SDF-1/CXCR4在骨髓增生异常综合征患者中的生物学作用

本研究主要探讨骨髓增生异常综合征(MDS)及白血病患者中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在细胞凋亡、迁移和黏附中的作用及相关的信号转导。选取37例初发MDS患者〔低危组(IPSS≤1.0)22例,高危组(IPSS≥1.5)15例〕、10例初发白血病患者及14例良性贫血患者(作为对照组),通过流式细胞术检测骨髓CD34+细胞表面CXCR4的表达水平及CD34+细胞的凋亡情况。选取4例低危MDS患者和5例高危MDS患者,通过微孔细胞迁移实验检测SDF-1对细胞的趋化作用。通过CCK-8法检测SDF-1对细胞之间黏附能力的影响。结果表明,低危MDS组骨髓内CD34+细胞的凋亡率明显高于高危MDS组(21.33%vs 7.27%,p<0.001),同样低危MDS组骨髓内CD34+细胞的凋亡率明显高于白血病组(21.33%vs 7.53%,p<0.001),未发现CD34+细胞的凋亡率与患者年龄性别有相关性。SDF-1能够促进高表达CXCR4患者的细胞黏附于基质细胞并能诱导该细胞的迁移,诱导细胞形态发生极化,上述作用可以被G蛋白抑制剂pertussis toxin、PI3K抑制剂wortmannin及CXCR4拮抗剂AMD3100明显抑制;而对低表达CXCR4的患者细胞则无上述抑制作用。结论:SDF-1/CXCR4通过PI3K信号通路提高细胞的迁移及黏附能力,发挥抗凋亡作用,上述作用可以被PI3K途径抑制剂和G蛋白抑制剂所阻断。     

电刺激对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素信号通路的影响

目的:观察电刺激对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素相关信号转导通路的影响并探讨其内在机制。方法:取20只OLETF大鼠,分离趾长伸肌,按照抑制剂和电刺激干预的不同分为4组,分别为电刺激组、无电刺激组、compound C 电刺激组和compound C组。用Western印迹法测定骨骼肌中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(proteinkinase B,PKB/Akt)、细胞外信号调节激酶(extracel lular signal-regulated kinase,ERK)的表达和活性变化。结果:电刺激组骨骼肌细胞中磷酸化PI3K蛋白较无电刺激组显著增加(P<0.05),Akt磷酸化程度(p-Akt/Akt)较无电刺激组显著增加(P<0.01);而ERK磷酸化程度(p-ERK/ERK)与无电刺激组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。compound C 电刺激组骨骼肌细胞中磷酸化PI3K蛋白较compound C组显著增加(P<0.01),Akt磷酸化程度(p-Akt/Akt)较compound C组亦显著增加(P<0.01)。结论:电刺激诱导骨骼肌收缩可以直接或间接激活骨骼肌PI3K/Akt信号转导通路,这一过程不依赖于AMPK信号转导通路。     

重组人促红细胞生成素与骨髓间充质干细胞的迁移及黏附☆

背景:促红细胞生成素可促进内皮祖细胞的增殖分化并增强其黏附性。目的:观察重组人促红细胞生成素干预对人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力及相关细胞信号传导通路的影响。方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,使用重组人促红细胞生成素干预第6代人骨髓间充质干细胞。分别用PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002或p38MAPK通路特异激动剂anisomycin或ERK1/2通路特异抑制剂U0126预处理。结果与结论:重组人促红细胞生成素可使人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,抑制p38MAPK通路磷酸化水平,对人骨髓间充质干细胞的ERK通路和总Akt、总p38MAPK水平无明显影响。重组人促红细胞生成素作用组中迁移细胞数目显著高于对照组(P<0.01),黏附细胞数亦明显增加(P<0.01),PI3K/AKT通路特异抑制剂Ly294002预处理后重组人促红细胞生成素对迁移能力的作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对两种作用影响均不明显。提示重组人促红细胞生成素具有增强人骨髓间充质干细胞迁移和黏附能力的作用,其增强迁移能力的作用与激活人骨髓间充质干细胞的PI3K/Akt通路有关,但是它对黏附能力的作用与PI3K/Akt和p38MAPK通路均无关。     

