抗核抗体荧光免疫检测质量控制方法的建立和应用

目的　研究荧光强度分析法检测抗核抗体 (ANA)的质量控制方法和质量控制标准及 ,并探讨其应用价值。方法　平行检测质控品 36次 ,分析其荧光强度值 ( x± 2s)和变异系数 (CV % ) ;以质控品荧光强度值在 x± 2s范围内为质量控制标准 ,在 3种荧光显微镜条件 (激发光和采图曝光时间不同 )下检测 1 0 0 0份ANA阳性血清的荧光强度 ,并进行对比分析。同一质控标准下分别用血清稀释法和荧光强度分析法检测 30 0 0份ANA阳性病人血清 ,比较两种方法的符合率 ,评估该质控方法的可靠性。结果　质控品的荧光强度值和CV分别为 1 0 6 6± 9 7和 4 6 %。在此质控标准下 ,1 0 0 0份ANA阳性血清在 3种荧光显微镜情况下的荧光强度值的差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;30 0 0份ANA阳性标本 ,用两种方法检测的总符合率为 99 4 % ,其中均质斑点型为 99 8% (998/ 1 0 0 0 )、均质型为 99 5 % (995 / 1 0 0 0 )、斑点型为 99 0 % (990 / 1 0 0 0 )。结论　用定值的质控品控制各个实验室的ANA检测结果 ,可以排除因荧光显微镜等实验条件的差异所导致的误差 ,使实验室间ANA结果准确可靠 ,具有可比性 ,因而可整体提高ANA检测质量     

100例荧光抗核抗体阳性结果分析

抗核抗体(Antinudear antjbody ANA)又称为抗核因子(Antinuckar factor ANF)，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，属自身抗体，抗核抗体的检测是自身免疫性疾病．特别是系统性红斑狼疮(SLE）以及结缔组织性疾病的实验室检查的主要项目之一。抗核抗体的检测方法很多，目前临床实验室以间接荧光免疫法为最常用。本文就间接荧光免疫法检测的100例荧光抗核抗体阳性结果作如下分析。     

血清抗核抗体荧光核型及抗核抗体谱检测在系统性红斑狼疮诊断中的应用价值分析

目的　研究抗核抗体（antinuclear antibody,ANA）荧光核型和抗体谱联合检测在系统性红斑狼疮（systemiclupus erythematosus,SLE）患者诊断中的应用价值。方法　对135 例SLE 患者、96 例非SLE 风湿性疾病患者与96 例健康体检者分别采用间接免疫荧光法（indirect immunofluorometric assay,IIF）和线性免疫印迹法（linearityimmunoblotting assay,LIA）检测血清中的ANA荧光核型和ANA谱,分析两种方法联合检测在SLE患者诊断中的应用价值。结果　SLE 病人ANA阳性率为99.3%,显著高于疾病对照组（75.0%）和健康对照组（4.5%）,差异有统计学意义（P<0.05）。ANA 荧光核型以核颗粒型为主（46.7%）,其次是核均质型（22.2%）,还有少量的胞浆型（13.3%）和均质胞浆混合型（11.1%）。ANA 谱分析发现双链DNA（double-strand DNA,dsDNA）抗体、抗低分子量核糖核蛋白（low-molecularribose nuclear protein,nRNP）抗体、抗核小体（nucleosome,NUC）抗体、Ro-52 抗体、SSA 抗体、抗核糖体P 蛋白（ribosme P protein, RIB）抗体、抗组蛋白（histone, HI）抗体、Smith（Sm）抗体和SSB 抗体九种抗体的敏感度均显著高于疾病对照组和健康对照组,两两比较差异均有统计学意义（χ2=6.60~83.74,均P<0.01）。其中dsDNA 抗体的敏感度和特异度分别为57.8% 和99.0%,nRNP 抗体的敏感度和特异度分别为48.9% 和95.8%,NUC 抗体的敏感度和特异度分别为40% 和99.0%,这三种抗体的敏感度和特异度都比较高。结论　① dsDNA 抗体、nRNP 抗体和NUC 抗体可以作为SLE 诊断的标志性抗体。② ANA 荧光核型分析敏感度高而特异度低,ANA 谱检测敏感度稍低而特异度高。这两种方法各有其优缺点,在临床工作中应把二者结合起来应用以利于SLE 的诊断和治疗。     

