an important role in the development of acute lung injury (ALI) in preterm infants. Despite the critical role of microRNA in inflammatory response, little is known about its function in ALI. In this study, we investigate the role of MicroRNA-24 (miR-24) in lipopolysaccharide (LPS) induced neonatal rats ALI and its potential mechanism. LPS was used to induce ALI neonatal animal model. miR-24 expression in the lung tissues of LPS-challenged neonatal rats was detected by qPCR. Proinflammatory factors, including tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), IL-1β, IL-18 in the bronchoalveolar lavage fluid and lung tissues of LPS-challenged neonatal rats were measured by qRT-PCR and western blot, respectively. The mRNA levels of surfactant protein A (SP-A) and D (SP-D) was measured by qRT-PCR. Direct binding of miR-24 and pyrin domain-containing 3(NLRP3) were determined by dual luciferase assay. The levels of NLRP3, apoptosis-associated speck-like protein containing a C?terminal caspase recruitment domain (ASC) and caspase-1 protein expression were detected by immunohistochemistry (IHC) staining and western blot, respectively. Our data indicated that LPS-induced lung injury in neonatal rats and resulted in significant downregulated of miR-24 expression. Overexpression of miR-24 significantly reduced LPS-induced lung damage and decreased the release of proinflammatory cytokine TNF-α, IL-6, IL-1β and SP-A, SP-D expression induced by LPS. In addition, miR-24 inhibited the expression of NLRP3 by directly targeting to the CDS region of NLRP3 mRNA. Furthermore, miR-24 overexpression attenuated lung inflammation and deactivated the NLRP3/caspase-1/IL-1β pathway in LPS-challenged neonatal rats. These data show that miR-24 alleviated inflammatory responses in LPS-induced ALI via targeting NLRP3.     

白花丹素调控ROS抑制NLRP3炎症小体减轻IgA肾损伤机制的实验研究

目的 研究白花丹素对IgA肾病的作用和机制。 方法 按Ying等改良的BSA+LPS+CCl4方法复制实验IgA肾病模型；然后，给药组大鼠每组分别腹腔注射10 mg/kg、20 mg/kg和50 mg/kg白花丹素，1次/d，对照组和模型组腹腔注射等量的生理盐水1次/d；8周后，全自动化学分析仪检测24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素，流式检测ROS含量，试剂盒检测SOD活性和MDA含量，HE染色观察病理损伤，Elisa检测TNF-α、IL-18、IL-1β，蛋白印迹法检测NLRP3、ASC、caspase-1 p20、P13K、AKT和NF-kB蛋白表达。 结果 与模型组相比，给药组大鼠的尿蛋白、血清肌酸酐和尿素氮含量显著减少，ROS水平显著降低，SOD含量显著增多，MDA含量显著减少，MDA、IL-1β、IL-18和TNF-α的含量显著减少，NLRP3、ASC、caspase-1 p20、P13K、AKT和NF-kB的蛋白表达显著下调，并且随着给药量的增加效果越显著。 结论 白花丹素通过降低尿蛋白、血肌酐和血尿素含量，减轻病理损伤，抑制氧化应激、炎症反应和NLRP3/P13K/AKT/NF-kB通路激活来减轻IgA肾病。     

Inhibition of NLRP3 Inflammasome Prevents LPS-Induced Inflammatory Hyperalgesia in Mice: Contribution of NF-κB,Caspase-1/11, ASC,NOX, and NOS Isoforms

The nucleotide-binding domain and leucine-rich repeat protein 3 (NLRP3), an intracellular signaling molecule that senses many environmental- and pathogen/host-derived factors, has been implicated in the pathogenesis of several diseases associated with inflammation. It has been suggested that NLRP3 inflammasome inhibitors may have a therapeutic potential in the treatment of NLRP3-related inflammatory diseases. The aim of this study was to determine whether inhibition of NLRP3 inflammasome prevents inflammatory hyperalgesia induced by lipopolysaccharide (LPS) in mice as well as changes in expression/activity of nuclear factor κB (NF-κB), caspase-1/11, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase (NOX), and endothelial/neuronal/inducible nitric oxide synthase (eNOS/nNOS/iNOS) that may regulate NLRP3/apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC)/pro-caspase-1 inflammasome formation and activity by using a selective NLRP3 inflammasome inhibitor, MCC950. Male mice received saline (10 ml/kg; i.p.), LPS (10 mg/kg; i.p.), and/or MCC950 (3 mg/kg; i.p.). Reaction time to thermal stimuli within 1 min was evaluated after 6 h. The mice were killed and the brains, hearts, and lungs were collected for measurement of NF-κB, caspase-1, caspase-11, NLRP3, ASC, NOX subunits (gp91^phox; NOX2), and p47^phox; NOXO2), nitrotyrosine, eNOS, nNOS, iNOS, and β-actin protein expression, NOS activity, and interleukin (IL)-1β levels. LPS-induced hyperalgesia was associated with a decrease in eNOS, nNOS, and iNOS protein expression and activity as well as an increase in expression of NF-κB p65, caspase-1 p20, caspase-11 p20, NLRP3, ASC, gp91^phox, p47^phox, and nitrotyrosine proteins in addition to elevated IL-1β levels. The LPS-induced changes were prevented by MCC950. The results suggest that inhibition of NLRP3/ASC/pro-caspase-1 inflammasome formation and activity prevents inflammatory hyperalgesia induced by LPS in mice as well as changes in NF-κB, caspase-11, NOX2, NOXO2, and eNOS/nNOS/iNOS expression/activity.     

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β

 目的: 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法: 预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot 法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果: 与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P< 0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加 (P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h 细胞上清液IL-1β含量显著增加(P< 0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论: Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。     

全氟辛烷磺酸通过NLRP3炎症小体诱导幼年期大鼠肺损伤及格列本脲干预的研究

目的:探讨含NLRP3家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体参与全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导幼年期大鼠肺损伤的可能机制。方法:28只21日龄SD大鼠随机分为对照(C)组、PFOS(P)组、格列本脲(G)组和格列本脲+PFOS(GP)组。将实验动物根据不同分组建立PFOS暴露模型和格列本脲保护模型,留取肺标本进行HE染色,ELISA法检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量,高效液相色谱法(HPLC)检测血清中PFOS浓度,Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1和含CARD凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的蛋白水平。结果:肺组织病理切片HE染色结果显示,与C组相比,P组的气管及肺泡间质可见明显炎症浸润;格列本脲可使炎症反应显著减轻。ELISA结果显示,P组肺组织中MPO含量较C组显著升高(P<0.05),P组BALF中的IL-1β和IL-18含量较C组也明显升高(P<0.05);GP组肺组织MPD含量及BALF中IL-1β和IL-18含量均较P组降低(P<0.05...