慢性肝病肝组织凋亡蛋白TNF-α、TNFR、Bcl-2家族表达的研究

探讨凋亡蛋白TNF -α、TNFR及Bcl- 2家族在慢性肝炎、肝硬化及肝癌发生、发展中对凋亡的调节作用。 94例慢性肝病患者 ,慢性肝炎 2 8例 ,肝硬化 2 2例 ,肝癌 4 4例 ,采用原位杂交法检测TNF -α、TNFR及免疫组化SP法检测Bcl- 2家族凋亡蛋白及Fas、FasL在其肝组织中的表达。肝硬化TNF -α、TNFR表达率为 90 9%、95 5 % ,明显高于慢性肝炎组 (5 3 6 %、4 6 4 % )及肝癌组 (43 2 %、38 6 % ) ,P <0 0 5或 <0 0 1;Fas在慢性肝炎和肝硬化与肝癌组表达分别为 (10 0 0 %、81 8%、5 6 8% ) ;前二者与肝癌相比P <0 0 1表达明显高于肝癌组。HAI记分越高TNF-α、TNFR和Fas表达越明显 ,而Bcl- 2表达越低。说明在慢性肝病时 ,TNF -α、TNFR、Bcl- 2各凋亡蛋白家族参与了肝组织凋亡的调节 ,引起不同程度的肝组织损伤     

慢性肝病肝细胞凋亡Fas、FasL、Bax、Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-2α等蛋白表达

目的 探讨慢性肝病时肝细胞凋亡蛋白Fas、FasL、Bax、Bcl-2、BcL-XL、Bcl-2α等的表达与线粒体的改变。方法 慢性肝炎72例、肝炎后肝硬化29例，以上患者肝组织采用免疫组化SP法检测促凋亡蛋白Fas、FasL、Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-2α等的表达，并对其中15例肝组织着重观察了线粒体的超微结构。结果 促凋亡蛋白与抑凋亡蛋白相比，表达差异有非常显著性(P＜0．001)，前者最高达94．4％，明显高于后者的最高值61．1％，两组Fas、FasL的表达程度以( )、( )为主，未见差别；但慢性肝炎组Bax( )表达多达16例(22．2％)、肝硬化组未见( )表达者。提示慢性肝炎组有明显的细胞凋亡现象而肝硬化组的凋亡相对不活跃。凋亡肝细胞的线粒体普遍存在明显的改变，包括线粒体嵴的扩张，外膜破裂、基质外漏等。结论 慢性肝炎时肝细胞的凋亡激活途径很可能偏重以线粒体途径为主，但尚需进一步研究证实。     

Bax、Bcl-2及FHIT在胰腺癌中的表达及意义

目的研究胰腺癌组织及细胞中Bax/Bcl-2蛋白和FHIT mRNA的表达,探讨FHIT与凋亡相关因子在胰腺癌中的关系.方法应用ABC免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞和组织标本中Bax与Bcl-2蛋白,RT-PCR检测其中FHIT mRNA的表达.结果 38例胰腺癌中Bax蛋白阳性17例(45%),Bcl-2蛋白阳性表达22例(58%),FHIT mRNA异常表达为21例(56%).转染有外源性FHIT的1990细胞(1990 pFHIT)Bax表达阳性率有升高,Bcl-2/Bax比值下降.结论 Bax、Bcl-2及FHIT都通过调控凋亡参与胰腺癌的病理过程.FHIT诱导凋亡可能与Bax上调表达有关.     

激动素对实验性肝纤维化大鼠Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的研究实验性肝纤维化大鼠肝组织Bcl-2和Bax的表达及激动素对它们的影响,初步探讨激动素抗肝纤维化的机制.方法用CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型,使用0.1%激动素溶液0.5ml/100g·d-1,背部皮下注射,治疗12周,设立正常对照组、肝纤维化模型组及激动素治疗组.以苏木精-伊红染色观察肝组织炎症和纤维化程度.采用免疫组化方法检测各组大鼠肝组织Bcl-2、Bax基因的表达.结果模型组肝纤维化程度明显高于激动素治疗组.Bcl-2在正常对照组大鼠肝细胞浆和肝窦呈低水平表达,在模型组大鼠肝组织分布广泛,主要表达在汇管区、纤维间隔、肝窦和肝细胞膜、中央静脉和肝细胞浆,表达的量明显高于正常对照组.Bax在正常对照组大鼠的中央静脉及其周围的肝窦呈低水平表达,在模型组大鼠肝组织主要表达在肝细胞浆、肝窦、纤维间隔和肝细胞膜中,表达的量也明显高于正常对照组基因的表达.激动素治疗组大鼠肝组织Bcl-2的表达明显低于模型组,Bax的表达也明显低于模型组,Bcl-2/Bax比值无明显差异;激动素对纤维间隔Bax的表达无明显作用,但能降低Bcl-2的表达,下调Bcl-2/Bax比值.结论肝纤维化时Bcl-2和Bax表达加强,激动素可促进纤维间隔中肝星状细胞的凋亡,促进肝星状细胞凋亡可能是激动素抗肝纤维化机理之一.     

