结核分枝杆菌分子生物检测及常规痰涂片检测结核菌对比研究

目的研究分子生物检测及常规痰涂片检测对结核分枝杆菌(MTB)和耐药性影响。方法选取我中心2019年至2021年就诊的患者160例,将患者分为疑似肺结核患者(A组)、活动性肺结核住院患者(B组)。A组进行L-J、FQPCR和LAMP三种检测,以结核杆菌培养结果作为金标准,并对三种方法的病原学效果进行了统计;B组则用L-J及绝对浓度法固体药敏试验、LPA和Gene Xpert三种测试,并对病原学和药敏结果进行了分析。结果以结核杆菌培养结果作为金标准,A组患者三种联合检测方法的阳性率分别高于L-J、FQ-PCR、LAMP三种单独方法检测的阳性率,差异均显著(P<0.05);B组三种联合检测方法的阳性率分别高于L-J、LPA、GeneXpert三种单独方法检测的阳性率,差异均显著(P<0.05)。A组90例患者采用L-J、FQ-PCR和LAMP 3种方法单独化验痰标本一致性情况Kappa值分别是0.579、0.612和0.641。B组70例患者采用L-J及绝对浓度法固体药敏试验、LPA和Gene Xpert 3种方法单独化验痰标本一致性情况Kappa值分别是0.416、0.498、0.652。结论分子生物学检测大大推动了结核病的诊断效能,临床上MTB病原学的各项目检测中具有可接受的一致性,结核病诊治水平在运用分子生物学检测后得到了进一步提高:联合检测阳性率较高,药敏成绩一致性较好,值得推广。     

LAMP法在肺结核患者痰标本中的应用评价

目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核患者痰标本中的应用。方法收集该院2016年12月至2017年4月门诊及住院诊断为肺结核且抗结核治疗涂片阳性的患者痰标本75份、涂片阴性患者痰标本72份,每份痰标本同时进行LAMP法结核分枝杆菌复合群核酸快速检测、罗氏固体(L-J)培养,分别计算LAMP法及L-J培养的阳性率。结果 75份痰涂片抗酸染色阳性标本中,LAMP法检测阳性75份,L-J培养阳性64份,LAMP法阳性检出率[(100%)75/75]显著高于L-J培养阳性检出率[(85.3%)64/75],且差异具有统计学意义(χ2=9.09,P0.05)。72份痰涂片抗酸染色阴性标本中,LAMP法检测阳性23例,L-J培养阳性12例;与痰涂片阴性标本比较,LAMP阳性检出率[31.9%(23/72)]显著高于L-J培养阳性检出率[16.7%(12/72)],且差异具有统计学意义(χ2=6.67,P0.05)。结论 LAMP法具有较高的灵敏度及特异度,对结核分枝杆菌的阳性检出率高于痰涂片和L-J培养,且LAMP法具有快速、简便、准确的特点,可用于临床上早期发现结核病患者。     

环介导等温扩增技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌

目的建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肺结核患者痰标本和分枝杆菌阳性培养物中的结核分枝杆菌(MTB)。方法选择临床可疑肺结核患者痰标本121份、MTB阳性分离物14份,非结核分枝杆菌(NTM)阳性分离物14种共31株,用涂片抗酸染色镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP技术分别进行检测,用LAMP技术对人MTB标准菌株H37Rv及卡介苗(BCG)进行检测,判断LAMP检出限并评价敏感性和特异性。结果涂片法抗酸杆菌检出率为38.02%(46/121),培养法MTB检出率为42.15%(51/121),LAMP法MTB检出率为49.28%(56/121),差异无统计学意义(χ2分别为3.146和1.247,P均>0.05)。对121例可疑肺结核患者痰标本进行MTB检测,以罗氏固体培养基培养结果为金标准,LAMP检测结果的敏感性为92.16%(47/51),特异性为87.14%(61/70),二者无显著性差异(χ2=1.247,P>0.05),且一致性强(kappa=0.78,P<0.01)。LAMP能准确分辨MTB和NTM阳性分离物,对H37Rv、BCG检测结果均为阳性;对H37Rv菌株的检出限为120 CFU/mL。结论 LAMP检测MTB敏感性和特异性高,操作简便易行、快速准确,不需要昂贵的检验设备,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。     

GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨GeneXpert MTB/RIF、MGIT960液体培养法在胸腔积液结核分枝杆菌检测中的应用。方法回顾性分析386例疑似和确诊结核病患者胸腔积液标本中腺苷脱氨酶(ADA)、GeneXpert MTB/RIF及MGIT960液体培养法的检测结果。以胸腔积液ADA>40 U/L作为鉴别结核性积液的标准,将标本分为3组:第1组为非结核性积液(ADA≤40 U/L,219例),第2组为结核性积液(ADA>40 U/L,145例),第3组为脓性胸腔积液(不能进行ADA检测,22例)。结果在386例患者中,GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌复合群的阳性率为15.54%(60/386),MGIT960液体培养法检测结核分枝杆菌复合群的阳性率为5.44%(21/386),前者检测阳性率明显高于后者(χ²=14.52,P<0.05)。3组中,GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为3.20%、24.83%和77.27%;MGIT960液体培养法检测阳性率分别为2.74%、8.28%和13.64%。GeneXpert MTB/RIF在结核性积液、脓性胸腔积液中检测结核分枝杆菌复合群的阳性率明显高于MGIT960液体培养法(χ²=14.38、17.97,P<0.05)。将采用MGIT960液体培养法检测为阳性的标本21例进行GeneXpert MTB/RIF检测发现,两种方法检测阳性结果的符合率为52.38%(11/21)。结论GeneXpert MTB/RIF检出结核分枝杆菌复合群的阳性率明显高于MGIT960液体培养法,特别是在结核性积液和脓性胸腔积液中。两种方法联合检测,有助于临床对结核性胸膜炎的早期诊断和治疗。     

BacT/ALERT 3D在结核分枝杆菌快速培养和药敏试验中的应用

目的探讨BacT/ALERT 3D在结核分枝杆菌快速培养中的应用。方法应用BacT/ALERT 3D检测结核分枝杆菌,并与传统L-J法比较。结果 523份痰标本BacT/ALERT 3D法检出阳性217份(41.52%),阳性报告时间平均14.05 d;L-J法检出阳性178份(34.03%)。BacT/ALERT法培养结核分枝杆菌的阳性率明显高于L-J法(P<0.05);阳性报告时间提前14.66 d,差异有统计学意义(P<0.05)。BacT/ALERT 3D快速药敏法表明总耐药率为56.2%,药敏报告时间平均8.5 d,L-J法则为30 d,两种方法药敏符合率为96.38%(213/221);使用BacT/ALERT 3D快速法进行结核分枝杆菌的培养和药敏试验,报告时间比L-J法总计提前35 d以上。结论 BacT/ALERT 3D法是目前较理想的一种快速检测结核分枝杆菌的方法。     

肺结核患者结核菌L型感染及其荧光定量PCR检测的意义

目的评价荧光定量PCR（FQ-PCR）和结核菌（MTB）L型检测的临床价值。方法收集61例痰阴性肺结核患者痰、血标本分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用染色、免疫组化和FQ-PCR技术进行检测和鉴定,部分标本透射电镜观察。结果痰MTB及其L型检测的阳性率为72.4%,血液阳性率为28.3%,而痰血检测总的阳性率为75.4%。痰直接FQ-PCR33.3%,培养后FQ-PCR40.4%,总阳性率45.5%。血直接FQ-PCR0/35,培养后FQ-PCR 22.5%。痰血FQ-PCR阳性率比较,χ^2=5.3028,P〈0.05,差异有统计学意义,痰阳性率明显高于血。痰和血FQ-PCR阳性率低于相应的涂片和培养结果。结论分枝杆菌L型的分离和FQ-PCR的应用可提高痰菌阴性肺结核的诊断效率。FQ-PCR阴性不能完全排除结核病,但可用于痰及血中分枝杆菌L型的辅助诊断,尤其对不易从感染部位取得标本的患者更有帮助。     

