miR-203靶向PIK3CA对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-203对结肠癌SW480细胞增殖的影响及可能机制。方法采用脂质体介导的miR-203模拟物转染结肠癌SW480细胞,通过实时定量PCR进行验证,Western blot检测miR-203过表达后SW480细胞中p110α蛋白的表达。采用CCK-8法检测miR-203过表达后,SW480细胞增殖能力的变化,采用生物信息学网站预测PIK3CA是否为miR-203的靶基因,进一步应用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-203模拟物转染SW480细胞组,miR-203的表达水平显著升高,p110α蛋白表达下调,miR-203过表达能抑制SW480细胞体外增殖,生物信息学分析结果显示PIK3CA是miR-203的靶基因之一,双荧光素酶实验证实PIK3CA为miR-203的下游靶基因。结论 miR-203通过靶向调控PIK3CA抑制结肠癌SW480细胞增殖。     

mi R-34a-3p抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移并下调Smad2/TGF-β信号通路

目的 探讨miR-34a-3p对胰腺癌细胞的作用及可能机制。方法 RT-qPCR方法检测miR-34a-3p在人胰腺导管腺癌细胞SW1990和胰腺导管上皮细胞HPDE中的表达情况;转染miR-34a-3p mimics后,采用CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞侵袭情况;Western blot检测细胞上皮-间质转化情况;进一步用生物信息学预测miR-34a-3p的下游靶基因,并用荧光素酶报告基因实验验证;然后采用Western blot检测靶蛋白以及靶蛋白下游调控蛋白的表达。结果 RT-qPCR检测发现miR-34a-3p在SW1990中的表达低于HPDE细胞。miR-34a-3p在SW1990细胞中过表达后,SW1990细胞增殖受到抑制、侵袭能力降低、E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调。生物信息学网站预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实Smad2是miR-34a-3p的靶蛋白,同时发现其下游蛋白TGF-β表达也显著下调。结论 miR-34-3p在胰腺癌细胞中的表达下调,miR-34-3p能够抑制胰腺癌细胞增殖、侵...     

过表达miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的影响及可能机制

目的探讨miR-101对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-101模拟物组、miR-101阴性对照组及空白对照组,将miR-101模拟物转染至miR-101模拟物组细胞,阴性对照组细胞转染无关序列,空白对照组细胞不作任何处理,采用Real time PCR方法验证其转染效率,分别用MTT方法与Transwell实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与迁移能力变化。采用双荧光素酶报告基因验证Girdin是否为miR-101的靶基因,Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞Girdin mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-101模拟物组SKOV3细胞miR-101表达水平显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-101模拟物组SKOV3细胞增殖、迁移能力显著降低(P0.01)。双荧光素酶报告基因分析结果显示,Girdin为miR-101的靶基因;过表达miR-101后,Girdin mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-101可能通过下调Girdin的表达抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移。     

TNF-α通过调控miR-650 / LATS1 表达对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:探究miR-650是否通过介导LATS1表达参与TNF-α对结肠癌细胞增殖和凋亡的调控。方法:双荧光素酶报告基因分析法验证miR-650对LATS1的靶向作用。用不同浓度TNF-α处理SW480细胞,分别构建miR-650抑制表达、LATS1过表达和经TNF-α处理的miR-650过表达SW480细胞株,qRT-PCR检测miR-650表达水平,Western blot检测LATS1、CyclinD1、Bcl-2、p21和Bax蛋白表达水平,MTT实验检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:LATS1是miR-650的靶基因,miR-650可负性调控LATS1的表达。TNF-α处理可抑制SW480细胞的增殖,促进细胞凋亡,并可抑制miR-650、CyclinD1和Bcl-2的表达,促进LATS1、Bcl-2和p21的表达。抑制miR-650表达或LATS1过表达均可抑制SW480细胞的增殖,促进细胞凋亡。miR-650过表达可部分逆转TNF-α对SW480细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:TNF-α通过下调miR-650/LATS1抑制结肠癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

