溶血磷脂酸对子宫内膜癌RL-952细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂分泌的影响

目的探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对子宫内膜癌RL-952细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂（urokinase-type plasminogen activator,uPA）分泌的影响。方法不同浓度的LPA刺激子宫内膜癌RL-952细胞24h,80μmol/LLPA刺激子宫内膜癌RL-952细胞不同时间后收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附试验检测uPA的分泌情况,Transwell试验检测LPA对子宫内膜癌RL-952细胞体外迁移/侵袭能力的影响。结果 2、10μmol/L的LPA即可诱导子宫内膜癌RL-952细胞uPA的分泌增加,且随着LPA浓度的加大,uPA分泌量明显增多,二者呈明显的浓度依赖关系;80μmol/L的LPA作用于RL-952细胞时,随着时间的延长uPA分泌量增多,二者呈明显的时间依赖关系。并且LPA可以明显增加子宫内膜癌RL-952细胞的体外迁移/侵袭能力。结论 LPA可成为子宫内膜癌早期诊断及预后监测的分子标志物,并有望成为子宫内膜癌分子靶向治疗的靶标。     

Matriptase与子宫内膜癌细胞株侵袭迁移能力的相关性研究

目的:探讨Matriptase与子宫内膜癌细胞侵袭转移能力的相关性。方法:采用荧光定量PCR和Western blot法检测HEC-1A、HEC-1B和RL952细胞中Matriptase、HAI-1 mRNA和蛋白表达水平;构建Matriptase基因SiRNA慢病毒载体,采用RNA干扰技术,对Matriptase高表达的HEC-1A和RL952细胞进行瞬时转染,从而达到抑制Matriptase基因表达水平的目的。应用细胞划痕实验及穿膜小室实验观察干扰前后癌细胞体外侵袭及迁移能力的改变。结果:荧光定量PCR检测结果显示,Matriptase和HAI-1 mRNA在HEC-1A细胞(0.2123±0.021和0.2827±0.049)和RL-952细胞(0.1778±0.013和0.2420±0.032)中为均阳性表达;在HEC-1B细胞中为阴性表达(0.000695±0.00012和0.00263±0.00043)。Western blot结果显示,Matriptase和HAI-1在HEC-1A细胞和RL-952细胞中为阳性表达,在HEC-1B细胞中为阴性表达。转染siRNA后,HEC-1A细胞和RL-952细胞的Matriptase mRNA和蛋白表达水平显著下降,抑制率达80%以上,HAI-1表达水平未见明显改变,Matriptase/HAI-1比值明显降低(HEC-1A:0.75 vs 0.11,P0.01;RL-952:0.0.73 vs 0.12,P0.01)。细胞划痕实验和穿膜小室实验显示,癌细胞体外侵袭及迁移能力显著下降。结论:Matriptase表达水平与子宫内膜癌细胞侵袭迁移能力呈正相关,Matriptase/HAI-1比值降低亦可能抑制癌细胞的侵袭迁移。     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P<0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

双酚A激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖的研究

目的:研究双酚A(bisphenol A,BPA)活化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)促子宫内膜癌细胞Ishikawa和RL952增殖的机制。方法:CCK8试剂盒检测Ishikawa和RL952细胞的增殖情况,蛋白质印迹(Western blotting)法检测p-AKT蛋白的表达。结果:在Ishikawa和RL952细胞中,BPA作用48 h时,细胞增殖呈浓度依赖性,1μmol/L的BPA促细胞生长效应最显著,Ishikawa和RL952细胞增殖率分别为0.758±0.023和0.692±0.042。BPA浓度超过1μmol/L后,促细胞增殖的作用下降。BPA作用24 h时促增殖效应不明显,BPA作用72 h时表现出细胞毒作用。1μmol/L BPA处理的Ishikawa和RL952细胞48 h后p-AKT蛋白的表达较对照组升高(P0.05),加入PI3K抑制剂(LY294002),p-AKT的蛋白表达比对照组降低,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:BPA通过激活PI3K/AKT通路促进子宫内膜癌细胞增殖。     

