昆明地区HBV DNA基因型的分布特征

目的 研究云南省昆明地区乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型特征.方法 采用荧光定量PCR及基因型特异性引物PCR方法 ,对云南省昆明地区360例HBV感染血清进行HBV DNA定量及基因分型检测,以ELISA法检测血清乙肝标志物.结果 360例 HBV感染血清中有346例(96.11%)可以直接分型,其中196例(56.65%)为C型,91例(26.30%)为B型,37例(10.69%)为C/B混合型,21例(6.07%)为D型,A型仅1例(0.29%);比较显示,C型基因分布率显著高于其他基因型(P<0.01);C基因及C、B混合基因型患者HBV-DNA定量显著高于B基因及其他基因型患者(P<0.01或P<0.05);另除B型基因在"大三阳"模式中比例显著较低(P<0.05),HBV基因型在其他各血清模式组间的分布差异无统计学意义(P>0.05);14例标本未能直接分型(3.89%),其HBV-DNA定量平均水平为4.136×103IU/mL显著低于其他检样(P<0.05).结论 昆明地区HBV基因型的分布较为丰富,存在C型、B型、C/B混合型及D型和A型,其中以C型和B型为本区域的主要HBV基因型;当C/B混合型和C型的HBV感染时,往往伴随HBV较高水平复制,且HBV感染B基因型与HBeAg的检出呈负相关;本区域内D基因型分布率介于内地低海拔区域和拉萨高原地带之间.这些可能是本区域内HBV基因型分布的流行病学特征.未能直接分型检样的HBV-DNA定量均较低,可能说明HBV基因分型应该在一定的HBV-DNA定量水平基础上进行.     

昆明地区HBV DNA基因型的分布特征

目的研究云南省昆明地区乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型特征。方法采用荧光定量PCR及基因型特异性引物PCR方法,对云南省昆明地区360例HBV感染血清进行HBV DNA定量及基因分型检测,以ELISA法检测血清乙肝标志物。结果 360例HBV感染血清中有346例(96.11%)可以直接分型,其中196例(56.65%)为C型,91例(26.30%)为B型,37例(10.69%)为C/B混合型,21例(6.07%)为D型,A型仅1例(0.29%);比较显示,C型基因分布率显著高于其他基因型(P0.01);C基因及C、B混合基因型患者HBV-DNA定量显著高于B基因及其他基因型患者(P0.01或P0.05);另除B型基因在"大三阳"模式中比例显著较低(P0.05),HBV基因型在其他各血清模式组间的分布差异无统计学意义(P0.05);14例标本未能直接分型(3.89%),其HBV-DNA定量平均水平为4.136×10~3 IU/mL显著低于其他检样(P0.05)。结论昆明地区HBV基因型的分布较为丰富,存在C型、B型、C/B混合型及D型和A型,其中以C型和B型为本区域的主要HBV基因型;当C/B混合型和C型的HBV感染时,往往伴随HBV较高水平复制,且HBV感染B基因型与HBeAg的检出呈负相关;本区域内D基因型分布率介于内地低海拔区域和拉萨高原地带之间。这些可能是本区域内HBV基因型分布的流行病学特征。未能直接分型检样的HBV-DNA定量均较低,可能说明HBV基因分型应该在一定的HBV-DNA定量水平基础上进行。     

昆明地区HBV DNA基因型的分布特征

目的 研究云南省昆明地区乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型特征.方法 采用荧光定量PCR及基因型特异性引物PCR方法 ,对云南省昆明地区360例HBV感染血清进行HBV DNA定量及基因分型检测,以ELISA法检测血清乙肝标志物.结果 360例 HBV感染血清中有346例(96.11%)可以直接分型,其中196例(56.65%)为C型,91例(26.30%)为B型,37例(10.69%)为C/B混合型,21例(6.07%)为D型,A型仅1例(0.29%);比较显示,C型基因分布率显著高于其他基因型(P<0.01);C基因及C、B混合基因型患者HBV-DNA定量显著高于B基因及其他基因型患者(P<0.01或P<0.05);另除B型基因在"大三阳"模式中比例显著较低(P<0.05),HBV基因型在其他各血清模式组间的分布差异无统计学意义(P>0.05);14例标本未能直接分型(3.89%),其HBV-DNA定量平均水平为4.136×103IU/mL显著低于其他检样(P<0.05).结论 昆明地区HBV基因型的分布较为丰富,存在C型、B型、C/B混合型及D型和A型,其中以C型和B型为本区域的主要HBV基因型;当C/B混合型和C型的HBV感染时,往往伴随HBV较高水平复制,且HBV感染B基因型与HBeAg的检出呈负相关;本区域内D基因型分布率介于内地低海拔区域和拉萨高原地带之间.这些可能是本区域内HBV基因型分布的流行病学特征.未能直接分型检样的HBV-DNA定量均较低,可能说明HBV基因分型应该在一定的HBV-DNA定量水平基础上进行.     

