粉防己碱对急性胰腺炎大鼠胰腺核因子κB活化的影响

目的 :观察急性胰腺炎 (Acutepancreatitis,AP)大鼠胰腺核因子κB(nuclearfactor-κB ,NF -κB)的活性变化及粉防己碱 (Tetrandrine ,Tet)对其的影响 ,以探讨Tet治疗AP的作用机制。方法 :采用胰胆管逆行加压注射 3%牛磺脱氧胆酸钠制成AP模型 ,分离血浆测定其中淀粉酶活性 ;取大鼠胰腺采用免疫组织化学法检测NF -κB表达量的变化。结果 :AP大鼠有腹水生成、血浆淀粉酶活性及胰腺组织中NF -κB表达增加 ;Tet组腹水生成量减少 ,胰腺NF -κB血浆淀粉酶活性明显降低 (P <0 .0 5 ) ,胰腺的病理损伤减轻 ,动物的死亡率降低 (P <0 .0 5 ) ,生存时间延长 (P <0 .0 5 )。结论 :Tet可能通过减轻胰腺组织中NF -κB活化而对急性胰腺炎发挥治疗作用     

硫化氢对离体大鼠胰腺腺泡细胞炎症因子表达的影响

目的 以雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞为体外急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型,研究硫化氢(H2S)对AP时胰腺腺泡细胞炎症因子表达的影响及机制.方法 分离25只SD大鼠胰腺腺泡细胞,用雨蛙素(10-7 mol/L)诱导体外AP模型,用不同浓度NaHS(5、10、20、40 μmol/L)及不同时间(10、30、60 min) NaHS(5μmol/L)处理,Real-time PCR检测炎症因子mRNA水平.再用CSE抑制剂PAG处理,Real-time PCR检测炎症因子mRNA水平及CSE mRNA水平.进一步用NF-κB抑制剂BAY 11-7082处理后,Real-time PCR检测炎症因子mRNA水平,Western blot检测浆内IκBα及核内NF-κBp65的蛋白表达.结果 当5μmol/L NaHS预处理60 min时,TNF-α水平(14.70±1.10)、IL-1β水平(14.42±0.83)显著低于雨蛙素组(P＜0.05),IL-10水平(12.20 ±0.55)显著高于雨蛙素组(P＜0.05);CSE抑制剂PAG预处理60 min后,TNF-α水平(37.38 ±0.89)、IL-1β水平(24.45 ±0.76)显著高于雨蛙素组(P＜0.05),CSE水平(0.14±0.03)、IL-10水平(0.14 ±0.03)显著低于雨蛙素组(P＜0.05);NF-κB抑制剂BAY 11-7082预处理30 min,TNF-α水平(9.17±0.96)、IL-1β水平(2.90 ±0.17)显著低于雨蛙素组(P＜0.05),IL-10水平(40.00±1.00)显著高于雨蛙素组(P＜0.05),并且胞浆内IκBα(0.90 ±0.01)的降解及细胞核内NF-κBp65 (0.70 ±0.04)的蛋白表达明显低于雨蛙素组(P＜0.05).结论 小剂量H2S供体NaHS在雨蛙素孵育的胰腺腺泡细胞中具有一定抗炎作用,且该作用是通过抑制NF-κB通路从而抑制腺泡细胞表达促炎因子实现的.     

肿瘤坏死因子α对肠上皮细胞核因子κB的活化与细胞因子表达的影响

目的探讨炎症状态时肠上皮细胞核因子κB的活化对肠上皮细胞分泌促炎细胞因子的调节作用.方法将TNF-α(10 ng/ml)加入培养的结肠癌上皮细胞系H29细胞中,3 h后收集上清液,ELISA法测IL-8;分别提取细胞核蛋白、mRNA,经Western blotting检测核因子NF-κB P65的活化,PT-PCR检测IL-8的表达.结果对照组的HT29细胞低表达IL-8 mRNA,细胞核中很难检测出NF-κB P65,细胞培养液中IL-8的质量浓度为172 ng/L.经TNF-α刺激后,HT29细胞高表达IL-8 mRNA.核蛋白NF-κB P65表达明显增高,细胞培养液中IL-8的质量浓度为639 ng/L,明显高于对照组(P＜0.01). 结论炎症状态时,核因子κB的活化促进肠上皮细胞分泌促炎细胞因子,调节肠上皮细胞参与炎症反应.     