趋化因子SDF-1及其受体对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨趋化因子受体CXCR4在人卵巢癌细胞中的表达及SDF-1/CXCR4系统与卵巢癌细胞恶性表现的关系.方法:采用RT-PCR检测卵巢癌细胞系SW626中CXCR4的表达,MTT法检测SW626细胞增殖能力的变化,通过体外微孔隔离室板(Transwell)检测SDF-1对SW626细胞迁移及CXCR4的封闭对其迁移的影响.结果:CXCR4 mRNA在SW626细胞呈阳性表达,抗CXCR4单克隆抗体(20 μg/mL)对SW626细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05),SDF-1可促进SW626细胞的迁移,CXCR4的封闭能抑制SDF-1对SW626迁移的这种促进作用(P＜0.05).结论:SDF-1及其受体CXCR4的相互作用可能在卵巢癌细胞增殖和迁移中发挥着重要作用,干扰SDF-1/CXCR4的相互作用可能成为治疗卵巢癌的一个有意义的靶点和策略.     

LncRNA FTH1P3通过调控PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移能力

目的 研究长链非编码RNA铁蛋白重链1伪基因3(LncRNA FTH1P3)在胃癌组织中的表达及临床意义,并探讨LncRNA FTH1P3通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移的作用机制。方法 收集胃癌和癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LncRNA FTH1P3在胃癌组织中的表达,分析LncRNA FTH1P3的表达与胃癌患者病理参数和预后的关系。常规培养胃癌细胞,分为si-NC组和si-LncRNA FTH1P3-1组、si-LncRNA FTH1P3-2组,采用LncRNA FTH1P3 siRNA转染胃癌细胞,qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA FTH1P3的表达;CCK8实验检测各组细胞增殖能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力;体内成瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力;Western blot检测各组细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化PI3K(pPI3K)、磷酸化AKT(pAKT)的表达。结果 LncRNA FTH1P3在胃癌组织中表达上调(P<0.05)。LncRNA F...     

高压氧对脑外伤外源性骨髓间充质干细胞归巢的影响

目的探讨高压氧治疗对脑外伤大鼠外源性骨髓间充质干细胞(BMSCs)归巢的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养BMSCs,应用流式细胞仪对第三代BMSCs表面标志CD_(29)、CD_(90)、CD_(45)、CD_(11b)进行鉴定,细胞膜荧光探针CM-DiI对BMSCs进行示踪处理。36只Sprague-Dawley大鼠分为假手术组(A组,n=6)、模型组(B组,n=6)、BMSCs移植组(C组,n=12)、高压氧+BMSCs组(D组,n=12),分别于移植后1 d、3 d取脑组织标本,冰冻切片,荧光显微镜下观察示踪后BMSCs归巢的数量和部位;Western blotting检测基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体CXCR4的蛋白表达。结果受伤侧大脑半球,尤其是受损脑组织周围,荧光标记BMSCs更为集中;同一时间点D组BMSCs归巢数量明显高于C组(P0.01);C、D组3 d时BMSCs归巢数量均明显高于1 d时(P0.01)。D组SDF-1、CXCR4的蛋白表达水平高于C组(P0.05)。结论高压氧治疗可以促进外源性BMSCs归巢至大鼠受损脑组织,其作用与SDF-1/CXCR4信号轴的表达增强相关。     

