miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

 目的: 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法: 利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果: Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论: miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。     

miR-7靶向调节EGFR基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miRNA-7(miR-7)对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-7抑制剂组、miR-7模拟物组和对照组,分别将miR-7抑制剂或miR-7模拟物转染至miR-7抑制剂组或miR-7模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-7表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞EGFR mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞miR-7表达水平显著降低,miR-7模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-7抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,EGFR mRNA及蛋白表达水平显著升高,miR-7模拟物组则均显著降低(P0.01)。结论 miR-7抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调EGFR的表达相关。     

敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制.方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平.转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因.结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达.沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(p＜0.05).同时细胞中cyclin D1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高.双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTEN siRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用.结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点.     

熊果酸通过调节miRNA-133a抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭

目的:探讨熊果酸(ursolic acid,UA)是否通过调节miRNA-133a影响肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力。方法:MTT法检测细胞活力;real-time PCR法检测UA干预和转染miRNA-133a mimics及inhibitor后细胞中miRNA-133a的表达;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:UA可显著抑制肺癌A549细胞的活力(P0.05),随着给药剂量的增加,UA对肺癌细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,UA作用于肺癌A549细胞24 h后的IC50为31.04μmol/L。在不同浓度的UA作用下,肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P0.01)。Real-time PCR实验结果显示,在10、20μmol/L UA作用24 h后,A549细胞内miRNA-133a的表达显著高于溶剂对照组(P0.01);细胞瞬时转染miRNA-133a mimics后可上调A549细胞中miRNA-133a的表达,而转染miRNA-133a inhibitor后下调A549细胞中miRNA-133a的表达(P0.01)。肺癌A549细胞转染miRNA-133a mimics后,细胞活力、迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P0.01);相反,转染miRNA-133a inhibitor后,细胞活力、迁移和侵袭能力明显增强(P0.01)。结论:UA能抑制肺癌A549细胞活力、迁移和侵袭,其作用机制可能是通过上调miRNA-133a介导来实现的。     

miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能机制

目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平。体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组（转染miR-27a inhibitor）与阴性对照组（转染miR-27a inhibitor NC）,采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达。结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞（P<0.01）。转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功。抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显...     

RNA干扰EMS1基因表达对人胃癌MGC803细胞增殖和迁移的影响

目的探讨RNA干扰EMS1基因表达对人胃癌MGC803细胞增殖和迁移的影响。方法为检测下调EMS1基因表达后MGC803细胞功能的变化,运用平皿集落形成实验检测其增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡;Transwell迁移和侵袭实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化。结果下调MGC803细胞中EMS1基因表达后,MGC803细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制,与对照组相比差异有显著性(P0.05),而对细胞周期和凋亡无明显影响。结论 RNA干扰EMS1基因可抑制胃癌MGC803细胞的增殖和迁移侵袭能力。     

miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2增殖

目的检测miR-129对鼻咽癌细胞系CNE2细胞生物学功能的影响。方法人工合成miR-129模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),转染至鼻咽癌CNE2细胞中,RT-qPCR检测细胞miR-129表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果与对照组相比,转染miR-129 mimics组的miR-129表达水平明显升高(P0.05);转染miR-129 inhibitor组的miR-129表达水平均明显降低(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 mimics组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著下降(P0.05),凋亡显著增多(P0.05);与对照组相比,转染miR-129 inhibitor组CNE2细胞增殖能力、侵袭能力显著升高(P0.05),凋亡显著下降(P0.05)。结论 miR-129抑制鼻咽癌细胞系CNE2的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。     