外泌体circRPPH1促进结直肠癌增殖和转移北大核心CSCD

目的:探讨外泌体circRPPH1在结直肠癌(CRC)细胞中的生物学功能及潜在作用机制。方法:对GEO数据库GSE126094进行分析,筛选并验证CRC组织差异表达circRNA。SW620和SW480细胞转染circRPPH1 shRNA(sh-circRPPH1)后,MTT、流式细胞术和Transwell实验观察细胞增殖活性、细胞周期、迁移和侵袭能力变化。将转染Oe-circRPPH1质粒和sh-circRPPH1的SW620和SW480细胞(供体细胞)分别与未经处理的SW620和SW480细胞(受体细胞)共培养,qRT-PCR检测供体细胞、细胞外泌体及受体细胞circRPPH1表达。在线生物信息学数据和双荧光素酶报告基因实验预测并验证circRPPH1的靶miRNA及其下游靶基因。结果:circRPPH1在CRC肿瘤组织和癌细胞中高表达;敲除circRPPH1可抑制SW620和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期、抑制细胞迁移和侵袭。SW620和SW480细胞可通过外泌体将circRPPH1传递给周围癌细胞。生物信息学和荧光素酶报告基因实验显示,circRPPH1在CRC细胞中起miR-330-5p海绵作用,miR-330-5p在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈低表达;NRAS是miR-330-5p的下游靶基因,在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈高表达。结论:circRPPH1在CRC细胞增殖和转移过程中发挥重要作用,并可能通过海绵miRNA发挥调控作用,提示外泌体circRPPH1在CRC中起致癌作用,可能是CRC的潜在生物标志物。     

过表达miR-136-5p对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、侵袭以及凋亡的影响

目的 探讨miR-136-5p和E2F1在子宫内膜癌中的表达以及过表达miR-136-5p对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 通过生物信息学网站分析TCGA数据库中子宫内膜癌miR-136-5p以及E2F1 mRNA和蛋白的表达.采用miR-136-5p模拟物转染子宫内膜癌HEC-1A细胞,设置空白组(未进行转染)、miR-136-5p阴性对照组(转染无义序列)、miR-136-5p模拟物转染组(转染miR-136-5p模拟物),采用CCK-8方法检测各组HEC-1A细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组HEC-1A细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测HEC-1A细胞E2F1蛋白表达,应用Targetscan软件预测E2F1是否为miR-136-5p的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验验证.结果 生物信息学分析显示,与正常组相比,子宫内膜癌组织中miR-136-5p表达下调,E2F1的mRNA和蛋白表达上升.miR-136-5p模拟物转染组HEC-1A细胞中miR-136-5p表达上升,细胞增殖能力下降、侵袭能力下降,细胞凋亡率上升.miR-136-5p过表达组HEC-1A细胞中E2F1蛋白表达下降,生物信息学分析结果显示,E2F1是miR-136-5p的靶基因,双荧光素酶实验证实E2F1为miR-136-5p的靶基因.结论 过表达miR-136-5p可以抑制HEC-1A细胞增殖与侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控E2F1的表达相关.     

过表达miR-139-5p对胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨过表达miR-139-5p对胶质瘤U87MG细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其可能机制.方法 在胶质瘤U87MG细胞中瞬时转染miR-139-5p并用real-time PCR方法验证其转染效率,CCK-8法检测转染后各组U87MG细胞的增殖能力,Transwell实验检测转染后各组U87MG细胞的侵袭能力,Western blot检测转染后各组U87MG细胞中BMI1蛋白的表达,应用生物信息网站Targetscan和双荧光素酶报告基因实验验证BMI1是否为miR-139-5p的靶基因.结果 miR-139-5p过表达使U87MG细胞增殖能力下降,侵袭能力下降,U87MG细胞中BMI1蛋白表达下降,生物信息学分析及双荧光素酶实验证实BMI1为miR-139-5p的靶基因.结论 过表达miR-139-5p抑制U87MG细胞增殖及侵袭能力,与下调BMI1的表达相关.     