江苏地区乙型肝炎患者HBV基因分型与血清HBV DNA水平研究

目的了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平、患者年龄之间的关系。方法采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测。结果176例血清中,C型117人(66.5%),B、C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%)。C型与B、C混合型在HBV DNA水平上存在显著差异(t=2.413,P<0.05),B、C混合型的HBV DNA水平明显高于C型。C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无显著性。HBV DNA各基因型在患者年龄水平上没有明显差异(P>0.05)。结论江苏地区HBV基因型以C型为主、B、C混合型次之,B型较少,D型、A型极少;B、C混合型患者的HBV DNA数量水平显著高于C型。     

江苏地区乙型肝炎患者HBV基因分型与血清HBV DNA水平研究

目的 了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平、患者年龄之间的关系.方法 采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测.结果 176例血清中,C型117人(66.5%),B、C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%).C型与B、C混合型在HBV DNA水平上存在显著差异(t=2.413,P＜0.05),B、C混合型的HBV DNA水平明显高于C型.C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无显著性.HBV DNA各基因型在患者年龄水平上没有明显差异(P＞0.05).结论 江苏地区HBV基因型以C型为主、B、C混合型次之,B型较少,D型、A型极少;B、C混合型患者的HBV DNA数量水平显著高于C型.     

中国5个地区无偿献血者HBV基因分型及群体遗传学分析

目的 调查中国5个地区无偿献血者人群中HBV基因型分布及群体遗传学特征。方法 收集广西血液中心、重庆血液中心、乌鲁木齐血液中心、绵阳市中心血站和洛阳市中心血站2014～2016年的HBsAg中和试验阳性的献血者血浆标本共630份,用半巢式PCR的方法扩增HBV病毒基因组S区序列,Sanger测序后对HBV分子的基因型分型和群体遗传进行分析。结果 5个地区无偿献血者中成功扩增出HBV S基因片段55例,HBV分型发现3种基因型,分别为B型46例(83.64%),C型7例(12.73%)和D型2例(3.63%)。广西分布有15例B型,3例C型;重庆分布有10例B型,1例C型;洛阳分布3例B型,1例C型,1例D型;绵阳分布15例B型;乌鲁木齐分布3例B型,2例C型和1例D型。对群体数量最大的HBVB型群体的错配分布呈现单峰分布,Tajima′s D与Fu′s Fs中性检验结果都为负值,说明这5个地区的HBV群体在扩张。结论 在无偿献血者中HBV流行的基因型为B型,且B型HBV群体正在经历一个缓慢的扩张,应该引起我们的重视,将来应针对HBV进行彻底的分子流行病调查,以保障血液安全。     

建立PCR熔解曲线法检测HBV基因型

摘要：目的：建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法临床应用的可靠性。 方法：依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法。用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果进行比较。 结果：186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例（71.5％）,C型37例（19.9％）,B/C混合型16例（占8.6％）。选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100％,C型符合率100％,B/C混合型符合率81.25％,总符合率94.1％（Kappa=0.909,P＜0.05）。 结论：建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测。     

承德地区HBV基因型分布及临床意义的研究

目的研究承德地区HBV基因型分布及其与临床的相关性。方法收集本地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清标本145例,采用FQ-PCR技术进行HBV DNA定量检测及HBV基因分型,并分析基因型与临床的相关性。结果所有阳性标本中B基因型12例(8.28%),C基因型107例(73.79%),BC混合型9例(6.21%),D基因型1例(0.7%),无法分型16例(11.03%)。同时发现基因型BC组在HBeAg阳性率,病毒载量及肝功能指标上均显著高于C组和B组(P<0.05),而C型又高于B型。结论 HBV基因型存在地区差异,承德地区以C型为主,并且C型对肝脏损害较B型严重;而BC混合型对肝脏的损害更为严重。     

