低温治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤起始时间的探讨

目的 探讨低温干预起始时间对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响。方法 Wistar 7日龄新生大鼠,随机分到:缺氧缺血后0 min、60 min、120 min、6 h起始亚低温干预组、常温(37℃)恢复组、正常对照组(假结扎组),每组30只。每组20只于缺氧缺血后78 h处死,10只用于测定脑组织含水量,10只经灌注固定,冠状切片进行微管相关蛋白-2(MAP-2)免疫组化染色,测定脑梗塞面积;另外10只于生后42d用迷宫实验检测其学习和记忆能力。结果 (1)亚低温干预各组大鼠脑组织含水量与常温恢复组相比显著减少(P<0.05);(2)亚低温干预各组大鼠脑梗塞面积与常温恢复组相比显著降低(P<0.05),且随着亚低温干预起始时间的延迟,梗塞面积逐渐增大;延迟6 h的干预仍有效;(3)亚低温干预各组大鼠学习和记忆能力显著高于常温恢复组(P<0.05)。结论亚低温干预效果与缺氧缺血后低温的起始时间有关,延迟6 h的亚低温干预仍有效。     

低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机制

目的　探讨全身低温对缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机理。方法　结扎 7日龄Wistar大鼠左侧颈总动脉后吸入 7 7%氧气 6 0min制成脑缺氧缺血 (HI)模型 ,随机分成低温组(30℃ ,n =18)和常温组 (36℃ ,n =18)给予维持恒定目标温度 10h。在HI后 2 4h ,每组 8只取脑进行匀浆用于半胱天冬酶 2 ,3(caspase 2 ,3)活性测定和Western蛋白印迹检查 ,其余每组 10只在HI后 72h处死 ,取脑进行石蜡包埋 ,冠状切片 10 μm用于活性caspase 3,凋亡诱导因子 (AIF) ,发夹寡核苷酸探针原位杂交 (HPP)检测凋亡及相关因子 ,微管相关蛋白 2 (MAP 2 )免疫组化染色用于计算脑梗塞体积和海马CA1神经元丢失 ,HE染色计算脑损伤积分。结果　常温组在HI后 2 4h损伤侧大脑半球caspase 2 ,3的活性 [(2 7 7± 14 7)、(94 9± 5 3 1) pmol/(min·mg蛋白 ) ]均明显高于正常对照组 [(7 6± 0 7)、(12 9± 0 5 ) pmol/(min·mg蛋白 ) ]和低温干预组 [(7 9± 3 4 )、(2 1 1± 18 7)pmol/(min·mg蛋白 ) ],P <0 0 1;而低温组与正常对照组相比无明显差异。Western蛋白印迹结果显示低温组caspase 3的激活受到明显抑制。免疫组化显示常温组活性caspase 3及AIF的阳性细胞数(中位数 14 8 5 ;2 2 /视野 )明显高于低温组 (中位数 4 8 5 ;9/视     

褪黑素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的保护作用

目的 探讨褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及其机制.方法 7日龄Wistar大鼠54只结扎左侧颈总动脉,吸入氧氮混合气体55 min制作HIBD模型,随机分成正常对照组、HIBD组和褪黑素治疗组,每组18只.正常对照组既不结扎亦不缺氧,褪黑素治疗组在缺氧缺血前30 min予褪黑素15 mg·kg-1 腹腔注射.在缺氧缺血24 h,取每组6只脑组织匀浆用于半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3活性测定,其余每组6只在缺氧缺血72 h取其脑进行石蜡包埋,并进行半胱天冬酶-3、凋亡诱导因子(AIF)及微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫组织化学染色,上述指标用于计算脑梗死体积和海马CA1神经元的丢失,HE染色用于计算脑损伤积分.结果 缺氧缺血24 h,HIBD组新生大鼠脑组织半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3活性均明显高于正常对照组(Pa<0.05),给予褪黑素治疗后,半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3活性均明显下降(Pa<0.05);72 h时褪黑素治疗组半胱天冬酶-3和AIF的阳性细胞计数均明显下降(Pa<0.05);褪黑素治疗组脑损伤积分、脑梗死体积、CA1神经元丢失均显著下降(Pa<0.05).结论 褪黑素对HIBD有保护作用,其机制与抑制神经细胞凋亡有关.     

丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期智能的影响

目的 探讨丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后远期智能的影响。方法 建立新生大鼠HIBD模型,给予丹参注射液150mg/10g腹腔内注射,采用迷宫实验观察远期学习记忆能力的改变。结果 丹参组学习记忆能力明显好于HIBD组,表现在达标所需反映次数明显低于HIBD组(P<0.05),而正确率却明显高于HIBD组(P<0.05)。丹参组大鼠脑部改变仅见轻微的脑皮层萎缩,HIBD大鼠脑部可见皮层萎缩、液化及空洞形成,病理组织学可见筛状软化灶形成、胶质结节和钙化灶形成等。结论 丹参可预防和治疗新生大鼠HIBD所致的智能障碍。     

高压氧治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的不良反应

目的 探讨高压氧治疗对HIBD新生大鼠视网膜血管和肺组织的不良反应.方法 将出生7日的SD新生大鼠162只随机分为6组:正常对照组(n=22),HIBD组(n=20),高体积分数氧组(高氧组,n=32),高压空气组(n=16),高压氧组(n=36),高氧加高压氧组(n=36).高压空气组和高压氧组于HIBD模型制作后2 h分别给予高压空气和高压氧(2个大气压)处理1 h,1次/d,连续7 d.高氧组于HIBD制作后给予900～950 mL/L氧,连续7 d.高氧加高压氧组于HIBD模型制作后进行高氧处理,同时予高压氧治疗,1次/d,连续7 d.21日龄处死动物,TUNEL法检测各组海马CAI区神经细胞凋亡;HE染色观察其眼球和肺组织病变;墨汁染色视网膜铺片观察其血管增生情况;免疫组织化学观察其血管内皮生长因子(VEGF)表达;ELISA法检测其脑组织8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平.结果 1.HIBD组、高压空气组、高氧组和高氧加高压氧组脑组织海马CA1区凋亡细胞数较正常对照组明显增多(Pa <0.01),高压氧组无明显增加.2.高氧组和高氧加高压氧组视网膜新生血管细胞核计数较正常对照组明显增多(Pa <0.01),高压氧组增加不明显.3.视网膜铺片显示高氧组和高氧加高压氧组视网膜血管明显增生,但HIBD组、高压空气组、高压氧组无明显血管增生现象.4.高氧组和高氧加高压氧组视网膜VEGF较正常对照组明显表达(Pa <0.01).5.肺组织HE染色观察到HIBD组、高压空气组和高压氧组结构均与正常对照组相似;高氧组和高氧加高压氧组肺泡样结构明显遭破坏,后者程度稍轻.6.脑组织8-iso-PGF2α水平在HIBD组、高压空气组和高压氧组均较正常对照组增加(Pa <0.01);高氧组和高氧加高压氧组均较高压氧组显著增高(Pa <0.01).结论 高压氧治疗对HIBD新生大鼠脑损伤有保护作用;高氧有刺激新生大鼠视网膜血管增生和肺组织损伤作用,而高压氧则无眼和肺的不良反应;高氧可加重HIBD后脑组织脂质过氧化物的产生,而高压氧无此作用.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程

为确定新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程、采用HE染色及TUNEL研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡情况。结果显示,新生大鼠缺氧缺血后3周时,左脑仍有少量凋亡细胞存在,与对照组比较有显著性差异,P<0.05;于4周时左脑凋亡细胞数与对照组比较无显著性差异,P>0.05。结果提示新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后种经细胞凋亡持续至损伤后4周。     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤自由基影响的研究

