雷帕霉素下调光老化成纤维细胞老化表型的初步研究

目的探讨雷帕霉素(RAPA)对紫外线照射导致的成纤维细胞(FBs)衰老和抗氧化应激的作用特点。方法采用CCK-8法检测不同浓度的RAPA对FBs活性的影响,甄选最佳应用浓度。利用紫外线体外反复照射构建成纤维细胞的老化模型。RAPA作用后,β-半乳糖苷酶染色法检测衰老细胞,利用DCFH-DA为荧光探针,用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)的水平。结果低浓度的RAPA对细胞的活性并无影响;与紫外线照射组组比较,RAPA+紫外线组的β-半乳糖苷酶染色阳性率下降了约40%,差异具有统计学意义(P0.05)。RAPA预处理可以明显降低紫外线照射细胞组ROS的产生。结论 RAPA可以降低光老化成纤维细胞ROS生成量,一定程度上缓解了紫外线照射导致的细胞光老化进程。     

PRP促进光老化人皮肤成纤维细胞胶原与透明质酸合成的研究

目的体外研究人皮肤成纤维细胞（HSFs）发生光老化时,富血小板血浆（PRP）对其合成胶原与透明质酸的影响。方法使用紫外线（UVA）照射体外培养的原代人皮肤成纤维细胞,并检测光老化细胞的细胞增殖情况及细胞倍增时间。用含不同浓度PRP（10%、30%、50%）的培养液培养光老化细胞,正常培养的光老化细胞为阴性对照,原代人皮肤成纤维细胞为阳性对照。ELISA检测各组细胞外液中胶原蛋白与透明质酸含量。结果经紫外线照射后,细胞增殖减弱,加入PRP后,伴随PRP浓度的增加,细胞倍增时间缩短;ELISA检测发现,经过UVA照射的成纤维细胞COL1、COL3及透明质酸合成量,显著低于正常培养的成纤维细胞（P〈0.01）。在PRP作用后,成纤维细胞的COL1、COL3及透明质酸合成量均明显增加（P〈0.01）。结论PRP能显著促进光老化人皮肤成纤维细胞胶原与透明质酸合成,可应用于皮肤抗衰老的研究。     

丹皮酚对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

目的探讨丹皮酚对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用。方法自2018年9月至2020年6月北部战区总医院烧伤整形科提取原代增生性瘢痕成纤维细胞后,将细胞平分为4组,分别采用0μmol/L(对照组)、50μmol/L、100μmol/L的丹皮酚及10μmol/L的5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理;CCK-8实验检测细胞处理后第0、3、5、7天的增殖情况。处理3 d后通过ELISA实验检测增生性成纤维细胞中活性氧基团或分子、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量;Western blot实验检测丹皮酚对于细胞中TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达情况。结果50、100μmol/L的丹皮酚和10μmol/L的5-FU分别作用于细胞3 d后与对照组相比,对于细胞增殖的抑制率分别为(32.63±3.06)%、(46.41±4.41)%和(45.32±9.26)%,组间比较差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。丹皮酚能够显著下调增生性成纤维细胞中ROS和MDA的表达情况,上调SOD的含量,降低TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达。结论丹皮酚能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长、减轻氧化应激损伤,下调TGF-β1和胶原的表达。     

