表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在活体内对鸟疟原虫生长抑制的研究

为了研究表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)在活体内对疟原虫的抑制,实验选取了感染虎纹伯劳Lanius tigrinus的伯劳疟原虫Plasmodium (Novyella) lanius作为研究对象.实验把通过血转种成功的50只带虫金丝鸟Serinus canar...     

抗恶性疟原虫单克隆抗体的分析

在两次细胞融合中,经2—4次克隆化后已建成28株抗恶性疟原虫(FCC—1/HN)的杂交瘤。其中针对裂殖子和分裂体抗原的McAb有9株,仅对裂殖体特异的有4株,对裂殖体和滋养体期原虫产生荧光反应的有15株。 应用间接荧光抗体技术,检查这28株McAb对恶性疟原虫(安徽株),间日疟原虫、食蟹猴疟原虫,诺氏疟原虫、伯氏疟原虫、约氏疟原虫和鸡疟原虫的交叉反应。结果,仅有93D4和94B5属株特异性McAb,其余各株均对恶性疟原虫(安徽株)有明显荧光反应。有5     

探究获得高成熟率伯氏疟原虫裂殖体的体外培养条件?

为获得大量有活力的伯氏疟原虫裂殖体,本研究对伯氏疟原虫ANKA虫株的体外培养条件主要从培养基的用量、培养基胎牛血清的含量、培养的细胞浓度、培养时间及培养的气体环境等方面进行了优化。当小鼠体内虫血率达到1％～3％,在红内期疟原虫处于环期或早期滋养体阶段时取血分组培养,观察在不同培养条件下裂殖体的状态并检测其活力。与既往的体外培养方法相比,优化后的培养方法,可将裂殖体的成熟率提高到80％,每个裂殖体含12～16个裂殖子,裂殖体尾静脉注射重新入侵红细胞4 h后的虫血率为1?57％,与对照组相比裂殖体的活力提高3?4倍。优化的方法可以提高裂殖体的得量和活力,为伯氏疟原虫的转染奠定基础。     

青蒿提取物对伯氏疟原虫超微结构的影响

采用4天抑制试验法,观察青蒿提取物和青蒿素对伯氏疟原虫超微结构的影响。结果显示,青蒿提取物和青蒿素均使原虫滋养体膜结构损伤,表现为虫体表膜、食物泡膜、限制膜、线粒体膜、内质网、核膜呈现肿胀及膜间隙增宽。有些虫体表膜、食物泡膜呈现多层螺纹膜样改变。严重病变的原虫滋养体退变崩解,结构消失,残留退变的食物泡和吞噬泡散在红细胞内。此外,还观察到青蒿提取物和青蒿素对疟原虫纳虫泡内裂殖子发育有抑制作用。试验证明,青蒿提取物和青蒿素对伯氏疟原虫滋养体的超微结构损伤部位和病变特征基本相同;并提示对疟原虫纳虫泡内裂殖子发育有一定影响。     

疟原虫裂殖子入侵人红细胞的受体学说研究进展

疟原虫裂殖子入侵红细胞是在受体介导下完成的,目前研究较多的是恶性疟和间日疟受体。一般认为,恶性疟原虫裂殖子受体主要是红细胞膜上的血型蛋白A(GPA),GPA分子中的Ne-uNAc、(GlcNAc以及T;和T6结构均可能参与其活性中心的组成。Duffy血型抗原可能作为间日疟原虫裂殖子受体,但至今对其化学本质的了解远不如GPA清楚,又由于间日疟原虫在体外培养未获成功,故对间日疟原虫受体及其活性中心的研究进展较缓。人们在研究受体过程中,已分离纯化出多种裂殖子表面配体,发现受体和配体均存有异源性,这些突破性进展将为最终阐明疟原虫裂殖子入侵的生化机制开拓研究前景。     

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白对裂殖子入侵人红细胞的抑制作用

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白－１（ＭＳＡ１），又称Ｐ１９５，与人红细胞具有结合作用，这种结合是裂殖子识别红细胞的基础。为了确定Ｐ１９５蛋白与识别有关的位点，本研究在大肠杆菌中分８段表达了ＭＡＤ２０株恶性疟原虫的Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离，然后复性。在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期，将各段蛋白分别加入到培养基上清中，继续培养２４小时，检查红细胞感染率，通过感染率了解各段蛋白对裂殖子入侵红细胞的影响。结果发现Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８４－５９５的一段蛋白（Ｍ６），呈剂量依赖性抑制恶性疟原虫裂殖子入侵人红细胞，且Ｍ６对疟原虫生长无细胞毒性作用。这表明Ｍ６可能含红细胞结合位点，该位点与裂殖子竞争性结合红细胞，而使感染率下降     

恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白对裂殖子入侵人红细胞的…

恶性疟原虫裂殖了表面主要蛋白－１（ＭＳＡ１），又称Ｐ１９５，与人红细胞具有结合作用，这种结合是裂殖子主只别红细胞的基础，为了确定Ｐ１９５蛋白与识别的位点，本研究在大肠杆菌中分８段达了ＭＡＤ２０株恶性疟原虫的Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离，然后复性，在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期，将各种段蛋白分别加入到培养基上清中，继续培养２４小时，检查红细胞感染率，通过感染率了解各段蛋白对裂殖入子侵红细     

鸡疟原虫红细胞内期电镜观察

鸡疟原虫裂殖子侵入红细胞后，圆锥体、致密内膜和膜下微管均没立即消失。随着虫体发育，滋养体逐渐增大，形状不规则，由单层表膜包绕，虫体一侧有胞口，胞口直径与食物泡大小并非有关，食物泡形状各异，其内有结晶状疟色素，细胞质内具有一个大的有嵴线粒体和球形体。细胞核分裂从细胞核变长开始，核膜两极出现染色体团块，两极之间形成纺锤体，核分裂时虫体内细胞器也发生较大的变化，线粒体断裂成多个，裂殖体多处表膜形成致密内膜和膜下微管，内膜覆盖区向含虫空泡凸出形成裂殖子芽，棒状体、细胞核、线粒体和球形体相继进入裂殖子芽中，最终形成多个裂殖子。裂殖子由表膜复合物包绕，顶端呈截状圆锥形突起，有极环，虫体内有棒状体、细胞核、线粒体和球状体等结构。     

抗恶性疟原虫全虫单克隆抗体的制备和鉴定

为建立分泌抗恶性疟原虫全虫单克隆抗体杂交瘤细胞株，研制简易、敏感、特异的快速诊断恶性疟试剂盒。本用恶性疟原虫全虫抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，用ELISA法筛选分泌抗体的阳性杂交瘤细胞克隆，测定单抗的效价和Ig亚类，并用SDS-PAGE、Western印迹、IFAT和IPA等方法对单抗进行鉴定。结果，获得4株(2H6，2A3，3B1和2C12)分泌抗恶性疟原虫单抗的杂交瘤细胞克隆，均属IgG类。其中2H6克隆产生的抗体滴度最高《腹水效价达1：32000)．属IgG1亚类。与伯氏疟愿虫、弓形虫无交卫反应；Western印迹分析显示2H6能被约：130、63、41、33和20kDa等抗原蛋白所识别,IFAT和IPA分析显示，2H6单抗的抗原主要定位于裂殖子、滋养体和裂殖体的表膜部分。从而提示所制备的抗恶性疟原虫全虫杂交癌细胞株能分越高滴度的抗体，其中2H6是针对恶性疟原虫裂殖于表面蛋白的特异性单抗，可用于怒性疟快速诊断试剂盘的研制。     

连续的重复顺序是恶性疟原虫上红细胞受体结合蛋白的结合区

疟原虫裂殖子入侵红细胞是一个受体介导的过程。近年来的研究结果证明:恶性疟原虫裂殖子首先必须与红细胞上血型糖蛋白(即受体)结合,才能侵入人红细胞;而裂殖子上分子量为155,000(GBP-155)和130,000～135,000(GBP-130)的     

Hydroethidine-流式细胞术法相对定量分析恶性疟原虫虫血率及其生长周期

本文结合活体荧光染料Hydroethidine（HE）和结合流式细胞术，对实验室培养的恶性疟原虫虫血率及其生长周期进行了相对定量研究和分析，以期寻求一种可替代血涂片镜检法的检测方法。结果表明，染料Hydroethidine工作浓度10μg／ml即可获得与50μg／ml相同的效果；Hydroethidine-流式细胞术法与常规血涂片镜检法具有强相关性；此外，该方法可以进一步分析培养恶性疟原虫中早期（环期、滋养体期）和晚期（裂殖体期）的组成和比例。因此，Hydroethidine．流式细胞术法作为一种客观、准确、快速的相对定量分析方法，在疟原虫研究中具有广泛的应用空间，可以替代血涂片镜检法。     

用斑点酶联免疫吸附试验筛选抗恶性疟原虫单克隆抗体及检测恶性疟抗原

以往筛选抗恶性疟原虫(Pf)单克隆抗体(McAb)常用间接免疫荧光(IFA)或ELISA,以培养的原虫为检测抗原。所得McAb检测培养的Pf抗原效果较好,但检测病人血中Pf抗原时阳性率较低。抗原分析显示这些McAbs多是针对滋养体、裂殖体或裂殖子抗原。为了得到能用于诊断的抗环状体期McAb,我们直接以病人血中Pf为检测抗原,用斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA)进行筛选,结果如下。     