抗核抗体荧光模型与抗核抗体谱对应关系研究

目的探讨间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)荧光模型与ANA谱(包括抗ds DNA、抗RNP、抗Sm、抗SSa、抗SSb、抗Scl-70、抗Jo-1和抗rib-P)检测结果的对应关系。方法回顾性分析2010年1月-2013年12月间7 385例ANA荧光模型与ANA谱中8种特异性自身抗体之间的对应关系。ANA采用以人喉表皮样癌细胞为底物的间接免疫荧光法(IIF法)检测;ANA谱中的抗ds DNA采用以绿绳短膜虫为底物的IIF法检测,其他7种抗体采用纯化抗原的免疫条带法检测。结果 ANA荧光模型为颗粒型主要见于抗RNP、抗Sm、抗SSa及抗SSb(P<0.001);均质型主要见于抗ds DNA及抗SSa(P<0.001);核仁型、着丝点型、复合荧光模型主要见于抗SSa(P<0.05);胞浆型主要见于抗rib-P和抗SSa(P<0.05);而高尔基体型、核点型、周边型、肌动蛋白型、原肌球蛋白型、增殖细胞核抗原(PCNA)型、波形蛋白型荧光模型时8种自身抗体的检出率均较低甚至无法检出。当单纯抗ds DNA阳性时荧光模型为均质型出现频率高达77.91%(P<0.001);单纯抗RNP或抗SSa或抗Sm时为颗粒型出现频率分别为96.84%、52.01%和82.35%(P<0.001);单纯抗Scl-70阳性时均质型与核仁型2种复合荧光模型的出现频率达30.53%(P<0.001);抗rib-P和抗Jo-1阳性时胞浆型的出现频率分别为50.00%和61.54%(P<0.05),但单纯抗SSb阳性时并未发现优势荧光模型。结论 ANA荧光模型与ANA谱之间具有一定的规律。颗粒型、均质型、胞浆型荧光模型可对应多种自身抗体;而着丝点型、高尔基体型、核点型、周边型、肌动蛋白型、原肌球蛋白型、PCNA型、波形蛋白型8种临床常规检测的自身抗体的检出率均很低;抗ds DNA主要对应ANA均质型,抗RNP、抗SSa及抗Sm主要对应颗粒型,抗Scl-70主要对应均质核仁复合型,抗rib-P和抗Jo-1主要对应胞浆型,该结果可为临床医生检验项目申请及实验室结果核对提供依据。     

818例自身免疫病抗ENA抗体与抗核抗体的对照分析

目的比较抗核抗体(ANA)荧光核型与抗可提取性核抗原(ENA)抗体结果之间的相互关系。方法ANA采用间接免疫荧光法检测,抗ENA抗体采用免疫印迹和免疫双扩散法检测,检测结果采用双盲对照比较分析。结果818例抗ENA抗体阳性中ANA的总阳性率97.4%,但有6.4%(8/125)针对分子量60000的SSA抗体和30.0%(3/10)抗Jo-1抗体阳性的标本ANA阴性。抗ENA抗体中抗Sm、U1-RNP抗体阳性时有94.4%(51/54)显示为ANA单纯的斑点型或合并有其他核型;抗SS-A、SS-B抗体阳性时核型较分散,斑点型占75.4%(49/65);抗Scl-70抗体阳性时以核仁型为主,阳性率为68.6%。82例斑点型ANA阳性病例中抗ENA抗体常规6项阳性率为67.1%(55/82)。结论ANA目前作为风湿免疫病的筛查实验还有欠缺,宜与抗ENA抗体同时检测。抗ENA抗体阳性时并非都与ANA斑点核型有关,需具体分析;ANA斑点型阳性时,抗ENA抗体常规项目可以为阴性,可扩大抗ENA抗体的检测范围。     