超声微泡对骨髓间充质干细胞CXC类趋化因子受体4表达的影响

目的探讨超声微泡（UM）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）CXC类趋化因子受体4（CXCR4）表达的影响及可能机制。 方法取雄性SD大鼠骨髓，将培养至第3代生长良好的BMSCs分为对照组、超声（US）组、UM组、UM+过氧化氢酶组（UMC组）、UM+AMD3100组（UMA组）、UM+抗CXCR4抗体组（UMCX组）。对照组不予特殊处理，US组采用频率为1MHz、强度为1W/cm2的US辐照30s，UM组在US组基础上加入微泡，UMC组在UM组基础上加入过氧化氢酶，UMA组在UM组基础上加入AMD3100，UMCX组在UM组基础上加入CXCR4抗体。采用qPCR和Western blotting技术测定对照组、US组、UM组及UMC组CXCR4 mRNA的转录和蛋白表达水平；干预后即刻、5min、15min，在显微镜下观察经Fluo-4/AM标记的对照组、US组、UM组BMSCs胞内荧光强度；采用迁移实验观察6组BMSCs向基质衍生因子-1α（SDF-1α）的趋化能力。 结果US组BMSCs CXCR4 mRNA转录和蛋白表达水平与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），但均低于UM组（P<0.05）；UMC组BMSCs CXCR4 mRNA转录和蛋白表达水平均较UM组低（P<0.05）。US组细胞内的荧光强度与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），但均低于UM组（P<0.05）。US组向SDF-1α的移行细胞数（22.4±2.2）与对照组（20.5±2.3）比较，差异无统计学意义（P>0.05），但均少于UM组（53.1±3.8）（P<0.05）；UMC组（35.2±3.1）、UMA组（32.5±2.8）和UMCX组（30.7±2.9）向SDF-1α的移行细胞数均较UM组减少（P<0.05）。 结论UM可以促进BMSCs CXCR4的转录和表达，增加BMSCs向SDF-1α的移行数，该效应可能与钙离子的内流增加有关。     

SDF-1/CXCR4通路在干细胞心肌梗死治疗中的研究进展

基质细胞衍生因子(SDF-1)最开始被认为是骨髓CD34+细胞的趋化因子,诱导干细胞从骨髓中向外周迁移。后续研究发现,SDF-1不仅存在于骨髓,心脏、骨骼肌、脑组织也可以分泌SDF-1。SDF-1结合其受体CXC chemokine receptor 4(CXCR4),形成SDF-1/CXCR4通路,启动细胞内信号转导系统,发挥多种生物学功能,近年来,大量实验表明,SDF-1/CXCR4在心肌梗死干细胞治疗中发挥重要作用,现就这一通路作一综述。     

基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4在进展期胃癌中的表达及意义

目的 研究趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体CXCR4与胃癌生物学行为的关系,探讨SDF-1/CXCR4轴在胃癌侵袭、转移中的生物学意义.方法 应用免疫组化EnVision两步法检测58例胃癌组织中SDF-1、CXCR4的表达.结果 (1)SDF-1、CXCR4在胃癌组的阳性表达率分别为87.9%、56.9%,显著高于切缘对照组的47.8%、30.4%,差异有显著性(P<0.05);(2)SDF-1和CXCR4的表达在淋巴结转移组高于无转移组(P<0.05),SDF-1、CXCR4表达程度与淋巴结转移、浆膜侵犯、临床分期指标相关(P<0.05);(3)SDF-1与CXCR4的表达呈正相关(P<0.05).结论 胃癌细胞SDF-1、CXCR的表达水平与胃癌的发生、侵袭及淋巴结转移密切相关,可作为预测胃癌淋巴结转移及预后的免疫病理学指标;胃癌细胞可能通过SDF-1/CXCR4生物轴促进肿瘤的浸润和转移,提示SDF-1可能是药物靶向治疗的重要靶点.     

电针对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马神经元自噬及IGF-1/PI3K/Akt通路的影响

目的 探讨电针对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马神经元自噬及胰岛素样生长因子1(IGF-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法 将108只新生大鼠随机分为假手术组、模型组、IGF-1组(0.2 mg/kg)、电针组、电针联合LY294002组(电针+PI3K抑制剂0.3 mg/kg),每组18只。采用左颈总动脉结扎和低氧处理2 h的方法构建新生大鼠HIBD模型(造模成功率为80%)。各组大鼠在手术清醒后和电针治疗结束后进行神经功能缺陷评分;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脑组织IGF-1的含量;苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理学变化;透射电镜观察细胞自噬情况;免疫荧光双标法检测自噬标志物与神经元特异性核蛋白(NeuN)的共定位表达;Western blot法检测海马组织PI3K/Akt通路、自噬相关蛋白的表达[PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、磷酸化p-Akt(p-Akt)、Beclin-1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ)]。结果 与假手术组相比,HIBD模型组大鼠海马中神经元损伤...     