microRNA98靶向N-RAS对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移的影响

目的探讨miR-98对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移的影响及可能机制。方法利用脂质体介导的miR-98模拟物或阴性对照转染鼻咽癌CNE-1细胞,并通过实时定量PCR进行验证。MTT实验检测CNE-1细胞增殖能力的变化,划痕实验检测CNE-1迁移能力变化,采用生物信息学软件预测N-RAS是否为miR-98潜在的靶基因,并以双荧光素酶报告基因实验验证。Western blot检测miR-98过表达后CNE-1细胞N-RAS蛋白的表达变化以及下游ERK、p-ERK、AKT、p-AKT的表达变化。结果 MiR-98过表达能抑制鼻咽癌CNE-1细胞的体外增殖与迁移能力;生物信息学软件分析结果显示N-RAS是miR-98的靶基因之一,双荧光素酶报告基因证实N-RAS为miR-98的下游靶基因。miR-98过表达后,CNE-1细胞中N-RAS表达下调,ERK与Akt蛋白的表达水平不变,但pERK与p-Akt蛋白的表达水平下调。结论 miR-98通过靶向调控N-RAS抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖与迁移。     

miR-342靶向LGR5对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨miR-342对鼻咽癌CNE-1细胞增殖与侵袭的影响及可能机制。方法利用脂质体介导的miR-342模拟物或阴性对照转染鼻咽癌CNE-1细胞,并通过实时定量PCR进行验证。通过MTT实验检测CNE-1细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测CNE-1侵袭能力变化,采用生物信息学软件预测LGR5是否为miR-342潜在的靶基因,并以双荧光素酶报告基因实验验证。Western blot检测miR-342过表达后CNE-1细胞LGR5蛋白的表达变化以及下游β-catenin、Ascl2和C-myc的表达。结果 MiR-342过表达能抑制鼻咽癌CNE-1细胞的体外增殖与侵袭能力;生物信息学软件分析结果显示LGR5是miR-342的靶基因之一,双荧光素酶报告基因证实LGR5为miR-342的下游靶基因。miR-342过表达后,CNE-1细胞中LGR5以及下游β-catenin、Ascl2和Cmyc蛋白表达下调。结论 miR-342通过靶向调控LGR5抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖与侵袭。     

过表达miR-320a对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能机制

目的 探讨过表达miR-320a对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 将宫颈癌Hela细胞用培养基培养后,将miR-320a模拟物瞬时转染Hela细胞使miR-320a过表达,并通过实时定量PCR进行验证,采用CCK-8方法、Transwell实验检测各组Hela细胞的增殖和侵袭能力,Western blot检测各组Hela细胞E2F1蛋白表达,应用Targetscan7.2网站预测E2F1与miR-320a的靶向关系,应用双荧光素酶报告基因实验进行验证.结果 在转染miR-320a模拟物后,Hela细胞中miR-320a表达上升,细胞增殖能力和侵袭能力下降,E2F1蛋白表达下降,生物信息学分析及双荧光素酶实验证实E2F1为miR-320a的靶基因.结论 过表达miR-320a可以抑制Hela细胞增殖与侵袭,其机制可能与调控E2F1的表达相关.     

miR-129-5p靶向KLK7对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制

目的 探讨高表达miR-129-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR方法检测卵巢癌SKOV3细胞与人正常卵巢上皮细胞株中miR-129-5p的表达。在卵巢癌SKOV3细胞中瞬时转染miR-129-5p模拟物及无意义序列,采用CCK8法及Transwell实验检测各组细胞的增殖能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR检测miR-129-5p和KLK7的相对表达水平;Western blot检测各组细胞中KLK7蛋白表达;Targetscan 7.2和双荧光素酶实验分析miR-129-5p与KLK7的靶向关系。结果 miR-129-5p在卵巢癌SKOV3细胞中的表达低于人正常卵巢上皮细胞(P<0.05),过表达miR-129-5p降低SKOV3细胞中KLK7 mRNA和蛋白的表达,Targetscan 7.2网站分析及双荧光素酶实验证实KLK7为miR-129-5p的靶基因,过表达miR-129-5p抑制SKOV3细胞增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 过表达miR-129-5p可通过靶向调控KLK7抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭。     