多对型特异性引物巢式PCR检测乙型肝炎病毒基因型分析

目的采用多对型特异性引物通过巢式PCR法检测HBeAg阳性患者血清中乙肝病毒(HBV)基因型的分布情况。方法根据从前S1基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物,并将其中8条内引物分成A、B两组分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV,然后将第2轮PCR的两组产物分别用3%琼脂糖进行电泳,根据PCR产物片段大小直接判定HBV基因型。用该法检测15例慢性乙肝患者血清中HBV基因型,了解HBV基因型分布情况。结果 HBV基因分型结果为B型7例(46.7%)、C型4例(26.7%)、B+C型2例(13.3%),另有2例未能分型。结论人群HBV优势基因型以B型为主,C型次之。     

桂西地区慢性乙型肝炎基因分型及其临床特点

目的 探讨桂西地区慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因分型情况及其临床特点.方法 采用基因芯片反向斑点杂交技术、实时荧光定量PCR、时间分辨免疫荧光法和酶法分别对105例CHB患者的HBV基因型、HBV DNA含量以及HBV血清学指标进行检测.结果 桂西地区CHB患者HBV基因分型为B型53例(50.48%),C型27例(25.71%),D型1例(0.95%),B+C混合型17例(16.19%),B+D混合型2例(1.90%),未分型5例(4.76%).CHB组中B型所占百分比明显高于C型(P<0.05),尤其是轻度和中度组(P<0.01),而在CHB重度组和肝硬化组中C型所占百分比明显高于B型(P<0.05).C型和B+C混合型HBV DNA载量和HBeAg含量明显高于其他型(P<0.05);酶类指标则是B型丙氨酸氨基转移酶含量较高,C型天门冬氨酸氨基转移酶和γ-谷氨酰转移酶含量较高.结论 桂西地区CHB患者HBV 基因型以B型为主,C型次之,D型极少;C型及B+C混合型较易发展为重度CHB和肝硬化,基因分型与疾病的严重程度有一定关系,根据基因分型与临床特点可对CHB选择合适的治疗方案.     

乙肝病毒基因变异和基因型(亚型)与肝细胞癌的关系

目的 初步探讨乙肝病毒基因变异、基因型及亚型与HCC发病的相关性。 方法 特异探针杂交法检测乙肝病毒C启动子变异，分别用特异探针杂交和特异引物PCR两种方法鉴定病毒基因型，限制性酶切片段长度多态性法鉴定部分HCC乙肝病毒的基因亚型。用SPSS10.0进行统计分析其中相关性。 结果 HCC组与NHCC组HBV-DNA载量无显著差异，两组HBV中A1762T/G1764A变异株分别占77.8%和44.4%。B和C型为HBV主要基因型，基因型B和C在HCC患者中分别为3例（11.11%）和24例（88.89%），在NHCC患者中分别为29例（42.65％）和21（50.85％），HCC组24例基因型C的HBV中21例为C2亚型。 结论 乙肝病毒C启动子A1762T/G1764A双变异、基因型C与HCC的发生密切相关，HCC患者HBV基因亚型主要为C2亚型。     

Hepatitis B virus genotypes in Korea: an endemic area of hepatitis B virus infection

OBJECTIVES: It has been reported that distribution of hepatitis B virus (HBV) genotypes shows geographic difference and are associated with clinical outcomes of HBV infection, including response to antiviral therapy and progression of chronic liver diseases. In this study, we analyzed the distribution of HBV genotypes according to the various clinical outcomes of chronic HBV infection in Korea, which is one of the most endemic areas of HBV infection. METHODS: A total of 200 patients with chronic HBV infection were enrolled. Clinical diagnoses of the 200 patients with chronic liver diseases were as follows: hepatitis B e antigen (HBeAg)-positive healthy carrier (defined as HBeAg(+), anti-HBe(-), HBV DNA(+) by hybridization, normal transaminase; n = 40); inactive HBsAg carrier (n = 40); chronic hepatitis B (n = 40); liver cirrhosis (n = 40); hepatocellular carcinoma (n = 40). HBV genotypes were determined by nested polymerase chain reaction using genotype-specific primers. RESULTS: All patients except 2 (inactive HBsAg carriers) were positive for nested PCR and they have genotype C regardless of clinical outcomes. CONCLUSIONS: HBV genotype was genotype C regardless of various clinical outcomes of chronic HBV infection in Korea. Considering that HBV genotypes have clinical relevance, distribution of HBV genotype in each area should be monitored when management for chronic HBV infection is planned.     