Fas/FasL在肝癌免疫逃避中作用的探讨

应用免疫组织化学法及脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (Tunel)技术 ,对 41例肝癌组织中Fas、FasL表达及肝细胞凋亡进行观察和比较。结果显示 ,肝癌中Fas阳性率为 31 .71 % ,癌旁肝硬化Fas阳性率 80 .0 0 % ,癌细胞Fas表达较癌旁显著减小 ,肝癌及癌旁肝硬化FasL阳性率分别为 41 .46 %、65 .0 0 % ;FasL表达在二者间无显著差异。肝癌组织Fas、FasL表达与性别、肿瘤大小、组织分级无关。Fas表达与门静脉癌栓发生率呈负相关 ,FasL表达则与其无关。Fas抗原表达阳性的肝癌组织细胞凋亡指数明显高于Fas抗原表达阴性组。表明Fas/FasL系统在原发性肝癌肿瘤免疫逃避中起重要作用 ,Fas抗原表达在原发性肝癌门静脉癌栓形成中的作用值得进一步研究     

阻塞性黄疸大鼠肝组织Bcl-2及BaX的表达与细胞凋亡

目的探讨在阻塞性黄疸肝损害中Bcl-2,Bax基因的表达.方法结扎Wistar大鼠胆总管建立阻塞性黄疸大鼠动物模型.分为结扎后3,7,14,21d及阴性对照各组,每组8只.结扎后3,7,14,21 d处死大鼠,门静脉抽血,离心后取上层血清行胆红素测定.HE染色,光镜下观察阻塞性黄疸大鼠肝脏组织的病理改变.用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组织化学方法检测阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因Bcl-2,Bax蛋白的表达.结果胆总管结扎后,随结扎时间的延长胆红素值逐渐增高.光镜下,胆总管结扎3d即见肝内胆管扩张,结扎7 d,肝细胞内或细胞间瘀胆,纤维组织增生;结扎14 d,纤维组织增生向肝小叶内扩展;结扎21 d,纤维组织带增宽,肝脏结构广泛改变.TUNEL检测表明,正常大鼠肝组织偶见细胞凋亡,结扎3d即见细胞凋亡增加,结扎7 d明显增加,结扎14 d后细胞凋亡达高峰,凋亡指数(AI)达58.2%±1.6%,各组AI有显著性差异(P＜0.05),21 d细胞凋亡数目明显减少.SABC免疫组化检测,Bcl-2蛋白的表达,对照组、胆总管结扎3 d,7 d均为阴性表达,14 d弱阳性表达,21 d强阳性表达;结扎14 d,Bcl-2蛋白弱阳性表达,AI达高峰,结扎21 d Bcl-2强阳性表达,AI下降.Bax蛋白的表达,对照组、胆总管结扎3 d均可见表达,7 d表达增多,14 d明显增多;21 d表达减少;结扎7 d,Bax蛋白中阳性表达,AI增高;结扎14 d,Bax蛋白强阳性表达,AI达高峰.表明在阻塞性黄疸过程中,Bcl-2蛋白表达越强,凋亡指数越少;Pax蛋白表达越强,凋亡指数越强.结论 Bcl-2和Bax蛋白均参与了阻塞性黄疸肝组织中细胞凋亡的调节,并在阻塞性黄疸肝损害的发生和发展中起重要作用.     

HDV/HBV感染树鼩肝组织中Bcl2/Bax表达和肝细胞凋亡

目的探讨HDV感染树鼩肝组织中Bcl2/Bax表达与HDV感染之间的关系,以及Bcl2/Bax在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用.方法采用免疫组化技术对45份HDV感染树鼩肝组织中HDAg,Bcl2/Bax的表达进行了检测;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测;并应用免疫组化双重染色对HDAg,Bcl2/Bax的表达以及肝细胞凋亡进行了检测.结果45份肝组织中有33份可检出Bax(阳性率73%),有7份可检出Bcl2(阳性率16%),有41份可检出凋亡细胞(阳性率91%).HDAg表达与Bcl2/Bax表达之间有显著相关性(X12=27.6,X22=35.9,P<0.05),HDAg表达越强,Bax表达越强;相反,Bcl2表达则越弱.凋亡在HDAg阳性和阴性细胞中均可发生,以在HDAg阳性细胞内发生为主.Bcl2/Bax表达与肝细胞凋亡之间有显著相关性(X12=40.1,X22=38.2,P<0.05),Bax表达越强,凋亡阳性细胞越多;相反,Bcl2表达越强,凋亡阳性细胞越少.结论丁型肝炎病毒感染和未感染的肝细胞均可发生凋亡,但凋亡只在少数细胞内发生;HDV可诱导Bax表达,但对Bcl2表达无明显诱导作用,Bcl2/Bax在肝细胞凋亡中起重要作用.     

肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Bcl-2/Bax、Fas/FasL信号通路的影响

目的:观察Bcl-2/Bax、Fas/Fas L介导的信号转导通路在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用及肾气丸对其的影响。方法:采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,同时以肾气丸进行干预12周。HE染色观察大鼠肝组织病理组织学变化,免疫组织化学检测肝组织中Fas、Fas L、Bcl-2、Bax、Caspase-8蛋白的表达;Realtime-PCR法检测肝组织Caspase-8 mRNA表达。结果:模型组大鼠肝组织Bcl-2、Bax、Fas、Fas L蛋白以及Caspase-8 mRNA和蛋白表达均较正常组显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值较正常组明显的降低(P<0.05);大鼠肝组织Caspase-8蛋白表达与Fas、Fas L蛋白表达均呈明显正相关(r分别为0.907、0.804,P均<0.01);予以肾气丸干预后,Bax、Fas、Fas L蛋白的表达以及Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均较模型组明显的降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较模型组明显的增加(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾气丸可能通过影响Bcl-2/Bax、Fas/Fas L信号转导通路,下调Bax、Fas、Fas L、Caspase-8表达,减少肝细胞的脂性凋亡,从而防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生发展。     

Ⅰ型自身免疫性肝炎患者肝组织细胞凋亡的研究

目的　探讨细胞凋亡在Ⅰ型自身免疫性肝炎 (AIH)肝细胞损伤过程中的作用。方法　采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL)和细胞凋亡促进因子Fas的免疫组化染色 ,检测 10例AIH肝组织和 3例正常肝组织中的细胞凋亡情况。结果　所有AIH患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性和Fas抗体染色阳性肝细胞。正常对照肝组织中未见到TUNEL阳性肝细胞 ,Fas表达微弱或缺如。在AIH肝组织中 ,凋亡指数 (AI)与炎症坏死分级有显著相关性 (r =0 .4 5 ,P <0 .0 5 ) ,而与血清丙氨酸转氨酶水平以及组织学纤维化分期无显著相关。结论　Fas介导的细胞凋亡参与了AIH的肝细胞损伤过程。     

吡喹酮对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察吡喹酮(Praziquantel)治疗对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织中与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法建立小鼠血吸虫病肝纤维化模型。模型对照组不做治疗,吡喹酮治疗组按500 mg/kg给药,1次/d,连用2 d。10周后处死小鼠,取肝组织制片,免疫组化染色(SP法),观察小鼠肝组织中Bcl-2和Bax的表达水平;HE染色观察肝组织的病理学变化。实验设正常小鼠对照。结果模型对照组和治疗组小鼠肝组织Bcl-2、Bax表达水平较正常对照组显著增高(P<0.01或P<0.05);治疗组Bcl-2水平显著高于模型对照组(P<0.05),而Bax的表达水平2组间差异无显著性(P>0.05)。结论吡喹酮可能通过促进Bcl-2表达,减少肝细胞的变性坏死,阻止血吸虫病肝纤维化的发生。     

乙型肝炎,肝硬化及肝癌的免疫组化研究

本文应用抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb_(13)(简称HAb_(13))和抗细胞角蛋白单克隆抗体HK_2(简称HK_2),经免疫组化PAP法染色,对10例正常肝、10例乙型肝炎、20例肝硬化及42例原发性肝癌进行研究,结果发现HAb_(13)相应抗原在肝癌的阳性率为78.6% 提示HAb_(13)是肝癌较好的标志物。HK_2在正常肝仅见汇管区胆管上皮细胞阳性,肝细胞均为阴性;在乙型肝炎及肝硬化组织中,除成熟及增生的胆管上皮外,部分肝细胞也出现HK_2阳性,其阳性率分别为30%和60%;在肝癌HK_2的总阳性率为92.9%,其中肝细胞型癌36例,33例呈弱阳性,胆管型肝癌6例全部为强阳性表达。     