莪术油对人子宫内膜癌细胞株RL-95-2抑制作用的体外研究

目的研究莪术油注射液在体外对人子宫内膜癌细胞株RL-95-2细胞周期进程的干扰及其可能的机制。方法通过MTT法实验观察莪术油在体外对RL-95-2的抑制作用;流式细胞仪分析其细胞周期的改变;免疫细胞化学法观察部分细胞周期素的表达。结果莪术油注射液对RL-95-2的抑制作用呈时间-剂量依赖性,中效浓度(72h)为222.36μg/ml,1/2此剂量的莪术油作用于Rl-95-2细胞株24小时、48小时、72小时均可引起G0/G1期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少,统计学表明这种改变差异有非常显著性(P<0.01)。免疫细胞化学法显示Cy-clinD1、CyclinE、P16表达增加,CyclinA、突变型P53表达减低。结论莪术油注射液在体外可抑制人子宫内膜癌细胞株RL-95-2增殖,可能系通过促进P16表达增加,而改变细胞周期进程,同时抑制突变型P53表达从而抑制细胞生长的。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞株HEC-1B ERRα表达调控的研究

目的:探讨ERRα与雌、孕激素的相互作用及其在ERα阴性子宫内膜癌发病中的作用。方法:用MTT、实时定量PCR方法,检测不同浓度雌二醇(E2)、孕酮(P)作用于HEC-1B细胞后细胞增殖和ERRα mRNA的变化。结果:E2促进细胞增殖,E2(10-6～10-8mol/L)组OD值与对照组相比在48h时有统计学差异(P0.05);E2明显上调ERRα表达,且10-7mol/L时上调最明显,Pearson相关分析ERRα mRNA表达含量与相应细胞生长变化显示:24、48h呈正相关(P0.05),表明雌激素通过上调ERRα表达而诱导细胞增殖。P抑制细胞增殖,并具有浓度和时间依赖性,P(10-4～10-6mol/L)组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);P明显下调ERRα表达,且10-4mol/L时下调最明显,Pearson相关分析ERRαmRNA表达含量与相应浓度细胞生长变化在24h呈正相关(P0.05),表明孕激素通过下调ERRα表达而抑制细胞增殖。结论:ERRα在ERα阴性子宫内膜癌的发生中发挥一定作用。     

VPA、SAHA和DAC对子宫内膜癌细胞系抑制作用的研究

目的:观察丙戊酸(VPA)、软木酰苯胺氧肟酸(SAHA)和5-氮-2-脱氧胞苷(DAC)对子宫内膜癌细胞RL-952和HEC-1-B的增殖抑制作用,及对细胞周期、凋亡情况和上皮型钙黏素(E-cad)基因表达的影响.方法:以VPA、SAHA和DAC作用于子宫内膜癌细胞,应用噻唑蓝(MTr)比色法、流式细胞仪和透射电镜对细胞增殖、周期和凋亡情况进行观察.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察药物作用后细胞内E-cad mRNA表达的情况.结果:VPA、SAHA和DAC作用HEC-1-B和RL-952细胞,随着药物浓度的增加,增殖抑制率明显增加(6.77％～93.25％和3.24％～89.25％,5.61％ ～97.36％和2.56％～87.85％,8.25％～92.54％和5.56％～93.47％)(P＜0.01);同一浓度药物随着作用时间的延长(24～96小时)对HEC-1-B和RL-952细胞增殖抑制率明显增加(42.41％～82.74％和36.17％ ～71.05％,43.15％～82.09％和40.38％～85.93％,43.26％～91.44％和37.75％ ～ 85.37％)(P＜0.01).HEC-1-B和RL-952细胞G0/G1期所占比例,经VPA、SAHA、DAC作用24小时后均较对照组增高,差异有高度统计学意义(P＜0.01).应用VPA、SAHA和DAC后细胞凋亡发生率均较对照组增高,差异有高度统计学意义(P＜0.01),出现特征性凋亡形态特征.VPA、SAHA和DAC作用后,RL-952和HEC-1-B细胞E-cad mRNA表达上调,较对照组均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:VPA、SAHA和DAC可有效抑制子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B细胞增殖,有明显的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,对E-cad基因具有明显上调作用.     