目的 研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后自由基的影响。方法 7日龄大鼠行左侧颈总动脉结扎后吸入8%氧气2h,制成缺氧缺血性脑损伤模型。动物随机分成五组：假手术组、缺氧缺血组、缺氧缺血后30min给予亚低温组、缺氧缺血后1h给予亚低温组、缺氧缺血后3h给予亚低温组。脑皮质细胞匀浆用于测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 缺氧缺血组MDA含量明显高于假手术组,而亚低温各组MDA含量均低于缺氧缺血组,而且亚低温应用越早者MDA含量减少越明显。结论 亚低温可以通过减少自由基的产生发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

早期高压氧治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的远期保护作用

目的：高压氧(hyperbaricoxygen,HBO)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)中的应用及疗效仍存在争议。至目前为止,HBO在新生动物HIBD中的实验研究不多,这些实验注重近期病理和生化结果的评价,缺乏远期功能评价指标。该实验评价早期HBO治疗对HIBD新生大鼠远期脑病理和行为的影响。方法：7日龄大鼠随机分为对照组(n=18)、HIBD组(n=17)和HBO组(n=17,HIBD后0.5~1h开始2个绝对大气压HBO治疗,稳压30min/次,每日1次,共2d),以大鼠37~41日龄的学习记忆功能(Morris水迷宫实验)和42日龄的脑形态组织学(脑重量、海马CA1区存活神经元数、AchE纤维面积和NOS神经元数)来判断干预效果。结果：HIBD组学习记忆功能严重不良伴有脑形态组织学的明显缺损,与对照组比较水迷宫实验的平均逃逸潜伏期(EL)延长(56.35±22.37svs23.07±16.28s);搜索时间和搜索距离缩短(29.29±6.06svs51.21±4.59s)和(548±92cmvs989±101cm),左脑重量减轻(0.601±0.59gvs0.984±0.18g);CA1区存活神经元数减少(100±27个/mmvs183±8个/mm);AchE纤维面积减少(18.50±2.24)%vs(27.50±2.18)%,NOS神经元数减少(19.25±4.33个/mm2vs33.75±5.57个/mm2)以上两组比较均P<0.05。HBO组学习记忆功能不良改善,脑形态组织学缺损减轻,与对照组比较差异有显著性,EL为39.17±21.20s;搜索时间为36.84±4.36s;搜索距离686±76cm;脑重量0.768±0.85g;存活神经元数133±25个/mm;AchE纤维面积(21.94±2.73)%(均P<0.05)。结论：早期HBO治疗在一定程度上改善了HIBD所引起的学习记忆功能不良并减轻了HIBD所导致的远期脑形态组织学缺损。     

骨髓基质细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时间窗探讨

近年来,用干细胞移植治疗新生动物缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemicbraindamage,HIBD）取得了一定的效果。如何充分利用脑损伤内在的修复机制,使移植达到最佳效果,目前关于这方面的研究较少,而且也主要基于成年动物大脑中动脉缺血（MCAO）模型。本研究在新生大鼠脑损伤后24h、72h、7d进行移植,观察不同时间点移植对大鼠远期行为学影响、组织学改变以及BMSCs在脑内的神经分化,探讨新生大鼠HIBD后最适宜的移植时间窗,为BMSCs临床移植治疗提供理论基础。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织小RNA表达的变化

目的：观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）皮层小RNA（microRNA,miRNA）差异表达,以研究其在HIBD的病理生理中的作用。方法：建立新生大鼠HIBD模型14 d后,取皮层脑组织,miRNA表达谱芯片检测miRNA差异表达。实时定量PCR检测miR-126-26a、-674-5p、-21、-25、-290和miR-124、-125b-5p、-9a等9个miRNA。结果：miRNA表达谱芯片结果提示,与对照组比较,HIBD大鼠皮层脑组织中27个已知miRNA表达上调2倍以上;60个表达下调2倍以上。实时定量PCR检测所选择的9个miRNA结果与miRNA芯片结果具有同样趋势。结论：HIBD模型大鼠miRNA表达有明显差异,这些改变可能在HIBD的病理生理中起着重要作用。［中国当代儿科杂志,2010,12（5）：373-376］     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究