过表达miR-519d-3p通过降低DU-145前列腺癌细胞TRAF4水平抑制其增殖

目的观察微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)对前列腺癌细胞增殖的影响,并探讨可能的分子机制。方法通过荧光实时定量PCR检测PC-3、DU-145、22RV1、PC-3M、LNCa P人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-519d-3p的表达水平。以miR-519d-3p表达水平最低的DU-145前列腺癌细胞为转染对象,转染miR-519d-3p模拟物或阴性对照微小RNA(miR-NC)并验证转染效率。采用流式细胞术检测miR-519d-3p对前列腺癌细胞细胞周期的影响,MTT法检测前列腺癌细胞的增殖能力。生物信息学软件预测并应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-519d-3p的靶基因。荧光实时定量PCR检测miR-519d-3p靶基因的表达水平,Western blot法检测靶基因蛋白及下游转化生长因子β(TGF-β)信号通路蛋白表达水平。结果与正常前列腺上皮细胞相比,miR-519d-3p在前列腺癌细胞的表达水平显著降低,DU-145细胞表达水平最低。DU-145细胞转染miR-519d-3p模拟物后,细胞miR-519d-3p的表达水平显著增加。过表达miR-519d-3p将前列腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期并降低细胞的增殖能力。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因证明肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)为miR-519d-3p的靶基因。过表达miR-519d-3p可明显降低前列腺癌细胞中TRAF4基因及下游TGF-β信号通路蛋白的表达水平。结论 miR-519d-3p在前列腺癌细胞中低表达,过表达miR-519d-3p通过抑制TRAF4的表达抑制DU-145前列腺癌细胞的增殖。     

miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能机制

目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平。体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组（转染miR-27a inhibitor）与阴性对照组（转染miR-27a inhibitor NC）,采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达。结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞（P<0.01）。转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功。抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显...     

miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及可能机制

目的探讨miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖及迁移能力的影响及可能机制。方法采用miR-137模拟物转染喉癌Hep-2细胞,实验分为空白对照组组(未进行转染)、miR-137阴性对照组(转染无关序列)、miR-137模拟物转染组(进行miR-137模拟物转染)。real-time PCR法验证转染效率,采用CCK8法检测miR-137对喉癌Hep-2细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测转染后Hep-2细胞的侵袭能力变化,采用流式细胞术检测miR-137对Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot检测转染后Hep-2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3以及侵袭相关蛋白T细胞因子-4(TCF-4)蛋白表达的变化。结果与空白对照组或阴性对照组相比,miR-137模拟物转染组Hep-2细胞miR-137的表达水平显著高于对照组(P0.01),喉癌Hep-2细胞的增殖与侵袭能力显著降低,细胞凋亡率明显升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平降低,而Bax与caspase-3蛋白表达升高,侵袭相关蛋白TCF-4表达降低。结论过表达miR-137抑制Hep-2细胞增殖与侵袭、诱导细胞凋亡,与上调Bax、caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2、TCF-4表达相关。     

MicroRNA143调节结肠癌细胞KRAS蛋白的表达

目的：探讨结肠癌细胞中microRNA143（miR-143）对KRAS蛋白表达的影响及其作用机制。方法: 从基因组DNA中克隆pri-miR-143基因，构建miR-143的表达载体。miR-143转染结肠癌细胞系SW480，用Northern blotting方法测定miR-143水平的变化，通过RT-PCR和Western blotting方法检测转染细胞中KRAS基因的表达。构建含miR-143结合位点的荧光素酶报告载体，与miR-143表达载体共转染，检测细胞中的荧光素酶活性。结果: 基因转染的SW480细胞中miR-143的表达显著升高， KRAS蛋白的表达水平下降约40%，KRAS mRNA则未受影响。miR-143表达载体与含miR-143结合位点的报告载体共转染可以抑制细胞中的荧光素酶活性。结论: 结肠癌细胞中microRNA143在转录后水平抑制KRAS蛋白的表达。     