双氢青蒿素对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/CDDP的体外作用

目的:观察双氢青蒿素对SKOV3/CDDP细胞的体外作用,分析双氢青蒿素抗肿瘤和逆转耐药的效果.方法:采用MTT法观察顺铂、双氢青蒿素以及顺铂联合双氢青蒿素对SKOV3及SKOV3/CDDP细胞的体外影响.结果:①顺铂对SKOV3/CDDP细胞的IC50为34.12 mg/L,是对SKOV3细胞的(IC50为7.52mg/L)4.54倍.②不同浓度的双氢青蒿素对两种细胞的抑制作用随浓度的增加而增强,呈明显的剂量依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).双氢青蒿素对SKOV3细胞的IC50为27.45 μmol/L,对SKOV3/CDDP细胞的IC50为29.22 μmol/L.③不同浓度的双氢青蒿素联合顺铂作用于SKOV3细胞,顺铂Ic50由单用时的7.52 mg/L,下降到联用时的5.30 mg/L和2.16 mg/L.对SKOV3/CDDP细胞,顺铂Ic50由单用时的34.12 mg/L,下降为到联用时的15.25 mg/L和4.83 mg/L.结论:双氢青蒿素对人卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP具有体外抑制作用,对顺铂具有化疗增敏的作用,并能逆转SKOV3/CDDP对顺铂的耐药.     

顺铂增强TRAIL蛋白诱导Caski细胞凋亡机理研究

目的:观察顺铂对TRAIL蛋白诱导子宫颈癌Caski细胞株凋亡的调节作用,并探讨其作用机理。方法:传代培养宫颈癌Caski细胞,依照所加药物不同,将细胞分为TRAIL组、顺铂组、TRAIL+顺铂组、TRAIL序贯顺铂组、顺铂序贯TRAIL组以及空白对照组,分别于加药后不同时间应用:(1)倒置显微镜观察细胞的生长状态;(2)MTT法检测TRAIL蛋白与顺铂单用、联用以及序贯应用对Caski细胞的生长抑制率;(3)Caspase-8活性检测试剂盒检测不同用药方式对Caski细胞Caspase-8活力的影响;(4)流式细胞术检测Caski细胞TRAIL受体DR4,DR5,DcR1,DcR2的表达,以及1.0mg/L顺铂作用细胞24h后表达量的变化;(5)半定量RT-PCR分析顺铂作用细胞8h后4种受体mRNA水平的变化。结果:(1)TRAIL蛋白和顺铂对Caski细胞有不同程度的生长抑制作用;(2)100ng/mlTRAIL蛋白和1.0mg/L顺铂单用作用24h细胞生长抑制率分别为35.44%、50.26%,联合应用后增至89.66%,联合用药与单独用药差异有统计学意义(P<0.05);(3)顺铂序贯TRAIL蛋白生长抑制率79.88%,TRAIL蛋白序贯顺铂55.73%,两实验组的差异有统计学意义(P<0.01);(4)Caspase-8活力在顺铂序贯TRAIL组的表达最强,为单用TRAIL组的1.52倍;(5)Caski细胞4种TRAIL受体均有表达,但表达丰度不同,顺铂可以上调死亡受体的表达;(6)顺铂处理细胞8h后DR4,DR5mRNA表达水平明显升高,DR4为对照组的1.40倍,DR5为对照组的1.57倍,差异有统计学意义(P<0.05);(7)用顺铂处理前后DcR1,DcR2表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Caski为TRAIL蛋白敏感细胞,顺铂通过上调死亡受体4、5表达、提高Caspase-8活性,增强TRAIL蛋白抑制子宫颈癌Caski细胞生长的作用;顺铂序贯TRAIL的配伍方式具有更强的诱导Caski细胞凋亡的作用。     

自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用

目的：研究自噬在顺铂致宫颈癌Hela细胞死亡中的作用,以及自噬基因Beclin 1对Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法：不同浓度顺铂作用Hela细胞后,丹磺酰戊二胺（MDC）法观察细胞中自噬体的形成,蛋白质印迹法（Western blot）检测自噬基因Beclin 1和LC3蛋白的表达;将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1（＋）-Beclin1转染Hela细胞,Western blot检测Beclin 1在Hela细胞中的蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测顺铂对Hela半数抑制浓度（IC50）的变化,流式细胞仪检测自噬细胞与凋亡细胞的百分率.结果：顺铂作用Hela细胞后,细胞内自噬体形成增加,自噬蛋白Beclin 1和LC3表达增加,且均呈现浓度依赖性（P＜0.05）;pcDNA3.1（＋）-Beclin 1转染Hela细胞后,Beclin 1蛋白表达增加（P＜0.05）,MTT检测IC50由转染前的1.0 mg/L下降到0.5 mg/L,凋亡细胞百分率和自噬细胞百分率均升高,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：自噬参与了顺铂对宫颈癌Hela细胞的细胞毒性作用,自噬基因Beclin 1过表达能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性.     