ELA经PI3K/AKT和MARK通路促进MSCs增殖和迁移

目的:观察ELABELA(ELA)对骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,MSCs)增殖和迁移能力的影响,并探讨可能调控机制。方法:将体外培养的MSCs分为Control组、ELA处理组(50 n M、500 n M、5μM、10μM)。MTS法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移。Western Blot法检测Control组、5μM ELA、5μM ELA+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)组、5μM ELA+U0126(MARK通路抑制剂)组中AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、Cyclin D1的表达情况。结果:与Control组相比,ELA处理组(50 n M、500 n M、5μM)MSCs的增殖及迁移能力显著增加(P0.01),其中以5μM ELA处理MSCs增殖及迁移能力最佳;与Control组相比,5μMELA组p-AKT/AKT、p-ERK/ERK、Cyclin D1的蛋白水平显著增加(均为P0.01),然而此效应可被LY294002及U0126阻断。结论:5μM ELA处理MSCs增值及迁移能力最佳,此效应可能与激活PI3K/AKT通路及MARK通路相关。     

艾塞那肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的:研究艾塞那肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及涉及的信号通路。方法:艾塞那肽以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法测细胞数目,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)磷酸化程度。结果:艾塞那肽1、10 nmol/L作用24、48 h或100、1 000 nmol/L作用24、48、72、96 h,MCF-7细胞数目减少,但差异无统计学意义,艾塞那肽1、10 nmol/L作用72、96 h,MCF-7细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。艾塞那肽10 nmol/L作用96 h,S+G2/M期细胞数目减少(P<0.05),同时出现Erk1/2磷酸化程度下降、Akt磷酸化程度升高,但差异无统计学意义。结论:艾塞那肽1、10 nmol/L作用MCF-7细胞72、96 h,抑制细胞增殖,该作用未涉及Erk和PI3K/Akt信号通路。     

糖原合成酶激酶-3β介导心肌营养素-1对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用

目的 研究心肌营养素-1(CT-1)对心肌细胞急性缺氧复氧损伤的作用及信号通路.方法 本研究在江西省分子医学重点实验室完成.用改良的方法培养出生1～3 d的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞,根据实验要求分为5组:(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧组+CT-1组;(4)缺氧复氧组+CT-1+LY294002组(PIK3/Akt阻断剂);(5)缺氧复氧组+CT-1+助溶剂DMSO组.CT-1的质量浓度为10ng/mL,缺氧3 h,复氧3 h.MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(△ψm),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.心肌细胞磷酸化糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和PI3K蛋白检测用western blotting.以方差分析及q检验进行统计学分析.结果 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位(△ψm)下降[(40.55±4.25)vs.(86.28±7.15),P<0.01];磷酸化的GSK-3β和PI3K蛋白稍有增加.而CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升(87%),心肌细胞凋亡率及细胞内ROS显著减少,△ψm水平增加,磷酸化GSK-3β及PI3K蛋白水平明显增加.CT-1的作用能被PIK3/Akt阻断剂LY294002抑制,而助溶剂组则未观察到类似作用.结论 CT-1能保护缺氧复氧损伤的心肌细胞,且其作用依赖PI3K/GSK-3β信号通路的激活.     