流式细胞术检测CD161对结核病的诊断效能

目的探讨流式细胞术检测CD161对活动性肺结核的诊断效能,并比较其与其他检测方法的差异。方法采用流式细胞术检测138例体检健康者(健康对照组)和178例结核病患者(结核病组)全血细胞中CD161的表达,同时比较CD161检测技术、GeneXpert、结核分枝杆菌(TB)-DNA、痰涂片和γ-干扰素释放试验(IGRAs)对结核病的检测阳性率,以及在菌阴性肺结核患者和菌阳结核患者中的阳性率。结果CD161诊断活动性肺结核患者的灵敏度为72.47%,特异度为71.01%;CD161检测技术、GeneXpert、TB-DNA、痰涂片和IGRAs方法在检测结核患者中的阳性率分别为72.47%、50.34%、40.62%、33.33%、67.46%;在菌阳性肺结核患者中,GeneXpert检测阳性率最高,为97.96%,在菌阴性肺结核患者中,CD161检测技术阳性率最高,为72.64%。结论流式细胞术检测CD161对活动性肺结核有很高的诊断价值,可用于健康人群的体检筛查。     

不同实验室方法在肺结核辅助诊断中的应用评价

目的评价不同实验室方法在肺结核(PTB)诊断中的应用效能,为PTB的早期诊断提供数据参考。方法 2016年1月至2018年12月在上海市同仁医院肺科门诊诊治的298例疑似PTB患者,依照临床诊断,分为活动性肺结核组138例、非活动性肺结核组43例、非肺结核组117例。对其痰标本分别采用痰涂片快速抗酸染色、MGIT培养、Xpert MTB/RIF分子检测,采用卡方检验比较其敏感性、特异性。结果 3种方法在区分活动性肺结核组与非活动性肺结核合并非肺结核组上具有一定的意义(χ~2值分别为89.08,138.94,137.12,P均0.01),非活动性肺结核组与非肺结核组的阳性率之间差异无统计学意义。痰涂片、MGIT培养、Xpert MTB/RIF和3种方法联合检测诊断活动性肺结核的敏感性分别为45.7%(63/138)、63.8%(88/138)、65.4%(87/133)和78.2%(104/133),MGIT培养和Xpert MTB/RIF敏感性高于痰涂片(χ~2值分别为35.79和11.26,P均0.01),MGIT培养和Xpert MTB/RIF的敏感性差异无统计学意义(χ~2=29.87,P0.05),联合检测敏感性高于3种方法单独检测(χ~2值分别为30.84,64.62,70.14,P均0.01);诊断特异性分别为99.1%(116/117)、98.3%(115/116)、99.1%(113/114)和97.3%(110/113),3种方法的特异性差异无统计学意义。结论 MGIT培养与Xpert MTB/RIF对PTB检测具有较高的敏感性,3种方法联合检测可提高敏感性。     

结核分枝杆菌检测方法临床应用的对比研究

目的用涂片、聚合酶链反应(PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值。方法对169例临床确诊的肺结核患者、可疑肺结核患者和非结核患者痰标本用涂片、PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析。结果 169例痰标本中,痰涂片检查阳性率为7.1%(12/169),PCR检测阳性率为32.54%(55/169);痰涂片、PCR法检测42例临床确诊的肺结核患者痰标本阳性率分别为11.9%(5/42)、57.1%(24/42);检测82例临床可疑肺结核患者痰标本阳性率分别为8.54%(7/82)、37.8%(31/82)。比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(χ2=19.729,P<0.01),检测45例非结核患者痰标本,涂片及PCR检测均为阴性。结论 PCR法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核病检测诊断的有效方法之一。     