慢性肝炎患者肝组织AFP的表达及其意义

目的；探讨慢性肝炎患者肝组织中ＡＦＰ的表达及其临床意义，方法：应用免疫组化技术检测２６０例慢性肝炎及５０例肝硬变，肝癌患者肝组织中ＡＦＰ的表达情况，结果：ＡＦＰ垢表达与慢性炎患者的年龄，性别，炎症活动度，纤维化程度有关，同时肝癌组患者ＡＦＰ表达显著多于慢性肝炎及肝硬变组，结论：肝组织表达ＡＦＰ显著者其病变程度较深愈合较差，并可能发展为癌前病变。     

Fas/FasL、Bcl-2/Bax、Caspase-8在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的作用机制

目的:探讨肝细胞凋亡及其相关因素Fas/FasL、Bcl-2/Bax蛋白及Caspase-8 mRNA的表达在大鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用.方法:采用改良高脂饮食建立大鼠NAFLD模型,以正常饮食设立对照组.HE染色观察肝脏脂肪变、炎症活动和纤维化程度,采用流式细胞仪法测肝细胞凋亡百分数;免疫组织化学法检测Fas、FasL、Bcl-2及Bax在肝组织中表达情况;实时荧光定量PCR法检测肝脏Caspase-8 mRNA的表达.结果:NAFLD模型组脂肪变性明显,纤维化和炎症活动度记分均显著高于正常对照组.流式细胞仪检测显示,与对照组比较,实验组大鼠肝细胞凋亡百分数增加,随造模时间延长凋亡率增加更明显(均P<0.01);免疫组织化学染色显示随着肝脏脂肪变加重,Fas、FasL蛋白染色加深,阳性细胞数增加;Bcl-2、Bax在对照组的表达均为散在弱阳性,实验组4、8、12wk阳性细胞数渐增加,并在脂肪变明显的部位着色深且随着脂肪肝的进展,Bcl-2/Bax比率进行性下降.实时荧光定量PCR法显示Caspase-8 mRNA表达量在高脂组中显著高于对照组(均P<0.01),且随肝脏脂肪变及炎症加重呈进行性上升.结论:在NAFLD发生过程中,肝细胞凋亡促进NAFLD大鼠病情进展;Fas、FasL、Caspase-8 mRNA相关调控蛋白的活化是引起NAFLD脂肪变性、炎症及纤维化的重要因素.细胞凋亡调节蛋白Bax、Bcl-2表达上调,二者表达的相对比例发生异常,这可能是NAFLD中肝细胞发生凋亡的重要原因之一.     

剔毒护肝方药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的:研究剔毒护肝方药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响.方法:传代培养大鼠肝星状细胞(HSC)系HSC-T6与不同剂量剔毒护肝方(大、中、小剂量组)共同培养48小时,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测剔毒护肝方对大鼠HSC凋亡的影响;免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax水平.结果:剔毒护肝方能使大鼠HSC凋亡率明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:剔毒护肝方可下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

补肝散对感染血吸虫小鼠肝损伤后肝组织Bcl-2、Bax水平的影响

目的:观察补肝散干预感染血吸虫小鼠肝损伤模型后,对肝组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响,探讨补肝散对肝损伤的防护作用机制.方法:选择健康8周龄雄性昆明小白鼠108只,随机分为5组,将血吸虫尾蚴(18条/只)经小鼠腹部皮肤攻击感染造模,每组定期随机抽取6只小鼠,处死后留取其肝脏左叶,置于10％中性甲醛(用PBS配)固定,免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.结果:①Bcl-2、Bax表达在模型组小鼠肝组织中的阳性率均明显升高,与正常组比较差异有显著性意义(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.05);②补肝散组与模型组相比小鼠Bel-2表达升高差异有显著性意义(P＜0.05),Bax表达升高差异无显著性意义(P＞0.05),Bcl-2/Bax比值增高差异有显著性意义(P＜0.05).结论:补肝散可促进Bcl-2表达,使Bcl-2/Bax比值上调,减少肝细胞的凋亡,进而防护血吸虫性小鼠肝损伤,发挥抗纤维化的作用.     