为研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用,应用7日龄大鼠制成缺氧缺血性脑损伤模型.动物随机分组假手术组(C组),缺氧缺血正常温度组(HI组),缺氧缺血后30分钟亚低温治疗组(亚低温组).脑皮质细胞匀浆用于测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,应用原位缺口末端标记(TUNEL)及免疫组化bax基因表达,观察神经细胞凋亡情况.结果显示,HI组MDA含量明显高于C组(P＜0.01),亚低温组MDA含量明显低于HI组(P＜0.01);亚低温组凋亡细胞明显少于HI组(P＜0.01).因此,亚低温可以通过减少自由基的产生,抑制细胞凋亡的机制发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用.     

高压氧对新生猪缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究

使用新生猪复制新生儿缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic ischemic brain damage,HIBD)模型,研究HB0(Hvperbaric Oxygen,HBO)对HIBD的治疗作用.取30只7天仔猪使用改良Lvine法复制HIBD模型后,随机分为HB0组(16只)和对照组(14只),HB0组采用纯氧加压至170kPa,每天1次,对照组无任何治疗.分别于缺氧缺血(HI)后1天、7天处死每组各1半的仔猪,观察两组(1)仔猪的病死率及神经系统症状;(2)右颈总动脉血注速度VC、AV);(3)动脉血气分析;(4)脑重量.结果显示,HB0组病死率及神经症状发生率显著低于对照组(P<O.05).第1次HB0治疗后,HB0组rCAV明显高于对照组(P<O.05),低氧血症和代谢性酸中毒纠正速度明显快于对照组,(P<0 05).HI后1天和7天两组脑重量均无显著差异(P<0.05).因此HB0治疗HIBD具有一定的效果,作为一种HIBD的治疗方法,以早期应用效果为佳.     

银杏叶提取物对宫内缺氧新生大鼠神经细胞凋亡的保护效应

目的 探讨银杏叶提取物(EGb)对宫内缺氧新生大鼠急性脑缺血损伤的保护作用。方法 夹闭妊娠大鼠子宫血管，制成急性脑缺血损伤新生鼠模型，治疗组给予腹腔注射EGb，在生后不同时间比较两组仔鼠脑组织含水量、NO的变化,神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达及神经细胞凋亡情况变化。结果 急性脑缺血后，脑组织含水量明显增加，NO的含量迅速上升，同时凋亡细胞数增加，两者成直线正相关。EGb治疗后NO含量显著低于未治疗组，同时观察到治疗组的nNOS表达明显降低，凋亡细胞数量减少。结论EGb对急性缺血引起的脑损伤有保护作用。     

THE PROTECTIVE EFFECT OF ACUTE PHASE REACTANTS IN NEONATAL SEPSIS

Abstract. Phase reactants were evaluated prospectively in babies suspected of having sepsis. Among 318 babies, there were 22 proven and 10 "very probable" cases of neonatal sepsis. Of the proven cases 14 survived and 8 died. The survivors had a positive latex C-reactive protein (CRP) in 11 cases and an alpha₁-acid glycoprotein (AGP) level greater than 0.5 g/l in 12 cases. Among those who died, one had a positive latex CRP and none had AGP >0.5 g/l. These findings were supported by positive CRP and elevated AGP in almost all "very probable" cases, all of whom survived. These data in newborn infants support the hypothesis that acute phase reactants have a functional role in combating infection.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后血管内皮生长因子的变化