UVB诱导人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原下调机制的研究

目的 观察紫外线对原代人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响并探讨其作用的分子机制.方法 使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,以不同剂量紫外线照射人皮肤成纤维细胞,倒置显微镜观察细胞形态学的改变;β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老试剂盒染色;western blot检测衰老标志物P16蛋白的表达;RT-PCR检测中波紫外线处理皮肤成纤维细胞不同时相Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变及对MMP1、MMP3的影响.结果 20～40 mJ/cm2 UVB单次照射后可以成功诱导人皮肤成纤维细胞出现衰老形态学的改变,β-gal染色阳性率达到约90%,P16蛋白表达随时相明显升高;紫外处理成纤维细胞后,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平明显降低;而MMP1、MMP3表达水平明显升高.结论 利用20～40 mJ/cm2中波紫外线照射可诱导人皮肤成纤维细胞衰老,不仅伴随Ⅰ、Ⅲ型胶原合成减少,而且通过升高MMP1、MMP3来降解已形成的Ⅰ、Ⅲ型胶原.以上数据表明,中波紫外线可以诱导人皮肤成纤维细胞衰老并在皮肤衰老过程中发挥重要作用,为了解及干预皮肤衰老过程提供了线索.     

光老化作用对体外人皮肤成纤维细胞的影响

目的 建立体外分离培养人皮肤成纤维细胞的光老化模型,观察研究中波紫外线对人皮肤成性纤维细胞的影响.方法 使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,并用免疫荧光特异性标记物鉴定证实,选择不同剂量的紫外线照射人皮肤成纤维细胞后,倒置显微镜观察细胞形态学的改变;β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老试剂盒染色;MTT检测不同剂量的紫外线照射对成纤维细胞增殖能力影响;western blot检测衰老标志物P16蛋白的表达.结果 组织块法成功分离获得人皮肤成纤维细胞,用20～60mJ/cm2 UVB单次照射后,可以成功诱导人皮肤成纤维细胞出现衰老形态学的改变,其增殖能力降至正常对照组的一半左右,β-gal染色阳性率约90%,衰老相关蛋白P16表达随时相明显升高.结论 20～60mJ/cm2中波紫外线照射人皮肤成纤维细胞可诱导人皮肤成纤维细胞衰老,为今后皮肤光老化的体外研究提供了参考.     

一氧化氮合酶对增生性瘢痕影响意义的研究

目的观察一氧化氮合酶（Nitrogen oxide synthetase，NOS）在增生性瘢痕与正常皮肤组织及细胞中的表达特征及其差别．并通过应用NO供体或NOS抑制剂对培养的瘢痕成纤维细胞进行体外药物干扰，探索NO、NOS在增生性瘢痕形成中的作用。方法取临床增生性瘢犍下．术病人的瘢痕组织及周围少许正常皮肤，体外培养获得皮肤和穰痕成纤维细胞．通过免疫细胞化学及RT—PCR方法比较两种组织及细胞中NOS的表达及分布的差异。分别以100～500μM的NO供体硝普钠（Sodium nitroprusside，SNP）、NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L—Arginine methyl，L-NAME）作用于瘢痕成纤维细胞，观察细胞增殖的变化；并用免疫细胞化学和RT—PCR方法比较作用前后成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化。结果免疫组化检测及RT—PCR方法检测显示增生性瘢痕组织及细胞中NOS表达相对于皮肤组织及成纤维细胞中明显减少（p〈0．05）。瘢痕细胞经SNP作用后，细胞增殖显著降低。免疫细胞化学方法和RT-PCR方法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原结果显示，从SNP200μM组开始Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著降低（p〈0．05）。经L—NAME200μM作用后，Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著增加（p〈0．05）。结论增生性瘢痕组织及细胞中NOS含量较正常皮肤组织及细胞明显减少，NO供体SNP对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及胶原表达起到抑制作用，NOS抑制剂L—NAME对其胶原表达则起到促进作用，结果提示NOS表达降低可能与瘢痕增生密切相关，因此改变NO的产生及NOS的活性可望调控瘢痕成纤维细胞的生物学行为．     

