转化生长因子-β1及端粒酶对肝癌早期诊断价值的动态观察

目的 探讨肝癌形成过程中转化生长因子（TGF）-β1和端粒酶表达及其早期诊断价值。方法 雄性SD大鼠以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲制备肝癌模型，在肝细胞癌变过程中，观察肝脏总RNA变化，以病理组织学分析肝细胞形态学变化，采用酶联免疫吸附法（ELISA）分析肝细胞TGF-β1，以聚合酶链反应-ELISA分析端粒酶的动态变化。结果病理学证实大鼠在喂饲2-FAA后，正常肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性，中期阶段肝组织中出现不典型增生，后期可见大量癌巢结节，均为高分化肝细胞癌。在正常肝细胞及血清中仅见较低水平的TGF-β1和端粒酶表达。诱癌后，随着肝细胞组织形态的变化，肝组织及血清中TGF-β1和端粒酶表达水平逐渐增强，癌变组和癌前病变组均显著高于正常对照组（P〈0．05），且肝组织中TGF-β1、端粒酶和肝脏总RNA的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论 TGF-β1和端粒酶呈过表达与肝细胞癌变发生发展密切相关，且两者均有助于肝癌的早期诊断。     

核因子-κB基因过度表达与肝细胞恶性转化的关系

目的 探讨核因子-κB（NF-κB） mRNA在肝癌（HCC）形成过程中的表达与动态改变。方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠诱发肝细胞癌变,以病理组织学（HE染色）观察肝细胞形态学的变化,以巢式逆转录聚合酶链反应（Nested-RT-PCR）扩增分析NF-κB mRNA表达,并定量分析肝细胞癌变过程肝组织中NF-κB的动态表达。结果 SD大鼠在喂饲2-FAA后,肝细胞在形态学上出现颗粒样变性、癌前病变到HCC形成多个发展阶段。在HCC形成过程中,肝组织总RNA水平呈动态梯度增加,表现为癌变组〉癌前组〉变性组〉对照组（P〈0.01）;肝组织NF-κB mRNA扩增的阳性率在变性组、癌前组和癌变组均为100%,明显高于正常对照组（P〈0.01）;肝组织中NF-κB呈明显的梯度增加,且与肝细胞的恶性转变呈正相关关系。结论 肝癌形成过程中NF-κB mRNA过度表达,与肝癌发生、发展密切相关。     

血管内皮生长因子在癌旁组织中的表达与肝细胞癌术后预后相关

目的：研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）在肝癌组织及癌旁肝脏组织的表达情况与肝细胞肝癌预后的关系。方法：收集在我所接受肝切除手术并术后病理证实为肝细胞癌的101例患者标本，应用组织芯片和免疫组织化学等方法研究肝癌及癌旁组织VEGF的表达情况，并评价其与临床预后的关系。结果：癌旁组织VEGF的表达明显高于癌组织，癌旁组织VEGF的高表达是患者死亡（P=0．027，风险比（HR）2．356，95％可信区间（CI）1．101～5．040）和复发（P=0．023，HR：2．091，95％CI：1．106～3．950）的独立危险因素。结论：VEGF在癌旁组织中的高表达与肝细胞癌术后肿瘤复发和低生存期显著相关，提示研究癌旁组织的血管生成微环境在肝癌复发转移研究方面的重要性。     

肝癌发生过程中核因子-κB和Bcl-2动态表达及意义

目的：探讨肝癌形成过程中核因子-κB（NF—KB）及Bcl-2的动态表达与临床意义。方法：以2乙酰氨基芴（2-FAA）喂雄性SD大鼠制备肝癌模型,病理分析肝细胞的形态学变化,在癌变不同时期,分别以免疫组织化学法观察NF-κB和Bcl-2变化,并定量观察核蛋白、NF—κB和Bcl-2动态表达。结果：病理检查示鼠在喂2-FAA后,正常肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性,中期肝组织出现不典型增生,后期有大量癌巢结节．均为高分化肝细胞癌。在正常肝细胞中仅见较低水平的NF-κB和Bcl-2表达。诱癌后．随着肝细胞形态的变化．肝组织中NFKB和Bcl-2表达依次增强,均显著高于正常肝组织（P〈0．01）,且两者的表达高度相关（r=0．73．P％0．01）。结论：癌变过程中NF—κB信号转导途径激活和Bcl-2呈过表达状态与肝癌的发生、发展密切相关。     

