波动性高糖对内皮细胞粘附分子表达及NO分泌的影响

目的探讨波动性高血糖在糖尿病慢性血管并发症中的致病机制。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,分别测定波动性高浓度葡萄糖（5或20mmolPL）与恒定性高浓度葡萄糖（20mmolPL）环境下内皮细胞表达VCAM-1、ICAM-1的含量,同时观察培养液中NO含量的不同。结果波动性高糖组VCAM-1、ICAM-1均明显高于恒定高糖组（分别为P〈0.01;P〈0.01）,而波动性高糖组的NO则明显低于恒定性高糖组（P〈0.01）.结论波动性高血糖较恒定性高血糖对血管内皮细胞可能具有更强的损伤效应。     

高血糖水平对中度至极重度烧伤患者内皮细胞功能的影响

目的：探讨高血糖水平对中度至极重度烧伤患者内皮细胞功能的影响及其可能机制。方法选取中度至极重度烧伤患者20例,分离人静脉血管内皮细胞,分为对照组和培养基含有不同高浓度葡萄糖的实验组,其中实验A组葡萄糖10 mmol／L,实验B组葡萄糖15 mmol／L、实验C组葡萄糖20 mmol／L,检验内皮细胞活力、内皮细胞凋亡、内皮细胞迁移能力、细胞培养上清液丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）水平。结果各实验组较对照组内皮细胞活力下降、内皮细胞凋亡率升高、内皮细胞迁移能力下降,MDA水平升高、SOD水平降低;实验B组较实验A组内皮细胞活力略下降、内皮细胞凋亡率升高、内皮细胞迁移能力下降,MDA水平升高、SOD水平降低,实验C组较实验B组内皮细胞活力明显下降、内皮细胞凋亡率升高、内皮细胞迁移能力下降,MDA水平升高、SOD水平降低。结论高血糖水平限制了内皮细胞的增殖和生长,随血糖浓度升高内皮细胞的爬行迁移能力明显减弱,且细胞凋亡速度加快,使血管通透性增加。     

高糖减弱肾组织干细胞条件培养液对缺氧损伤肾小管上皮细胞的修复作用

目的： 评估高糖对肾组织干细胞（kidney stem cells,KSC）条件培养液修复缺氧损伤肾小管上皮细胞（renal tubular epithelium cells,RTEC）作用的影响。方法： 分离肾乳头处的KSC,分别用正常糖浓度（简称“正糖”,5.6 mmol/L）和高糖（30 mmol/L）培养基对KSC进行预处理后制备KSC条件培养液。建立大鼠RTEC缺氧/复氧模型,比较高糖与正糖刺激后KSC条件培养液对缺氧/复氧RTEC修复作用的差异。结果： （1）缺氧4 h/复氧2 h为RTEC缺氧/复氧模型的最佳时间。（2）缺氧后,RTEC早期凋亡率和晚期凋亡率均升高,采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组RTEC的凋亡率均明显降低（P<0.01）。正糖组和高糖组比较,干预24 h后,正糖组RTEC的总体凋亡率显著低于高糖组（P=0.02）。（3）缺氧后,RTEC上清液的乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平明显升高（P<0.01）,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平明显降低（P<0.01）。采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组的LDH和MDA水平均显著降低（P<0.01）,SOD水平均显著升高（P<0.01）。正糖组和高糖组比较,高糖组的LDH和MDA水平要显著高于正糖组（P<0.05）,SOD水平要显著低于正糖组（P<0.01）。结论： KSC条件培养液对缺氧损伤的RTEC有修复作用,这种作用主要是通过减少氧化应激、抑制细胞凋亡来实现的,而经高糖预处理的KSC条件培养液的抗氧化应激、抗凋亡作用减弱。     

长链非编码RNA-Paupar在局麻药致神经毒性过程中的作用研究

目的 观察长链非编码RNA-Paupar（lnc-Paupar）在布比卡因诱导的神经毒性过程中的调控作用。方法 分离培养小鼠脊髓背根神经节细胞并构建布比卡因神经毒性细胞模型,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）观察lnc-Paupar表达,构建lnc-Paupar特异的siRNA-P及随机对照组siRNA-C,200 nmol/L的siRNA-P、siRNA-c转染神经节细胞成功后,通过TUNEL法观察两组细胞凋亡率,Western blot观察JNK及磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达。结果 lnc-Paupar在布比卡因诱导的神经毒性过程表达增高（ P＜0.05）,与siRNA-C组相比,siRNA-P组细胞凋亡率降低( P＜0.05）。同时,siRNA-P组抑制细胞JNK及p-JNK蛋白表达（ P＜0.05）。结论 Lnc-Paupar通过JNK通路产生致神经毒性作用。     