桥本甲状腺炎甲状腺组织中Fas、Fas配体、Bcl-2、Bax表达及意义

目的　探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas配体 (FasL)、Bcl 2、Bax表达与桥本甲状腺炎(HT)发病机制的关系。方法　采用免疫组化S P法检测 41例HT和 10例正常甲状腺组织Fas、FasL、Bcl 2、Bax表达及分布 ,应用Mias99图像分析系统进行定量分析。结果　 (1)HT组甲状腺组织中Fas、FasL、Bcl 2、Bax阳性染色面积、平均光密度和积分光密度均显著高于正常组 (P <0 .0 1) ;(2 )HT组中组织结构破坏较重区域中小滤泡及失去正常滤泡结构的腺上皮Fas、FasL、Bax表达高于其它腺上皮 ,滤泡结构较完整的区域Bcl 2表达较高。结论　Fas、FasL、Bcl 2、Bax的过度表达可能参与HT发病过程 ,其导致的细胞凋亡增高可能是HT甲状腺细胞破坏的重要机制之一 ;Bcl 2在维护HT甲状腺滤泡结构的完整性中起着某种重要作用     

Fas／FasL、FAP-1在肝母细胞瘤中的表达研究及其临床意义

目的 探讨肝母细胞瘤组织Fas、FasL及FAP-1和组织中淋巴细胞的Fas、FasL的表达状况及临床意义。方法 应用Fas、FasL多克隆抗体及FAP-1单克隆抗体对15例小儿肝母细胞瘤组织标本进行免疫组化染色，以检测其组织Fas、FasL及FAP-1和淋巴细胞的Fas、FasL的蛋白表达，并以相应的正常肝组织作对照。结果 肝母细胞瘤组织中Fas表达（78％）高于正常肝组织（5％），阳性信号主要位于细胞膜和细胞浆，呈胞浆型表达。正常肝组织中FasL表达阴性，而肝母细胞瘤中FasL表达73％，两者表达率差异明显；在15例肝母细胞瘤中FAP-1阳性表达13例。同时发现瘤周淋巴细胞Fas、FasL的阳性表达率分别为80％、68％，而在正常肝组织中的表达均为阴性。结论 正常肝组织同时表达Fas／FasL，在维持其自身细胞的增殖与凋亡的平衡中起重要作用；肝母细胞瘤组织Fas、FasL表达上调以及FAP-1阳性表达可诱导表达Fas的淋巴细胞凋亡以实现免疫逃逸。     

Bax、Bcl—2及FHIT在胰腺癌中的表达及意义

目的：研究胰腺癌组织及细胞中Bax／Bcl-2蛋白和FHIT mRNA的表达，探讨FHIT与凋亡相关因子在胰腺癌中的关系。方法：应用ABC免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞和组织标本中Bax与Bcl-2蛋白，RT－PCR检测其中FHITmRNA的表达。结果：38例胰腺癌中Bax蛋白阳性17例（45％），Bcl-2蛋白阳性表达22例（58％），FHITmRNA异常表达为21例（56％），转染有外源性FHIT的1990细胞（1990pFHIT)Bax表达阳性率有升高，Bcl-2／Bax比值下降，结论：Bax、Bcl-2及FHIT都通过调控凋亡参与胰腺癌的病理过程，FHIT诱导凋亡可能与Bax上调表达有关。     

抗纤软肝胶囊对肝纤维化大鼠肝组织Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨抗纤软肝胶囊对肝纤维化大鼠肝组织Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 66只雄性Wistar大鼠,随机数字表法中选取66个数字依大小排列,前12个为正常组,中36个为模型组,后18个为干预组,通过腹腔注射四氯化碳(CCl4)法制备大鼠肝纤维化模型,应用苏木素-伊红(HE)染色和Masson三色染色观察肝组织形态变化,免疫组化法检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果三组羟脯氨酸(Hyp)含量差异显著(P0.05),其中模型组和干预组高于正常组,模型组高于干预组(P0.05)。免疫组化染色显示Bax蛋白主要分布在肝细胞质、Bcl-2蛋白主要分布在肝纤维间隔和汇管区。三组Bax、Bcl-2蛋白表达差异显著(P0.05),其中正常组和干预组低于模型组,正常组低于干预组(P0.05),三组Bax/Bcl-2比值统计学差异(P0.05)。结论抗纤软肝胶囊可能降低肝细胞Bax和Bcl-2蛋白表达,减轻肝损伤。     

Bcl-2家族在胃癌组织中的表达及意义

采用免疫组化方法检测45例胃癌组织和癌旁组织Bcl-2、Bcl-xl、Bax的表达水平.结果 Bcl-2、Bcl-xl、Bax在胃癌组织中的阳性表达率分别是:51.1%(23/45)、57.8%(26/45)、60.0%(27/45),在癌旁组织中的阳性表达率分别是:17.8%(8/45)、33.3%(15/45)、55.6%(25/45).胃癌与癌旁组织比较,Bcl-2和Bcl-xl表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05).Bcl-2、Bcl-xl在高分化组织中的表达明显高于低分化组织(P<0.05),无淋巴结转移者Bax的表达明显高于有淋巴结转移者(P<0.05).认为Bcl-2家族参与了胃癌发生、发展的过程.