Ezrin、Moesin在肝细胞癌中表达的研究

目的探讨肝细胞癌中Ezrin和Moesin的表达及其与肝细胞癌分化程度、恶性程度及侵袭的关系。方法以Edmondson分级法对肝癌组织分级,采用免疫组化法检测23例肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中Ezrin、Moesin的表达。结果①Ezrin、Moesin在肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中均有表达;②Ezrin在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织和正常肝组织（P〈0.01）,肝癌组织中高侵袭组表达显著高于低侵袭组（P〈0.05）,并与Edmondson分级显著相关（P〈0.01）;③Moesin在肝癌组织中的表达显著高于正常肝组织（P〈0.01）,肝癌组织中高侵袭组与低侵袭组的表达差异不显著,而与Edmondson分级显著相关（P〈0.01）。结论Ezrin在肝细胞癌侵袭和转移过程中可能发挥重要作用。     

肝细胞性肝癌膜联蛋白A2异常表达的临床病理学特征及意义

目的 分析膜联蛋白A2（ANXA2）在肝细胞性肝癌（HCC）患者中表达的临床病理学特征及对HCC的诊断价值.方法 以自身配对法收集术后肝癌的癌灶、癌旁组织和远癌组织,以Western blot法检测组织中ANXA2的表达,以定量PCR分析ANXA2 mRNA转录水平,以免疫组化法分析ANXA2在细胞中定位;分组收集肝癌、良性肝病患者和健康人群外周血,以ELISA法定量外周血中ANXA2表达水平.结果 无论是ANXA2还是ANXA2 mRNA,HCC癌灶组织中ANXA2表达显著高于癌旁和远癌组织（P〈0.001）;ANXA2在HCC癌灶组织中定位于胞质和胞膜,癌旁组织中定位于胞质,而远癌组织中未见明显表达;HCC患者血ANXA2表达水平,显著高于良性肝病或健康人群（P〈0.01）,但与转移性肝癌组间未见明显差异.临床病理学特征：血ANXA2表达与HBV感染（t=6.820,P〈0.001）、伴肝外转移（t=3.191,P=0.002）、门静脉癌栓（t=2.859,P=0.005）、中低程度分化（P〈0.001）和TNM分期相关（t=5.594,P〈0.001）,但与患者性别、年龄、肿瘤大小和AFP水平间未见明显相关;血ANXA2与AFP联合检测,可提高肝癌诊断阳性率（96.52%）.结论 ANXA2过表达有助于肝癌的诊断与鉴别.     

VEGF、Bag - 1 及 Bcl - 2 在肝癌中的表达及意义简

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和凋亡抑制基因Bag-1、Bcl-2在肝癌细胞、正常肝细胞中的表达。进而探讨其与肝癌的关系。方法利用免疫组织化学染色法检测60例癌组织、14例正常肝组织中VEGF、Bag-1及Bcl-2的水平,并进行统计学分析。结果VEGF、Bag-1及Bcl-2在肝癌组织中的表达显著高于正常肝组织中的表达（P〈0．05）;VEGF、Bag-1及Bcl-2的表达呈高度-致性（P〈O．05）。结论VEGF、Bag-1及Bcl-2与肝癌的生物学行为密切相关。     

血管生成素-2,VEGF和bFGF在人肝细胞肝癌中表达及意义

【目的】研究血管生成素-2（Ang-2）在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达．并探讨其与HCC组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）和微血管密度（MVD）的关系。【方法】采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法,对38倒HCC的癌组织及癌旁非肿瘤组织,7例正常肝组织中的Ang-2、VEGF、bFGF和MVD的表达进行检测,同时研究了肝癌组织中Ang-2的表达与临床病理关系。【结果】Ang-2在正常肝组织无表达．癌旁组织呈弱表达（39．47％）。在大部分癌组织呈强表达（60．53％）。Ang-2表达与VEGF、bFGF和MVD表达有明显相关性（r分别为0．857、0．706和0.820,P〈0．01）。Ang-2表达与HCC的血管侵犯、肿瘤的转移及肿瘤的分级有关（P〈0．05）。【结论】Ang-2、VEGF和bFGF在HCC血管形成和进展中具有协同作用。Ang-2、VEGF、bFGF及MVD可作为HCC生物学行为恶化的一项评估指标。     