单核巨噬细胞集落刺激因子对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：研究单核巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GMCSF）对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,探讨其促进创面愈合的机制并为临床准确定量应用该因子促进创面愈合提供理论依据。方法：分别应用浓度为0、25、50、75、100、150ng/mlGMCSF培养液孵育离体培养的人皮肤成纤维细胞,作用24h后四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞的活性。选择最适浓度GMCSF干预细胞,用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期变化;应用ELISA检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况。结果：GMCSF在浓度为25～100ng/ml之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以50/ml最为显著;成纤维细胞在最适浓度GMCSF干预24h后,细胞大多处于DNA合成前期和合成期;与空白组比较,GMCSF组Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌明显增加（P〈0.01）,且Ⅰ、Ⅲ型胶原比值下降（P〈0.01）。结论：GMCSF在浓度为25～100ng/ml对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,且能刺激成纤维细胞合成大量Ⅰ、Ⅲ型胶原,这可能是其加速创面愈合的机制之一。     

阻断转化生长因子-β信号转导抑制成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成

目的研究阻断转化生长因子-β(TGF-β)受体的信号转导对正常皮肤成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的调控.方法组织块法体外培养皮肤成纤维细胞,加入缩短型TGF-βⅡ型受体的重组腺病毒(实验组,50 pfu/cell)或β-半乳糖苷酶重组腺病毒(对照组,50 pfu/cell),培养后行细胞计数和Westem Blot检测细胞增殖率和Ⅰ型胶原合成状况.结果缩短型TGF-βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达能有效抑制细胞增殖达34%～50%,并显著减少Ⅰ型胶原的合成.结论过度表达缩短型TGF-βⅡ型受体可以通过阻断TGF-β的信号转导来抑制成纤维细胞的细胞增殖和Ⅰ型胶原合成.     

不同浓度生长分化因子-5对内侧副韧带成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 观察生长分化因子-5(GDF-5)对内侧副韧带(MCL)成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响. 方法 体外培养10周龄SD大鼠MCL成纤维细胞,分别加入不同浓度GDF-5,分为4组:0 ng/mL组、10 ng/mL组、50 ng/mL组、100 ng/mL组,用CCK-8法测定细胞增殖能力,羟脯氨酸测试盒测定细胞总胶原含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测I与Ⅲ型胶原mRNA的表达. 结果 浓度为10、50、100 ng/mL的GDF-5均能增强MCL成纤维细胞的增殖能力,以100 ng/mL的GDF-5作用最显著,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).MCL成纤维细胞中加入GDF-5后,羟脯氨酸量增加,I型胶原mRNA表达增加,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),但Ⅲ型胶原mRNA表达组间比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 GDF-5可以促进MCL成纤维细胞增殖及胶原合成进而促进韧带损伤愈合.     

赛来昔布对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及β-catenin和C-myc表达的影响

目的 探讨赛来昔布对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及β-catenin和C-myc表达的影响.方法 用不同浓度(0、25、50、100、125μmol/L)及不同作用时间(24、48、72h)的赛来昔布作用于人瘢痕疙瘩成纤维细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,QRT-PCR、Western-blot检测体外培养的人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞中β-catenin和C-myc 的mRNA及蛋白表达.结果 CCK-8法显示,赛来昔布可显著抑制体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P ＜0.05),呈剂量和时间依赖性;QRT-PCR和Western-blot显示:①与体外培养的人正常皮肤成纤维细胞相比,体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,C-myc 及β-catenin蛋白的表达明显上调(P ＜0.05),而β-catenin mRNA表达未见明显增加;②不同浓度(0、25、50、100、125μmol/L)赛来昔布作用的体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,随着赛来昔布浓度增高,β-catenin和C-myc的表达逐渐降低,各组之间差别明显(P ＜0.05).结论 人瘢痕疙瘩的发生与Wnt信号通路异常密切相关;赛来昔布能通过Wnt信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,有望用于瘢痕疙瘩的临床治疗.     

