PTZ诱导孕鼠痫性发作对胎鼠海马中bax、bcl-2、capase-3表达的影响

目的探讨母鼠孕期痫性发作对胎鼠海马中bax、bcl-2、capase-3表达的影响。方法将雌性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、盐水组(NS组)和癫痫组(PTZ组),采用戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致痫模型,PTZ组大鼠每天给予腹腔下注射PTZ 35 mg/kg,点燃成功后将雌性SD大鼠与雄性SD大鼠合笼;发现阴栓记为孕0d,孕鼠继续孕前处理至孕20d。NS组腹腔注射相应剂量的生理盐水,NC组不做任何处理。Western Blot方法测定胎鼠海马组织中bax、bcl-2及caspase-3蛋白表达变化。结果 PTZ组胎鼠海马caspase-3蛋白(2.57±0.08)较NC组(0.53±0.13)明显升高(P<0.05);PTZ组胎鼠海马bax蛋白(3.24±0.32)较NC组(1.55±0.11)明显升高(P<0.05);PTZ组子鼠海马bcl-2表达水平(1.42±0.074)较NC组(2.45±0.07)明显降低(P<0.05)。结论孕期痫性发作使胎鼠海马促凋亡蛋白bax表达增加,抑凋亡蛋白bcl-2表达降低,凋亡执行蛋白caspase-3表达增加,推测孕期痫性发作可能使胚胎海马神经元凋亡增加。     

乌司他丁对创伤性脑水肿合并海水淹溺性肺水肿大鼠的治疗作用

目的 探讨乌司他丁对创伤性脑水肿(TBE)合并海水淹溺性肺水肿(PE-SWD)大鼠的治疗作用. 方法 32只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(8只)和治疗组(24只).脑侧方液压打击伤+气管内灌注海水建立大鼠TBE合并PE-SWD动物模型.伤后治疗组腹腔注射不同剂量(2500、50 000、100 000 U/kg)乌司他丁溶液1 mL,对照组腹腔注射1 mL生理盐水,伤后24 h观察脑、肺组织含水量变化,血清、脑组织、肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化以及脑、肺组织病理学变化. 结果 乌司他丁治疗后.TBE合并PE-SWD大鼠脑、肺组织含水量及血清、脑组织、肺组织IL-1β和TNF-α含量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);脑、肺组织病理学改变有明显减轻. 结论 乌司他丁可以减轻TBE及PE-SWD.其机制与抗炎作用有关.     

乌司他丁对糖尿病大鼠局灶性脑缺血的脑保护作用

目的探讨乌司他丁对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 (1)应用高剂量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作实验型2型糖尿病大鼠模型。(2)非糖尿病大鼠(n=30)和糖尿病大鼠(n=60)均制作大脑中动脉脑缺血模型。制模后局部大脑中动脉缺血30min后,再给予乌司他丁及24h再灌注。其中30只糖尿病大鼠在MCAO成功30min后,立即给予乌司他丁(100mg/kg,腹腔)。PCR检测凋亡诱导因子(AIF)评估细胞凋亡,免疫组化方法检测细胞色素C。结果乌司他丁治疗后糖尿病大鼠的凋亡相关蛋白和细胞色素C较无药物治疗的明显减低(P<0.05)。糖尿病合并MCAO大鼠的凋亡相关蛋白和细胞色素C较单纯的MCAO大鼠明显增加(P<0.05)。结论乌司他丁可能通过减少凋亡诱导因子、细胞色素C而改善糖尿病大鼠的脑缺血再灌注损伤。     

乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子表达及凋亡细胞数的影响

目的探讨乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子(AIF)表达及凋亡细胞数的影响。方法 54只SD大鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注组(对照组)、脑缺血-再灌注+乌司他丁治疗组(治疗组)。采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型。治疗组再灌注时,腹腔注射乌司他丁2万U/kg。采用免疫组化法检测大鼠脑组织细胞色素C表达,采用逆转录(RT)-PCR法检测大鼠脑组织AIF表达,采用原位末端标记法检测大鼠脑组织凋亡细胞数。结果对照组和治疗组大鼠脑组织皮质区细胞色素C、AIF的表达及凋亡细胞数均明显高于假手术组(均P<0.05),但治疗组大鼠脑组织皮质区细胞色素C、AIF的表达及凋亡细胞数明显低于对照组(均P<0.05)。结论乌司他丁抑制细胞凋亡可能与下调脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、AIF的表达,减轻线粒体损伤,抑制线粒体通路的凋亡途径有关。     