三氧化二砷对卵巢癌细胞的生长及化疗敏感性的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌COC1细胞顺铂(cDDP)化疗敏感性的影响,As2O3与cDDP联合作用的效应以及As2O3对COC1细胞的生长抑制效应及机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度As2O3、cDDP作用72h对卵巢癌细胞生长的抑制作用,As2O3对顺铂化疗敏感性的影响及两药联合作用的效应。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)分别检测PIK3CA mRNA和AKT、ERK、MMP-2蛋白表达的变化。结果:单独应用As2O3或cDDP和联合用药时卵巢癌COC1细胞生长均受到抑制,并呈浓度依赖关系,联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05);0.08~0.15μmol/L As2O3无明显细胞毒性,不能提高COC1细胞对顺铂的敏感性。各浓度(1、3、8、16μmol/L)As2O3作用24h可以下调AKT、MMP-2蛋白水平(P<0.05),并呈浓度依赖效应,但对ERK蛋白的表达无显著影响。0.5、1、2、4μmol/L As2O3作用4h,PIK3CA mRNA表达分别降低45.03%、53.05%、61.67%和72.91%(P<0.05)。结论:As2O3抑制COC1细胞增殖具有浓度依赖性,与顺铂联用有相加效应,可能与As2O3下调PIK3CA mRNA、AKT、MMP-2蛋白水平等有关。     

不同雌激素受体表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性分析

目的 分析并比较不同雌激素受体(ER)表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活 性.方法 采用实时荧光定量RT-PCR技术检测子宫内膜癌细胞系RL-952[Erα、Erβ表达均阳性(+)]、HEC-1A[Erα表达弱阳性(±)、Erβ表达阴性(-)]、HEC-1B[Erα、Erβ表达均(-)]细胞中Erα mRNA的表达.采用345通量转录因子芯片检测RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子的活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测不同转录活性的转录因子NFkKBp65、p38MAPK以验证芯片检测结果.结果 Erα mRNA在RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中表达水平依次递减,分别为(6780±282)、(684±84)、(168±38)copy/ng.转录因子NFkBp65、p38MAPK的转录活性采用ELISA方法检测(分别为2.0±0.4、0.9±0.5,P=0.020)与芯片检测(分别为3003±530、882±538,P:0.017)结果一致.在345个转录因子中,筛选出与ER功能相关的差异表达的转录因子共28个,与ER(+)的RL-952细胞相比,ER(-)的HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子活性同时上调的有13种,同时下调的有15种.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE的活性与Erα mRNA表达水平呈明显线性正相关关系(r=0.523,P=0.037),而转录因子RFX123和Ikaros的活性与Erα mRNA表达水平呈明显非线性负相关关系(r=-0.312,P=0.041).结论转录因子芯片检测是筛选子宫内膜癌致病机制中主要转录因子的先进技术.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE可能与ER(+)子宫内膜癌中的信号传导通路相关;转录因子RFX123和Ikams可能与ER(-)子宫内膜癌中的信号传导通路相关.     