GeneXpert和LPA两种方法检测在诊断耐药结核病中的价值

目的 探讨实时荧光定量核酸扩增检测技术（GeneXpert）和线性探针检测技术(LPA)两种方法检测在诊断耐药结核病中的价值。方法 将我院2021年3月至2022年3月期间286例肺结核患者纳入研究。所有患者均进行GeneXpert检测、LPA检测,并进行BACTEC?MGIT?960液体培养(液体培养),以液体培养结果作为金标准。观察GeneXpert检测、LPA检测的检验效能。结果 286例肺结核患者经液体培养确定279例为耐药性肺结核（阳性）,7例为不耐药性肺结核（阴性）;经GeneXpert检测发现275例阳性,11例阴性,准确度为95.80%、误诊率为4.20%、特异度为42.86%、灵敏度为97.13%、阴性预测值为27.27%、阳性预测值为98.55%;经LPA检测发现273例阳性,13例阴性,准确度为93.71%、误诊率为6.29%、特异度为14.29%、灵敏度为95.70%、阴性预测值为7.69%、阳性预测值为97.80%;两种检测中准确度、误诊率、特异度、灵敏度、阴性预测值及阳性预测值比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 GeneXpert和LPA两种方法检测在诊断耐药结核病中效果相当,后续检测可根据实际情况选择,但由于两者均存在误诊风险,因此还需引入其他检测方式,为实验室提供更精准的依据。     

基层医院应用GeneXpert MTB/RIF检测诊断早期肺结核的价值分析

目的 探讨MTB/利福平耐药实时荧光定量基因扩增检测系统(GeneXpert MTB/RIF)在基层医院对肺结核及利福平耐药的诊断价值.方法 收集2020年1-9月上海市奉贤区古华医院结核病专科门诊就诊的281例疑似肺结核患者的痰液标本,通过痰涂片抗酸染色镜检(AFB)、MGIT320培养及GeneXpert MTB/RIF检测,分析不同方法的阳性率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、一致性、平均周转时间、利福平耐药性.结果 281例疑似肺结核患者标本中GeneXpert MTB/RIF检测、痰涂片AFB、MGIT320培养阳性率分别为28.5％(80/281)、15.7％(44/281)、26.3％(74/281).以MGIT320培养结果为准,GeneXpert MTB/RIF分析的灵敏度为90.5％(67/74),特异度为93.7％(194/207),PPV为83.8％(67/80),NPV为96.5％(194/201),一致性为92.9％[(67+194)/281];痰涂片AFB的灵敏度为51.4％(38/74),特异度为97.1％(201/207),PPV为86.3％(38/44),NPV为84.8％(201/237),一致性为85.1％[(38+201)/281].AFP与GeneXpert MTB/RIF检测的灵敏度、一致性比较,差异有统计学意义(χ2=25.57、15.42,P<0.001).结论 GeneXpert MTB/RIF检测具有操作简单、快速、安全等优势,且灵敏度、特异度都较高,可以作为基层医院早期检测肺结核的重要方法之一,值得推广.     

全血γ-干扰素释放试验对涂阴肺结核诊断价值的研究

目的探讨全血γ-干扰素释放试验在涂阴肺结核快速诊断中的应用价值。方法研究对象共分两组:肺结核组374例(其中涂阴肺结核组254例)、其他肺部疾病组156例,应用全血γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB试剂盒)检测外周血淋巴细胞对结核分枝杆菌菌种特异性分泌蛋白:早期分泌靶抗原6(ES-AT-6)和培养分泌蛋白(CFP-10)的免疫反应。对肺结核及其他肺部疾病患者在入院时做结核菌素皮肤试验(TST),检查痰涂片、痰培养、痰快速培养(BACTEC960)、痰结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)和血清结核抗体(TB-AB)等。结果肺结核组T-SPOT阳性率为89.3%,涂阴肺结核组T-SPOT阳性率为85.8%,其他肺部疾病组T-SPOT阳性率为19.2%,肺结核组及涂阴肺结核组的T-SPOT阳性率均明显高于其他肺部疾病组(P<0.01)。肺结核组TST阳性率为66.8%,涂阴肺结核组TST阳性率为72.4%,其他肺部疾病组TST阳性率为21.8%。肺结核组及涂阴肺结核组的TST阳性率明显高于其他肺部疾病组,差别有统计学意义(P<0.01)。在涂阴肺结核组,血T-SPOT的敏感性(85.8%)明显高于TST(72.4%)、痰慢培养(22.0%)、痰快速培养(37.8%)、痰TB-DNA(34.1%)、血TB-AB(64.6%)(P<0.01)。血T-SPOT、TST、痰慢培养、痰快速培养、痰TB-DNA、血TB-AB的特异度分别为:80.8%、78.2%、100%、88.5%、80.8%、53.8%。T-SPOT对涂阴肺结核的阳性预测值为87.9%,阴性预测值为77.8%。结论全血γ-干扰素释放试验在涂阴肺结核的诊断上具有快速,敏感性及特异性较高的优点,在临床上对疑似肺结核的患者进行T-SPOT试验对鉴别诊断具有重要价值。     