波动性高糖对大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的：对比研究波动性与稳定性高糖对肾小球系膜细胞（GMC）氧化应激的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株，分正常糖对照组（5．5mmol／L，NG）、稳定高糖组（25mmol／L。HG）、波动性高糖组（5．5mmol／L或25mmol／L，每24h交替，IHG），培养GMC6d，分别以二氢二氯荧光素（DCFH—DA）标记细胞，通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄（DCF）的荧光强度而测得细胞内ROS水平，比色法检测细胞上清液中的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果：与NG组相比，HG组与IHG组细胞内DCF平均荧光强度均显著升高（均P〈0．01），总SOD活力均下降（均P〈0．01），GSH含量均下降（P〈0．05，P〈0．01），MDA均升高（P〈0．05，P〈0．01）。与HG组相比，IHG组细胞内DCF平均荧光强度显著升高（P〈0．01），总SOD活力下降（P〈0．01），GSH含量下降（P〈0．01），MDA升高（P〈0．05）。结论：波动性高糖较稳定性高糖可能对GMC有更强的氧化损伤效应。     

金丝桃苷对高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响及其机制研究

目的 探索金丝桃苷在高糖诱导的心肌细胞氧化应激损伤中的作用及其分子机制。 方法 高糖处理模拟心肌细胞氧化应激损伤。细胞分为5个组:正常对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）,高糖损伤模型组（35 mmol/L葡萄糖）,低、中、高浓度金丝桃苷保护组（35 mmol/L葡萄糖+4/8/20 nmol/L金丝桃苷）。各组细胞培养48 h后,CCK-8检测细胞存活力;流式细胞术分析细胞凋亡;通过流式细胞仪利用活性氧（ROS）检测试剂盒DCFH-DA分析ROS水平;超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）试剂盒检测SOD和MDA水平;Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化（p）-AKT、核因子E2相关因子2（Nrf2）、p-Nrf2的表达;免疫荧光染色分析AKT的活化情况。 结果 与正常对照组比较,高糖损伤模型组细胞存活率降低,细胞凋亡率增高,ROS、MDA水平升高,SOD水平降低,PI3K相对表达量及AKT、Nrf2磷酸化水平（p-AKT/AKT和p-Nrf2/Nrf2的比值）降低,AKT阳性细胞数比率降低,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。与高糖损伤模型组相比,金丝桃苷保护组（4、8、20 nmol/L）细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,ROS、MDA水平降低,SOD水平升高,PI3K相对表达量及AKT、Nrf2磷酸化水平升高,AKT阳性细胞数比率升高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 金丝桃苷可通过激活PI3K/AKT/Nrf2信号通路保护心肌细胞免受高糖诱导的氧化应激损伤。     

α-硫辛酸对大鼠皮肤成纤维细胞高糖损伤的保护机制

目的:探讨α-硫辛酸(ALA)抑制高糖刺激大鼠皮肤成纤维细胞损伤的作用机制。方法:以不同浓度ALA干预高糖作用下的大鼠皮肤成纤维细胞,分别采用MTT比色法观察细胞活力,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,Caspase-3活性检测以及Western blotting法检测细胞磷酸化JNK(p-JNK),磷酸化p38(p-p38)蛋白量的表达。结果:ALA能够显著改善高糖刺激对大鼠成纤维细胞细胞活力的影响(P<0.05),降低细胞内MDA含量及ROS水平并提高SOD活力,且能明显降低Caspase-3的活性以及p-JNK、p-p38蛋白量的表达(P<0.05)。结论:在体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞模型中,ALA能够通过降低氧化应激水平,抑制JNK,p38通路的激活并降低Caspase-3活性来改善高糖诱导的氧化应激损伤。     