目的 了解血管内皮生长因子(VEGF)在新生鼠缺氧缺血性脑损伤后表达的动态变化。方法 采用Rice法制备缺氧缺血性脑病模型，将80只7日龄SD大鼠随机分为：正常对照组、模型后即刻组、1h组、3h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h组、7d组。用免疫组织化学方法观察VEGF表达的动态变化。结果 正常对照组中大鼠脑内几乎无VEGF表达；模型组结扎侧大脑皮质，纹状体，海马在模型后即刻即有VEGF表达，3～12h达高峰，随后开始下降，7d后呈低水平稳定表达。结论 缺氧缺血作为一种信号刺激VEGF在神经细胞内表达增加；VEGF的表达增加具有时间依赖性；VEGF对缺氧缺血性神经元损伤可能具有一定的保护作用。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后血管内皮生长因子的变化

目的了解血管内皮生长因子(VEGF)在新生鼠缺氧缺血性脑损伤后表达的动态变化.方法采用Rice法制备缺氧缺血性脑病模型,将80只7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、模型后即刻组、1 h组、3 h组、6 h组、12 h组、24h组、48 h组、72 h组、7 d组.用免疫组织化学方法观察VEGF表达的动态变化.结果正常对照组中大鼠脑内几乎无VEGF表达;模型组结扎侧大脑皮质,纹状体,海马在模型后即刻即有VEGF表达,3～12 h达高峰,随后开始下降,7 d后呈低水平稳定表达.结论缺氧缺血作为一种信号刺激VEGF在神经细胞内表达增加;VEGF的表达增加具有时间依赖性;VEGF对缺氧缺血性神经元损伤可能具有一定的保护作用.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤热休克蛋白70的表达

目的利用新生鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型，探讨缺血缺氧后不同时间热休克蛋白(HSP70)的表达。方法采用阻断左侧颈总动脉制作新生鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型，用原位杂交的技术观察正常对照组及缺氧缺血1h、24h、48h、96h组HSP70表达变化以及阳性染色细胞的分布部位及数量。结果核酸原位杂交DAB染色、图象扫描分析显示，HSP70表达在缺氧缺血后1h后即有升高，24h时阳性表达最高，48h、96h表达逐渐降低。结论脑缺氧缺血后热休克蛋白(HSP)表达增加，与脑缺氧缺血后神经细胞保护作用有关。     

QUALITATIVE CYTOLOGY OF CEREBROSPINAL FLUID AS AN INDICATOR OF NEONATAL BRAIN DAMAGE AND PSYCHOMOTOR OUTCOME

ABSTRACT. Dalens, B., Bezou, M. J., Raynaud, E. J., Coulet, M., and Gaulme, J. (Clinique Médicale Infantile and Laboratoire d'Hématologie, Hotel-Dieu, Clermont-Ferrand, France). Qualitative cytology of cerebrospinal fluid as an indicator of neonatal brain damage and psychomotor outcome. Acta Paediatr Scand, 70:161, 1981. –The authors report a double blind study on 57 full-term neonates prospectively subjected to clinical, electroen-cephalographical, cerebrospinal fluid and developmental examinations. Usual neonatal pleiocytosis depends on histiomonocytic cells which probably are a reflection of constant small brain damage during delivery. Infants suffering neurological sequelae at age one are recognizable as early as the 60th to 84th hours of life in view of persisting high histiomonocytic counts greater than 10 M. elements/1) and granulocytic peaks (greater than 2 M. elements/1) in clear samples. This method is then of interest, despite its invasive nature and limits (traumatic punctures, time-limits).     

地塞米松预防新生大鼠缺氧缺血性脑病的研究

目的研究Dex在新生大鼠HIE中的神经保护作用及机理。方法4日龄SD大鼠随机分为三组,分别给予生理盐水、不同剂量Dex预处理4天,然后缺氧处理。观察梗塞发生率、梗塞面积、非结扎侧皮层厚度和细胞密度,皮层细胞超微结构变化。结果Dex组梗塞发生率和面积低于对照组,大脑神经细胞的超微病理变化轻。Dex组大鼠体重、非结扎侧皮层厚度和细胞密度少于对照组,Dex组死亡率高于对照组。结论地塞米松预处理对新生大鼠HIE具有保护作用,远期可抑制体格生长和大脑皮层发育。