疟原虫裂殖子识别人红细胞的分子基础

疟疾是严重危害人类健康的疾病之一。由于有效的抗疟药的研制和各种防治措施的实施,其发病率和死亡率已大大降低。然而,还远没有消灭,在许多地区仍十分流行。某些新的抗药性疟原虫株的出现,使药物治疗更为困难。因此,人们开始了许多新的研究,试图找出新的防治办法。对疟原虫裂殖子入侵红细胞的机理研究就是其中的一个方面。在疟原虫的生活史中,疟原虫裂殖子入侵红细胞的机理知道不多。近几年来,由于疟原虫体外培养技术的发展和红细胞膜生化研究的成就,在研究入侵机理方面有所进     

恶性疟原虫FCCl／HN株MSAl全基因编码区的体外扩增

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSA1)是抗疟疫苗的候选抗原之一。据已知的MSAl基因序列，自行设计合成了四对引物。应用PCR技术，分四段从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA中扩增出垒基因编码区序列。扩增产物经1．2％琼脂塘凝腔电泳鉴定．表明获得了正确的MSA1基因扩增片段。     

疟原虫如何识别红细胞

已知疟原虫的裂殖子侵入红细胞是感染疟疾的关键.此过程必须通过对红细胞表面上特异分子的识别来进行,而红细胞的唾液糖蛋白、血型蛋白A、B及C在识别过程中极为重要。但这些分子中的什么部位起着受体的作用呢?自然,存在于血型糖蛋白N-末端的N-乙酰葡萄糖胺是首选的对象。实验证明:N-乙酰葡萄糖胺能抑制疟原虫对红细胞的侵入。这种同种分子的竞争性作用,表明N-乙酰葡萄糖胺是实际的受体。     

抗恶性疟原虫单克隆抗体的分析

在二次成功的细胞融合中,我们共获得29株抗恶性症原虫(FCC—1/HN)McAb。其中针对裂植子和成熟裂殖体期原虫抗原的有11株,其余18株是对晚期滋养体和裂殖体特异的。体外抑制试验证明,只有针对裂殖子抗原的5株McAb具有明显的抑制活性,其中94D1和94C3株McAb无论是杂交瘤培     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端编码基因真核表？…

构建以恶性疟原虫红内期重要的疫苗候选抗原－裂殖子表面蛋白羧基端编码分子量４２０００蛋白的基因片段为外源基因的可用作候选核酸疫苗的真核表达载体。方法目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟，将恶性疟原虫ＦＵＰ株裂殖子表面蛋白１羧基端编码４２０００蛋白的基因片段用常规分子克隆方法，分别克隆入非分泌性真核表达载体ＶＲ１０１２和改建后的分泌型载体ＶＲ１０１２／ＴＡ中，通过ＰＣＲ和酶切鉴定出重组克隆。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端编码基因真核表达重组克隆的构建

目的构建以恶性疟原虫红内期重要的疫苗候选抗原——裂殖子表面蛋白１（ＭＳＰ１）羧基端编码分子量４２０００蛋白的基因片段为外源基因的可用作候选核酸疫苗的真核表达载体。方法目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟，将恶性疟原虫ＦＵＰ株裂殖子表面蛋白１羧基端编码４２０００蛋白的基因片段用常规分子克隆方法，分别克隆入非分泌性真核表达载体ＶＲ１０１２和改建后的分泌型载体ＶＲ１０１２／ＴＰＡ中，通过ＰＣＲ和酶切鉴定出重组克隆。结果成功地构建了真核表达载体ＶＲ１０１２／ＭＳＰ１－４２和ＶＲ１０１２／ＴＰＡ／ＭＳＰ１－４２。结论目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟红外期，该研究对研制有效的恶性疟原虫红内期核酸疫苗是一个有益的尝试。其免疫保护作用待进一步研究。     

巢式PCR在恶性疟原虫基因分型上的应用研究

巢式ＰＣＲ方法被应用于泰国疟区恶性疟原虫的基因分型，应用特异的等位基因引物扩增了恶性疟原虫裂殖子表面蛋白基因的１、４变异多态区，以凝胶电泳分析扩增的目的基因片段，结果表明；共分别检测出恶性疟原虫６个ＭＡＤ２０等位基因型，４个Ｋ和１个Ｒ０３３等位基因型。在９个月的流行季节，上述虫株的等位基因频率没有明显的改变，并存在较高程度的恶性疟原虫不同等位基因株的混合感染，本文进一步阐明了巢式ＰＣＲ技术在疟疾流     

恶性疟原虫海南株裂殖子表面蛋白MSP117区基因的测序及其核酸疫苗的构建

恶性疟原虫海南株裂殖子表面蛋白ＭＳＰ１１７区基因的测序及其核酸疫苗的构建①①本研究由联合国开发计划署／世界银行／世界卫生组织热带病研究和培训特别规划署（ＴＤＲ）资助ＩＤ．ＮＯ．９５０３８５作者简介：王晓晨，男，３１岁，助教，硕士；薛采芳，女，５８岁，...