MicroRNA-146a对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨microRNA-146a（miR-146a）对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响,并分析相关机制。方法 体外诱导并培养急性胰腺炎MPC-83细胞,将急性胰腺炎MPC-83细胞分为阴性对照组（mimics-NC组）、过表达miR-146a组（miR-146a-mimics组）,另以未经诱导处理的MPC-83细胞为空白对照组（NG组）。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组MPC-83细胞miR-146a,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）,Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、核转录因子-κB p65（NF-кB p65）蛋白的表达。结果 急性胰腺炎细胞模型建立成功,成功转染后,与NG组、mimics-NC组比较,miR-146a-mimics组细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、Bax和NF-κB p65蛋白相对表达量降低（P <0.05）,细胞存活率、PCNA和Bcl-2蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 过表达miRNA-146a可抑制急性胰腺炎MPC-83细胞凋亡并促进细胞增殖,其作用可能通过抑制NF-кB通路活化来实现。     

胃肠多肽对大鼠胰腺腺泡细胞生长的影响

目的:了解胆囊收缩素(CCK)、蛙皮素(BBS)、生长抑素、肠血管活性多肽和胃泌素对大鼠胰腺腺泡细胞生长的影响.方法:采用大鼠胰腺腺泡细胞原代培养,测定细胞3H-胸腺嘧啶核苷掺入(3H-TdR)以观察细胞生长.结果:培养期间,细胞存活良好,保持腺泡形态,与对照组(251.5±69.1 cpm)比较,CCK、BBS明显增加了大鼠胰腺腺泡细胞的3H-TdR,分别为361.0±57.6和605.5±214.2 cpm,P＜0.05;而VIP组、SST组和胃泌素组则对大鼠胰腺腺泡细胞的3H-TdR无明显影响,P＞0.05.结论:CCK、BBS有促进大鼠胰腺腺泡细胞生长的作用,SST、VIP、胃泌素则不影响胰腺腺泡细胞的生长.     

实验性急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞超微结构的观察

目的：了解实验性急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞超微结构的改变。并探讨雨蛙素致急性胰腺炎的机理。方法：采用皮下注射超大剂量雨蛙素建立大鼠急生水肿性胰腺炎模型,用透射电镜观察了雨蛙素刺激１ｈ,３ｈ,６ｈ,１２ｈ及２４ｈ后胰腺腺泡细胞的形态学改变。结果：①腺泡细胞质空泡形成。在雨蛙素刺激后１小时即可见到,随着雨蛙素刺激时间的延长,空泡数量显著增加,６ｈ达高峰;体积变显著增大,空泡之间或空泡与酶原颗粒间互相融     

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌细胞核因子-κB激活的影响

目的:观察氧化型低密度脂蛋白对人平滑肌细胞核因子κB激活的影响,探讨氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化机制。方法:以体外培养的人脐动脉平滑肌细胞为对象,采用免疫细胞化学法测定氧化型低密度脂蛋白与核因子κB亚单位p65核移位的时间效应与浓度效应关系。结果:在氧化型低密度脂蛋白刺激下,平滑肌细胞中0.5h即出现核因子κB核移位,2h达高峰,4h仍持续可见。不同浓度(12.5,25,50及100mg/L)氧化型低密度脂蛋白均可诱导平滑肌细胞中核因子κB核移位,在一定剂量范围内,氧化型低密度脂蛋白的浓度越大,核因子κB核移位越明显,尤以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用最明显。结论:氧化型低密度脂蛋白可刺激平滑肌细胞中核因子κB的激活,进一步提示氧化型低密度脂蛋白/核因子κB信号途径在促进动脉粥样硬化发病机制中起重要作用。     