抗核抗体荧光核型在原发性胆汁性胆管炎和自身免疫性肝炎筛查中的作用评估

目的探讨国际抗核抗体荧光核型共识(ICAP)所定义的荧光核型在原发性胆汁性胆管炎(PBC)和自身免疫性肝炎(AIH)患者筛查中的作用。方法纳入106例PBC和138例AIH患者作为研究对象。用HEp-2细胞为底物的间接免疫荧光法(IFA)检测血清抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)和抗平滑肌抗体(ASMA),免疫印迹法检测自身免疫性肝病相关特异性抗体,用酶联免疫法检测抗肌动蛋白IgG抗体。以ICAP所定义的30种荧光核型(AC-0～AC-29)为判读标准,比较AMA、AMA-M2和M2-3E在胞浆网状/线粒体样型(AC-21)和其他胞浆颗粒型(AC-18/19/20)中的检出率;抗Sp100和抗PML抗体在核多点型(AC-6)和核少点型(AC-7)中的检出率;抗gp210抗体在点状核膜型(AC-12)和光滑核膜型(AC-11)中的检出率以及ASMA、抗F-肌动蛋白抗体在胞浆线性/肌动蛋白型(AC-15)和其他胞浆纤维型(AC-16/17)中的检出率。结果 PBC患者ANA荧光核型单一和混合检出率分别为37.7%和53.8%,检出率最高的单一核型为AC-21(13.2%),复合核型为AC-3合并AC-21(13.2%)。AIH患者ANA荧光核型单一和混合检出率分别为43.5%和25.4%,检出率最高的单一核型为细颗粒型(AC-4)[14.5%(20/138)],复合核型为AC-12合并AC-21[8.0%(11/138)]。PBC患者AMA、AMA-M2和M2-3E在AC-21中检出率分别为90.7%(49/54)、87.0%(47/54)和94.4%(51/54),显著高于胞浆细颗粒型(检出率25.0%)和除胞浆颗粒型以外其他荧光核型中的检出率(15.8%～36.8%);抗Sp100和抗PML抗体在AC-6核型中检出率分别为90.9%(10/11)和36.7%(4/11),明显高于其在AC-7中的检出率25%(1/4)和0%(0/1);抗gp210抗体在AC-12中检出率为95.2%(25/26),在其他核型中检出率为21.1%(15/71);PBC患者中未检出AC-15,AIH患者中AC-15检出率为1.5%(2/138),ASMA和抗F-肌动蛋白抗体在AC-15中检出率分别为50.0%(1/2)和100%(2/2)。结论 AC-21、AC-12和AC-6荧光核型在自身免疫性肝病筛查中有重要意义,实验室应重视上述核型的判读。     

抗核抗体的实验室检测进展

随着生物医学技术的迅速发展和抗核抗体（ANA）检测的临床推广应用,ANA的实验室检测新技术不断涌现,如间接免疫荧光法（IIF）检测ANA的自动化技术、其他免疫学技术检测ANA及其特异性自身抗体等。上述进展对ANA的实验室检测及其规范应用带来新的机遇和挑战。     

抗核抗体与抗ENA抗体的相关性分析

目的 探讨抗核抗体(ANA)荧光核型与抗可提取性核抗原(ENA)抗体不同项目阳性结果 之间的相关性.方法 抗核抗体采用间接免疫荧光法检测,抗ENA抗体采用欧蒙免疫斑点法检测.采用双肓对照法对比分析243例抗ENA抗体(抗nRNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70和Jo-1抗体)阳性的病例ANA的荧光核型.结果 243例抗ENA抗体阳性的病例,ANA的阳性率为91.8%.主要以核浆颗粒型(包括细、粗颗粒)为主,约为51.0%(124/243),抗SS-A单独阳性时核型比较分散,核浆细颗粒型占28.3%(36/127).核浆粗颗粒型占19.7%(25/127).抗nRNP/Sm单独阳性时以核浆粗颗粒型为主,阳性率为56.3%(18/32).另外,350例ANA阳性病例中抗ENA抗体常规6项阳性率为63.7%(223/350).结论 抗ENA抗体阳性时并非都与ANA核浆颗粒型有关,抗核抗体(ANA)荧光核型与抗可提取性核抗原(ENA)抗体类型没有绝对的规律可言.随着对自身抗体的深入研究.目前抗ENA抗体谱的检测项目还有待进一步扩展.     