二氢杨梅素激活磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 探讨二氢杨梅素对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及其与磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的关系.方法 体外培养原代人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(5.56 mmoL/L葡萄糖)、高糖处理组(33.36 mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、AMPK激动剂5-氨基咪唑4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-Aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-D-ribofuranoside,AICAR)(10 nmol/L)+高糖处理组、二氢杨梅素(1μmol/L)+高糖处理组、AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L) +AICAR+高糖处理组和AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L)+二氢杨梅素+高糖处理组.处理36 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)和p-ACC蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖处理组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),p-AMPK、p-ACC水平显著降低(P＜0.05);二氢杨梅素或AICAR预处理均明显抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力下降、细胞凋亡增加和p-AMPK、p-ACC水平降低(P＜0.05);Compound C预处理明显抑制AICAR和二氢杨梅素对高糖诱导HUVECs细胞凋亡的保护作用(P＜0.05).结论 二氢杨梅素通过促进AMPK活化抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡.     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

胰高血糖素样肽-1可改善高糖环境下人脐静脉内皮细胞的氧化应激

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（GLP-1）对高糖培养的原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化应激情况的影响。方法体外分离、培养原代人 HUVECs ,分为对照组、高糖组（30 mmol/L ）及 GLP-1预处理组（GLP-1100 nmol/L预处理1 h后30 mmol/L高糖培养）。检测细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量,进行细胞毒性作用定量分析;化学发光法检测细胞内活性氧族（ROS ）水平、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD ）活力了解细胞内氧化应激状态。结果（1）GLP-1可以改善高糖环境对人脐静脉内皮细胞的毒性作用,高糖组LDH漏出量为对照组的1．8倍,GLP-1预处理组的LDH漏出量为对照组的1．3倍（P＜0．05）。（2）高糖组细胞内ROS荧光强度较对照组增强1倍以上,而GLP-1预处理组ROS荧光强度可抑制至对照组水平（P＜0．05）;与对照组比较,高糖组细胞内SOD酶活性无明显改变;但与高糖组比较,GLP-1预处理组SOD酶活性升高了64．64％（P＜0．05）。结论 GLP-1可以改善高糖对 HUVECs的细胞毒性作用,其机制可能是通过减轻细胞氧化应激来实现的。     

急性血糖波动对肝细胞凋亡的影响及可能的机制研究

目的探讨急性血糖波动对肝细胞凋亡的影响及可能的机制。方法选择30只健康雄性Wistar大鼠,将其随机分为3组：对照组、血糖波动组及持续性高血糖组,各10只。以间断和持续静脉滴注50％葡萄糖注射液48h的方法,建立急性血糖波动和持续性高血糖雄性Wistar大鼠动物模型。滴注48h后,采用比色法检测大鼠血清丙二醛（MDA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用Tunnel方法检测肝细胞凋亡的情况;采用免疫组化方法检测肝细胞内核因子-KB（NF—KB）、Jun氨基末端激酶-1（JNK1）表达。结果血糖波动组大鼠MDA水平、SOD活性及MDA／SOD与对照组、持续性高血糖组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;血糖波动组大鼠肝细胞凋亡率显著高于对照组及持续性高血糖组,差异亦有统计学意义（P〈0．05）。血糖波动组大鼠肝细胞内NF—KB、JNK1表达水平及JNK1／NF—KB值亦显著高于对照组及持续性高血糖组（P〈0．05）。结论血糖波动能诱导氧化应激增强,进而使JNK1、NF—KB细胞信号转导途径激活,这可能是导致肝细胞凋亡的主要原因。     

Effects of adiponectin on oxidative stress and apoptosis in human cardiac myocytes cultured with high glucose

Background  Diabetic cardiomyopathy is the major cause of morbidity and mortality in diabetic patients. Oxidative stress plays an important role in diabetic cardiomyopathy. This study aimed to investigate the effects of adiponectin on oxidative stress and apoptosis in human cardiac myocytes (HCM) cultured with high glucose. 

Methods  The cells were assigned to three group: control group, high glucose group and high glucose plus adiponectin group. After culture for 24, 48, 72 hours, oxidative stress was evaluated by detecting levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in the supernatant of culture media. The expression of p66Shc and Heme oxygenase-1 (HO-1) was detected by real-time polymerase chain reaction (PCR). Flow cytometry was designed to observe and detect cellular apoptosis.