3种方法检测结核分枝杆菌的评价

目的评价荧光定量基因扩增法(FQ-PCR法)、胶体金法、痰涂片萋-纳氏抗酸染色法检测结核分枝杆菌情况,寻求结核分枝杆菌的快速、准确和特异性检测手段。方法选择经临床确诊96例肺结核患者痰液,采用3种方法进行检测。以临床确诊结核组为"真阳性",以对照组为"真阴性",分别计算3种方法的灵敏度、特异度、符合率、正确诊断指数、阴性及阳性预测值。结果 3种方法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为:FQ-PCR法42.7%,胶体金法48.9%,痰涂片萋-纳氏抗酸染色法12.5%,FQ-PCR法联合胶体金法66.7%。经χ2检验,FQ-PCR法、胶体金法对结核分枝杆菌的检出率优于痰涂片萋-纳氏抗酸染色法;FQ-PCR法联合胶体金法对结核分枝杆菌的检出率优于单独采用FQ-PCR法、胶体金法的检出率;FQ-PCR法具有高度灵敏性和特异性,结果的可信度优于其他两种方法,联合胶体金法诊断可在保持高灵敏性、高特异性的同时,进一步提高结核分枝杆菌检出率。结论对早期诊断可获得较好治疗效果的肺结核患者应该选择灵敏度高的诊断方法,FQ-PCR法联合胶体金法检测有一定优势。     

肺癌患者血浆及外周血单个核细胞Lunx mRNA检测的临床意义

目的检测肺癌患者血浆及外周血单个核细胞肺特异性X基因(Lunx)mRNA,探讨两者对肺癌辅助诊断的临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肺癌患者、肺良性疾病患者、肺外肿瘤患者及健康人血浆及外周血单个核细胞Lunx mRNA。结果肺癌组患者血浆Lunx mRNA阳性率显著高于肺良性疾病组(χ2=113.10,P<0.01)、肺外肿瘤组(χ2=125.34,P<0.01)和健康组(χ2=100.33,P<0.01);Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血浆Lunx mRNA阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者(χ2=7.07,P<0.05)。肺癌组患者外周血单个核细胞LunxmRNA阳性率显著高于肺良性疾病组(χ2=32.79,P<0.01)、肺外肿瘤组(χ2=44.44,P<0.01)和健康组(χ2=44.44,P<0.01);Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者外周血单个核细胞Lunx mRNA阳性率显著高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者(χ2=24.52,P<0.01)。血浆Lunx mRNA检测对肺癌辅助诊断的敏感性高于单个核细胞检测的敏感性(χ2=36.46,P<0.01),血浆检测的阴性预测值高于外周血单个核细胞检测的阴性预测值(χ2=16.37,P<0.01)。结论血浆与外周血单个核细胞Lunx mRNA检测均可用于肺癌的辅助诊断,前者敏感性较后者高。     