江苏省南通地区乙型肝炎病毒基因分型与临床相关性

目的了解江苏省南通地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布状况及其临床相关性。方法选择南通地区HBV-DNA阳性的乙型肝炎病毒感染者300例,其中乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)28例,慢性乙型肝炎(CHB)189例,重型肝炎(CSH)26例,肝硬化(LC)30例,肝细胞癌(HCC)27例,采用多对型特异性引物巢式PCR法检测HBV基因型。结果300份血清标本中B型89例(29.7%),C型196例(65.3%),BC混合型15例(5.0%);C基因型在LC组、HCC组中的比例显著高于ASC组和CHB组(P<0.05)。结论南通地区HBV基因型可能以B、C型为主,C型为优势基因型并与肝硬化、肝癌的发生相关。     

型特异性引物巢式PCR快速检测HBV基因型及其临床意义

目的　应用型特异性引物巢式PCR检测HBV基因型并初步了解山东地区HBV基因型的分布状况。方法　随机选择山东地区HBVDNA阳性患者共 178例 ,其中无症状携带者 (ASC) 5 3例 ,慢性活动性肝炎 (CH) (包括轻、中、重度 ) 87例 ,肝硬化(LC) 38例 ,先通过外引物进行第一轮PCR ,然后 ,将 6对型特异性引物分到两个反应体系 (MixA和MixB)中分别对第一轮扩增产物进行第二轮PCR ,根据阳性结果判断出样本的基因型。结果　C基因型 85例 (47.8% ) ,B基因型 6 3例 (35 .4 % ) ,B C混合基因型 30例 (16 .8% )。C基因型在活动性肝病 (CH及LC)中占优势 ,而ASC组则是以B基因型为主 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。C基因组中HBeAg阳性率、HBVDNA定量及ALT水平均较B基因组为高 (P <0 .0 0 1或P <0 .0 0 5 ) ,而抗HBe阳性率则在B基因型组显著升高 (P <0 .0 0 5 )。结论　山东地区存在C、B及B C混合基因型 ,并以C基因型为主。型特异性引物巢式PCR敏感性高 ,特异性强 ,可以快捷准确地检测HBV基因型。     

建立依赖型特异性核苷酸的乙型肝炎病毒基因分型方法

目的：建立乙型肝炎病毒（HBV）基因型的新分型方法。方法：对HBV全基因序列和S基因片段序列，分别建立系统进化树作基因分型；同时，利用S基因片段序列中基因型特异性核苷酸，建立一种较为简单的基因分型方法。结果：S基因区进化树与全基因进化树在基因族的分布上基本相似。在S基因区，基因型A在核苷酸（nt)451位有型特异核苷酸T；基因型B在nt321位有A，nt324位有T，nt345位有G,nt408位有G；基因型C在nt293位有A,nt294位有C,nt491位有A；基因型D在nt290位有A；基因型E在nt619位有A；基因型F在nt287位有C，nt288位有T，nt294位有G，nt337位有T；基因型G在nt290位有G,nt306位有T，nt347位有T，nt481位有G。对18例基因型B和基因型C分子进行树进行分析，所得的基因型结果与S基因型特异核苷酸方法相同。结论：我们建立的一种依赖基因型特异性核苷酸的HBV基因分型方法，经分子进化树分析证明方法可靠。     

反义核酸抑制PCR荧光检测乙型肝炎病毒S基因145位密码子变异株及其临床应用

目的 建立一种反义核酸抑制PCR荧光检测方法,对临床标本乙型肝炎病毒(HBV)S基因G145R/A变异株进行检测.方法 依据HBV S基因587和588位核苷酸变异设计PCR DNA扩增引物,并增加一条反义野生型引物.使其遇到野生型(不含G145R/A基因变异)核苷酸序列时不能扩增,PCR扩增被抑制,而遇到突变型核苷酸序列时能扩增,并以荧光显示G145R/A突变.结果 使用突变型DNA引物进行PCR DNA扩增,对质粒DNA和HBV临床标本进行检测,检出G145R/A突变标本12份,对此12份标本采用ELISA法检测HBsAg和HBsAb,结果均为阳性.结论 该方法简便、准确,可用于临床筛查G145R/A变异株检测.     