miRNA-101-3p靶向调控EZH2蛋白抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的:研究微小RNA-101-3p(miRNA-101-3p)对人胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的调控机制。方法:Real-time PCR检测2种人胃癌细胞和1种胃黏膜细胞中miRNA-101-3p和zeste增强子同源物2(EZH2)的表达水平;采用脂质体瞬时转染技术过表达miRNA-101-3p;流式细胞术检测miRNA-101-3p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;Transwell实验、CCK-8法和台盼蓝染色法检测miRNA-101-3p对胃癌细胞迁移和增殖能力的影响;Western blot法检测EZH2的表达。结果:miRNA-101-3p在胃癌细胞的表达水平显著低于胃黏膜细胞(P0.05);过表达miRNA-101-3p后,流式细胞术结果显示胃癌细胞的S期比例减少,G0/G1期比例增加,早期凋亡率增加(P0.05);CCK-8法、台盼蓝染色法及Transwell实验结果显示胃癌细胞的增殖和迁移能力显著降低(P0.05);Western blot结果显示胃癌细胞中EZH2蛋白的表达明显下降(P0.05)。结论:miRNA-101-3p可能通过靶向负调控EZH2蛋白的表达抑制胃癌细胞的增殖和迁移,进而促进胃癌细胞凋亡。     

人附睾蛋白4过表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力及肿瘤形成的影响

目的 探讨人附睾蛋白4（HE4）过表达对子宫内膜癌（EC）细胞增殖、侵袭能力及肿瘤形成的影响。 方法 构建HE4过表达质粒载体（pcDNA 3.1/Myc-His-HE4）和HE4特异性小干扰RNA（siRNA）表达质粒载体（siRNA-HE4）,分别转染HEC-1B（HE4过表达组）和Ark2（HE4低表达组）两个EC细胞系;以空载体pcDNA 3.1/Myc-His转染的HEC-1B细胞为HE4过表达组的阴性对照,以非特异性序列siRNA转染的Ark2细胞为HE4低表达组的阴性对照;不进行转染处理、正常培养的EC细胞系为正常对照组。转染后,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测HE4 mRNA表达水平,MTT比色法测定细胞增殖活性,体外迁移和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。构建移植性肿瘤小鼠模型,比较各组动物的形成瘤体积。 结果 与正常对照组和阴性对照组的HEC-1B细胞比,转染pcDNA 3.1/Myc-His-HE4后HEC-1B细胞中HE4 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞增殖活性、穿膜细胞数明显升高（P＜0.05）;与正常对照组和阴性对照组的Ark2细胞比,转染siRNA-HE4后Ark2细胞中HE4 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞增殖活性、穿膜细胞数明显降低（P＜0.05）;而阴性对照组与正常对照组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;HE4过表达组的移植性肿瘤体积和重量明显大于其对照组（P＜0.05）,而HE4低表达组的移植性肿瘤体积和重量明显小于其对照组（P＜0.05）。 结论 HE4过表达可导致EC细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强,促进肿瘤形成;下调HE4基因表达可明显抑制EC细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制肿瘤生长。     

miR-217调控lncRNAMALAT1影响食管鳞癌细胞的生物学行为

目的　探讨miR-217通过调控lncRNA MALAT1抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,迁移和侵袭行为及其机制。 方法　qPCR检测miR-217在食管鳞状细胞癌组织和不同细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-217与MALAT1之间的相互作用;MTT增殖实验检测抑制miR-217后食管鳞状细胞癌细胞的增殖能力的变化情况;划痕愈合试验和Transwell侵袭实验检测抑制miR-217后食管鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭行为的变化情况;Western blotting实验检测miR-217对MALAT1下游相关蛋白表达情况的影响。 结果　与正常食管组织相比,食管鳞状细胞癌组织中miR-217的表达水平相对上调,与其他细胞株相比,Ec109细胞中miR-217表达最高;双荧光素酶实验证实miR-217能与MALAT1的3’ UTR特异性结合,可以调控MALAT1的表达与活性;抑制miR-217的表达后可以抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;抑制miR-217后MALAT1下游MIA2,ROBO1表达明显下调。 结论　miR-217可以调控MALAT1的表达影响食管鳞状细胞癌细胞的生物学行为。     