乌司他丁对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9活性的影响

目的 观察乌司他丁对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响.方法 采用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,腹腔注射乌司他丁,于脑缺血再灌注后6h、24h、48h、72h处死大鼠.通过测定损伤侧脑组织中伊文思蓝(EB)含鼍来观察BBB通透性的改变,用明胶酶谱法检测同侧脑部MMP-9活性变化.结果 脑缺血再灌注损伤后,大鼠EB含量增加,24h最明显;MMP-9活性明显升高,48h达高峰.乌司他丁处理组EB含量及MMP-9活性水平明显低于脑缺血再灌注组(P<0.05).结论 乌司他丁可抑制脑缺血再灌注后大鼠MMP-9的活性,减轻BBB通透性的破坏.     

经鼻给予TGFβ1对癫痫持续状态大鼠海马神经元的保护作用

目的探讨经鼻腔给予TGFβ1(transforming growth factor beta1,TGFβ1)对氯化锂-匹罗卡品所致癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元的保护作用及其潜在的机制。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为转化生长因子(TGF)组、匹罗卡品(Pilo)组和正常对照组(control)。建立氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型。应用TUNEL染色、Fluoro-Jade B(FJB)荧光染色法分别观察各组大鼠海马神经元的原位凋亡及变性死亡情况。采用免疫组化方法检测凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达。结果 SE后24h、48h、72h,TGF组大鼠海马FJB、TUNEL、caspase-3阳性细胞均较Pilo组显著减少(P<0.05);72h最为明显(P<0.01)。结论经鼻(IN)给予TGFβ1可以显著抑制或减轻癫痫持续状态大鼠海马神经元的变性与凋亡,从而发挥神经保护作用。其潜在的神经保护机制可能涉及下调caspase-3蛋白表达。     

乌司他丁对创伤性脑损伤的保护作用研究

目的探讨乌司他丁(UTI)对创伤性脑损伤的保护作用和具体机制。方法 BALB/c小鼠27只,随机分为空白组(shame组)、生理盐水对照组(control组)、损伤组(TBI组)和乌司他丁预处理组(UTI组)。利用小鼠神经功能评分(NSS)法判断乌司他丁的治疗作用;Western blot方法检测脑组织中cathepsin B蛋白表达变化情况。结果与shame组比较,TBI组的cathepsin B蛋白表达明显增加(P<0.05),UTI组cathepsin B蛋白表达显著减少(P<0.05);与空白组比较,UTI组能明显减轻神经功能障碍,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁预处理可能通过调控cathepsin B减轻细胞死亡,从而有效改善脑损伤后神经功能,具有显著的神经保护作用。     

乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注后海马NMDAR1表达的影响

目的探索乌司他丁对脑缺血再灌注大鼠海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)表达的影响。方法将72只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(I/R组)和乌司他丁干预组(U组)。采用线栓法阻断大脑右侧中动脉建立脑缺血损伤模型。U组于再灌注即刻腹腔注射乌司他丁20000 U/kg,再灌注3 h后进行神经功能评分(NDS),采用TUNEL法检测脑组织凋亡细胞数,RT-PCR检测NMDAR1 mRNA的表达水平,采用免疫组化染色计算平均光密度值(MOD)观察NMDAR1的表达。结果与S组(0)比较,I/R组(2.58±0.35)和U组(1.34±0.41)的NDS升高(P<0.05);与S组(0)比较,I/R组(52.10±3.25)和U组(26.40±2.70)的凋亡细胞数增加(P<0.05);与S组(0.8902±0.0136)比较,I/R组(1.0398±0.0211)和U组(0.9073±0.0142)NMDAR1 mRNA的表达上调(P<0.05);与S组(0.0066±0.0007)比较,I/R组(0.0594±0.0111)和U组(0.0068±0.0004)NMDAR1表达的MOD值升高(P<0.05)。与I/R组(2.58±0.35)比较,U组(1.34±0.41)的NDS降低(P<0.05);与I/R组(52.10±3.25)比较,U组(26.40±2.70)凋亡细胞数减少(P<0.05);与I/R组(1.0398±0.0211)比较,U组(0.9073±0.0142)NMDAR1 mRNA的表达下降(P<0.05);与I/R组(0.0594±0.0111)比较,U组(0.0068±0.0004)NMDAR1表达的MOD值降低(P<0.05)。结论乌司他丁减轻脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制NMDAR1表达有关。     