自身免疫性疾病中抗核抗体与抗ENA抗体的相关性分析

目的探讨抗核抗体(ANA)荧光核型与抗可提取性核抗原抗体(ENA)之间的相关性。方法 ANA采用间接免疫荧光法检测,抗ENA抗体采用德国欧蒙公司免疫斑点法检测,检测结果采用双盲对照法分析。结果 132例抗ENA抗体阳性病例ANA的阳性率为93.9%,荧光核型主要以颗粒型为主。另外检测的103例ANA阳性病例中,抗ENA抗体常规6项阳性率为78.6%。结论抗ENA抗体类型与ANA荧光核型之间没有绝对的规律,临床检测自身抗体时需将两者结合分析。     

抗核抗体与抗ENA抗体的相关性分析

目的探讨抗核抗体（ANA）荧光核型与抗可提取性核抗原（ENA）抗体不同项目阳性结果之间的相关性。方法抗核抗体采用间接免疫荧光法检测．抗ENA抗体采用欧蒙免疫斑点法检测。采用双肓对照法对比分析243例抗ENA抗体（抗nRNP／Sm、Sm、SS—A、SS—B、Scl-70和Jo-1抗体）阳性的病例ANA的荧光核型。结果243例抗ENA抗体阳性的病例,ANA的阳性率为91．8％。主要以核浆颗粒型（包括细、粗颗粒）为主。约为51．0％（124／243）,抗SS—A单独阳性时核型比较分散,核浆细颗粒型占28．3％（36／127）,核浆粗颗粒型占19．7％（25／127）。抗nRNP／Sm单独阳性时以核浆粗颗粒型为主,阳性率为56．3％（18／32）。另外．350例ANA阳性病例中抗ENA抗体常规6项阳性率为63．7％（223／350）。结论抗ENA抗体阳性时并非都与ANA核浆颗粒型有关,抗核抗体（ANA）荧光核型与抗可提取挂核抗原（ENA）抗体类型没有绝对的规律可言。随着对自身抗体的深入研究．目前抗ENA抗体谱的检测项目还有待进一步扩展。     

979例自身免疫性疾病抗核抗体与抗ENA抗体联合检测的结果分析

目的回顾本实验室开展抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)与抗可提取性核抗原(extractable nuclear antigens,ENA)抗体联合检测的情况,分析两者之间的相关性,并探讨联合检测在自身免疫性疾病中的应用价值。方法间接免疫荧光法检测ANA,生物芯片技术检测抗ENA(ds-DNA、Sm、SS-A/Ro、SS-B/La、u1RNP、Scl-70、Jo-1、RibosomalP)抗体,并采用双盲法分析ANA阳性标本的荧光核型与抗ENA抗体的关系。结果979例临床标本中,ANA阳性的标本数为400例,阳性率为40.9%(400/979)。荧光核型主要是核颗粒型(249例)、核均质型(83例)、胞浆颗粒型(30例),同时对979例标本进行抗ENA抗体的检测,阳性标本数为199例,阳性率为20.3%(199/979),只有1例阳性出现在ANA阴性的标本中。在400例ANA阳性的标本中,抗ENA抗体的阳性率为49.5%(198/400),出现较多的阳性抗体是抗SS-A/Ro(133例)、抗RibP(78例)、抗u1RNP(70例)、抗ds-DNA(61例)、抗SS-B/La(40例)等抗体,主要与颗粒型荧光相关。而均质型ANA标本中,常见的抗ENA抗体是抗ds-DNA(37例)、抗SS-A/Ro(27例)、抗Jo-1(20例)、抗RibP(20例)等抗体。结论不同荧光核型的ANA与抗ENA抗体之间的关系有各自的特点。用间接荧光法筛查ANA,并联合抗ENA抗体谱进行分型,可以确定部分ANA靶抗原的类型,进一步扩展抗ENA抗体谱,才能准确确定靶抗原。     