小剂量丙泊酚对食管鳞癌细胞Eca109生物学行为的影响

目的:探讨低剂量丙泊酚对食管鳞癌细胞Eca109的增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响。方法:根据预实验结果设置低剂量丙泊酚组,干预食管鳞癌细胞Eca109后,利用MTT、流式细胞术、transwell检测对增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,应用实时荧光定量PCR检测血红素氧合酶1(HO-1)的表达变化。结果:低剂量Eca109可以促进Eca109的增殖、迁移与侵袭并抑制凋亡,实时荧光定量PCR显示干预后HO-1的表达增加且随浓度的增加而增加。结论:低剂量丙泊酚可以促进Eca109的增殖、迁移与侵袭并抑制凋亡,可能与促进HO-1的表达相关。     

微小RNA-4286调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型对胃癌细胞系HGC-27生长、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-4286(miRNA-4286)调控肌醇多聚磷酸-4-磷酸酶Ⅰ型(INPP4A)对胃癌细胞系NGC-27生长、迁移及侵袭的影响.方法 将胃癌HGC-27细胞分为空白对照组和阴性对照组、干预组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染pEGFP-N1质粒,干预组转染pEGFP-N1-miRNA-428...     

人食管癌细胞株KYSE-150、TE-1中肿瘤干细胞的培养分化及增殖侵袭能力分析

BACKGROUND: There is a certain cell subset in esophageal cancer tissues, with certain invasive and metastatic properties, which is closely related to the clinical therapeutic effect on tumors. OBJECTIVE: To isolate tumor stem cell spheres in human esophageal carcinoma cell lines KYSE-150 and TE-1 and to analyze their proliferation and invasion ability. METHODS: KYSE-150 and TE-1 cells were cultured in serum-free medium to observe the formation of cell spheres. Cell proliferation and invasion were detected using MTT and Transwell chamber culture. Surface markers of cells were detected using flow cytometry. RESULTS AND CONCLUSION: Cell spheres that were stably subcultured were obtained from KYSE-150 and TE-1 cells cultured in serum-free medium. The proliferation and invasion abilities of cell spheres were significantly stronger than those of parent cells (P < 0.05). The number of CD44+, CD271+ and CD44+CD271+ cells in TE-1 and KYSE-150 cell spheres was significantly higher than that in the TE-1 and KYSE-150 parent cells (P < 0.05). These experimental results show that cell spheres isolated from human esophageal carcinoma cell lines TE-1 and KYSE-150 have tumor stem cell properties as well as strong proliferation and invasion abilities. And moreover, CD44 and CD271 can be used as important surface markers of esophageal carcinoma stem cells.      

Clinicopathologic significance of CXCR4 expressions in patients with esophageal squamous cell carcinoma

AimsThis study was designed to investigate the biological function of CXCR4 in esophageal squamous cell carcinoma and to explore the underlying mechanism to provide potential targets for esophageal squamous cell carcinoma.MethodsA total of 101 patients with esophageal squamous cell carcinoma were included, and the relationship between CXCR4 and clinicopathological factors was analyzed. Laser scanning confocal microscopy was used to observe numbers of autophagosomes in TE-1 cell line and the ability of proliferation and invasion were evaluated meanwhile.ResultsCXCR4 is overexpressed in ESCC specimens and is associated with poor differentiation and lymphocyte metastasis. In the survival analysis, CXCR4 predicted a poor overall survival prognosis. The number of autophagosomes in the siR-CXCR4 group was decreased compared with negative group (P < 0.05), while was increased in the pcDNA3.1-CXCR4 group (P < 0.05).Western blot result show upregulation of LC3II, the ratio of LC3II/LC3I and Beclin1 in pcDNA3.1-CXCR4 group and decreased expression of LC3II, the ratio of LC3II/LC3I and Beclin1 in siR-CXCR4 group. Transwell assay show CXCR4 overexpression promote the invasion of TE-1 cells and was attenuated by autophagy inhibitor 3-Methyladenine.On the contrary, invasion cell numbers decreased in siR-CXCR4 group and was rescued by autophagy inducer Rapamycin.ConclusionCXCR4 is an indicator of poor prognosis for ESCC. CXCR4 promote autophagy and regulate cell invasion through autophagy in ESCC. Our study provides new insights for the treatment of esophageal squamous cell carcinoma and CXCR4 may serve as a therapeutic target for ESCC.     