不同剂量乌司他丁对大面积脑梗死患者转化生长因子β1和预后的影响

目的观察不同剂量乌司他丁对大面积脑梗死患者转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和预后的影响。方法 74例脑大面积脑梗死患者随机分为3组,A组22例,进行重症监护、甘露醇脱水降颅压、抗血小板聚集、开颅手术、营养神经、抗感染、营养支持等综合治疗; B组27例,在此治疗基础上加用乌司他丁20万U/d治疗; C组25例,在此治疗基础上加用乌司他丁40万U/d治疗,观察3组患者治疗前和治疗10 d、20 d的TGF-β1水平差异,以及住院8周内的病死率。结果3组患者在治疗前TGF-β1水平无统计学差异,经过治疗10 d和20 d后,A组患者TGF-β1水平无明显改变,B组和C组有不同程度升高,且C组升高更多,差异均有统计学意义(P0. 05)。住院期间3组患者病死率无明显差异。结论乌司他丁能够提高大面积脑梗死患者的TGF-β1水平,且提高程度与剂量有关,但不能改善预后。     

经鼻给予TGFβ1对氯化锂-匹罗卡品诱导的SE大鼠海马神经元凋亡调控因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨经鼻给予TGFβ1(Transforming growth factor-beta1,TGFβ1)对氯化锂-匹罗卡品诱导的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元凋亡调控因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为TGF组、Pilo组和正常对照组(Control)。建立氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型。采用免疫组化方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果 (1)SE后24h、48h、72h,TGF组大鼠海马Bax阳性细胞均较Pilo组显著减少(P<0.05);72h最为明显(P<0.01)。HE染色是对各组大鼠海马神经元的形态结构变化的大体观察。(2)SE后24h、48h、72h,TGF组大鼠海马Bcl-2阳性细胞均较Pilo组显著增加(P<0.05);24h最为明显(P<0.01)。结论经鼻(IN)给予TGFβ1可以显著抑制癫痫持续状态诱导的大鼠海马神经元Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,从而发挥神经保护作用。     

右美托咪啶对创伤性脑损伤大鼠模型的神经保护作用实验研究

目的探讨右美托咪啶对创伤性脑损伤组织炎症与细胞凋亡影响。方法建立创伤性脑损伤大鼠模型,设置实验组和对照组,其中实验组予以右美托咪啶6μg/kg腹腔注射干预,对照组予以等量生理盐水腹腔注射,损伤后第3天和第7天,采用ELISA检测损伤组织内肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)浓度水平,Western-bolt分析损伤组织内凋亡信号关键蛋白caspase-3表达,TUNEL法观察损伤组织细胞凋亡情况。结果右美托咪啶处理可明显降低创伤性脑损伤组织内炎性因子TNF-α和IL-1β浓度(P0.05),减少凋亡信号关键蛋白caspase-3表达(P0.05),显著抑制创伤性脑损伤组织中神经细胞凋亡(P0.05)。结论右美托咪啶处理具有明显神经保护作用,其机制可能与减轻创伤性脑损伤组织炎性反应和抑制神经细胞凋亡有关。     