胰腺腺泡细胞钙超负荷在诱发大鼠由水肿性向坏死性胰腺炎转变中 …

OBJECTIVE: To investigate the potential of pancreatic acinar cell calcium overload in the conversion of acute edematous pancreatitis (AEP) to necrotizing pancreatitis (ANP). METHODS: Ninety-six Sprague-Dawley rats were randomized in three experimental groups. Sham-operated control (Group I) AEP (Group II) was induced by pancreatic duct ligation and intravenous injection of bombesin (100 micrograms/kg) and secretin (10 micrograms/kg). ANP (Group III) was induced same as group II but with a large dose of dextran 110,000(500 mg/kg) intravenously. Pancreatic acinar cell Ca2+ overload was studied using fluorescent probe Fura2. Cytosolic free Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in isolated pancreatic acinar cells and Ca(2+)-ATPase activity in pancreatic cell plasma membranes were determined 1, 3, 6, 9 h respectively after treatment. RESULTS: The results showed that pancreatic acinar cell [Ca2+]i was elevated at 1 h[(213 +/- 19) nmol/L, P < 0.05] and increased to (464 +/- 29) nmol/L at 6 h(P < 0.05) in rats with ANP, pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity decreased significantly from (29.8 +/- 0.4) nmol.min-1.mgp-1 at 1 h to (18.6 +/- 0.5) nmol.min-1.mgp-1 at 9 h in rats with ANP (P < 0.05). CONCLUSIONS: In ischemia-induced conversion of AEP to ANP, there exists Ca2+ overload in the pancreatic acinar cells. The decreased pancreatic cell plasma membrane Ca(2+)-ATPase activity may be an important reason for acinar cell Ca2+ overload in the development of acute pancreatitis.     

消退素RvD1抑制LPS诱导的大鼠胰腺腺泡细胞炎性反应的实验研究

目的 探讨消退素RvD1对脂多糖 (LPS)诱导的胰腺腺泡细胞（AR42J）炎性效应的干预作用,并分析其机制。方法 将AR42J细胞分为6组:RvD1（100 nmol/L)组,LPS组, RvD1 （1、10、100 nmol/L）+LPS组和生理盐水对照组。其中LPS组和RvD1+LPS组以100 mg/L LPS刺激AR42J细胞,构建急性胰腺炎的体外模型,RvD1+LPS组在建模前先用不同浓度 （1、10、100 nmol/L）RvD1对AR42J细胞预处理30 min。实时荧光定量PCR检测各组AR42J细胞TNF-α、IL-6、及NF-κB活性亚基p65的mRNA表达;ELISA检测培养液上清中TNF-α、IL-6蛋白浓度的改变;流式细胞术检测AR42J细胞的NF-κB激活率。结果 RvD1可以抑制LPS诱导的AR42J炎症细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白的表达, 且呈剂量依赖方式。RvD1同样以剂量依赖方式抑制LPS诱导的AR42J细胞p65 mRNA表达及NF-κB激活率。结论 RvD1可以呈剂量依赖方式抑制LPS诱导的腺泡细胞NF-κB激活,进一步抑制TNF-α、IL-6等细胞因子的分泌,从而抑制胰腺腺泡细胞的炎性反应。     

急性血糖波动对心肌细胞核因子κB及其抑制因子IκB表达的影响

目的:探讨急性血糖波动对心肌细胞核因子κB(NF-κB)及其抑制因子IκB表达的影响和临床意义。方法:给Wistar雄性大鼠间断输注50%葡萄糖注射液48h的方法,建立急性血糖波动动物模型。采用比色法检查血清丙二醛、超氧化物歧化酶;免疫组化的方法检测心肌细胞浆中IκB、核中NF-κB表达。结果:急性血糖波动组心肌细胞中NF-κB、IκB、NF-κB/IκB的表达显著升高;急性血糖波动组血清丙二醛、超氧化物歧化酶明显升高。血糖波动组MDA/SOD比值显著高于对照组及持续性高血糖组。结论:急性血糖波动与持续性高血糖都能导致机体的氧化应激水平显著升高,急性血糖波动导致的氧化应激反应更强;增强的氧化应激促进细胞核NF-κB表达,导致心肌炎症反应的发生。     

青藤碱对类风湿关节炎树突状细胞核转录因子-κB活性的影响

目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者树突状细胞核转录因子-κB活性的影响。方法分离12例类风湿关节炎患者外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组。采用GM—CSF,IL-4联合刺激分化,于分化第6天给予青藤碱干预,48h后于培养第8天收获细胞及培养上清。抽提核蛋白采用凝胶迟滞实验检测核转录因子-κB的活性,酶联免疫吸附实验检测培养上清IL-12的表达。结果与对照组相比,经青藤碱高、中、低剂量干预的树突状细胞核转录因子-κB活性及IL-12表达均降低．不同剂量组之间两者存在正相关。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞转录因子-κB活性,阻断其分化成熟,阻止了它在类风湿关节炎发病中的抗原提呈作用。     