miRNA-181a对多发性骨髓瘤细胞增殖和迁移的作用

目的:通过沉默人多发性骨髓瘤细胞株RPM18226中miRNA-181a的表达,观察RPM18226细胞的增殖、迁移和细胞周期的变化,并探讨其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤患者和健康者血清标本中miRNA-181a的表达水平;转染miRNA-181a inhibitor后,CCK-8法与集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的周期变化,Western blot法检测cyclin D1、p-PI3K和pAkt蛋白水平的变化。结果:多发性骨髓瘤患者血清中miRNA-181a呈高表达,显著高于正常人;转染miRNA-181a inhibitor后,RPM18226细胞的存活率和集落形成能力下降,迁移能力降低,G_0/G_1期细胞比例明显减少,S期细胞比例增多,cyclin D1蛋白表达显著低于正常对照组,PI3K和Akt的磷酸化水平明显低于正常对照组。结论:沉默miRNA-181a的表达能够抑制RPM18226细胞的增殖,并降低细胞的迁移能力,可能与细胞周期及PI3K/Akt信号通路有关。     

miR-4746促进PRKACB表达上调并促进食管鳞癌细胞增殖

目的研究miR-4746在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌细胞的增殖的影响。方法收集食管鳞癌患者的癌组织和癌旁组织标本,RT-PCR和Western blot检测miR-4746和PRKACB的表达,并分析二者mRNA水平的相关性。培养EC9706、HET-1A、TE-1细胞,并转染miR-control、miR-4746 mimic或inhibitor,RT-PCR检测PRKACB的表达水平,MTT法检测细胞的增殖水平。结果在食管鳞癌患者的标本中,癌组织中miR-4746和PRKACB的表达显著低于癌旁组织,miR-4746和PRKACB的表达水平呈正相关。在转染miR-4746 mimic后,PRKACB的表达上调,EC9706、HET-1A、TE-1细胞的增殖受到促进;在转染miR-4746 inhibitor后,PRKACB的表达下调,EC9706、HET-1A、TE-1细胞的增殖受到抑制。结论miR-4746促进PRKACB表达上调,并促进食管鳞癌细胞的增殖。     

5-脂氧合酶激活蛋白抑制剂MK886对人食管癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的 5-脂氧合酶活化蛋白（FLAP）抑制剂MK886对人食管癌细胞系（KYSE-150和TE-3）增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用2.5、5、10、20、40和80μmol/L的MK886干预体外培养的KYSE-150和TE-3细胞;xCELLigence RTCA系统实时测定细胞增殖抑制率,同时确定半数抑制浓度(IC₅₀)。流式细胞测量术检测食管癌细胞的细胞周期。Western blot检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果人食管癌细胞系（KYSE-150和TE-3）的增殖抑制率随着MK886浓度增加而增强（P<0.05）,KYSE-150组的IC₅₀浓度为29.11μmol/L,TE-3组的IC₅₀浓度为27.47μmol/L。当MK886浓度增加至25μmol/L时,食管癌细胞G₀/G₁期滞后增加明显（P<0.001）,MK886处理浓度增加到50μmol/L时,食管癌细胞G₂/M期增加明显（P<0.001和P<0.05）...     

LINC00659靶向miR-149-5p调控食管鳞癌细胞Eca-109的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性

目的 探讨长基因间非编码RNA 00659(LINC00659)是否靶向miR-149-5p调控食管鳞癌Eca-109细胞的增殖、 迁移侵袭及放射敏感性.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)分析30对食管鳞癌组织、 对照组织中LINC00659和miR-149-5p表达量.将Eca-109细胞分为si-NC组、si-...