Genotype analysis,using PCR with type-specific primers,of hepatitis B virus isolates from patients coinfected with hepatitis delta virus genotype II from Miyako Island,Japan

OBJECTIVES: The aims of this study were to determine the hepatitis B virus (HBV) genotypes in hepatitis delta virus (HDV) RNA-positive patients and to characterize the HBV nucleotide sequences that may be found on a distant island of Japan. METHODS: This study included three patients with chronic hepatitis who were positive for hepatitis B surface antigen (enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA), HDV antibody (ELISA) and HDV RNA by polymerase chain reaction (PCR). The HBV genotype was determined by nested PCR using type-specific primers. The first-round PCR products from two patients were sequenced, followed by an investigation of nucleotide homology. RESULTS: Viruses from all three patients in this study were classified as HBV genotype B. Comparison with HBV isolates from geographically neighboring regions revealed that the two HBV isolates had 97.9-98.6% identity at the nucleotide level to a Chinese isolate, 98.3-98.6% identity to the Okinawa isolate and 98.6-98.8% identity to a Japanese isolate of genotype B. On phylogenetic analysis, the HBV isolates from the two patients were classified as HBV genotype B. The HBV isolates of cases 1 and 3 clustered in the same group as isolates from the Chinese mainland and Japanese mainland, which are geographically near Miyako Island. CONCLUSION: The HBV isolates coinfected with HDV found on Miyako Island were of genotype B. The PCR method based on genotype-specific primers was useful in determining HBV genotypes.     

温州地区乙型肝炎病毒基因型分布调查及意义

目的调查乙型肝炎病毒(HBV)感染者的HBV基因型分布,探讨HBV基因型与临床的相关性。方法用SP-nPCR法检测469例HBV感染者的HBV基因型,用荧光定量PCR法检测HBVDNA载量,用ELISA法检测HBV血清学标志物。结果469份标本分出基因型430例,HBV基因型分布为:A型2.6%(11/430),B型34.9%(150/430),C型49.8%(214/430),B/C型12.8%(55/430),未检出D、E、F基因型;无症状携带者(ASC)和慢性乙肝患者(CH)以C、B基因型为主,肝硬化(LC)和肝癌(HCC)以C基因型占绝对优势。基因型分布与性别无关。30岁以下人群感染以B基因型为主,30岁以上则以C基因型为优势。结论SP-nPCR法适用于慢性HBV感染者(病人和携带者)的基因分型和流行病学调查。HBV感染以C、B基因型为主,存在B/C混合基因型和A基因型。C基因型感染与肝硬化和肝细胞癌相关。     

应用型特异性引物巢式PCR分析温州地区乙型肝炎病毒基因型及其临床意义

目的了解温州地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布及其与临床的相关性。方法选取温州地区HBVDNA阳性的慢性HBV感染者202例,其中慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者52例,慢性乙型肝炎103例,肝硬化27例,肝细胞癌20例,应用型特异性引物巢式PCR检测HBV的基因型。结果202例HBVDNA阳性血清标本中,B型37例（18．3％）,C型123例（60．9％）,B／C混合型41例（20．3％）,D型1例（0．5％）,未发现A、E、F和G型;与B基因型、B／C混合型相比,C基因型在慢性乙型肝炎和肝细胞癌中明显升高,分别为56．1％和14．6％（P〈0．05）;C基因型感染者血清丙氨酸氨基转移酶水平（226±268）U／L高于B基因型的（114±183）U／L和B／C混合型的（130±222）U／L,差异有统计学意义（P〈0．05）;C基因型感染者HBeAg阳性率和HBVDNA含量明显高于B基因型和BC混合型感染者相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论温州地区存在HBV的B、C、D和B／C混合基因型,C型为本地区的优势基因型．并且C型HBV感染易引起较重肝脏损伤。