基质细胞衍生因子-1与碱性成纤维细胞因子对体外骨髓间充质干细胞增殖、分化和趋化的影响

目的研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)与碱性成纤维细胞因子(bFGF)对比格犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、分化和趋化的的影响。方法分离培养和鉴定比格犬BMSCs,利用不同浓度SDF-1与bFGF分别对比格犬BMSCs进行干预,检测不同浓度SDF-1与bFGF对BMSCs的增殖作用,检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、碱性磷酸酶(ALP)、S100钙离子结合蛋白A4(S100A4)等成骨、成纤维相关基因以及C-X-C家族趋化因子受体4(CXCR4)趋化相关基因的表达。结果 SDF-1在100、200、300 ng/ml时对BMSCs均有促进作用,其中200、300 ng/ml的效果更为显著; bFGF在20、50、100 ng/ml时对BMSCs均有促进作用,其中50 ng/ml时细胞增殖最为显著。SDF-1和bFGF均可显著增强Ⅰ型胶原及S100A4的表达; bFGF增加Ⅲ型胶原及S100A4表达的作用较SDF-1更明显; bFGF可以抑制ALP的表达; SDF-1能够增加CXCR4的表达。结论 SDF-1和bFGF均能促进BMSCs的增殖,并刺激BMSCs向成纤维细胞方向分化,促使抑制牙周膜矿化的基因高表达。     

普伐他汀对H2O2诱导的人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的:探讨普伐他汀干预对H2O2诱导的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)凋亡的影响及其相关细胞信号传导通路。方法:应用普伐他汀干预体外培养的第6代人MSCs,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测作用前后ERK1/2、p38MAPK及PI3K/Akt通路蛋白的表达及磷酸化情况。将10μmol/L普伐他汀预处理人MSCs 1 h后,换用含1 mmol/L H2O2的完全培养基培养1 h,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;进一步在普伐他汀干预前用特异的细胞信号通路抑制剂或激动剂阻断或激活ERK1/2、p38MAPK及PI3K/Akt途径,观察其对普伐他汀作用的影响。结果:普伐他汀可使人MSCs的PI3K/Akt通路磷酸化水平升高,使p38MAPK通路磷酸化水平降低,而其对人MSCs的ERK1/2通路和总Akt、总p38MAPK蛋白水平无显著影响。普伐他汀能抑制H2O2诱导的人MSCs的凋亡(P<0.05),PI3K/Akt通路特异抑制剂Ly294002预处理后这种作用消失,p38MAPK通路特异激动剂anisomycin预处理对这种作用影响不显著。结论:普伐他汀可激活人MSCs的PI3K/Akt通路,抑制p38MAPK通路,并可抑制H2O2诱导的人MSCs凋亡。PI3K/Akt通路的激活参与了其抗凋亡作用的调控。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对结直肠癌细胞转移潜能的影响研究

目的探讨HOXA1基因反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌HCT116细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法将HCT116细胞分为:15μmol/L的HOXA1 ASODN处理组(ASODN组)、15μmol/L N-ODN处理的无关对照组(N-ODN组)、15μmol/L的HOXA1 SODN处理的正义对照组(SODN组)及正常对照组。Western blotting检测HOXA1、上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达。MTT法检测细胞活力。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。对比四组上述各指标。结果与其他三组相比较,HOXA1 ASODN组可明显下调HOXA1、N-cadherin、Vimentin、PI3K和pAKT蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达,抑制细胞活力、侵袭和迁移能力。结论 HOXA1基因反义寡核苷酸可明显降低结直肠癌细胞转移潜能,机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路,从而逆转上皮间质转化有关。     