补阳还五汤和依达拉奉联用对小鼠急性脑缺血损伤后脑保护机制的研究

目的探讨补阳还五汤和依达拉奉联用对急性脑缺血损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响,探讨其可能的脑保护机制。方法将60只小鼠随机分假手术组、模型组、补阳还五汤组、依达拉奉组以及补阳还五汤+依达拉奉组,每组12只。采用改良线栓法制作小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,给予补阳还五汤及依达拉奉药物干预。分别于再灌注后1d和7d,采用TUNEL法观察小鼠脑皮质缺血区神经细胞凋亡率,采用免疫组化方法观察小鼠脑皮质缺血区B淋巴细胞瘤2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的阳性细胞数。结果与假手术组比较,模型组小鼠脑皮质缺血区凋亡指数升高(P0.01),且bcl-2、bax和caspase-3表达的阳性细胞亦均升高(P0.01);经补阳还五汤和(或)依达拉奉干预后,各药物组小鼠脑组织的凋亡指数及bax和caspase-3阳性细胞均较模型组下降(P0.01),而脑组织bcl-2阳性细胞均较模型组增加(P0.01),且补阳还五汤+依达拉奉联合用药组较单一用药组改变明显(P0.05)。结论补阳还五汤与依达拉奉联用能抑制脑缺血再灌注损伤后脑细胞中促凋亡蛋白bax、caspase-3的表达;促进具有神经元保护作用的bcl-2蛋白的表达,从而抑制神经细胞凋亡,协同发挥脑保护作用。     

人参总皂苷对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的 研究人参总皂苷对脑外伤大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨其抑制创伤性脑损伤(TBI)后继发性损伤的作用机制.方法 采用改良的Feeney自由落体法建立脑外伤模型,将Sprague-Dawley大鼠54只按照随机数字表法分为假手术组、脑外伤组、人参总皂苷治疗组(治疗组),每组18只.模型建立后24h处死大鼠,采用干湿重法测量脑水含量,光镜下观察尼氏染色海马细胞形态,凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法观察大脑皮质、海马神经细胞凋亡及凋亡基因bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达情况.结果 与脑外伤组比较,人参总皂苷治疗后的治疗组脑含水量明显减低,损伤侧海马病理学改变明显减轻,神经细胞凋亡减少,bcl-2的表达增高,bax、caspase-3的表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 人参总皂苷可以减轻脑外伤后继发性损伤,其机制可能是升高bcl-2的表达,抑制bax、caspase-3的表达,从而阻滞TBI后神经细胞凋亡.     

Ulinastatin attenuates isoflurane-induced cognitive dysfunction in aged rats by inhibiting neuroinflammation and β-amyloid peptide expression in the brain

ABSTRACT

Objective: Postoperative neurocognitive disease (PNCD) in the aged is a major clinical problem with unclear mechanisms. This study was designed to explore the mechanisms for ulinastatin (UTI) to attenuate isoflurane-induced cognitive decline in Fischer-344 rats.

Methods: The rats were divided into four groups: Control (0.9% saline only), Isoflurane (exposure to 1.2% isoflurane), Isoflurane-plus-UTI (exposure to 1.2% isoflurane followed by 100,000 U/kg UTI injection i.v.) and UTI-plus-isoflurane (i.v. of 100,000 U/kg UTI followed by 1.2% isoflurane exposure). After respective tests, the concentrations of tumour necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) in the brain were determined by ELISA the expression of β-amyloid peptide (Aβ) and cleaved caspase-3 were measured by Western blot. Ratio of apoptotic cells after Barnes maze challenge was assessed by TUNEL assay.

Results: In both Barnes Maze training and challenge, results indicated isoflurane-impaired learning capacity, while pre-and post-treatment with UTI could attenuate this phenomenon. The ratio of apoptotic cells and the expression of cleaved caspase-3 were increased after isoflurane exposure, indicating that isoflurane could induce neuronal apoptosis, while both pre- and post-treatment with UTI could diminish these effects. Moreover, UTI inhibited the expression of TNF-α, IL-1β and Aβ induced by isoflurane in rat brain harvested at 16 h after isoflurane exposure.

Conclusion: These results suggest that UTI inhibits neuronal apoptosis in rat brain by attenuating increased expression of Aβ₄₂ and inflammatory cytokines, which may contribute to its alleviation of isoflurane-induced cognitive dysfunction in rats. Moreover, UTI pre-treatment before isoflurane exposure showed more effective than post-treatment.     