基质金属蛋白酶在肝细胞癌中表达的实验研究

目的　探讨基质金属蛋白酶 - 2 (MMP- 2 )、基质金属蛋白酶 - 9(MMP- 9)在肝细胞癌的表达及其与侵袭转移过程中的关系 ,进一步了解肝细胞癌侵袭转移的发生机理。方法　通过免疫组化 SABC法 ,检测 32只大鼠的肝细胞癌模型标本肝癌及癌旁肝组织 MMP- 2、MMP- 9的表达 ,应用图像分析法进行定量分析 MMP- 2、MMP- 9的变化。门静脉癌栓形成作为肝细胞癌侵袭转移标志。结果　免疫组化显示 :癌及其癌旁肝组织均有 MMP- 2、MMP- 9表达 ,MMP - 2、MMP- 9在肝癌组织的表达显著高于癌旁肝组织 (P<0 .0 1) ;MMP- 2、MMP- 9在有侵袭转移肝癌组织的表达显著高于无侵袭转移肝癌组织 (P<0 .0 1)。 MMP- 2、MMP- 9在无侵袭转移肝癌、癌旁肝组织及有侵袭转移癌旁肝组织的表达无显著差异 (P>0 .0 5 )。结论　肝细胞癌在有侵袭转移情况下 MMP- 2、MMP- 9在癌组织表达明显增高。预示可通过检测癌组织 MMP- 2、MMP- 9表达水平帮助判断肝癌复发、转移风险。因此 ,提示其极有可能成为防治肝细胞癌的生物学标志物     

VEGF及其受体KDR在肝细胞癌中的表达

目的:研究VEGF及其受体KDR蛋白在人肝细胞癌组织中表达及其意义。方法:应用免疫组化方法检测42 例人肝细胞癌及其癌周组织与10例正常肝组织标本的VEGF及KDR。结果:VEGF及KDR在肝癌组织表达明显高于癌周及正常肝组织,与门静脉内癌栓、包膜浸润密切相关(分别为P<0.05, P<0.01)。VEGF及KDR阳性表达在生存时间2 年及2 年以上组分别为23.5%(4/17)、35%(7/20),在生存时间短于2年分别为42.1%(8/19)、56.3%(9/16)(P<0.05)。结论:肝细胞癌组织中VEGF及其受体KDR的表达与浸润转移密切相关,其阳性表达有助于判断预后。     

原发性肝细胞癌组织芯片的制备及其在原发性肝细胞癌分子病理研究中的应用

目的:制备原发性肝细胞癌组织芯片,并利用该组织芯片在分子病理水平探讨原发性肝细胞癌(hep-atocellularcarcinoma,HCC)的发生发展与乙型肝炎病毒感染、细胞周期G1期调节基因Rb的功能状态,以及库普弗细胞的分布规律之间的关系。方法:选取40例HCC肿瘤组织及其相应癌旁、远癌肝组织块制备共含120个标本的组织芯片,应用免疫组织化学技术(SP法)检测在HCC肿瘤、癌旁、远癌肝组织中,HBsAg、HBcAg和Rb蛋白的表达情况以及库普弗细胞的分布情况。结果:HCC肿瘤组织中的HBsAg、HBcAg的表达率明显低于癌旁及远癌肝组织(P<0·01);Rb蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为42·5%,显著高于癌旁和远癌正常肝组织(P<0·05),但与HCC肿瘤的大小和组织学分级均无统计学相关性(P>0·05);肝癌组织中的Kupffer细胞数明显少于癌旁及远癌肝组织(P<0·05)。随着肿瘤体积的增加和肿瘤组织分化程度的降低,肿瘤组织中Kupffer细胞数量减少(P<0·05)。结论:HCC的发生、发展可能与HBV感染、Rb蛋白表达缺失和库普弗细胞数量的减少均有着密切联系;组织芯片是一种有效的肿瘤分子病理研究技术平台,具有检测质控的高度均一性和检测操作的高通量性。     