GeneXpert MTB/RIF技术对肺结核的诊断效能评估

目的评估GeneXpert MTB/RIF技术在快速诊断肺结核方面的应用价值。方法收集2015年1-6月在北京市朝阳区结核病门诊就诊的240例疑似肺结核患者的痰液标本,每份标本同时进行涂片萋-尼氏染色显微镜检查抗酸杆菌,利用BACTEC MGIT 960(M960)系统进行结核杆菌培养及药物敏感性试验和利用GeneXpert MTB/RIF系统进行结核分枝杆菌基因及利福平耐药性检测。结果 GeneXpert MTB/RIF,试验阳性率为36.3%(87/240),M960系统培养阳性率为33.8%(81/240),差异无统计学意义(χ~2=0.33,P0.05)。以培养阳性为标准,GeneXpert MTB/RIF试验的灵敏度为84.0%(68/81),特异度为87.8(129/147),阳性预测值为78.2%(68/87),阴性预测值为87.2%(129/148)。GeneXpert MTB/RIF系统和M960系统检测结果一致性为82.8%,Kappa值为0.73。结论 GeneXpert MTB/RIF系统技术操作简便,阳性检出率和灵敏度均较高,对快速诊断肺结核具有较高的临床应用价值。     

Detection of Klebsiella pneumonia in respiratory tract samples by the loop-mediated isothermal amplification method

目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3和α-岩藻糖苷酶在原发性肝癌中的表达及其诊断意义

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和α-岩藻糖苷酶(AFU)联合检测对诊疗原发性肝癌的效果。方法收集2010年5月至2011年1月,在该院确诊的原发性肝癌患者100例,肝硬化患者50例,健康体检者50人,将其分为原发性肝癌组(PHC)、肝硬化组和健康对照组。用酶联免疫法分别检测GPC3、AFU的浓度,用放射免疫法测出AFP的浓度。然后分别按照检测项目统计分析,各组阳性率比较采用χ2检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结果 (1)PHC组与肝硬化组和对照组比较,GPC3和AFU的检测值差异有统计学意义(P<0.01)。肝硬化组与对照组比较,GPC3、AFU的检测值差异有统计学意义(P<0.01)。(2)100例PHC患者中GPC3阳性86例,阳性率为86.0%(86/100);肝硬化患者中阳性7例,阳性率为14.0%(7/50);健康对照组中阳性有1例,阳性率为2.0%(1/50)。PHC组的阳性率明显高于肝硬化组和健康对照组(χ2=73.344、96.551,P<0.01);肝硬化组的阳性率与健康对照组的差异无统计学意义(χ2=3.3967,P>0.05)。(3)100例PHC患者中AFU阳性82例,阳性率为82.0%(82/100);肝硬化患者中阳性14例,阳性率为28.0%(14/50);健康对照组中有2例,阳性率为4.0%(2/50)。PHC组的阳性率明显高于肝硬化组和健康对照组(χ2=42.187、82.305,P<0.01);肝硬化组的阳性率与健康对照组的差异有统计学意义(χ2=10.714,P<0.01)。(4)GPC3和AFU两者联合检测时,诊断PCH的敏感度为97.0%(97/100),特异度为88.0%(88/100),准确度为92.5%(185/200),优于任何单项和联合检测的敏感度和准确度。结论 GPC3和AFU联合检测优势互补,从而提高PHC诊断的敏感度、特异度和准确度。     