IGFBP-3对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的实验研究

目的:探讨外源性胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)对Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及在抗肿瘤中其能否与顺铂起协同作用,并初步探讨IGFBP-3对垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)表达的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测IGFBP-3、顺铂对Ishikawa细胞的抑制率,计算半数抑制浓度;用流式细胞仪检测两药单用及合用对Ishikawa细胞周期、凋亡的影响;RT-PCR法检测药物干预后PTTG1表达量的变化。结果:(1)IGFBP-3对Ishikawa细胞增殖有明显抑制作用(IC50=1.00±0.12),且与顺铂有协同作用(CI<1);(2)IGFBP-3干预后Ishikawa细胞凋亡是对照的4.5倍(P<0.05);(3)顺铂、IGFBP-3均能下调PTTG1基因的表达,且以顺铂的下调作用明显。结论:在子宫内膜癌的Ishikawa细胞,观察到IGFBP-3具抗增殖、促凋亡的作用;IGFBP-3可能作为一种抗肿瘤剂用于临床。     

吉非替尼对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib)对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其内在作用机制。方法:MTT法检测不同浓度吉非替尼作用后细胞的增殖抑制率。采用流式细胞术检测吉非替尼作用48h后的细胞凋亡率及细胞周期分布,并用倒置显微镜对细胞进行形态学观察。Western blot法检测不同浓度吉非替尼作用细胞48h后细胞内p-Akt、CyclinD1蛋白水平表达的变化。结果:吉非替尼能显著抑制Ishikawa细胞的增殖,促进细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性(P0.05),并使细胞周期中G0/G1期比例升高(P0.05),而对S期和G2/M期比例无明显影响(P0.05)。吉非替尼作用48h后,Ishikawa细胞中p-Akt、CyclinD1蛋白表达随着吉非替尼浓度的增加逐渐下降(P0.05)。结论:吉非替尼对人子宫内膜癌细胞Ishikawa的体外生长具有明显的抑制作用,并能诱导Ishikawa的凋亡,导致G0/G1期细胞阻滞,其分子机制可能与吉非替尼下调p-Akt蛋白及CyclinD1蛋白的表达有关。     

顺铂和卡铂上调SiHa细胞株胸苷磷酸化酶的研究

目的:研究顺铂、卡铂上调宫颈癌SiHa细胞株胸苷磷酸化酶(thymidinephosphorylase,TP)的变化,探讨序贯联合化疗时抗嘧啶类药物用药的适合时机。方法:体外培养SiHa细胞株,分为对照组、顺铂组、卡铂组。顺铂和卡铂72h的IC50分别是:19μmol/L,236.82μmol/L。药物作用后0、4、8、12、16、24、36、48h,用RT-PCR检测各组细胞TP mRNA表达。于药物作用后0、6、12、18、24、30h,用Western blot检测TP蛋白表达。结果:顺铂和卡铂作用4~8h后TP mRNA表达开始增加,24h达高峰,相对于空白组,顺铂组升高2.52倍,卡铂组升高1.90倍,24h后逐渐降低;顺铂和卡铂作用6~12h后TP蛋白增加,24h达高峰,顺铂组和卡铂组表达分别是对照组的3.45倍和2.73倍。蛋白质增加幅度大于mRNA,顺铂组与卡铂组差异无统计学意义。结论:顺铂和卡铂可以上调宫颈癌SiHa细胞株TP,渐次升高后下降,呈时间依赖性,顺铂组与卡铂组上调TP的作用差异不显著。     

ING4在正常子宫内膜及子宫内膜癌的表达及临床意义

目的:研究生长抑制因子4(ING4)在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达,探讨ING4在子宫内膜癌发生、发展中的作用,为子宫内膜癌的临床预防及治疗提供新的标志物。方法:利用荧光定量PCR、半定量RT-PCR、Western-blot及免疫组化等方法分别检测正常子宫内膜细胞及子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HHUA及子宫内膜癌组织中ING4基因的表达,并进行分析比较。结果:子宫内膜癌细胞中ING4基因的表达量显著低于正常子宫内膜细胞(P<0.05),且ING4在Ishikawa和HHUA这两种子宫内膜癌细胞系之间的表达量没有显著性差异(P>0.05)。Western-blot结果显示,正常子宫内膜细胞的ING4蛋白表达量显著高于Ishikawa和HHUA这两种细胞系(P<0.05),HHUA细胞系的ING4蛋白表达量显著高于Ishikawa细胞系(P<0.05)。免疫组化结果显示,ING4在不同组织内的表达量差异有统计学意义(P<0.05),正常子宫内膜细胞内的表达量最高,其次是复杂性及不典型增生子宫内膜,子宫内膜癌内的ING4表达量最低。结论:ING4基因表达的下调与子宫内膜癌发生、发展可能有一定关系,对子宫内膜癌的诊断有一定的参考意义。     

GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。     

米非司酮对卵巢上皮性癌耐药细胞DNA修复基因表达和顺铂敏感性的影响

目的 研究米非司酮对卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞DNA修复基因表达的调控,及对顺铂的增敏作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮作用后卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的顺铂半数抑制浓度(IC50);用RT-PCR技术、流式细胞仪检测米非司酮联合顺铂作用后COC1/DDP细胞ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA的表达水平及细胞周期和凋亡率的变化;建立COC1/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为顺铂组、米非司酮组、联合组和对照组,观察米非司酮在裸鼠体内对顺铂的增敏作用.结果 2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮分别使COC1/DDP细胞对顺铂的IC50下降为(3.18±0.46)、(1.95±0.14)和(0.64±0.18)μg/ml,2.5 μmol/L米非司酮联合顺铂作用后的IC50与单用顺铂者[(3.71±0.38)μg/ml]比较,差异无统计学意义(P=0.076),其他浓度之间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).米非司酮下调ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA表达水平,3种基因mRNA的相对表达量随米非司酮浓度的升高均呈下降趋势.2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞作用后,G0/G1,期细胞比例升高(分别为51.68%、53.74%、55.08%).2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮与10 μg/ml顺铂联合作用使细胞凋亡率分别增加为5.11%、9.13%和12.24%.米非司酮联合顺铂治疗裸鼠皮下移植瘤的生长抑制率为70.1%,与顺铂组、米非司酮组(分别为22.5%、6.5%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 米非司酮通过下调ERCC1、BRCA1、hMLH1基因的表达及阻滞G0/G1期细胞、增加细胞凋亡率来增强顺铂对卵巢癌细胞的抗肿瘤敏感性.     

沉默IGF-1R表达对子宫内膜癌化疗敏感性的影响及其相关机制研究

目的:将慢病毒载体表达的靶向IGF-1R的干扰片段转染子宫内膜癌细胞HEC-1B,探讨转染前后HEC-1B对顺铂化疗敏感性的改变及可能的潜在机制。方法:构建IGF-1R基因RNAi慢病毒载体,转染HEC-1B细胞并检测转染效率,Real-time PCR及Western blot检测转染前后IGF-1R基因及相关蛋白的表达情况,采用MTT及流式细胞仪分析转染前后细胞增殖率及凋亡的改变。结果:慢病毒载体的转染效率高达78%,转染特异IGF-1R siRNA使内源性IGF-1R mRNA降低85%(P<0.05),蛋白降低91.4%(P<0.05);Akt及Erk的磷酸化水平降低,分别是总Akt及Erk的(17.48±3.31)%与(11.55±3.27)%(P<0.05);转染前后的细胞暴露于不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度从10μmol/L增加到40μmol/L时,转染特异IGF-1R siRNA的细胞凋亡率从(22.21±4.63)%增加到(41.92±2.5)%(P<0.05);顺铂的IC50值从21.85μmol/L降到10.58μmol/L(P<0.05),同时伴随着cleaved caspase-9的表达增强(P<0.05)。结论:沉默IGF-1R的表达通过抑制下游信号通路的传导,增强子宫内膜癌对顺铂化疗敏感性。     

子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达及其甲基化状态的研究

目的:研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达下调的机制。方法:(1)应用Real-Time PCR法检测子宫内膜癌及正常组织中孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA的表达及去甲基化试剂5-Aza-CdR处理Ishikawa细胞前后孕激素两种受体亚型及DNA甲基化转移酶mRNA的表达;(2)应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa中PRA、PRB的甲基化状态。结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,总PR表达显著降低,与病理类型相关;PRB表达显著下降,与其临床特征无关。子宫内膜癌细胞系Ishikawa中,加入5-Aza-CdR2.5μmol/L48h后,孕激素受体亚型PRA、PRB甲基化条带均消失;孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA表达水平增加;同时Ishikawa细胞中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3B表达下调。结论:子宫内膜癌组织中,孕激素受体亚型mRNA表达下调可能与子宫内膜癌的发生相关;孕激素受体亚型表达下调与其启动子区甲基化状态相关;去甲基化试剂5-Aza-CdR可逆转基因启动子区的甲基化状态,恢复PR基因的表达。