CyclinDl在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌患者预后的关系

目的探讨CyclinDl在肝细胞癌中的表达及与肝细胞癌患者预后的关系。方法取133例肝细胞癌患者的癌组织（HCCs）及癌旁组织（PTLTs）病理切片,用免疫组化染色技术分析CyclinDl的表达,统计分析CyclinDl表达强度与肝细胞癌患者临床病理因素之间的关系,并以Kaplan－Meier生存曲线及Log－rank法检测不同CyclinDl表达组的生存差异。最后以单因素及多因素Cox回归模型分析影响肝细胞癌患者预后的独立危险因素。结果免疫组化染色结果发现51例肝癌患者的癌组织中CyclinDl表达阳性,表达率为38．3％（51／133）,而在癌旁组织中仅有4例CyclinDl表达阳性,表达率为3％（4／133）,肝癌组织中Cy－clinDl表达率显著高于癌旁组织（P=0．01）。Mann-WhitneyU检验发现肝癌组织中CyclinDl的高表达与AFP水平（P=0．006）之间呈正相关,且有统计学意义。而CyclinDl表达与性别（P=0．394）、年龄（P=0．232）、肿瘤大小（P=0．842）、肿瘤数目（P=0．479）、包膜（P=0．085）、脉管侵犯（P=0．331）、淋巴结转移（P=0．168）和Edmondson-Steiner病理分级（P=0．521）不相关;Kaplan-Meier生存曲线发现CyclinDl表达强度与患者生存相关,即表达强者预后差（P=0．001）;单因素及多因素Cox回归分析发现肿瘤数目、脉管侵犯、CyclinDl表达是影响HCC患者预后的独立危险因素（P值分别为0．003,0．010和0．017）。结论CyelinDl在肝细胞癌中表达升高,其表达与肝细胞癌患者预后呈负相关,并且是肝细胞肝癌预后的独立危险因素。     

趋化因子受体4、血管内皮生长因子在肝细胞肝癌的表达及临床意义

目的 探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)和血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测CXCR4和VEGF在肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理学特征的关系.结果 在肝癌组织CXCR4和VEGF的表达均显著高于癌旁及正常肝组织(56.5%,25.0%vs 0,76.7%,40.0%vs 0,P<0.05或<0.01);CXCR4和VEGF在肝癌转移的肿瘤组织中的表达高于无转移的肿瘤组织(85.7%vs 47.8%,100%vs 69.6%,均P<0.05);肝癌组织中CXCR4与VEGF的表达呈显著正相关(r=0.901,P<0.001).结论 CXCR4与VEGF可能在HCC的浸润转移中发挥着重要的协同作用.     

细胞角蛋白19的表达对原发性肝癌术后的预后价值

目的：探讨细胞角蛋白19（K19）表达对原发性肝癌肝切除术的预后价值。方法对152例肝细胞肝癌（HCC）行手术切除肝组织的患者进行研究,采用免疫组化法评估其肝癌组织中CK19的表达。≥5％的肿瘤细胞中度以上的膜和（或）胞质的表达定义为CK19阳性。结果 CK19阴性的患者术后1年和5年总生存率分别为90．7％和80．4％;CK19阳性组术后1年和5年总生存率分别为66．7％和32．2％,差异具有统计学意义。结论对于原发性肝癌患者,肝癌组织中CK19的表达增加往往表现为手术预后较差。     

原发性肝细胞癌组织VEGF—C和CD44v6表达及意义

目的探讨血管内皮细胞生长因子-C（VEGF-C）和CD44v6在原发性肝细胞癌（简称肝癌）中的表达及其与肝癌部分生物学行为的关系。方法采用常规SP免疫组织化学染色法检测33例原发性肝癌组织中VEGF-C和CD44v6的表达,并以21例肝硬化组织、16例肝外伤或肝囊肿组织作为对照,分析其表达水平与肝癌部分生物学行为的关系。结果VEGF-C定位于肝癌细胞的胞质,阳性表达率为78．8％,CD44v6主要定位于肝癌细胞的胞膜及胞质,阳性表达率为72．7％。二者在肝癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁组织（χ^2=12．157、10．280,P〈0．05）;在发生转移的肝癌组织中的阳性表达率明显高于无转移的肝癌组织（χ^2=4．930、8．088,P〈0．05）;在正常肝脏组织及肝硬化组织中几乎不表达。VEGF-C和CD44v6的表达与肝癌组织学分级、肿瘤大小、是否并发肝硬化、AFP表达、有无HBV感染无关。VEGF-C和CD44v6在肝癌组织中的阳性表达呈正相关（r=0．681,P〈0．01）。结论VEGF-C和CD44v6的表达与肿瘤侵袭转移的发生有关,可作为估计预后的指标。     