人体不同部位正常皮肤成纤维细胞对机械张力反应的研究

目的探讨人体不同部位正常皮肤成纤维细胞对机械张力反应的差异。方法取色素痣切除患者自愿捐赠的背部和上臂内侧正常皮肤,应用组织块法体外培养成纤维细胞,取第5~8代细胞进行实验。将背部和上臂内侧正常成纤维细胞分别设实验组和对照组,实验组细胞采用多通道细胞应力加载仪加载周期性机械张力24、36、48 h;对照组细胞正常培养。各时间点加载结束后,倒置显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖活性;RT-PCR法检测细胞内整合素β1、P130Ca s(p130Crk-associated substance)、TGF-β1、Ⅰ型胶原a1链(collagen type Iα1 chain,COL1A1)m RNA水平;ELISA法检测Ⅰ型胶原和TGF-β1含量。对照组于培养对应时间取细胞进行以上观察。结果实验组加载后细胞均增殖旺盛,分布密集,排列呈一定方向性。加载24 h后,实验组背部及上臂内侧细胞增殖,整合素β1、P130Cas、TGF-β1 m RNA表达水平和TGF-β1含量比较,差异均无统计学意义(P0.05);加载36、48 h时,背部细胞以上检测指标均显著高于上臂内侧细胞,差异有统计学意义(P0.05)。实验组各时间点背部及上臂内侧细胞的COL1A1 m RNA表达水平和Ⅰ型胶原含量比较,差异均无统计学意义(P0.05)。对照组各时间点背部及上臂内侧细胞以上指标比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论背部和上臂内侧皮肤成纤维细胞对机械张力的反应不同,提示人体皮肤成纤维细胞的力学特征存在部位差异,可能导致不同部位增生性瘢痕的发生率不同。     

杜仲提取液对紫外线照射下真皮成纤维细胞保护作用的研究

目的:研究紫外线(UV)照射对真皮成纤维细胞功能的影响,观察杜仲提取液对紫外线照射下细胞的保护作用。方法:体外培养人真皮成纤维细胞接收长波紫外线或中波紫外线照射,同时加入杜仲提取液,检测细胞存活率,基质金属蛋白酶(MMP)-1和3的mRNA表达,以及Ⅰ型、Ⅲ型前胶原蛋白表达水平。结果:与未照射组相比,20J/cm~2UVA1和40mJ/cm~2UVB照射组可显著抑制细胞存活率、增加MMP-1和MMP-3mRNA水平、抑制Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白表达水平(P0.01)。照射同时加入1mg/ml杜仲提取液可以显著减少UVA1或UVB照射对细胞引起的上述改变(P0.05)。结论:杜仲提取液对UV照射所致真皮成纤维细胞的增殖损伤、胶原合成和分解代谢紊乱有保护作用,因而可以应用于防治皮肤光老化。     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型，Ⅲ型胶原合成和表达的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（tansforming gowth factor—beta 1,TGF—β1）对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成和表达的影响。方法：通过MTT法检测TGF-β1干预后成纤维细胞增殖活性,选择UVA照射剂量为15J／cm^2,联免疫法（ELISA）测定不同剂量即TGF—β1小剂量组（UVA＋TGF—β1 0．1ng／ml）、中剂量组（UVA＋TGF—β1 1ng／ml）、大剂量组（UVA＋TGF—β1 10ng／ml）处理后成纤维细胞清夜中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,半定量RT—PCR检测成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞,导致成纤维细胞增殖活性下降,给予不同剂量TGF-β1干预后,成纤维细胞增殖活性与UVA照射组比较,明显提高;成纤维细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量增加,成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达增强。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性;增加UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,增强成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,对皮肤成纤维细胞起保护作用。     

三维培养的人皮肤成纤维细胞的实验研究

目的探讨三维培养的人皮肤成纤维细胞的生物学特性,为其在皮肤组织工程中的应用提供进一步的实验依据。方法培养人皮肤成纤维细胞,制备鼠尾胶原;对人皮肤成纤维细胞进行三维培养,流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡,RTPCR检测TGFβ1、层粘连蛋白(fibronectin,Fn)mRNA的表达,电镜观察细胞的形态学特征。结果三维培养的人皮肤成纤维细胞增殖缓慢,未见明显细胞凋亡。RTPCR检测二维、三维培养的人皮肤成纤维细胞TGFβ1、FnmRNA的表达无明显差异。电镜观察细胞染色质多,细胞器丰富。结论三维培养的人皮肤成纤维细胞增殖缓慢,但生物学活性良好。     

TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究

目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细胞特异性蛋白分泌增加,TGF-β_1联合VEGF可作为构建组织工程韧带的生长因子选择。     

辣椒素抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨辣椒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖能力、胶原表达及迁移能力的影响,为辣椒素治疗瘢痕疙瘩提供依据。方法取人瘢痕疙瘩9例,胶原酶消化获取瘢痕疙瘩成纤维细胞,用含有0.5μg/L和5μg/L辣椒素的DMEM培养液培养细胞,常规DMEM培养液培养作为对照。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测周期变化,QPCR检测胶原和炎症因子等的表达水平,并以划痕实验检测细胞的迁移能力。结果辣椒素能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,阻滞细胞于G0/G1期,并抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤连蛋白的表达。此外,辣椒素还能降低瘢痕疙瘩细胞炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。但是,辣椒素对细胞的迁移能力没有影响。结论辣椒素能抑制体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力,并抑制其胶原和炎性因子等的表达。     

阻断转化生长因子—β信号转导抑制成纤维细胞增殖和I型胶质合成

目的：研究阻断转化生长因子-β（TGF－β）受体的信号转导对正常皮肤成纤维细胞增殖和I型胶原合成的调控。方法：组织块法体外培养皮肤成纤维细胞，加入缩短型TGF－βⅡ型受体的重组腺病毒（实验组，50pfu/cell)或β－半乳糖苷酶重组腺病毒（对照组，50pfu/cell)，培养后行细胞计数和Western Blot检测细胞增殖率和I型胶原合成状况。结果：缩短型TGF－βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达能有效抑制细胞增殖达34％－50％，并显著减少I型胶原的合成。结论：过度表达缩短型TGF－βⅡ型受体可以通过阻断TGF－β的信号转导来抑制成纤维细胞的细胞增殖和I型胶原合成。     

强脉冲光对成纤维细胞增殖与周期的影响

目的:研究强脉冲光对正常离体人皮肤成纤维细胞(fibroblast,FB)的生长活力、细胞增殖能力以及细胞周期变化的影响并探讨其可能的发生机制,为强脉冲光除皱提供可能的理论依据。方法:培养人皮肤成纤维细胞,应用MTT比色法、免疫组织化学的方法和流式细胞仪(FCN)分析技术,观察皮肤成纤维细胞经不同能量的强脉冲光照射后细胞的生长活力、细胞增殖能力以及细胞周期变化。结果:强脉冲光能促进体外培养人皮肤成纤维细胞增殖,FCN结果显示强脉冲光照射后,成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论:强脉冲光可促进正常成纤维细胞增殖和DNA合成,从而为强脉冲光面部美容除皱供理论依据。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

肝细胞生长因子对光老化成纤维细胞凋亡及周期的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对紫外线诱导皮肤成纤维细胞周期及凋亡的影响。方法建立光老化模型,皮肤成纤维细胞(FBs)经HGF处理后行倒置显微镜观察、细胞计数并予以流式细胞周期检测;以HGF预处理皮肤FBs 2 h,中波紫外线(UVB)照射诱导体外FBs细胞发生细胞损伤,Tunel染色试剂盒检测细胞凋亡。结果光老化模型建立后,UVB+HGF组细胞存活较UVB组增多(P0.05);HGF减少光老化成纤维细胞P53的表达,改善光老化FBs细胞周期分布;HGF能够减少UVB导致的FBs凋亡(P0.05)。结论 HGF可调控光老化细胞周期分布及减少细胞凋亡,在光老化治疗中具有潜在应用前景。