miR-34a在人H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用及机制

目的探讨miR-34a对缺氧复氧损伤人H9C2心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法对数生长期人H9C2心肌细胞,随机分为正常对照组、缺氧复氧组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组。缺氧复氧组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组缺氧培养3 h、复氧培养4 h制备缺氧复氧模型;在缺氧培养前48 h,miR-34a激动剂组于培养基中加入摩尔浓度为50 nmol/L的miR-34a激动剂agomir,PI3K通道阻滞组在培养基中加入摩尔浓度为50 nmol/L的agomir和摩尔浓度为10μmol/L的PI3K特异性阻断剂LY294002,缺氧复氧组不作处理。正常对照组不制备模型,不进行药物干预。复氧培养4 h,4组采用TUNEL法检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测miR-34a mRNA、p-PI3K mRNA相对表达量;Western blot法检测心肌细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)蛋白、p-PI3K、p-Akt相对表达量。结果复氧培养4 h,正常对照组、miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞凋亡率[(20.00±2.14)%、(34.26±3.82)%、(58.58±5.69)%、(80.25±7.76)%]依次升高(P0.05);miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、正常对照组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞miR-34a mRNA(3.214±0.321、2.165±0.224、1.000±0.002、0.496±0.051)、p-PI3K mRNA(2.161±0.232、1.446±0.153、1.000±0.006、0.501±0.052)、p-PI3K(0.316±0.031、0.204±0.021、0.189±0.024、0.095±0.086)、p-Akt(0.586±0.062、0.306±0.032、0.182±0.021、0.071±0.008)蛋白相对表达量依次降低(P0.05);miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组、缺氧复氧组人H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白相对表达量(0.385±0.042、0.381±0.045、0.179±0.018)均低于正常对照组(0.832±0.062),caspase-3蛋白相对表达量(0.526±0.061、0.544±0.059、0.854±0.094)均高于正常对照组(0.518±0.021)(P0.05);缺氧复氧组人H9C2心肌细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组,caspase-3蛋白相对表达量高于miR-34a激动剂组、PI3K通道阻滞组(P0.05);miR-34a激动剂组与PI3K通道阻滞组人H9C2心肌细胞Bcl-2、caspase-3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-34a可抑制缺氧复氧损伤的人H9C2心肌细胞凋亡,其机制可能与促进PI3K磷酸化,活化PI3K/Akt信号通路,抑制细胞凋亡蛋白表达有关。     

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE) 3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达; Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高; PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P 0. 05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。     

心肌远隔缺血预适应通过SDF-1α/CXCR4途径保护兔心肌缺血/再灌注损伤的研究

目的:探讨远隔缺血预适应对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤保护作用及潜在机制。方法:成年雄性新西兰大白兔随机分成:(1)心肌缺血再灌注组(I/R组,n=6);(2)假手术组(Sham,n=6);(3)远隔缺血预适应(RIPC+I/R组,n=6);(4)SDF-1α/CXCR4阻断剂AMD3100+I/R组,(n=6);(5)AMD3100+RIPC+I/R组,(n=6)。ELISA检测外周血中SDF-1α;TTC检测心肌梗死面积;TUNEL检测细胞凋亡率;Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与Sham组相比,I/R组及RIPC+I/R组都可促进外周血中SDF-1α的释放,且后者的作用更显著(P0.05);RIPC+I/R及AMD3100+RIPC+I/R组可以不同程度缩小心肌梗死面积及降低心肌细胞凋亡率(P0.05),AMD3100+RIPC+I/R组与RIPC+I/R组相比,心肌梗死面积及细胞凋亡率均有所增加(P0.05)。结论:远隔缺血预适应可能通过SDF-1α/CXCR4信号通路对心缺血再灌注损伤心肌发挥保护作用。     

血清SDF-1、CXCR4水平与颞叶癫痫患者认知功能的相关性分析

目的探讨颞叶癫痫(TLE)患者血清中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及趋化因子受体4(CXCR4)水平与TLE患者认知功能的相关性。方法选取120例体检健康者(健康对照组)、126例TLE无认知障碍患者(TLE无认知障碍组)及132例TLE伴认知障碍患者(TLE伴认知障碍组),用酶联免疫吸附测定检测各组血清SDF-1和CXCR4水平;同时测定各组人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平,并采用简易智力状态检查量表(MMSE)进行认知功能分级,分析SDF-1、CXCR4水平与认知功能的相关性。结果TLE无认知障碍组和TLE伴认知障碍组患者血清SDF-1和CXCR4水平高于健康对照组,TLE伴认知障碍组的血清SDF-1和CXCR4水平高于TLE无认知障碍组,差异有统计学意义(均P<0.05);血清SDF-1和CXCR4水平与Aβ1-42水平呈正相关,与MMSE评分呈负相关(均P<0.05)。结论SDF-1和CXCR4血清水平能够反映TLE患者认知功能损害的程度,有望成为诊断TLE认知障碍程度的预警指标。