Results  Our findings showed significant increase in MDA levels and decrease in SOD activity in the high glucose group compared with the control group (P <0.05). However, MDA levels were significantly decreased and SOD activity was significantly increased in the adiponectin group compared with those in the high-glucose group (P <0.05). The mRNA expression of HO-1 in the high glucose group was significantly increased in a time-dependent manner compared with that in the control group (P <0.05).  Adiponectin further increased the mRNA expression of HO-1 induced by high glucose in a time-dependent manner (P <0.05).The expression of p66Shc was significantly increased in high glucose group compared with that in the control group (P <0.05). Adiponectin significantly suppressed the upregulation of p66Shc induced by high glucose (P <0.05). The apoptotic rate of cardiomyocytes was significantly increased in the high glucose group compared with that in the control group while the apoptotic rate in the adiponectin group was remarkably declined in comparison with that in the high glucose group．

Conclusion  Adiponectin reduces high glucose-induced oxidative stress and apoptosis and plays a protective role in myocardial cells by upregulating the HO-1 expression and downregulating p66Shc expression.

     

消渴灵片对2型糖尿病大鼠JNK信号通路的影响

[目的] 研究消渴灵片（XKL）对2型糖尿病大鼠JNK信号通路的影响。[方法] 将2型糖尿病模型大鼠,按随机数字表法随机分为正常组、模型组、XKL低、中、高组[分别以2、4、8 g/kg XKL作为低、中、高剂量灌胃）、阳性对照组（以0.8 g/kg盐酸二甲双胍灌胃）,测定各组大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）及胰十二指肠同源盒-1（PDX-1）蛋白相对表达情况及JNK mRNA表达情况。[结果] XKL各剂量组均可有效降低模型大鼠FBG水平;XKL中高剂量组可降低MDA水平,提高FINS水平及SOD活性（P<0.05）;XKL中、高剂量p-JNK蛋白及JNK mRNA表达量显着下降（P<0.05）,PDX-1蛋白表达量显着升高（P<0.05）.[结论] XKL的降糖作用,可能与抑制JNK信号通路的激活有关。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞中NO 合成的影响及作用机制

目的：探索波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞合成血管舒张因子一氧化氮（NO）的影响及其作用机制。方法：以体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为研究对象,分别测定波动性高浓度葡萄糖(5.5 或20 mmol/L) 与持续性高浓度葡萄糖(20 mmol/L)环境下NO浓度,RT-PCR及Western印迹方法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B（PKB/AKT）、内皮型一氧化氮合酶(eNOS）mRNA及蛋白表达水平。结果：波动性高糖组NO均明显低于持续高糖组和正常组（P<0.05）;波动组,持续高血糖组的PI3K,PKB,eNOS mRNA及蛋白表达水平均较正常组下调（P<0.01）,而波动组又低于持续组（P<0.05）。结论：波动性高血糖较持续性高血糖可能对血管内皮细胞具有更强的损伤效应,并可能通过影响信号通路PI3K/PKB/eNOS导致NO合成减少。     

金钗石斛水提物对糖尿病大鼠肾组织非酶糖基化及氧化的影响

目的 观察金钗石斛(Dendrobium nobil Lindl, DNL)水提物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾组织非酶糖基化和氧化应激的影响,探讨DNL对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。方法 采用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导DM大鼠模型,分为正常对照组(N组),糖尿病对照组(DM组),金钗石斛低(DNLL)、中(DNLM)、高(DNLH)剂量组和氨基胍(aminoguanidine, AG)对照组(AG组),给药12周。分别检测血糖、血尿素、肌酐、糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)、尿肌酐、24h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。透射电镜观察肾组织超微结构变化。结果 DM组大鼠血糖、血尿素、24h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织MDA含量显著高于N组(P＜0.05);肌酐清除率、肾组织总SOD活性显著低于N组(P＜0.05);DM组大鼠系膜扩张明显异常,基底膜明显增厚。DNL明显降低DM大鼠血糖、血尿素、24h尿白蛋白、血清及肾组织AGEs、肾组织MDA含量(P＜0.05),明显增加肌酐清除率(P＜0.05)、增强肾组织总SOD活性(P＜0.05)、减轻肾系膜的扩张和基底膜的增厚。结论 DNL能降低血糖、抑制AGEs的形成、抑制氧化应激的发生,从而阻止或延缓糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)的发生发展。     