抗核抗体筛查试验与特异性抗体确认试验的相关性研究

目的 分析探讨抗核抗体(ANA)筛查试验与特异性抗体确认试验的相关性.方法 用间接免疫荧光法(IIF)作为ANA筛查试验,用免疫印迹法(LIA)作为抗核抗体谱(ANAs)特异性抗体确认试验,对500份临床就诊患者血清标本进行检测分析,并根据IIF-ANA和LIA-ANAs检测结果分为4组(IIF-ANA~+/LIA-ANAs~+组、IIF-ANA~+/LiA-ANAs~-组、IIF-ANA~-/LIA-ANAs~+组、IIF-ANA~-/LIA-ANAs~-组).同时收集IIF-ANA~-/LIA.ANAs~+组标本,使用ELISA、双向免疫扩散法(DID)进行特异性抗体复查.结果 500份患者的标本中IIF-ANA~+/LIA-ANAs~+组为247份,IIF-ANA~+/LIA-ANAs~-组为86份,IIF-ANA~-/LIA-ANAs~-组为152份,IIF-ANA~-/LIA-ANAs~+组为15份.IIF-ANA~+/LIA-ANAs~+组中IIF-ANA滴度以≥1:1 280为主,占48.2%,1:80-1:160占23.9%,1:320-1:640占27.9%.在167例IIF.ANA~-患者中LIA-ANAs~+占9.0%(15/167),15份IIF-ANA~-/LIA-ANAs~+标本中:包括11份抗SSA抗体和抗R052抗体阳性,并与ELISA、DID法复查结果基本一致;抗组蛋白(Histone)、抗Scl-70、抗Jo-1、抗线粒体-M2(AMA-M2)抗体阳性各1份.LIA-ANAs与ELlSA、DID的阳性符合率为100%、69%.且IIF-ANA~-/LIA-ANAs~+组患者经临床资料分析明确诊断自身免疫病(AID)者为8例.86份为IIF.ANA~+/IJA.ANAs~-的标本,以1:80～1:160的滴度为主(50.0%),荧光模式以均质型(H)为主(36.1%),其与IIF-ANA~+/LIA-ANAs~+组比较[1:80～1:160的滴度占23.9%,荧光模式均质型(H)占17.0%],差异有统计学意义(χ~2=20.47、12.42,P均<0.05).结论 ANA临床检测中町先以筛查试验进行检测,若阳性,再进行特异性抗体确认试验.但足,对于临床疑似AID的患者,无论ANA初筛试验阴性与否,均需进行各种针对特异性抗体的确认试验;各种特异性抗体的确认试验不能完全替代ANA的筛查试验.     

原发性胆汁性肝硬化患者抗核抗体荧光核型的表现及意义

原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中可出现抗线粒体抗体(AMA)和抗核抗体(ANA),其中AMA与PBC密切相关,是诊断PBC的重要血清学指标[1]。本研究采用间接免疫荧光法(IIF)检测45例PBC患者的ANA,探讨PBC患者的ANA荧光核型表现及其对PBC诊断的意义。1材料与方法1.1研究对象PBC组包括2002~2004年住院及门诊的PBC患者45例,17例来自本院,28例来自北京佑安医院(由欧蒙公司获取并赠送,下同),其中男8例,女37例,年龄(38±9)岁。自身免疫性肝炎(AIH)组包括2002~2004年住院及门诊的AIH患者27例,6例来自本院,21例来自北京佑安医院,其中男…     

