SD大鼠骨骼肌卫星细胞系的建立及诱导其向成肌、成脂和成骨分化

目的:建立SD大鼠骨骼肌卫星细胞的细胞系,为组织工程学提供种子细胞和研究资料.方法:采用两步酶消化法结合差速贴壁技术,获得较高纯度的骨骼肌卫星细胞.MTT法观察骨骼肌卫星细胞的体外增殖特性并绘制生长曲线图,流式细胞仪检测细胞周期.观察不同诱导条件下骨骼肌卫星细胞的成肌、成脂、成骨的分化特性.结果:骨骼肌卫星细胞可传50代以上,第7代时,倍增时间约为60 h,80.7%的细胞处于G1期,在特定诱导作用下骨骼肌卫星细胞可以向成肌、成脂、成骨方向分化,显示了骨骼肌卫星细胞的多向分化潜能,成功建立了骨骼肌卫星细胞的细胞系.结论:建立了SD大鼠骨骼肌卫星细胞系,为组织工程学提供种子细胞.     

CD34在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞发育的免疫组织化学研究

目的 观察CD34在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布，探讨CD34在发育中的大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用。方法 原代培养骨骼肌卫星细胞，第1次传代后，取贴壁2、4、8、16、24、48和72h的细胞行CD34多克隆抗体的免疫组织化学染色。结果 CD34免疫阳性反应存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中，但在形成肌管后，细胞核免疫反应转为阴性，同时成纤维细胞呈弱阳性反应。结论 CD34在发育中的骨骼肌卫星细胞中有一定量的分布，它可能在骨骼肌的生理发育中起某种调节作用。     

巢蛋白在体外培养的大鼠骨骼肌卫星细胞发育过程中的表达——免疫细胞化学研究

为了观察巢蛋白 (nestin)在骨骼肌卫星细胞发育过程中的分布状况以进一步探讨 nestin在肌细胞发育中的作用 ,本实验对新生 Wistar大鼠股部骨骼肌传代培养后 ,在不同发育期进行 nestin单克隆抗体的 ABC免疫组织化学反应 ,并以抗 actin,desmin单克隆抗体作同期对照 ;计算阳性肌卫星细胞数量并进行统计学分析。结果发现 :actin,desmin,nestin三组间在同一培养时间点上的阳性肌卫星细胞数量无差异 (P>0 .0 5 ) ,但在时间点之间的比较上 ,4h组较 2 h组的阳性肌卫星细胞数量有所增加 (P<0 .0 5 ) ,其余各时间组的阳性肌卫星细胞数量则显著高于 2 h组、4h组 (P<0 .0 1)。提示 :nestin在体外培养的骨骼肌卫星细胞发育过程中有表达     

干细胞因子在体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞表达和发育的免疫组织化学研究

目的 观察干细胞因子(SCF)在发育中的体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞中的分布，探讨SCF在大鼠骨骼肌卫星细胞中的作用。方法 原代培养骨骼肌卫星细胞，经两次传代后，取培养2、4、8、16、24、48、72h的细胞行SCF单克隆抗体的免疫组织化学染色。结果SCF免疫阳性反应物存在于发育中的骨骼肌卫星细胞中，形成肌管后，细胞核呈强阳性反应。结论 SCF在发育的骨骼肌卫星细胞中有表达，它可能在骨骼肌的生理发育中起某种调节作用。     

大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养和鉴定

目的采用组织块培养技术探索大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养方法。方法以成年SPF级Sprague-Dawley大鼠为研究对象,采用组织块培养法获取大鼠骨骼肌卫星细胞,并与C2C12成肌细胞进行比较,对两种细胞进行形态学研究及采用免疫荧光和免疫组织化学法测定两种细胞α-actin蛋白和Desmin蛋白的表达及分布,从而对骨骼肌卫星细胞进行鉴定。结果通过组织块培养法获取的细胞增殖旺盛,分化良好。免疫细胞荧光和免疫组织化学实验结果显示,α-actin蛋白和Desmin蛋白在两种细胞胞浆中均有分布。结论用组织块培养法获取的骨骼肌卫星细胞具有良好的增殖与分化能力,用此种方法可培养出高纯度的骨骼肌卫星细胞。     