垂盆草水煎液对4种肝损伤模型小鼠的保肝作用

目的:研究垂盆草水煎液对4种肝损伤模型小鼠的保肝作用。方法:采用乙醇、对乙酰氨基酚、四氯化碳、D-氨基半乳糖复制小鼠肝损伤模型,随机分为正常组、模型组、联苯双酯滴丸组、垂盆草高剂量组(6.67 g·kg~(-1))、垂盆草低剂量组(3.33 g·kg~(-1))。正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水,连续给药数天后,观察不同剂量垂盆草对小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)及肝脏中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)等生化指标的影响。结果:1对乙醇所致肝损伤小鼠模型的影响:垂盆草水煎液高剂量组SOD、MDA与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液各剂量组ALT、AST与联苯双酯滴丸组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液低剂量组SOD、MDA与联苯双酯滴丸组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。2对D-氨基半乳糖所致肝损伤小鼠模型的影响:垂盆草水煎液各剂量组ALT、AST、SOD及MDA与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液各剂量组ALT,垂盆草水煎液低剂量组MDA、AST,垂盆草水煎液高剂量组SOD与联苯双酯滴丸组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。3对四氯化碳所致肝损伤小鼠模型的影响:垂盆草水煎液各剂量组ALT、AST与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液高剂量组SOD、MDA与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液各剂量组ALT、AST与联苯双酯滴丸组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液高剂量组SOD、低剂量组MDA与联苯双酯滴丸组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。4对对乙酰氨基酚所致肝损伤小鼠模型的影响:垂盆草水煎液各剂量组ALT、AST、SOD及MDA与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05);垂盆草水煎液低剂量组ALT、AST、SOD及MDA与联苯双酯滴丸组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:垂盆草对对乙酰氨基酚模型作用趋势强于其他模型组,在对抗活性氧过度产生中的作用强度呈现剂量依赖性,高剂量的垂盆草在清除自由基方面有较好的效果。     

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA) 沉默转录因子叉头框M1(FoxM1) 对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制.方法 采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平.siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI双染法检测细胞凋亡率.Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1) 及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK) 、p-JNK、 c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P＜0. 05),Ki67表达降低(P＜0. 05) .siRNA转染组G1期细胞比例增加(P＜0. 01),S期比例减低(P＜0. 05),Cyclin E1低表达(P＜0. 01) .同时, siRNA +紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+ 紫杉醇组(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P＜0. 05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P＜0. 01) .siRNA + 紫杉醇组与阴性对照+ 紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P＜0. 01),Bcl-2表达下调(P＜0. 01) .结论 特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性.     

脂联素对高糖环境心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

目的通过高糖环境培养人心肌细胞(human cardiac myocytes,HCM)建立心肌细胞氧化应激模型,观察脂联素(ad-iponectin,ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对心肌细胞可能的保护机制。方法将体外培养的人心肌细胞分为3组:对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72h。在倒置显微镜下观察心肌细胞形态变化,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量。用代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,用荧光定量RT-PCR法测定衔接蛋白(adaptinP66Shc)、血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,Ho-1)在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率。结果与对照组相比,高糖组SOD含量显著下降,MDA含量显著上升(P<0.05),与高糖组相比,脂联素组SOD含量显著上升,MDA含量显著下降(P<0.05),并且呈时间依赖性。与对照组相比,高糖组Ho-1 mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达亦增高(P<0.05)。与对照组相比,高糖组P66Shc mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达降低(P<0.05),呈时间依赖性。高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降。结论脂联素可通过减少P66Shc表达、增加Ho-1表达,增加抗氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,可能对糖尿病心肌细胞起保护作用。     

高磷诱导内皮细胞凋亡的代谢组学以及MAPK通路研究

目的研究高磷对血管内皮细胞代谢影响并观察MAPK通路变化情况。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）24 h,分为正常浓度组（1.0 mmol/L）、高磷浓度组（3.0 mmol/L）。通过气相色谱/质谱（gas chromatography/mass spectrometry,GC/MS）方法分析代谢物图谱,并采用正交信号校正和偏最小二乘判别分析方法（OSC-PLS-DA）。根据OSC-PLS-DA模型的变量权重（variable importance for projection,VIP）〉1及显著性差异检验结果筛选出差异性代谢物。同时用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western印记法检测MAPK通路ERK1/2、p-ERK1/2、p38 M APK、p-p38 M APK、JNK、p-JNK蛋白表达。结果鉴别出16个显著差异物质,涉及碳水化合物、氨基酸以及脂质代谢通路紊乱;与1.0 mmol/L Pi组相比,3.0 mmol/L Pi组细胞凋亡率明显升高（P〈0.05）,p-ERK1/2蛋白表达明显升高（P〈0.05）,p-p38 M APK蛋白表达明显下降（P〈0.05）,ERK1/2、p38 M APK、JNK和p-JNK蛋白表达无明显改变。结论高磷诱导内皮细胞凋亡是通过上调p-ERK信号通路及下调p-p38MAPK信号通路的活性来实现的。