抗核抗体谱检测的室间质量评价

目的 评价全国临床实验室检测抗核抗体谱的能力。方法 每年进行2次室间质量评价，每次发放5支质评样本；要求各临床实验室在规定时间内检测，并回报检测结果、所用检测方法、仪器和试剂资料；卫生部临床检验中心对各实验室的结果进行统计分析，最后将结果反馈给各实验室。结果70％以上的实验室采用间接免疫荧光法测定抗核抗体谱，2003-2005年的阳性符合率分别为94．1％、93．0％和98．6％。对单一核型，包括均质型、颗粒型等检测结果符合率明显高于混合核型的检测。阳性样本，各实验室回报的滴度存在很大差异。可提取性核抗原抗体谱的检测方法主要有酶联免疫吸附法、间接免疫荧光法和免疫印迹法，采用免疫印迹法的实验室占90％以上，检测结果符合率存在明显差异。抗双链DNA（抗dsDNA）抗体检测整体成绩均接近或超过90％。结论 抗核抗体的检测还有待于标准化。通过抗核抗体谱临床检验实验室间质量评价，可及时发现参评实验室检测中存在的问题，促进实验室不断提高检测质量。     

抗核抗体与抗β2糖蛋白-1抗体水平的相关性研究

目的 探讨抗核抗体(ANA)阳性患者是否存在更高的血栓或病理妊娠风险.方法 收集2019年5月至2020年8月该院检验科常规检测ANA谱的新鲜血清标本125例,其中ANA阳性患者(ANA阳性组)标本80例,ANA阴性患者(ANA阴性组)标本45例.采用化学发光免疫分析法分别进行抗β2糖蛋白-1(β2GP-1)抗体定量检...     

抗核膜抗体阳性患者在送检抗核抗体中的临床意义

目的 探讨抗核膜抗体(ANEA)在临床连续送检抗核抗体(ANA)标本中的阳性率及其临床意义.方法 回顾性分析该院门诊和住院患者连续送检的107937例ANA检测标本,对荧光模型判读为ANEA阳性的患者进行临床资料收集与分析.另选取50例ANEA阴性但ANA阳性的患者和65例健康体检者作为疾病对照组和健康对照组,分析AN...     

系统性红斑狼疮抗ENA抗体及抗核抗体的检测

系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）是一种慢性多系统的疾病。伴有多种血清自身抗体的出现，我们采用免疫印迹法技术，对３０例ＳＬＥ病人和２０例正常人进行了抗ＥＮＡ抗体和ＡＮＡ的测定，测定结果，抗ｓｍ１０例为３３．３％，抗ｕｉＲＮＰ抗体８例为２６．６％两者混合型１１例为３６．６％，１例阴性。２０例正常人为阴性。     

新疆地区564例抗核抗体阳性结缔组织病患者的荧光核型及靶抗原分析

摘要：目的：了解新疆地区结缔组织病（CTD）患者血清中抗核抗体（ANA）荧光核型、靶抗原与CTD之间的相关性。 方法：采用间接免疫荧光法（IIF）检测ANA荧光核型;采用免疫印迹法和酶免疫法检测抗核抗体谱和自身抗体。 结果：新疆地区564例ANA阳性CTD患者中,ANA荧光核型有单一及复合核型。单一核型中核颗粒型最多见（靶抗原依次为SSA、nRNP、Sm）,其次核均质型（靶抗原依次为dsDNA、核小体和组蛋白）。复合核型中,双核型以核颗粒型+核均质型,核颗粒型+胞浆颗粒型组合为主。三核型以核颗粒型+核均质型+胞浆颗粒型常见。在荧光核型、靶抗原及疾病关系分析结果中发现：SLE患者单核型以核均质和核颗粒最常见,双核型以核颗粒+核均质、核颗粒+胞浆颗粒组合常见,三核型为核颗粒、核均质、胞浆颗粒同时出现。另外抗核糖体P蛋白以往引起胞浆颗粒荧光,而本研究中核颗粒型检出率为27.03%。抗着丝点抗体在SLE、原发性胆汁性肝硬化（PBC）、硬皮病及重叠综合征中均能检出。 结论：新疆地区CTD患者血清ANA荧光核型呈现多样性。以核颗粒为优势核型;靶抗原SSA不仅可以引起经典的核颗粒荧光,还可呈现核均质、核仁型、胞浆颗粒型荧光。核糖体p蛋白呈现核颗粒型荧光。抗着丝点抗体具有较宽的疾病谱;SLE患者荧光核型呈现多样性,自身抗体谱广于其他自身免疫性疾病（AID）。