肿瘤坏死因子︿对肠上皮细胞核因子B的活化与细胞因子表达的影响

目的　探讨炎症状态时肠上皮细胞核因子 κB的活化对肠上皮细胞分泌促炎细胞因子的调节作用。方法　将 TNF-α(10 ng/m l)加入培养的结肠癌上皮细胞系 H2 9细胞中 ,3h后收集上清液 ,EL ISA法测 IL - 8;分别提取细胞核蛋白、m RNA,经 Western blotting检测核因子 NF- κB P6 5的活化 ,PT- PCR检测 IL- 8的表达。结果　对照组的 HT2 9细胞低表达 IL - 8m RNA,细胞核中很难检测出 NF-κB P6 5 ,细胞培养液中 IL - 8的质量浓度为 172ng/L。经 TNF- α刺激后 ,HT2 9细胞高表达 IL- 8m RNA。核蛋白 NF- κB P6 5表达明显增高 ,细胞培养液中 IL- 8的质量浓度为 6 39ng/L ,明显高于对照组 (P<0 .0 1)。结论　炎症状态时 ,核因子κB的活化促进肠上皮细胞分泌促炎细胞因子 ,调节肠上皮细胞参与炎症反应     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞NF-κB的抑制作用

目的 观察青藤碱(sinomenine,SN)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性及核转位的影响,以阐明该药抗炎的可能机制.方法 以CIA大鼠为模型,收集膝关节滑膜细胞体外培养,设正常对照组、CIA组、CIA 甲氨喋呤10 μmol/L(阳性对照组)、CIA SN 50 μmol/L组、CIA SN 500 μmol/L组.应用荧光标记与激光共聚焦扫描显微镜检测滑膜细胞NF-κB p65亚基核转位,电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测NF-κB与DNA序列的结合活性.结果 与正常对照组相比,CIA大鼠滑膜细胞可见明显的p65亚基核移位,NF-κB的DNA结合活性显著升高(P＜0.01),SN在50 μmol/L及500 μmol/L时可呈浓度依赖性地抑制CIA大鼠滑膜细胞p65亚基核转位及NF-κB的DNA结合活性,甲氨喋呤在10 μmol/L时可下调NF-κB的DNA结合活性但未抑制p65亚基的核转位.结论 SN抑制滑膜细胞内NF-κB p65 核转位和NF-κB的DNA结合活性为其抗炎机制之一.     

小檗碱对颈动脉粥样硬化家兔NF-κB的影响

目的:探讨小檗碱预防颈动脉粥样硬化形成的作用机制。方法:将24只雄性新西兰大白兔随机分成3组:正常组、颈动脉粥样硬化组(模型组)、小檗碱预防组(小檗碱组)。正常组给予正常饮食,模型组行高脂饲料喂养加颈动脉内膜空气干燥术建立颈动脉粥样硬化模型,小檗碱组在给予模型组相同处理的同时灌服小檗碱。术后4周麻醉处死,取颈动脉组织行HE染色、NF-κBP65免疫组织化学染色、RT-PCR法测NF-κBP65mRNA表达水平。结果:模型组血管病变以泡沫细胞为主,有动脉粥样斑块形成;小檗碱组血管主要显示内膜明显增厚,有少量泡沫细胞;小檗碱组NF-κBP65阳性细胞数密度高于正常组(P<0.05),明显低于模型组(P<0.05);RT-PCR半定量分析发现,小檗碱组NF-κBP65/β-actin扩增带吸光度值比值高于正常组(P<0.05),而明显低于模型组(P<0.05)。结论:小檗碱可能通过抑制NF-κB活性,降低组织中NF-κB含量,预防颈动脉粥样硬化形成。     