乌司他丁对首次单纯二尖瓣机械瓣置换患者术后早期认知功能的影响

目的 探讨乌司他丁对首次单纯二尖瓣人工机械瓣置换患者术后早期认知功能的影响.方法 将40例老年单纯二尖瓣人工机械瓣置换患者随机分为对照组和实验组.实验组在麻醉诱导后开始恒速静脉输注乌司他丁6000U/kg~(-1)(30min内输完),然后以1000U/kg~(-1)/h~(-1)的速率持续静脉输注至手术结束,对照组则不使用乌司他丁.于CPB前(T1)、转流后60min(T2)、停机后60min(T3)、停机后360min(T4)抽取动脉血,测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)浓度.分别在术前1d和术后第10天对患者进行神经精神功能9项测验.结果 两组患者血浆TNF-α、IL-6和IL-10的浓度,在12～T4各时点与体外循环前比较均明显增加(P<0.01);T2～T4时点实验组血浆TNF-α和IL-6浓度明显低于对照组(P<0.01),IL-10浓度明显高于对照组(P<0.05).术后认知功能障碍发生率对照组为40%(8例)、实验组为15%(3例),实验组组明显低于对照组(P<0.05).结论 乌司他丁可以降低首次单纯二尖瓣人工机械瓣置换患者术后早期认知障碍的发生率,这可能与其抑制体外循环过程中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的释放、促进抗炎细胞因子IL-10的释放有关.

Abstract：

Objective To determine the effect of ulinastatin on early postoperative cognitive function to primary simple mitral valve replacement patients.Methods Forty adult patients suffered from primary simple mitral replacement were randomly divided into control group and study group.In study group,ulinastatin 6000U/kg in 50ml of normal saline was in fused intravenously over 30 min after induction of anesthesia followed by continuous infusion of ulinastatin at 1000 U/kg~(-1)/h~(-1) until the end of the operation.In control group.was not.The blood samples were collected at the same time point of preoperation(T1),60 min of cardiopulmonary bypass(T2),and 1h(T3),6h(T4)after eardiopulmonary bypass.Plasma concentration of IL-6,IL-10 and TNF-α were detected with ELISA.A battery of 9 neuropsychologieal tests Was performed and scored pre-operation and 10d after surgery.Results The plasma levels of IL-6,IL-10 and TNF-α in each group were significantly increased at T2,T3,T4.The plasma levels of IL-6 and TNF-α in study group were significantly lower than control group at T2,T3,T4.The plasma levels of IL-10 in study group were significantly higher than the levels in control group at T2,T3,T4.The incidence of postoperative cognitive dysfunction Was significantly lower in study group(40%)compared with the control group(15%)(P<0.05).Conclusions This study indicated that ulinastatin could reduce the incidence of postoperative cognitive dysfunction through the following mechanism through inducing the increased amplitude of plasma levels of TNF-α and IL-6,whereas enhancing the increased amplitude of the plasma IL-10 levels that resulted from CPB.     

基于PI3K/Akt通路探讨氯吡格雷对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用

目的基于磷酯酰激醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路探讨氯吡格雷对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用.方法建立脑缺血再灌注大鼠模型,随机分为模型组、氯吡格雷组、LY294002(PI3K抑制剂)组、氯吡格雷+LY294002组,每组12只,另取12只SD大鼠设为假手术组.分组处理后,所有大鼠进行神经功能缺损评分并尾静脉取血,处死大鼠,HE染色检测各组大鼠神经元病理情况;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑组织梗死面积;ELISA检测血清中中枢神经特异性蛋白(S100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白免疫印迹法检测脑组织中PI3K/Akt通路蛋白表达情况.结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织神经元出现坏死、核收缩变小等病理变化,神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中S100β、NSE、IL-6及TNF-α水平均明显升高(P<0.05),脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt明显降低(P<0.05);与模型组相比,氯吡格雷组大鼠神经元病理损伤减轻,神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中S100β、NSE、IL-6及TNF-α水平均降低(P<0.05),脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt升高(P<0.05);LY294002组大鼠神经元病理损伤加重,神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中S100β、NSE、IL-6及TNF-α水平均升高(P<0.05),脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低(P<0.05).与LY294002组相比,氯吡格雷+LY294002组大鼠神经元病理损伤减轻,神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中S100β、NSE、IL-6及TNF-α水平均降低(P<0.05),脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt升高(P<0.05).与氯吡格雷组相比,氯吡格雷+LY294002组大鼠神经元病理损伤加重,神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中S100β、NSE、IL-6及TNF-α水平均升高(P<0.05),脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt降低(P<0.05).结论氯吡格雷可通过激活PI3K/Akt通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,保护脑组织.     