白念珠菌环介导等温扩增法的建立及其应用价值

目的建立一种简单快速检测白念珠菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并评价其临床价值。方法采用Primer Explorer 5.0软件,针对白念珠菌RPS0基因设计4条引物,对LAMP反应体系和反应条件进行优化,评价检测特异性和检测限;收集123例外阴阴道念珠菌病(VVC)组和42例正常对照组的女性阴道拭子,平行进行真菌培养、LAMP检测、PCR检测、1.79 mol/L KOH镜检,真菌培养作为VVC诊断参考方法;组间检测方法阳性率的比较采用Pearsonχ~2检验,LAMP、PCR、镜检与培养法的一致性采用Kappa检验,P0.05为差异有统计学意义;应用ROC曲线分析法评价LAMP、PCR在VVC诊断中的价值。结果 LAMP技术的最适反应温度为61℃,且特异性高,与其他常见菌株无交叉反应,检测限为103copies/μL; VVC组和正常对照组的LAMP、PCR、镜检阳性率差异有统计学意义(LAMP,χ~2=68.576; PCR,χ~2=64.918;镜检,χ~2=50.076,P0.01)。LAMP和PCR与培养法有较好的一致性(κ=0.744,0.720),镜检与培养法一致性较差(κ=0.533); LAMP对VVC的诊断敏感性为87.62%,特异性为88.33%,阳性预测值为92.93%,阴性预测值为80.30%。LAMP、PCR诊断VVC的ROC曲线下面积分别为0.873、0.888,两者的诊断效能差异无统计学意义(Z=0.849,P=0.395 6),但LAMP检测时间短于1 h。结论建立的检测白念珠菌的LAMP技术快速可靠、敏感性好、特异性高,综合筛查性能优于实验室常规方法,可用于白念珠菌感染的辅助诊断和疗效监控。     

新生儿败血症发病趋势及病原学和药敏的变迁

目的探讨本院新生儿败血症的发病趋势及病原学和药敏的变迁。方法总结2004年1月1日至2010年12月31日本院新生儿败血症76例,其中血培养阳性者57例。将病例分为2个阶段,并比较其中新生儿败血症的发病率及病原学和药敏特点。结果 (1)两阶段中新生儿败血症的发病率分别为8.41%(39/464)和4.27%(37/866),有显著差异(χ2=9.577,P<0.01)。(2)两阶段中血培养阳性率分别为74.36%(29/39)和75.68%(28/37),无显著差异(χ2=0.018,P>0.05)。(3)两阶段血培养阳性菌株中,革兰阳性球菌分别占86.67%和78.58%,无显著差异(χ2=0.665,P>0.05);革兰阴性杆菌分别占10%、7.14%,革兰阳性杆菌分别占3.33%、7.14%,真菌感染分别占0、7.14%。(4)两阶段中,凝固酶阴性葡萄球菌对万古霉素、利福平、力奈唑烷、替考拉宁的药敏率最高(100%)。与第一阶段比较,第二阶段中头孢呋辛、头孢曲松的药敏率均显著降低(分别为0 vs.50%,χ2=9.886;0 vs.42.86%,χ2=8.106,均P<0.01);四环素的药敏率显著上升(91.67%vs.40%,χ2=7.631,P<0.01)。(5)两阶段中,革兰阴性杆菌对环丙沙星、左旋氧氟沙星、丁胺卡那霉素、妥布霉素、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南的药敏率均较高(100%),复方新诺明的药敏率均较低(33.33%)。结论新生儿败血症的发生率已显著降低。凝固酶阴性葡萄球菌是新生儿败血症的最常见病原,且对二代、三代头孢菌素耐药;革兰阴性杆菌的耐药率较低;应警惕真菌感染。     

荧光定量PCR检测婴幼儿巨细胞病毒感染情况分析

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测婴幼儿尿液人巨细胞病毒(HCMV)在HCMV感染诊断中的意义。方法采用FQ-PCR检测148例临床疑似HCMV感染婴幼儿尿液中HCMV-DNA水平。同时采用ELISA法检测婴幼儿血清HCMV-IgM抗体。在尿液HCMV-DNA检测阳性患儿中比较血清HCMV-IgM抗体阳性与阴性患儿尿液中HCMV-DNA拷贝数差异。结果 FQ-PCR检测尿液HCMV-DNA的阳性率为35.14%,ELISA检测婴儿血清HCMV-IgM的阳性率为15.54%。两种方法对HCMV感染诊断的阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。在尿液HCMV-DNA检测阳性患儿中,IgM抗体阳性组尿液HCMV-DNA拷贝数显著高于阴性组(P<0.01)。结论 FQ-PCR检测尿液HCMV-DNA是早期诊断婴幼儿HCMV感染的敏感有效的方法。