HIF-1α和VEGF在骨肉瘤组织中的表达及其与血管生成的关系

目的 观察HIF-1α和VEGF在骨肉瘤组织中的表达,并分析两者相关性,同时探讨其在骨肉瘤血管形成中所起的作用.方法 应用免疫组织化学SP法,检测35例骨肉瘤、14例骨软骨瘤中HIF-1α和VEGF的表达情况,同时用CD34标记血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).结果 35例骨肉瘤组织中,HIF-1α蛋白的阳性表达率为34.3％(12/35),与对照组相比差别有非常统计学意义(P＜0.01);VEGF的阳性表达率为82.9％(29/35),亦显著高于对照组(P＜0.01); HIF-1α和VEGF的表达同时呈阳性,13例(37.1％)同时呈阴性,两者表达显著相关(r=0.589,P=0.000),且与癌组织分期显著相关(P＜0.05);HIF-1α和VEGF均阳性的骨肉瘤组织中MVD值高于两者均为阴性者,两者相比较差异有非常统计学意义(P＜0.01).结论 HIF-1α和VEGF在骨肉瘤组织中均为高表达,提示它们可能对骨肉瘤新生血管生成中具有协同作用,在骨肉瘤的发生、发展起到重要作用.     

肝癌发生相关细胞因子及脂质结合唾液酸检测与诊断价值的临床评价

目的探讨外周血血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、游离胰岛素样生长因子-Ⅱ（FIGF-Ⅱ）和脂质结合唾液酸（LSA）浓度分析对肝癌诊断与鉴别的临床价值。方法以不同的定量方法,分别检测了肝癌、慢性肝炎和肝硬化患者外周血VEGF、TNF-α、FIGF-Ⅱ和LSA浓度,综合比较评价了多项指标对肝癌诊断与鉴别的临床意义。结果肝癌组患者外周血VEGF、FIGF-Ⅱ、LSA和TNF-α水平显著高于慢性肝炎组和肝硬化组（P〈0．05,P〈0．01）,其阳性率分别为87．8％、75．6％、67．8％和86．7％。然而,未见良性肝病组间存在明显差异。综合评价多指标对肝癌诊断的敏感性、特异性和准确度,VEGF较好,分别为87．8％、87．2％和87．5％;TNF-α次之,分别为86．7％、65．4％和76．8％。结论肝癌发生相关细胞因子浓度分析有助于肝癌诊断及预后观察。     

CD88在肝细胞肝癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨CD88在肝细胞肝癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、免疫组织化学和Western blot检测56例肝癌及癌旁组织标本中CD88的表达,比较CD88表达在癌和癌旁组织中的差别,并分析其与临床病理特征的关系。结果：qRT-PCR检测结果显示肝癌组织中CD88mRNA的表达明显高于癌旁组织（0.056±0.014比0.003±0.0004,P〈0.001）;癌组织中CD88mRNA表达在肿瘤直径大于5cm、有肉眼癌栓和TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的肝癌患者中明显上调,分别为0.1119±0.0339比0.0256±0.0094、0.0907±0.0271比0.0245±0.009、0.0876±0.02630比0.0253±0.0096（P〈0.05）;免疫组织化学检测结果显示肝癌CD88阳性率明显高于癌旁组织（55.3%比37.5%,P〈0.05）;Western blot检测结果显示肝癌组织中CD88表达高于癌旁组织（3.71±0.92比0.91±0.34,P〈0.01）。结论：CD88高表达与肿瘤的恶性表型密切相关,它可能在肝癌侵袭和转移过程中发挥重要作用。