miR-200b通过靶向CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制。方法将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRTPCR以及Western blot方法检测的CRKL的m RNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点。将CRKL过表达和表达沉默质粒载体分别稳定转染至U251胶质瘤细胞,使用CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化。分别建立miR-200b和CRKL的稳定双转染U251细胞系,使用CCK-8法检测对各组细胞增殖水平的变化。结果与对照组相比,miR-200b过表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖并且抑制CRKL在U251胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证了miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点;CRKL过表达显著增强胶质瘤U251细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-200b抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用。结论 miR-200b能够通过靶向下调CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖。     

miR-7靶向缺氧诱导因子1α对肝癌细胞的影响

目的：探究微小RNA-7(miR-7)靶向缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝癌细胞迁移、凋亡及干细胞特性的影响。方法 ：采用慢病毒转染肝癌细胞MGCC97H,分为对照组、miR-7模拟物组、miR-7干扰组（转染miR-7模拟物组+干扰物）、HIF-1α过表达组（转染pc-HIF1α）和共转染组（转染miR-7模拟物+pc-HIF1α）,RT-PCR检测各组细胞miR-7、HIF-1α mRNA表达量,免疫印迹检测各组HIF-1α蛋白的表达量,Transwell实验检测细胞迁移能力,流式细胞法检测细胞凋亡情况,软琼脂克隆形成实验分析其干细胞特性,荧光素酶实验验证miR-7与HIF-1α靶向关系。结果 ：miR-7模拟物组细胞HIF-1α蛋白表达、迁移率、克隆形成率低于对照组,凋亡率高于对照组;HIF-1α过表达组细胞迁移率、克隆形成率高于对照组,凋亡率低于对照组;共转染组HIF-1α蛋白表达、细胞迁移率、克隆形成率低于HIF-1α过表达组,凋亡率高于HIF-1α过表达组。结论 ：miR-7靶向HIF-1α可降低肝癌细胞迁移能力及干细胞特性,促进细胞凋亡,miR-7及HIF-1α可能是...     

miR-124靶向Sp1对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的调控

目的探讨miR-124是否能够通过靶向抑制Sp1基因调控人骨肉瘤MG-63细胞的增殖。方法利用荧光素酶报告基因实验验证Sp1基因是否为miR-124的靶基因,应用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-124 mimics或inhibitor转染至MG-63细胞,利用real-time PCR和Western blotting分析转染后MG-63细胞Sp1 mRNA和蛋白表达的变化,通过MTT法分析转染后MG-63细胞增殖水平变化。结果荧光素酶报告基因实验证实Sp1基因为miR-124的靶基因。与对照组相比,转染miR-124 mimics后,MG-63细胞Sp1 mRNA与蛋白的表达均显著降低,增殖能力明显下降(P<0.01);与对照组相比,转染miR-124 inhibitor后,MG-63细胞Sp1mRNA与蛋白的表达均显著升高,增殖能力明显升高(P<0.01)。结论 miR-124抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖可能与靶向Sp1基因相关。     

miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

Runt相关转录因子3依赖的维生素D3抑制结肠癌细胞的增殖

目的:探讨维生素D3在结肠癌中的抗肿瘤机制及其与抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)的关系, 为临床有效治疗结肠癌提供依据.方法:不同浓度维生素D3作用于SW480结肠癌细胞系, RT-PCR和Western blot分别检测RUNX3在mRNA和蛋白水平的表达情况.构建RUNX3基因的小干扰RNA载体并将其转染SW480结肠癌细胞, 经G418 筛选获得稳定表达的细胞系.MTT法和流式细胞术检测维生素D3对转染前后的细胞生长作用的影响.结果:随着维生素D3作用浓度增加, SW480细胞中RUNX3基因在mRNA和蛋白表达水平均呈剂量依赖性增加.成功构建了RUNX3的小干扰RNA载体并将其转染SW480细胞;筛选到稳定的敲除RUNX3的结肠癌细胞系.与其他对照组相比, 维生素D3对RUNX3敲除的SW480细胞的生长抑制作用减弱.结论:维生素D3在转录和翻译水平正性调控RUNX3的表达而抑制结肠癌细胞的增殖.