成肌细胞增殖与分化及其调控机制

背景：成肌细胞作为肌源性祖细胞,属于肌卫星细胞,主要的生理功能是调节血糖平衡和机体代谢,且具有自我更新和生成新的肌纤维的能力,对维持运动能力起着重要作用。成肌细胞增殖与分化受到多种调节因子和信号通路的调控,成肌细胞增殖与分化对于骨骼肌运动性损伤的治疗具有重要意义。目的：查阅国内外相关文献,对成肌细胞增殖与分化及其基因调控机制的研究进展进行综述分析。方法：在2021年6月检索中国知网、Pub Med数据库建库至2021年所发表的文献,中文关键词：“成肌细胞、骨骼肌、骨骼肌损伤修复、基因调控、调节因子”;英文关键词：“Myoblast,Skeletal muscle,Skeletal muscle injury repair,Gene regulation,Regulatory factor”;通过对相关资料的整理与分析,综述成肌细胞增殖与分化的调控机制,并分析成肌细胞增殖与分化在骨骼肌损伤修复中的作用。结果与结论：成肌细胞增殖与分化是损伤或疾病后骨骼肌发育和再生的基础,在成肌细胞分化过程中,往往伴随着一系列参与调控细胞周期及其相关信号通路的调控因子表达水平的改变,主要有生肌调节因子(MR...     

骨骼肌卫星细胞对心肌梗死的治疗

细胞移植是目前对于急性心肌梗死治疗的热门话题,骨骼肌卫星细胞移植是最优选的心肌移植干细胞之一。本文阐述骨骼肌卫星细胞的特点,移植治疗心肌梗死的可能机制,体内移植时间,移植方法和标记方法,总结其目前在临床上的应用,指出目前关于其移植存在的问题,并对其应用做出展望。     

骨骼肌减少症与运动训练对肌卫星细胞影响的研究现状及展望

BACKGROUND: The phenomenon of atrophy or reduction of muscle, causing degenerative changes of muscle functions, appears along with age. Sports training, in which muscle satellite cells are of great importance, is beneficial to increase in muscle mass and improvement of muscle function.  OBJECTIVE:To summarize regulatory mechanism of satellite cells in skeletal muscle mass; changes of satellite muscle cells in the degenerative process of muscle mass and strength; declining and reverse effects of sports training intervention; situations and problems of current research and prospective of the future.  METHODS: A computer-based online search was conducted in PubMed database by using the key words of “sarcopenia, skeletal muscle, satellite cells” from 1986 to 2015. The language was limited to English. The eligible papers were further analyzed and reviewed. RESULTS AND CONCLUSION: A total of 168 papers were screened. Finally, 39 papers were selected according to the titles and objectives. Skeletal muscle atrophy is shown as II type muscle fiber atrophy, and the II type muscle fiber satellite cell content decreases simultaneously. Exercise is beneficial to increase muscle mass and improve muscle function in older people. Both resistance and endurance trainings can increase the skeletal muscle, especially the II muscle fiber satellite cell content with a further increase in the satellite cell activation and proliferation. The number and activation degree of satellite cells are related to muscle aging, and satellite cells and proliferation factors regulate muscle cell formation. Therefore, future researches should not only focus on the increase of satellite cell bank, but also explore effective ways to promote the activation of satellite cells, such as exercise training, nutrition and drugs. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

原代培养差速贴壁法分离纯化大鼠腰椎间盘髓核细胞

背景：髓核细胞在体外培养过程中存在表型丢失问题,包括Ⅱ型胶原、aggrecan、Sox-9等表达的下降,由类软骨细胞向类纤维样细胞转化。 目的：体外原代培养差速贴壁法分离纯化大鼠腰椎间盘髓核细胞。 方法：经胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶先后消化Wistar大鼠椎间盘髓核组织,第1,2代细胞传代时采用差速贴壁法分离纯化髓核细胞。 结果与结论：分离纯化后的第3代髓核细胞呈圆形或多角形,活力强,苏木精-伊红染色细胞核染成均一蓝黑色,胞浆呈现淡粉色;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性细胞比例为97%;aggrecan免疫组织化学染色阳性细胞比例为95%;扫描电镜可见细胞内有高尔基体、粗面内质网和游离核糖体,未见线粒体,可见少量板层小体;CCK-8生长曲线显示细胞经过2 d的生长潜伏期,3 d的指数生长期,进入生长停滞期。说明原代培养、两次差速贴壁法分离纯化的大鼠髓核细胞代谢旺盛、表型一致。     

碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA体外定向培养骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化***

背景：采用中药作为诱导剂对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞定向诱导分化是否会有效果呢？ 目的：验证碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入中药丹参酮ⅡA体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的效应。 方法：采用Percoll分离液密度梯度离心法获取骨髓间充质干细胞,取第3代细胞利用碱性成纤维细胞生长因子联合丹参酮ⅡA诱导其向神经元样细胞分化,全反式维甲酸无血清培养基诱导液及不进行诱导的细胞做为对照。 结果与结论：①骨髓间充质干细胞能稳定表达间质细胞特异性的标记物CD44,表达阳性率为(91.00±1.58)%,但不表达CD34、CD45,流式细胞学检测其纯度高达95.5%。②诱导分化后经扫描电镜检测可观察到典型的神经元样细胞结构;免疫组织化学检测细胞表达神经元特导性烯醇化酶,神经元特导性烯醇化酶阳性率为(75.60±2.31)%,Nestin呈一过性表达增加后随着诱导时间延长逐渐减低至阴性,不表达神经胶质纤维酸性蛋白。说明经碱性成纤维细胞生长因子预诱导后加入丹参酮ⅡA能高效地定向诱导神经元样细胞的分化。     

不同诱导剂对大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用

目的 观察体外不同诱导方法对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的作用.方法 体外培养、扩增骨髓MSCs,分别采用化学诱导剂(2-巯基乙醇 二甲基亚砜)和生物诱导剂,诱导骨髓MSCs分化为神经细胞.用神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学方法对诱导后的细胞进行鉴定和诱导率分析.应用组织学方法显示尼氏体.结果 倒置显微镜下可见,MSCs经两种方法诱导48h后,细胞均向神经细胞分化,胞体呈锥形、多角形,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支.免疫组织化学鉴定显示,诱导后的细胞能特异性表达NSE、NF,不表达GFAP.化学诱导剂组NSE阳性细胞率为86.9%,NF阳性细胞率为85.6%;生物诱导剂组NSE阳性细胞率为88.2%,NF阳性细胞率为86.8%,两组间无显著差异(P＞0.05).硫堇-伊红染色显示胞体内有大量的尼氏体.结论 体外两种诱导方法均可诱导大鼠骨髓MSCs分化为神经细胞.     

GDNF和HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞Bcl-2表达的影响

为了进一步探索治疗神经系统损伤的新途径 ,本研究用传代培养的骨骼肌卫星细胞加入胶质细胞源性神经营养因子(GDNF )和单纯疱疹病毒介导的 GDNF(HSV-GDNF) ,取培养 2、4、8、16、2 4、48、72 h的细胞进行 Bcl-2单克隆抗体的免疫组织化学反应 ,观察了 GDNF和 HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞 Bcl-2表达的影响。结果发现 :GDNF、HSV-GDNF组的肌卫星细胞 Bcl-2表达较对照组明显增强 ,细胞存活数量高于对照组 ,但 GDNF组、HSV-GDNF组两组之间无显著性差异。提示 :GDNF、HSV-GDNF可促进骨骼肌卫星细胞的增殖、分化 ,并对其发育有保护作用     

定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞

目的建立体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为成骨细胞的模型,为将MSC3用作骨组织工程的种子细胞奠定基础。方法用成骨添加剂（地塞米松10^-8mol/L、β-甘油磷酸钠10mmol／L、维生素C50mg/L）定向诱导传代大鼠骨髓MSCs分化为成骨细胞,通过形态学、生长曲线、免疫细胞化学及碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞。结果诱导组具有成骨细胞的形态和生长特点,增殖相对缓慢,但与对照组间的差异没有统计学意义（P〉0．05）,碱性磷酸酶活性增强。结论建立了体外定向诱导大鼠骨髓MSCs向成骨细胞转化的模型,成骨添加剂不影响细胞的增殖,可迅速大量获得种子细胞。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞

目的 采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin),α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定.在诱导后7d、21 d和28 d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性肌凝蛋白重链αMHC的表达.结果 MSCs体外经5-aza诱导后分化的细胞desmin、α-sarcomericactin、C-TnT均表达阳性,5 μmol/L组阳性表达较高,透射电镜下可见到平行排列的肌丝.RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7 d弱表达,21 d表达增强,28 d表达减弱.αMHC在诱导后7 d不表达,21 d弱表达,28 d表达明显.结论 骨髓间充质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞一种良好的供体来源.     