柴芩承气汤对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺核因子-κB活化的影响

目的：通过观察柴芩承气汤（Chaiqin Chengqi Decoction,CQCQD）对急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）大鼠的作用,探讨其治疗机制。方法：将30只SD大鼠随机分成3组：假手术（sham-operated,SO）组、ANP组和CQCQD治疗组。大鼠胆总管内逆向泵入3.5%牛胆酸溶液制备ANP模型。6h后分别行腹腔静脉采血送检,取胰腺组织做病理切片;酶标记免疫吸附测定法检测血浆肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）;HE染色光学显微镜观察胰腺组织病理情况;免疫组织化学染色SP法检测胰腺核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的活化。结果：ANP组白细胞（white blood cell,WBC）计数和血清淀粉酶（amylase,AMY）值较SO组明显升高（P〈0.05,P〈0.01）,CQCQD组血清WBC计数和AMY水平均较ANP组有所下降（P〈0.05）。ANP组的水肿、炎症浸润、出血、坏死和总积分情况较SO组严重（P〈0.01）;CQCQD组的水肿、炎症浸润、出血和总积分水平均较ANP组降低（P〈0.05）。CQCQD组胰腺NF-κB p65阳性细胞的积分光密度（integraloptical density,IOD）值低于ANP组（P〈0.05）。结论：CQCQD可减少血清TNF-α及IL-6含量,降低胰腺NF-κB的活性,减轻胰腺病理损害。     

复方中药对酒精性肝病大鼠核因子κB的影响

目的：探讨复方中药对酒精洼肝病核因子κB（NF-κB）的影响。方法：63只大鼠随机分为正常组、酒精组、中药组。酒精组及中药组分别用酒精和中药灌胃，在4、8、12周末分别处死3组大鼠，观察肝脏病理改变及肝组织中NF-κB的表达。结果：随着酒精性肝病的发展，酒精组大鼠肝细胞坏死增多，炎细胞浸润成团，细胞胞浆NF-κB的着色逐渐增强。而复方中药组病理改变和RF-κB的表达明显减弱。结论：RF-κB表达的强弱反映了酒精性肝损害的程度。复方中药能防止酒精性肝损害，有效地抑制NF-κB的表达。     

胰腺缺血再灌注损伤大鼠胰腺腺泡细胞超微结构的观察

目的　探讨胰腺缺血再灌注 (ischemia -reperfusion ,IR)损伤时胰腺腺泡细胞超微结构的改变及可能机制。方法　 2 4只大鼠随机分为 3组 :假手术组、IR 1h组、IR 6h组。测定血淀粉酶、脂肪酶 ,了解胰腺外分泌功能 ;光镜、电镜观察胰腺组织结构改变。结果　各手术组淀粉酶和脂肪酶含量均较假手术组明显增加 ,6h时增加更显著 (P <0 .0 1)。胰腺组织光镜下IR 1h组呈现急性水肿性胰腺炎表现 ,IR 6h组损伤加重 ,出现出血、坏死 ;电镜下IR 1h组内质网、线粒体、高尔基复合体肿胀 ,IR 6h组细胞器损伤进一步加重 ,可见自噬体和自噬空泡显著增多。结论　胰腺IR 1h时表现为急性水肿性胰腺炎 ,再灌注 6h发展为出血坏死性胰腺炎。胰腺IR 1h电镜下主要表现为细胞器肿胀 ,再灌注 6h特征性改变为自噬小体显著增多。     

小鼠烧伤后腹腔巨噬细胞核因子κB的活化

目的:观察小鼠烧伤后腹腔巨噬细胞核因子κB(NF-κB)活化情况.方法:小鼠烫伤后6 h,取腹腔巨噬细胞,用免疫组化方法观察NF-κB的活化情况,用格林试剂测定上清中一氧化氮(NO)含量.结果:烧伤后腹腔巨噬细胞NF-κB从细胞质移位到细胞核,而正常组腹腔巨噬细胞NF-κB移位不明显.体外培养巨噬细胞上清中NO含量烧伤组明显高于正常组.结论:烧伤后腹腔巨噬细胞NF-κB活化,产生N()增加.     

核因子-κB对感染性休克大鼠肾功能的影响

目的观察核因子-κB(NF-κB)对感染性休克大鼠肾功能的影响,探讨感染性休克时肾功能降低的机制。方法将20只大鼠随机分为2组,每组10只。实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作感染性休克模型,对照组不进行CLP术,其余操作同实验组。各组均测定肾脏组织NF-κB蛋白表达及肾功能情况。结果实验组CLP术后12 h肾组织NF-κB蛋白表达升高,与对照组比较有显著差异(P<0.01);实验组CLP术后12 h血清尿素氮及肌酐增加,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。结论CLP所致大鼠感染性休克过程中,肾组织NF-κB蛋白表达升高,可能是导致肾功能减退的重要因素。