腺病毒介导kallikrein基因过度表达对脑梗死周边区细胞凋亡的作用

目的 探讨激肽释放酶(kallikrein)对脑梗死周边区域缺血神经细胞凋亡的作用.方法 建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,将造模成功的30只大鼠采用随机数字表法分为以下几组:A组,空白对照组;B组,注射生理盐水;C组,注射pAdCMV-人类组织激肽释放酶(HTK):每组10只.观察每组大鼠处理前后神经功能损害评分(NSS),用免疫组化技术检测外源性HTK的表达,并通过TUNEL染色、RT-PCR检测细胞凋亡及凋亡因子bcl-2、bax、caspase-3 mRNA水平.结果 治疗后24h在C组中可见HTK表达阳性细胞并逐渐增多,72h后达高峰.与B组以及A组相比差异有统计学意义(112±6.1、68±4.2、59±3.9,P<0.05).治疗后72h,C组大鼠NSS神经功能评分明显低于B组以及A组(6.70±0.16、8.13±0.16、7.93±0.20,P<0.05);治疗后7 d差异更明显(5.14±0.18、7.82±0.14、7.91±0.10,P<0.01).凋亡神经细胞集中于梗死周边区,治疗后72h及7d时,C组平均TUNEL阳性细胞数较B组与A组明显减少(72 h:10.1±0.9、16.7±1.1、20.4±0.8;7 d:15.2±1.2、33.6±1.3、28.8±1.7,P<0.05).与B、A组比较,C组中bc1.2 mRNA水平增高不明显(P>0.05);治疗后72 h及7 d,bax与caspase.3 mRNA水平则明显降低(P<0.05). 结论 Kallikrein可能通过减少凋亡因子bax、caspase-3的表达,抑制脑梗死周边区域的神经细胞凋亡,从而达到保护缺血神经细胞,改善神经功能的作用.     

敲除let-7a减轻脑缺血再灌注后炎症反应和神经损伤

目的研究微小RNA let-7a在脑缺血再灌注后神经损伤中的作用及机制。方法将大鼠分为假手术组、对照组、anti-let-7a组和GFP组,每组各12只大鼠,假手术组大鼠为假手术组。对照组、anti-let-7a组和GFP组分别经尾静脉给予生理盐水、表达anti-let-7a的AAV-9质粒或者对照空质粒实验,然后通过线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型。模型建立24 h后,TTC法检测梗死体积,tunel法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3表达,ELISA和qRT-PCR检测脑组织中TNF-α和IL-6的表达。并通过Western blot、qRT-PCR和荧光报告基因验证let-7a对MKP1表达的调控。结果 anti-let-7a组大鼠脑梗死体积明显小于GFP组和对照组,脑组织内凋亡细胞数、caspase-3、TNF-α和IL-6的表达明显低于GFP组和对照组。let-7a可与MKP1 mRNA 3’UTR端结合,下调MKP1在PC12细胞中的蛋白表达。结论敲除let-7a可通过调控MKP1表达,抑制MAPK信号通路的激活从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应和细胞凋亡发挥神经保护作用。     

β-七叶皂甙钠对大鼠脑缺血-再灌注损伤炎症反应的影响

目的探讨β-七叶皂甙钠对脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法45只Wistar大鼠随机平均分为假手术组、生理盐水对照组和β-七叶皂甙钠治疗组。线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉,制备局灶性脑缺血-再灌注模型,在脑缺血2h、再灌注24h后,分别对各组大鼠的神经行为学变化评分,对缺血区白介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子（TNF-α）进行测定和分析。结果在脑缺血2h再灌注24h后治疗组与对照组相比,前者行为学评分优于后者（P〈0.05）,IL-1β和TNF-α含量降低（P〈0.05）。结论炎症反应参与了脑缺血-再灌注损伤,β-七叶皂甙钠可以降低缺血-再灌注后脑组织中的IL-1β和TNF-α含量,减轻梗死体积,减轻炎症反应,对局灶性脑缺血-再灌注损伤可能具有一定的保护作用。