大鼠冠状动脉平滑肌细胞电活动的实验研究

应用先进技术细胞内微电极的方法研究了大鼠冠状动脉平滑肌细胞的静息膜电位 (Em)及其对血管活性物质KCl、ACh、NE的反应性。结果表明 ,大鼠冠状动脉平滑肌细胞静息膜电位稳定 ,其均值为 -54.38± 2 .36mv ,KCl和ACh均可引起膜电位去极化 ,且呈剂量依赖式特点 ;NE对膜电位无明显影响。结论　同一动物的不同血管或不同动物的同一血管反应性存有明显的异质性。     

大鼠胚心房肌细胞分化发育的超微结构研究

本文在电子显微镜下,观察11～19天大鼠胚和新生大鼠心房肌的分化及发育,着重观察了心房特殊颗粒在鼠胚心房肌的发生和分布。胚11天时,未见心房肌细胞含特殊颗粒。12天时,少数心房肌出现特殊颗粒。随胚胎发育,这种颗粒在细胞内数量增加,体积变大。细胞分裂时,特殊颗粒不消失。第12天以后的鼠胚,在电镜下可区分含特殊颗粒和不含特殊颗粒的两种心房肌细胞,前者有较发达的高尔基复合体和粗面内质网。随胚胎发育,两种细胞的肌原纤维和线粒体均增多,渐趋成熟。     

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及在成年胶质瘤大鼠脑内的迁移

本文初步探讨了骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs治疗大鼠胶质瘤的可行性。体外实验以C6细胞条件培养基作BMSCs诱导剂,诱导7d后,表达微管相关蛋白2(MAP2)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性细胞分别为2.08%和9.37%。体内实验中,将BMSCs经Hoechst33342标记后,移植到胶质瘤模型大鼠正常侧大脑纹状体内。14d后,移植的BMSCs多沿着注射途径分布,胼胝体和血管壁可见少量迁移的细胞。21d后,移植的BMSCs广泛分布于胼胝体、大脑皮层和血管。免疫组化染色结果显示:移植的BMSCs分别表达MAP2和GFAP,分化相对比例分别为33.93%和18.02%。以上结果表明BMSCs可以分化为神经元样细胞,并在脑内向胶质瘤部位迁移,有望成为基因治疗胶质瘤的载体。     

大鼠肝血窦内皮细胞的分离培养及其免疫细胞化学研究

应用胶原酶经门静脉插管灌注，Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心及体外培养等方法，从大鼠肝分离出高纯度的肝血窦内皮细胞，纯度达９０％以上。电镜观察细胞表面有大量圆形窗孔，胞质内有丰富的穿内皮通道。肝血窦内皮细胞可与抗体包被的羊红细胞粘着形成花环，表明细胞表面保存良好的ＦＣ受体。     

胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养与定向分化为胆碱能神经元的研究

为了研究胚胎大鼠脊髓源神经干细胞(ESCSCs)的培养和体外分化为胆碱能神经元的情况,本文从孕龄13d的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞,采用含表皮生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清限定性培养基培养,并通过添加维甲酸(RA)、音猬因子(SHH)和神经营养因子-3(NT-3)等诱导因子,进行干细胞体外诱导,用免疫荧光细胞化学方法观测其向胆碱能神经元分化的情况。结果表明:从胚胎脊髓中可分离得到大量的神经干细胞,通过含EGF和bFGF的限定性培养基培养可获得干细胞球,通过添加RA、SHH和NT-3等诱导因子后,可见有胆碱能神经元生成。本研究结果提示,胚胎大鼠脊髓神经干细胞在添加EGF与bFGF的限定性培养基中可以增殖并长期保持稳定的ESCSCs性状,在添加特殊因子的条件下,并在体外ESCSCs可以被定向诱导分化为胆碱能神经元。